羅氏HE4試劑性能評(píng)估綜述- _劉萬(wàn)里主任

1、羅氏羅氏HE4試劑性能評(píng)估綜述試劑性能評(píng)估綜述中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院劉萬(wàn)里劉萬(wàn)里內(nèi)容內(nèi)容 羅氏 HE4檢測(cè)原理 Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究概況 Elecsys HE4性能評(píng)估 Elecsys HE4性能小結(jié)內(nèi)容內(nèi)容 羅氏 HE4檢測(cè)原理 Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究概況 Elecsys HE4性能評(píng)估 Elecsys HE4性能小結(jié)標(biāo)記免疫電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)標(biāo)記免疫電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)ECL (IA) Technology E Electro C Chemo L Luminescence I Immuno A AssayRoche HE4檢測(cè)試劑設(shè)計(jì)檢測(cè)試劑設(shè)

2、計(jì)雙抗體夾心一步法雙抗體夾心一步法原理：雙抗體夾心法 檢測(cè)時(shí)間：18分鐘 1st 孵育孵育: 分鐘10 L血樣, 生物素標(biāo)記HE4特異性單克隆抗體，釕標(biāo)記HE4特異性單克隆抗體，形成抗原抗體復(fù)合物 2nd 孵育孵育:分鐘加入鏈酶親和素包被的磁珠，通過(guò)生物素和鏈酶親和素反應(yīng)，形成復(fù)合物 檢測(cè)檢測(cè):反應(yīng)復(fù)合物送入測(cè)量池，磁珠結(jié)合至電極表面，未結(jié)合的反應(yīng)物通過(guò)ProCell清除通過(guò)對(duì)電極增加電壓觸發(fā)化學(xué)發(fā)光光電子釋放，后者通過(guò)光電倍增管檢測(cè)Roche HE4檢測(cè)試劑設(shè)計(jì)檢測(cè)試劑設(shè)計(jì)HE4檢測(cè)原理檢測(cè)原理生物素標(biāo)記的生物素標(biāo)記的HE4單克隆抗體單克隆抗體Ru待檢樣本中的待檢樣本中的HE4 (10 L)

3、釕標(biāo)記的釕標(biāo)記的HE4單克隆抗體單克隆抗體Ru鏈酶親和素鏈酶親和素包被的磁珠包被的磁珠Ru進(jìn)行檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)9 min9 minRoche HE4試劑成分試劑成分試劑試劑 工作溶液工作溶液 M: 包被鏈酶親和素的微粒（透明蓋），1 瓶，6.5 mL：包被鏈霉親和素的微粒0.72 mg/mL；防腐劑 R1: 生物素化抗人HE4抗體（灰蓋），1瓶，10 mL：生物素化單克隆抗HE4抗體（小鼠）0.75 mg/L，磷酸鹽緩沖液100 mmol/L，pH值6.5；防腐劑 R2: 釕復(fù)合物標(biāo)記的抗人HE4抗體（黑蓋），1 瓶， 10 mL：釕復(fù)合物標(biāo)記的單克隆抗HE4抗體（小鼠）1.5 mg/L；磷酸鹽緩

4、沖液100 mmol/L，pH值7.4；防腐劑Roche HE4試劑成分試劑成分需要的材料需要的材料試劑名稱試劑名稱貨號(hào)貨號(hào)規(guī)格規(guī)格Elecsys HE4 05950929 190100 測(cè)試Elecsys HE4 CalSet05950945 1904 x 1 mLPreciControl HE405950953 1902 x 1 mL each of PreciControl HE4 1 and 2試劑名稱試劑名稱貨號(hào)貨號(hào)規(guī)格規(guī)格Elecsys CA 125 II11776223 322 100 tests per rackpackElecsys CA 125 II CalSet11776

5、240 322 4 x 1 mLPreciControl Tumormarker11776452 122 2 x 3 mL each of PreciControl Tumormarker 1 and 2 卵巢癌腫瘤標(biāo)志物卵巢癌腫瘤標(biāo)志物提供提供HE4和和CA125檢測(cè)的廠家檢測(cè)的廠家HE4HE4CA 125CA 125Roche (Elecsys, cobas e)Roche (Elecsys, cobas e)Abbott (Architect)Abbott (Architect)Beckman (Access)Beckman (Access)Siemens (Immulite, Cent

6、aur, Siemens (Immulite, Centaur, Vista)Vista)Diasorin (Liaison)Diasorin (Liaison)B.R.A.H.M.S (Kryptor)B.R.A.H.M.S (Kryptor)Becton Dickinson (TriPath)Becton Dickinson (TriPath)plannedplannedCanAgCanAg（ELISAELISA）羅氏所有免疫平臺(tái)均可以同羅氏所有免疫平臺(tái)均可以同時(shí)提供時(shí)提供CA125CA125和和HE4HE4的檢測(cè)的檢測(cè)內(nèi)容內(nèi)容 羅氏 HE4檢測(cè)原理 Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研

