急性有機(jī)氟殺鼠劑中毒0305

1、急性有機(jī)氟殺鼠劑中毒事件衛(wèi)生應(yīng)急處置技術(shù)方案有機(jī)氟殺鼠劑以氟乙酰胺、氟乙酸鈉等最為常見(jiàn)。急性有機(jī)氟殺鼠劑中毒是短期內(nèi)接觸有機(jī)氟殺鼠劑后引起的以中樞神經(jīng)系統(tǒng)和心臟損害為主的全身性疾病。1概述氟乙酰胺和氟乙酸鈉為白色晶體,易溶于水,常溫下化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定。有機(jī)氟殺鼠劑均為高毒或劇毒化學(xué)物,其中毒途徑主要為經(jīng)口攝入，絕大多數(shù)為污染、誤用、投毒引起中毒，如食用有機(jī)氟殺鼠劑污染的食品和飲用水，也可經(jīng)皮膚黏膜吸收。2中毒事件的調(diào)查和處理2.1現(xiàn)場(chǎng)處置人員的個(gè)體防護(hù)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查人員的個(gè)體防護(hù)無(wú)特殊要求?，F(xiàn)場(chǎng)采樣人員采集樣品時(shí)，應(yīng)當(dāng)佩戴醫(yī)用防護(hù)口罩，乳膠手套和防護(hù)眼罩，防護(hù)服無(wú)特殊要求。醫(yī)療救護(hù)人員在救護(hù)中毒病人時(shí)，

2、一般不必穿戴特殊防護(hù)裝備。2.2中毒事件的調(diào)查調(diào)查人員到達(dá)中毒現(xiàn)場(chǎng)后，應(yīng)當(dāng)先了解中毒事件的概況，懷疑由餐飲食品引起的有機(jī)氟中毒時(shí)，應(yīng)當(dāng)及時(shí)向有關(guān)部門提出收集并封存所有可疑中毒食品和其他可能導(dǎo)致本次中毒事件物品的建議，然后進(jìn)行中毒事件相關(guān)場(chǎng)所、人員等調(diào)查工作，主要包括人群流行病學(xué)調(diào)查和危害因素調(diào)查。中毒事件危害因素調(diào)查包括中毒事件涉及可疑食品的原料、生產(chǎn)加工、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、銷售、食用等過(guò)程中的相關(guān)危害因素以及使用的原料和配料、調(diào)料、食品容器、使用的工具，食品的分裝、儲(chǔ)存條件以及食用方法等。人群流行病學(xué)調(diào)查對(duì)象應(yīng)當(dāng)包括中毒病人、目擊證人以及其他相關(guān)人員（如生產(chǎn)加工人員、商店銷售服務(wù)人員等）。調(diào)查內(nèi)容

3、包括接觸時(shí)間、接觸物質(zhì)、接觸人數(shù)、中毒人數(shù)、中毒的主要癥狀、中毒事件的進(jìn)展情況、已經(jīng)采取的緊急措施以及可疑食品來(lái)源、生產(chǎn)單位、日期、批號(hào)，配方、加工工藝流程、生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)過(guò)程危害因素控制、生產(chǎn)經(jīng)營(yíng)記錄等信息。同時(shí)，還應(yīng)當(dāng)向臨床救治單位進(jìn)一步了解相關(guān)資料（如搶救過(guò)程、臨床治療資料、實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果等）。對(duì)現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查的資料作好記錄，進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)拍照、錄音等。取證材料要有被調(diào)查人的簽字。在調(diào)查工作中要作好相關(guān)的記錄，被調(diào)查者應(yīng)當(dāng)在記錄上和其提供的材料上簽字確認(rèn)，拒絕簽字的，由調(diào)查人員會(huì)同1名以上現(xiàn)場(chǎng)見(jiàn)證人員在相應(yīng)材料上注明原因并簽字。2.3現(xiàn)場(chǎng)中毒樣品的快速檢測(cè)懷疑氟乙酰胺中毒時(shí)，可以使用改良奈氏試劑法（附件2

