PCR產(chǎn)物的純化

1、PCRPCR產(chǎn)物的回收純化產(chǎn)物的回收純化. .實驗?zāi)康膶嶒災(zāi)康?學(xué)習(xí)和掌握從瓊脂糖凝膠中純化回收學(xué)習(xí)和掌握從瓊脂糖凝膠中純化回收DNADNA片段的有片段的有關(guān)技術(shù)。關(guān)技術(shù)。背景知識背景知識vDNADNA片段的純化：主要目的是回收得到純的目的片段的純化：主要目的是回收得到純的目的DNADNA片段，去片段，去除影響除影響DNADNA連接酶活性的物質(zhì)以及其它的連接酶活性的物質(zhì)以及其它的DNADNA片段。片段。v純化純化DNADNA片段的方法有多種，如：電洗脫法、從低熔點或普片段的方法有多種，如：電洗脫法、從低熔點或普通瓊脂糖凝膠中回收、玻璃珠純化、柱層析以及硅膠吸附等通瓊脂糖凝膠中回收、玻璃珠純化、

2、柱層析以及硅膠吸附等方法。目前一些生物公司推出了直接從方法。目前一些生物公司推出了直接從 PCRPCR產(chǎn)物中或瓊脂糖產(chǎn)物中或瓊脂糖凝膠中回收凝膠中回收DNADNA片段的試劑盒，有效地加快了片段的試劑盒，有效地加快了DNADNA的純化的速的純化的速度。度。實驗材料實驗材料vPCRPCR產(chǎn)物產(chǎn)物(1.15kb(1.15kb，帶有，帶有BamBamHIHI、XhoXhoI I酶切位點酶切位點) )v酚；氯仿；無水乙醇；酚；氯仿；無水乙醇；70%70%乙醇；滅菌雙蒸水乙醇；滅菌雙蒸水vTAETAE緩沖液緩沖液(1(1) )v上樣液上樣液(10(10) )實驗儀器實驗儀器v1、瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)v2、紫

3、外觀察分析儀v3、離心機（Eppendoff）v4、單面刀片實驗步驟實驗步驟v1、制備1%瓊脂糖凝膠，然后對目的DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳。v2、在紫外燈下切出含有目的DNA的瓊脂糖凝膠，用紙巾吸盡凝膠表面的液體。 此時應(yīng)注意盡量切除不含目的此時應(yīng)注意盡量切除不含目的DNADNA部分的凝膠，部分的凝膠，盡量減少凝膠體積，提高盡量減少凝膠體積，提高DNADNA回收率?；厥章?。 注：切膠時請注意不要將注：切膠時請注意不要將DNADNA長時間暴露于紫外長時間暴露于紫外燈下，以防止燈下，以防止DNADNA損傷損傷。v3、將切下的凝膠放入Eppendorf管中，移入100ulTE緩沖液，使其浸沒于TE緩沖液中v4、搗碎凝膠 ,-80 ,10min 。v5、加入等體積（各200L )酚氯仿，蓋緊，劇烈振搖。 10000rpm 4 離心5分鐘。v6在一新1.5mL 離心管中加入 2.5倍體積預(yù)冷 無水乙醇、1/10體積3M的醋酸鈉。將步驟5的上清小心加入本步驟離心管中。顛倒數(shù)次混勻。在 -80,靜置30min，12000rpm 4 離心15分鐘。v7棄上清，將離心管倒置于干凈吸水紙巾上5分鐘。室溫下吹風(fēng)