7、究概況 Elecsys HE4性能評(píng)估 Elecsys HE4性能小結(jié)Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究注冊(cè)研究研究概況研究概況 研究時(shí)間：2011.12011.6 研究中心中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院山西省腫瘤醫(yī)院Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究注冊(cè)研究 研究目的一：與康乃格公司HE4 (酶聯(lián)免疫法) 進(jìn)行比對(duì)檢測(cè)，評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果 研究目的二：盆腔腫塊患有卵巢癌風(fēng)險(xiǎn)的評(píng)估：Elecsys HE4和Elecsys 125II聯(lián)合檢測(cè)計(jì)算ROMA指數(shù)，評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)高低 研究目的三：血清,血漿對(duì)比試驗(yàn)，驗(yàn)證不同類型樣本結(jié)果的一致性El

8、ecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究結(jié)果注冊(cè)研究結(jié)果共入組共入組1487例樣本例樣本標(biāo)本類型標(biāo)本類型醫(yī)科院腫瘤醫(yī)科院腫瘤 浙大婦產(chǎn)浙大婦產(chǎn)武漢同濟(jì)武漢同濟(jì)山西腫瘤山西腫瘤合計(jì)合計(jì)卵巢上皮癌卵巢上皮癌103494045237疑似樣本疑似樣本 （盆腔包塊患者）（盆腔包塊患者）611916868388其他腫瘤其他腫瘤 （子宮內(nèi)膜癌、（子宮內(nèi)膜癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌、肺癌、乳腺癌、消化道癌、膀胱癌等）膀胱癌等）621363648282表觀健康人群表觀健康人群12012511082437RF陽(yáng)性陽(yáng)性111091040溶血溶血1010101141脂血脂血1011101142黃疸黃疸10001020合計(jì)

9、合計(jì)3875322832851487Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究結(jié)果注冊(cè)研究結(jié)果各研究中心不精密度結(jié)果各研究中心不精密度結(jié)果 CV（低濃度）（低濃度）CV(中濃度中濃度)醫(yī)科院腫瘤醫(yī)科院腫瘤醫(yī)院醫(yī)院2.21%4.35%浙浙江江大大學(xué)學(xué)婦產(chǎn)婦產(chǎn)醫(yī)醫(yī)院院1.05%1.11%武漢武漢同濟(jì)同濟(jì)醫(yī)院醫(yī)院1.06 %0.62 %山西山西省省腫瘤腫瘤醫(yī)院醫(yī)院1.61%0.66%選取中、低濃度的樣品各一份，分別檢測(cè)10次，計(jì)算CV值Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究結(jié)果注冊(cè)研究結(jié)果各研究中心質(zhì)控結(jié)果良好各研究中心質(zhì)控結(jié)果良好參比試劑參比試劑考核試劑考核試劑CA125CA125醫(yī)院醫(yī)院名稱名稱

10、質(zhì)控名稱質(zhì)控名稱HE4HE4質(zhì)控名稱質(zhì)控名稱PreciControl HE4PreciControl HE4質(zhì)控名稱質(zhì)控名稱PC TMPC TM質(zhì)控批號(hào)質(zhì)控批號(hào)2796427964270922709227093270931560800015608000 1560810015608100靶值靶值47.5pmol47.5pmol/L/L391.5pmo391.5pmol/Ll/L45pmol/L45pmol/L341pmol/341pmol/L L32.6(U/m32.6(U/mL)L)101(U/mL)101(U/mL)范圍范圍33-6233-62313-470313-47035.0-35.0-

11、53.653.6262 262 40240225.7639.25.7639.444479.791279.79122.212.21醫(yī)科院腫醫(yī)科院腫瘤瘤檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)結(jié)果43.7843.78447.4447.446.1846.18340.8340.828.728.7101.7101.7浙大婦產(chǎn)浙大婦產(chǎn) 檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)結(jié)果41.3441.34367.74367.7447.847.8344.5344.529.0229.0280.2480.24武漢同濟(jì)武漢同濟(jì) 檢測(cè)結(jié)果檢測(cè)結(jié)果39.5939.59360.5360.542.7442.7432132133.6233.6291.9491.94山西腫瘤山西腫瘤 檢

12、測(cè)結(jié)果檢測(cè)結(jié)果50.9850.98441.71441.7143.4343.43343.9343.932.9632.9686.9186.91Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究結(jié)果注冊(cè)研究結(jié)果與參與試劑有良好的一致性與參與試劑有良好的一致性y = 1.0942x + 2.7976y = 1.0942x + 2.7976相關(guān)系數(shù)相關(guān)系數(shù)r r0.9490.949回歸系數(shù)回歸系數(shù)R R2 20.89970.8997Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究結(jié)果注冊(cè)研究結(jié)果ROMA指數(shù)可將盆腔腫塊患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)指數(shù)可將盆腔腫塊患者進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)絕經(jīng)絕經(jīng)前前:PI = -12,0 + 2,38*LNH