4、）或異羥肟酸鐵反應(yīng)法（附件3）對(duì)中毒事件現(xiàn)場(chǎng)采集的可疑中毒食品、水以及中毒病人的嘔吐物等樣品進(jìn)行快速定性檢測(cè)。2.4 中毒事件的確認(rèn)和鑒別2.4.1 中毒事件的確認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)同時(shí)具有以下三點(diǎn)，可以確認(rèn)為急性有機(jī)氟殺鼠劑中毒事件：a) 中毒病人存在有機(jī)氟殺鼠劑接觸機(jī)會(huì)；b) 中毒病人短時(shí)間內(nèi)出現(xiàn)以癲癇樣大發(fā)作、頭痛、頭暈等中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害和/或心律失常、心肌損傷等心臟損害為主的臨床表現(xiàn)；c) 血、嘔吐物和/或食物等樣品中檢出有機(jī)氟殺鼠劑。2.4.2 中毒事件的鑒別應(yīng)當(dāng)注意其它毒物中毒（如毒鼠強(qiáng)中毒、霉變甘蔗中毒、有機(jī)氯殺蟲(chóng)劑中毒等），以及乙型腦炎、流行性腦脊髓膜炎等傳染病疫情、群體性癔病、急性心肌炎、

5、特發(fā)性癲癇等鑒別。2.5 現(xiàn)場(chǎng)醫(yī)療救援現(xiàn)場(chǎng)醫(yī)療救援首要措施是迅速控制中毒病人的抽搐發(fā)作，并保持呼吸道通暢。意識(shí)清晰的中毒病人應(yīng)當(dāng)立即進(jìn)行催吐，有條件可給予活性炭（成人用量為50g，兒童用量為1g/kg）口服。當(dāng)出現(xiàn)大批中毒病人，應(yīng)當(dāng)首先進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢傷分類，優(yōu)先處理紅標(biāo)病人。2.5.1 現(xiàn)場(chǎng)檢傷分類a) 紅標(biāo)，具有下列指標(biāo)之一者：昏迷；癲癇樣發(fā)作呈持續(xù)狀態(tài)；窒息。b) 黃標(biāo)，具有下列指標(biāo)者：癲癇樣大發(fā)作。c) 綠標(biāo)，具有下列指標(biāo)者： 出現(xiàn)局灶性癲癇樣發(fā)作，以及頭痛、頭暈、乏力、胸悶、心悸、惡心、嘔吐等癥狀。d) 黑標(biāo)，同時(shí)具備下列指標(biāo)者：意識(shí)喪失，瞳孔散大，無(wú)自主呼吸，大動(dòng)脈搏動(dòng)消失。2.5.2

6、現(xiàn)場(chǎng)醫(yī)療救援對(duì)于紅標(biāo)病人要保持復(fù)蘇體位，立即建立靜脈通道。抽搐發(fā)作者，立即緩慢靜脈注射地西泮，必要時(shí)可聯(lián)合應(yīng)用苯巴比妥鈉。黃標(biāo)病人和紅標(biāo)病人出現(xiàn)呼吸節(jié)律明顯不規(guī)律、窒息或嚴(yán)重缺氧等情況時(shí)，及時(shí)給予氣道開(kāi)放、呼吸支持。綠標(biāo)病人脫離環(huán)境后，暫不予特殊處理，觀察病情變化。2.5.3 病人轉(zhuǎn)送中毒病人經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)急救處理后，應(yīng)當(dāng)立即就近轉(zhuǎn)送至有血液凈化條件的醫(yī)院繼續(xù)觀察和治療。3中毒樣品的采集與檢測(cè)3.1 采集樣品的選擇選擇全血作為采集樣品。3.2 樣品的采集方法采血人員應(yīng)當(dāng)戴無(wú)粉乳膠或聚乙烯手套，在潔凈的環(huán)境中，采用肝素鋰(鈉)抗凝采血管，同時(shí)采集2份全血樣品，每份采集量不少于5ml。隨機(jī)抽取與樣品采集同

7、批號(hào)的采血管2份，作為樣品空白。3.3 樣品采集時(shí)機(jī)樣品應(yīng)當(dāng)在接觸毒物后盡快采集，6小時(shí)以內(nèi)采集的樣品可以進(jìn)行氟乙酰胺、氟乙酸根離子定性定量檢測(cè)，6小時(shí)到24小時(shí)之間采集的樣品可以進(jìn)行氟乙酸根離子定性定量檢測(cè)。3.4 樣品的保存和運(yùn)輸將采集后的樣品和樣品空白置于清潔容器中冷凍運(yùn)輸。樣品采集后應(yīng)當(dāng)盡快送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析測(cè)定。所有實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)完畢后的樣品和未檢樣品，應(yīng)當(dāng)在冷凍（-80）條件下至少保存1周以上，以備樣品復(fù)測(cè)。3.5 推薦的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法3.5.1全血中氟乙酸根離子液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法（附件4）。3.5.2全血中氟乙酰胺的氣相色譜質(zhì)譜檢測(cè)方法（附件5）。3.5.3全血中氟乙酸根離子的離

