菌體收集與干燥

1、菌體收集與干燥 將培養(yǎng)到期的培養(yǎng)物（要求生孢率達(dá)90%以上）經(jīng)過(guò)純菌試驗(yàn)，確認(rèn)無(wú)雜菌污染。將上述培養(yǎng)物4000rpm/min轉(zhuǎn)速離心20分鐘，棄上清，收獲濕菌體。將濕菌體與無(wú)水碳酸鈣以1：3（重量比）混合攪拌成濕菌粉。在7080條件下干燥，并研磨、過(guò)篩制成粉末狀菌粉。菌粉的鑒定 5.1 外觀 5.2 目的菌檢驗(yàn) 5.3 干燥失重 5.4 活菌數(shù)測(cè)定 采用肉眼觀察，應(yīng)為白色，灰白色或灰黃色粉末。 取少量菌粉加入適量滅菌生理氯化鈉溶液或其他適宜稀釋液以后，涂布在適宜的瓊脂平皿上，在適宜條件下培養(yǎng)，其培養(yǎng)物的生長(zhǎng)特性和染色鏡檢的特征應(yīng)符合生產(chǎn)用菌種特征。 按儀器方法測(cè)定，除另有規(guī)定外，芽孢菌制品的減

2、失重量應(yīng)不得超過(guò)7.0%。 無(wú)菌稱取3.0g菌粉（膠囊取內(nèi)容物），加入27.0ml稀釋液中，充分搖勻，做10倍系列稀釋（最終稀釋度根據(jù)不同的指標(biāo)要求而定）。取最終稀釋度的菌液100l，滴入選擇性瓊脂培養(yǎng)基平皿上，共做3個(gè)平皿，并以玻棒涂布均勻，置適宜條件下培養(yǎng)，到期觀察每個(gè)平皿菌落生長(zhǎng)情況，并計(jì)數(shù)。當(dāng)平皿菌落數(shù)小于10或大于300時(shí)，應(yīng)調(diào)整最終稀釋度，重新測(cè)定。根據(jù)3個(gè)平皿菌落總數(shù)按下列公式計(jì)算活菌數(shù)：活菌數(shù)（CFU/g）=3個(gè)平皿菌落數(shù)之和/3*10*最終稀釋度活菌數(shù)應(yīng)大于等于200億個(gè)活菌/克【附注】 （1） 活菌數(shù)用“CFU”表示，即為細(xì)菌集落單位。（2） 稀釋液使用滅菌生理氯化鈉溶液或

3、其他適宜的稀釋液。（3） 選擇性瓊脂培養(yǎng)基，是指最適宜制劑（或菌粉）中活菌生長(zhǎng)的培養(yǎng)基。須經(jīng)批準(zhǔn)后方可使用。膠囊制備 將上述原菌粉與滅菌過(guò)篩（篩孔為80目）地乳糖、可溶性淀粉按下述重量比混合：原菌粉2份，乳糖10份、可溶性淀粉88份，并充分?jǐn)噭?，其中上述菌粉混合物的活菌?shù)控制在1108個(gè)活菌數(shù)/克。將菌粉混合物置于膠囊灌裝機(jī)內(nèi)罐裝，壓板、包裝，制成枯草芽孢桿菌膠囊制劑，其中每粒膠囊為0.25克/粒。成品鑒定 7.1 鑒別試驗(yàn) 7.2 理化檢查 （外觀、干燥失重、裝量差異 、崩解時(shí)限） 7.3 活菌數(shù)測(cè)定 7.4 安全試驗(yàn) 檢查成品中所含的目的菌是否符合生產(chǎn)用菌種的特性。即按上述“種子批的檢定”

4、方法進(jìn)行生長(zhǎng)特性、染色鏡檢和生化反應(yīng)檢查，應(yīng)符合規(guī)定。7.2.1 外觀 膠囊劑內(nèi)粉末的粒子大小、色澤應(yīng)均勻，間有菌粉色斑。7.2.2 干燥失重 按儀器方法測(cè)定，除另有規(guī)定外，芽孢菌制品的減失重量應(yīng)不得超過(guò)7.0%。 取供試品20粒，分別精密稱定質(zhì)量后，傾出內(nèi)容物（不能損失囊殼），硬膠囊殼用小刷或其他事宜的用具（如棉簽）拭凈，再分別精密稱定囊殼質(zhì)量，求得每粒內(nèi)容物裝量與平均裝量。每粒裝量與平均裝量相比，超出限度差異的膠囊不得多于2粒，并不得有1粒超出裝量差異限度的1倍。 膠囊劑的裝量差異限度：0.3g以下在10以內(nèi)7.2.4 崩解時(shí)限 硬膠囊或軟膠囊，除另有規(guī)定外，取供試品6粒，按片劑的裝置與方法進(jìn)行檢查（使用崩解籃）。硬膠囊應(yīng)在30分鐘內(nèi)全部崩解并通過(guò)篩網(wǎng)（囊殼碎片除外），如有1粒不能完全崩解，應(yīng)另取6粒復(fù)試，均應(yīng)符合規(guī)定。 見(jiàn)“菌粉”的活菌測(cè)定 安全試驗(yàn)是通過(guò)動(dòng)物試驗(yàn)進(jìn)行的非特異性毒性檢查，應(yīng)根據(jù)制品的使用途徑和人用劑量確定試驗(yàn)方法。 腸道微生態(tài)活菌制品檢查 ：稱取2g制品，加入8ml生理氯化鈉溶液中，混合均勻。用5只體重1822g小鼠，每只小鼠經(jīng)口灌胃0.