13、E4 +0,0626*LNCA125絕經(jīng)絕經(jīng)后后:PI = -8,09 + 1,04*LNHE4 + 0,732*LNCA125582例樣本被正確分入高例樣本被正確分入高/低風(fēng)險(xiǎn)組低風(fēng)險(xiǎn)組ROMA (%) =Exp(PI) x 1001 + Exp(PI)注：風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)注：風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)PI（Predictive Index） LN為自然對(duì)數(shù)為自然對(duì)數(shù)內(nèi)容內(nèi)容 羅氏 HE4檢測(cè)原理 Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究概況 Elecsys HE4性能評(píng)估 Elecsys HE4性能小結(jié)病例報(bào)告病例報(bào)告 患者，女，患者，女，4545歲，歲，B B超檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊，超檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊， 羅氏試劑電化

14、學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清羅氏試劑電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清HE4HE4濃度，濃度，結(jié)果為結(jié)果為 136 pmol/L 136 pmol/L。如何判斷這患者如何判斷這患者HE4HE4結(jié)果是否異常？結(jié)果是否異常？臨床判斷臨床判斷HE4HE4檢測(cè)結(jié)果應(yīng)考慮的問(wèn)題檢測(cè)結(jié)果應(yīng)考慮的問(wèn)題1.1. 參考值參考值2.2. HE4HE4實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差3.3. 樣本檢測(cè)前誤差：樣本檢測(cè)前誤差：標(biāo)本采集影響標(biāo)本采集影響 標(biāo)本保存的影響標(biāo)本保存的影響 干擾物質(zhì)的影響干擾物質(zhì)的影響 人生理變異人生理變異治療措施的干擾（藥物）治療措施的干擾（藥物）其他疾病的干擾其他疾病的干擾三組各年齡段三組各年齡段HE4濃度比較濃度比較

15、a 均值標(biāo)準(zhǔn)差pmol/l（例數(shù)）； 青年組：45歲；中年組：45-59歲；老年組：60歲。*LSD檢驗(yàn)；#經(jīng)隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)方差分析組別組別總計(jì)總計(jì)a a (323)青年組青年組a a (34)中年組中年組a a (108) # 老年組老年組a a (181) #OC組組337.5156.4(160)304.6143.2(19)334.7156.4(60) 373.3132.5(81)良性組良性組72.038.7(54)*50.616.3(10)68.712.6(18)96.638.7(26)健康組健康組59.222.9(109)*42.28.9(5)58.77.6(30)76.85.6(74)

16、1 1、參考值、參考值HE4在不同觀察組間的差異 OC組，不同年齡的HE4良性病變組，不同年齡的HE4健康對(duì)照組組，不同年齡的HE4 年齡因素對(duì)年齡因素對(duì)HE4HE4濃度的影響濃度的影響HE4在各年齡在各年齡組參考值的設(shè)定和診斷價(jià)值評(píng)估組參考值的設(shè)定和診斷價(jià)值評(píng)估 所有病例的ROC曲線 青年組的ROC曲線 AUCAUCCutoffCutoff點(diǎn)點(diǎn)(PM)(PM)敏感性敏感性特異性特異性總體總體0.8390.839828267.3%67.3%93.6%93.6%青年組青年組0.9460.946757583.4%83.4%92.6%92.6%HE4在各年齡在各年齡組參考值的設(shè)定和診斷價(jià)值評(píng)估組參考

17、值的設(shè)定和診斷價(jià)值評(píng)估 中年組的ROC曲線 老年組的ROC曲線 AUCAUCCutoffCutoff點(diǎn)點(diǎn)(PM)(PM)敏感性敏感性特異性特異性中年組中年組0.8700.870* *808075.0%75.0%93.1%93.1%老年組老年組0.7750.775* *13013050%50%93.2%93.2%2、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差 日間精密度（羅氏）日間精密度（羅氏） 日間精密度（驗(yàn)證）日間精密度（驗(yàn)證）在三個(gè)研究中心進(jìn)行的在三個(gè)研究中心進(jìn)行的重復(fù)性檢測(cè)的結(jié)果：不重復(fù)性檢測(cè)的結(jié)果：不精密度（精密度（CV)CV)低值（低值（44.344.3） CV=2.1%CV=2.1%高值高值 （1317131