8、子色譜檢測(cè)方法（附件6）。3.5.4生物樣品中氟乙酸根離子的氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢驗(yàn)方法。（GA/T933-2011）4醫(yī)院內(nèi)救治4.1 病人交接中毒病人送到醫(yī)院后，由接收醫(yī)院的接診醫(yī)護(hù)人員與轉(zhuǎn)送人員對(duì)中毒病人的相關(guān)信息進(jìn)行交接，并簽字確認(rèn)。4.2診斷和診斷分級(jí)救治醫(yī)生對(duì)中毒病人或陪護(hù)人員進(jìn)行病史詢問(wèn)，對(duì)中毒病人進(jìn)行體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查，確認(rèn)中毒病人的診斷，并進(jìn)行診斷分級(jí)。4.2.1診斷及診斷分級(jí)中毒病人有明確的有機(jī)氟殺鼠劑接觸證據(jù)（病人本身或共同暴露其他病人的生物材料中檢出有機(jī)氟殺鼠劑，或相關(guān)食品、水等接觸樣品中檢出有機(jī)氟殺鼠劑等），出現(xiàn)了以頭痛、頭暈、癲癇樣發(fā)作等中樞神經(jīng)系統(tǒng)損害和

9、/或心律失常、心肌損傷等心臟損害為主的特征性臨床表現(xiàn)，可確認(rèn)急性有機(jī)氟中毒的診斷。對(duì)于有有機(jī)氟殺鼠劑接觸機(jī)會(huì)，無(wú)特征性臨床癥狀者可作為觀察對(duì)象。具體診斷分級(jí)如下：a) 輕度中毒：具有下列情況之一者：i出現(xiàn)頭痛、頭暈、惡心、嘔吐、四肢無(wú)力等癥狀，可有局灶性癲癇樣發(fā)作；ii心電圖出現(xiàn)輕度缺血性改變，或CK-MB達(dá)到或超過(guò)正常參考值2倍以上至5倍以下，并伴有AST、LDH等酶相應(yīng)增高，或肌鈣蛋白檢測(cè)陽(yáng)性； 出現(xiàn)陣發(fā)性室上性心動(dòng)過(guò)速，單源頻發(fā)室性期前收縮，莫氏型房室傳導(dǎo)阻滯等心律失常之一。b) 中度中毒：在輕度中毒基礎(chǔ)上，具有下列之一者：i癲癇樣大發(fā)作；ii精神病樣癥狀，如幻覺(jué)、妄想等； 心電圖有明顯

10、缺血性改變，或CK-MB達(dá)到或超過(guò)正常參考值5倍以上，并伴有AST、LDH等酶相應(yīng)增高； 出現(xiàn)陣發(fā)性室性心動(dòng)過(guò)速，多源性室性期前收縮，成對(duì)或RonT型室性期前收縮，莫氏型房室傳導(dǎo)阻滯等心律失常之一。c) 重度中毒：具有下列之一者：i癲癇樣發(fā)作呈持續(xù)狀態(tài)；ii 出現(xiàn)度房室傳導(dǎo)阻滯、尖端扭轉(zhuǎn)型室性心動(dòng)過(guò)速、心室顫動(dòng)或心室停搏等心律失常之一； 出現(xiàn)腦、心、肺、腎、肝等臟器功能衰竭。4.3 治療接收醫(yī)院對(duì)所接收的中毒病人確認(rèn)診斷后，根據(jù)病情的嚴(yán)重程度將病人送往不同科室進(jìn)行進(jìn)一步救治。觀察對(duì)象進(jìn)行至少48h醫(yī)學(xué)觀察，輕、中度中毒病人住院治療，重度中毒病人立即進(jìn)行搶救治療。4.3.1 清除體內(nèi)毒物a) 催

11、吐：對(duì)于意識(shí)清晰、經(jīng)口中毒早期者，可進(jìn)行催吐。1歲以下及不能配合的兒童不要進(jìn)行催吐治療。b) 洗胃：對(duì)經(jīng)口中毒不足24h，無(wú)洗胃禁忌癥的病人均要進(jìn)行洗胃。重度中毒的病人洗胃后可保留洗胃管，以備反復(fù)灌入活性炭。c) 活性炭：無(wú)使用活性炭禁忌癥的中毒病人均可考慮給予活性炭治療。輕度中毒病人洗胃后給予活性炭1次，中、重度中毒病人可反復(fù)使用，使用劑量一般為成人每次30g50g，兒童每次1g/kg。d) 血液凈化：首選血液透析治療，中、重度中毒病人在保證生命體征平穩(wěn)的情況下，應(yīng)當(dāng)早期進(jìn)行血液凈化治療，可多次進(jìn)行。4.3.2 特效解毒藥物乙酰胺為特效解毒劑，需早期、足量應(yīng)用。輕、中度中毒病人每次2.5g5