18、7） CV=1.9%CV=1.9%2、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差初步結(jié)論初步結(jié)論實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差 5%5%樣本檢測(cè)前誤差樣本檢測(cè)前誤差血清、血漿（血清、血漿（EDTA、肝素）、肝素） 樣品保存（樣品保存（24h24h內(nèi)）內(nèi)）血清血漿，血清血清血漿，血清24h24h內(nèi)檢測(cè)，內(nèi)檢測(cè)，HE4HE4無(wú)顯著性差異無(wú)顯著性差異樣本檢測(cè)前誤差樣本檢測(cè)前誤差 干擾物質(zhì)影響（羅氏）干擾物質(zhì)影響（羅氏） 藥物的影響（羅氏）藥物的影響（羅氏）回收率均回收率均 10%10%結(jié)論：上述濃度下的干結(jié)論：上述濃度下的干擾物質(zhì)和藥物對(duì)擾物質(zhì)和藥物對(duì)HE4HE4檢測(cè)檢測(cè)無(wú)顯著影響。無(wú)顯著影響。樣本檢測(cè)前誤差樣本檢測(cè)前誤差 對(duì)對(duì)

19、HE4HE4濃度分別在濃度分別在65 pmol/L 65 pmol/L 和和155 pmol/L155 pmol/L進(jìn)行檢測(cè)，判進(jìn)行檢測(cè)，判斷與乳清酸性蛋白家族其他斷與乳清酸性蛋白家族其他成員的交叉反應(yīng)性成員的交叉反應(yīng)性 Elafin :彈性蛋白酶特異性彈性蛋白酶特異性抑制劑抑制劑 SLPI：分泌性白細(xì)胞蛋白：分泌性白細(xì)胞蛋白酶抑制劑酶抑制劑 干擾物質(zhì)的影響 ： 交叉反應(yīng)（羅氏）結(jié)論：交叉反應(yīng)對(duì)結(jié)論：交叉反應(yīng)對(duì)HE4HE4結(jié)結(jié)果的影響可忽略不計(jì)。果的影響可忽略不計(jì)。樣本檢測(cè)前誤差樣本檢測(cè)前誤差 HE4生理變異的影響（n=2)初步結(jié)論初步結(jié)論: :HE4HE4個(gè)體日間變異度個(gè)體日間變異度10%1

20、0%樣本檢測(cè)前誤差樣本檢測(cè)前誤差 肺部疾病的影響肺部疾病的影響 腎功不良的影響腎功不良的影響結(jié)論：肺部疾病，尤其是結(jié)論：肺部疾病，尤其是腎衰腎衰顯著影響顯著影響HE4水平水平總結(jié)總結(jié)1、HE4的參考值需按年齡段設(shè)定的參考值需按年齡段設(shè)定2、HE4實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差52、HE4個(gè)體日間變異度約個(gè)體日間變異度約103、肺部疾病和腎衰、肺部疾病和腎衰HE4水平顯著升高水平顯著升高4、其他樣品前檢測(cè)影響因素對(duì)、其他樣品前檢測(cè)影響因素對(duì)HE4的影響不顯著的影響不顯著5、HE4結(jié)果結(jié)果超過(guò)參考值上限超過(guò)參考值上限20判斷為異常判斷為異常，對(duì)高于，對(duì)高于 正常參考限但未大于正常參考限但未大于20的

21、患者，應(yīng)連續(xù)追蹤觀察。的患者，應(yīng)連續(xù)追蹤觀察。患者患者HE4結(jié)果的初步判斷結(jié)果的初步判斷 患者，女，患者，女，4545歲，歲，B B超超檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊，檢查發(fā)現(xiàn)卵巢腫塊， 羅氏試劑電化學(xué)發(fā)光羅氏試劑電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)血清法檢測(cè)血清HE4HE4濃度，濃度，結(jié)果為結(jié)果為 136 pmol/L 136 pmol/L 腎功正常，無(wú)肺部疾腎功正常，無(wú)肺部疾病病 病理診斷：卵巢癌病理診斷：卵巢癌實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差約實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)誤差約136x56.8個(gè)體變異個(gè)體變異36x10%=13.6預(yù)計(jì)該患者預(yù)計(jì)該患者HE4的結(jié)果為的結(jié)果為115.6156.4范圍內(nèi)范圍內(nèi)該年齡組參考限為該年齡組參考限為80pmol/L結(jié)論：該患者結(jié)論：該患者HE4異常增高異常增高內(nèi)容內(nèi)容 羅氏 HE4檢測(cè)原理 Elecsys HE4 SFDA注冊(cè)研究概況 Elecsys HE4性能評(píng)估 Elecsys HE4性能小結(jié)Elecsys HE4性能參數(shù)性能參數(shù) 小結(jié)小結(jié)Elecsys HE4 性能參數(shù)性能參數(shù)檢測(cè)時(shí)間檢測(cè)時(shí)間18