12、.0g，肌內(nèi)注射，每日24次，連用57日；重度中毒病人首日每次可給予5.0g10.0g。兒童使用劑量為每次0.1g/kg0.3g/kg。4.3.3鎮(zhèn)靜止驚a) 地西泮：癲癇樣大發(fā)作和癲癇樣發(fā)作持續(xù)狀態(tài)的首選藥物。成人每次10mg20mg，兒童每次0.3mg/kg0.5mg/kg，或按（年齡+1）mg計(jì)算，如1歲2mg、2歲3mg等，兒童每次用量不超過(guò)10mg，嬰幼兒每次用量不超過(guò)2mg，緩慢靜脈注射。注射速度成人不大于5mg/min，兒童不大于2 mg/min，新生兒0.1mg/min0.2mg/min。必要時(shí)1520分鐘可重復(fù)靜脈注射。使用時(shí)應(yīng)注意氣道保護(hù)，防止發(fā)生呼吸抑制。b) 苯巴比妥鈉

13、：為基礎(chǔ)用藥，可與其他鎮(zhèn)靜止驚藥物合用。輕度中毒，每次0.1g，每8小時(shí)1次，肌內(nèi)注射；中、重度中毒，每次0.1g0.2g，每6h8h時(shí)1次，肌內(nèi)注射。抽搐停止后減量使用37天。兒童每次8mg/kg10mg/kg，每12小時(shí)1次，連用2天，每日最大用量不超過(guò)20mg/kg，以后再予每天3mg/kg5mg/kg維持。c) 咪達(dá)唑侖：控制癲癇樣大發(fā)作和癲癇樣發(fā)作持續(xù)狀態(tài)。成人每次5mg10mg，兒童每次0.15mg/kg0.3mg/kg，緩慢靜脈注射，注射速度成人不大于4mg/min，兒童不大于1.25mg/min。必要時(shí)1520分鐘可重復(fù)靜脈注射。發(fā)作頻繁者，可以（0.10.4）mg/kg.h或

14、（26）g/kg.min持續(xù)靜脈點(diǎn)滴，發(fā)作控制12小時(shí)后減量停用。使用時(shí)應(yīng)注意氣道保護(hù)，防止發(fā)生呼吸抑制。d）其他：癲癇持續(xù)狀態(tài)超過(guò)30min，連續(xù)兩次使用地西泮或咪達(dá)唑侖，抽搐仍不能得到有效控制，應(yīng)及時(shí)使用靜脈麻醉劑。4.3.4 保護(hù)心肌、控制心律失常 使用能量合劑、維生素C、輔酶Q10、1-6二磷酸果糖等藥物以保護(hù)心肌、改善心肌細(xì)胞代謝；及時(shí)使用抗心律失常藥物控制心律失常，出現(xiàn)莫氏型或度房室傳導(dǎo)阻滯伴血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定者，可考慮安裝臨時(shí)起搏器。4.3.5 其他對(duì)癥支持治療加強(qiáng)營(yíng)養(yǎng)、合理膳食，注意水、電解質(zhì)及酸堿平衡，密切監(jiān)護(hù)心、腦、肝、腎等重要臟器功能，出現(xiàn)呼吸衰竭、腦水腫、精神障礙以及肝腎

15、功能障礙時(shí)，應(yīng)及時(shí)給予氧療、呼吸機(jī)支持、脫水降顱壓等相應(yīng)對(duì)癥支持治療措施。5 應(yīng)急反應(yīng)的終止中毒食品和其他可疑毒物已經(jīng)完全收繳和銷毀，中毒相關(guān)危險(xiǎn)因素已被有效控制，未出現(xiàn)新的中毒病人且原有病人病情穩(wěn)定24h以上。10附件1致痙攣性殺鼠劑的理化性質(zhì)和毒性毒物名稱CAS分子式物理特性化學(xué)性質(zhì)毒性人最低致死劑量備注動(dòng)物途徑LD50（mg/kg）氟乙酰胺640-19-7C2H4OFN白色針狀結(jié)晶，無(wú)臭無(wú)味，易溶于水、乙醇、丙酮，微溶于氯仿?？諝庵幸壮苯?，熔點(diǎn)107108。常溫下化學(xué)性質(zhì)較為穩(wěn)定。大鼠經(jīng)口5.75 mg/kg可造成二次中毒。氟乙酸鈉62-74-8FCH2COONa白色晶體，略帶醋酸氣味，

16、極易溶于水，微溶于丙酮、乙醇。在空氣中易潮解成糖漿狀。常溫下化學(xué)性質(zhì)較為穩(wěn)定，但高于200可以分解。大鼠經(jīng)口0.15 mg/kg可引起二次中毒甘氟80650-71-2C3H6OF2占70%80%，C3H6OFCl占20%30%無(wú)色或微黃色透明油狀液體，具有揮發(fā)性，略帶酸味，能與水、醇、乙醚混溶?；瘜W(xué)性質(zhì)穩(wěn)定大鼠經(jīng)口30可引起二次中毒。經(jīng)皮66附件2改良奈氏試劑法定性測(cè)定食品、生物樣品中氟乙酰胺1 適用范圍適用于食品樣品及部分生物樣品(嘔吐物、胃液和胃內(nèi)容物)中氟乙酰胺的定性測(cè)定，測(cè)定結(jié)果可作為初步判斷事件中毒物的重要參考，不能作為確定事件性質(zhì)的依據(jù)。氟乙酰胺的檢測(cè)目前無(wú)分析方法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，遇重大

17、突發(fā)事件性質(zhì)的判定，建議采用其他分析方法加以確證。2 原理氟乙酰胺水溶液遇到強(qiáng)堿性的奈氏試劑,逐漸水解出氨,與奈氏試劑作用,產(chǎn)生黃棕色沉淀。3 方法重要參數(shù)3.1 檢出限：0.5g。 3.2 干擾：銨鹽存在假陽(yáng)性干擾。3.3 全程測(cè)定時(shí)間：20min。4 器材與試劑4.1 試劑奈氏試劑:11.5g碘化汞和8g碘化鉀溶于少量水中,溶后加水稀釋至50ml,再加入25%氫氧化鈉50ml,靜置過(guò)夜。取上清液置于棕色瓶中待用。4.2 陽(yáng)性對(duì)照樣品：5ml胃液中加50g氟乙酰胺。4.3 陰性對(duì)照樣品：5ml胃液中加50g溴鼠隆。5 測(cè)定5.1 樣品處理固體或半固體(胃內(nèi)容物、嘔吐物)樣品,可采用有機(jī)溶劑直

18、接提取法。一般常用甲醇或乙醇浸泡,在50水浴上溫浸1h2h。如用其他有機(jī)溶劑(乙酸乙酯、氯仿等)時(shí),可在提取容器中充分振搖,然后過(guò)濾,濾液置60水浴上蒸發(fā)至近干,用適量甲醇溶解殘?jiān)?混濁時(shí)可過(guò)濾),溶液供檢驗(yàn)用;液體樣品(飲水、菜湯、飲料),可直接用氯仿等有機(jī)溶劑提取或用透析法處理,也可采用在水浴上蒸去水分后再用甲醇浸出。5.2 測(cè)定取處理后的樣品溶液1ml2ml ,加奈氏試劑1ml2ml ,如有氟乙酰胺,在滴加試劑約0.5min，觀察顏色變化。如測(cè)定食品樣品氟乙酰胺，應(yīng)同時(shí)與氟乙酰胺標(biāo)準(zhǔn)和水質(zhì)等作對(duì)照。如測(cè)定胃液和胃容物中氟乙酰胺時(shí)，同時(shí)與陽(yáng)性樣品和陰性樣品對(duì)照。6 結(jié)果判定陽(yáng)性：淡黃色黃色

19、亮黃色深黃色，2min 后逐漸混濁，最后生成桔紅色沉淀。陰性：無(wú)顏色反應(yīng)。7 說(shuō)明7.1 如有銨鹽存在，滴加試劑后立即生成桔紅色沉淀。7.2 對(duì)含量低的或含量高的樣品要用幾種檢驗(yàn)方法來(lái)確證，以避免假陽(yáng)性和假陰性，同時(shí)要以氟乙酰胺標(biāo)準(zhǔn)和水質(zhì)等作對(duì)照試驗(yàn)，以便檢查操作是否準(zhǔn)確。7.3 樣品分離提取后，得到的毒物數(shù)量往往很少，而且常常又不能重復(fù)采樣，為此，在試驗(yàn)前以消耗少量的樣品進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)后，再進(jìn)行確證試驗(yàn)。附件3異羥肟酸鐵反應(yīng)法定性測(cè)定食品等樣品中氟乙酰胺1 適用范圍 本方法適用于食品、毒餌、水、嘔吐物樣品，可作為初步判斷事件中毒物的重要參考，不能作為確定事件性質(zhì)的依據(jù)。氟乙酰胺的檢測(cè)目前無(wú)分析方

20、法國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，遇重大突發(fā)事件性質(zhì)的判定，建議采用其他分析方法加以確證。2 原理氟乙酰胺與羥胺在堿性條件下，生成異羥肟酸，與三價(jià)鐵離子作用發(fā)生變色反應(yīng)，通過(guò)顏色變化，可對(duì)氟乙酰胺進(jìn)行定性。3 方法重要參數(shù)3.1 檢出限：50g/ml。3.2 干擾：堿度過(guò)高對(duì)其可造成假陽(yáng)性干擾，酸度過(guò)高可造成假陰性干擾。3.3 全程測(cè)定時(shí)間：15min。4 試劑和儀器4.1 儀器：酒精燈1個(gè)（或電熱杯1個(gè)）、試管若干、500ml燒杯1個(gè)、100ml燒杯2個(gè)、漏斗或滴管1個(gè)、玻璃棒1個(gè)、濾紙若干，PH試紙。4.2 試劑：活性炭或中性氧化鋁、氫氧化鈉溶液，鹽酸羥胺溶液、鹽酸溶液、三氯化鐵。4.3 氟乙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品可從公安

21、部門獲得。5 樣品前處理由于現(xiàn)場(chǎng)所采集的樣品成分復(fù)雜，除少數(shù)樣品，例如市售鼠藥或工業(yè)原粉，可直接用本方法檢測(cè)外，其他樣品均需進(jìn)行樣品前處理來(lái)以去除雜質(zhì)干擾，提高靈敏度和降低假陽(yáng)性率。5.1 鼠藥和工業(yè)原粉直接取少量0.1g0.5g樣品進(jìn)行檢測(cè)。5.2 固體樣品（毒餌、米、面、茶葉、鹽、嘔吐物等）取固體樣品（顆粒大的固體需先研磨碎）2g5g放入10ml比色管中，加入3倍于樣品重的蒸餾水，振搖后過(guò)濾，將上清液用濾紙過(guò)濾，重復(fù)上述過(guò)程一次，合并上清液至一大試管內(nèi)，將比色管置于沸水浴中，使濾液煮沸濃縮至1ml左右。注意：不要將已經(jīng)揮發(fā)干的試管長(zhǎng)時(shí)間置于沸水浴中，否則會(huì)影響回收率，出現(xiàn)假陰性結(jié)果。5.3

22、 液體樣品（水、酒、飲料、醬油、醋等）取液體樣品5ml放入大試管中，加入等量于樣品重的蒸餾水或純凈水，充分振蕩混勻，靜置5min，用分液漏斗或滴管分離上清液，重復(fù)過(guò)程一次，合并上清液至大試管內(nèi)，將試管置于沸水浴中，使濾液煮沸濃縮至1ml左右。醬油、醋、有顏色的飲料等液體樣品使用少量活性炭或中性氧化鋁進(jìn)行脫色處理，以防止顏色干擾。6 樣品測(cè)定取待檢液1ml左右于試管中，加氫氧化鈉溶液10滴，加鹽酸羥胺溶液5滴，置沸水中水浴5min（使其充分水解成氟乙酸鈉釋放出氨）。取出放冷，加鹽酸溶液910滴（調(diào)pH值至35）后，加三氯化鐵溶液310滴（使其與氟乙酸反應(yīng)），取出觀察顏色變化。同時(shí)取一干凈的空試管

23、進(jìn)行同樣操作作為對(duì)照。7 結(jié)果判定陽(yáng)性：粉紅或紫紅色，尤其在滴加后的液面上更為明顯。陰性：淺黃或黃色。8 說(shuō)明8.1 加鹽酸溶液9滴后要用pH試紙測(cè)試溶液pH值，若pH值太高(堿度過(guò)高)，加入三氯化鐵溶液時(shí)可產(chǎn)生紅棕色沉淀，影響結(jié)果判定，造成假陽(yáng)性結(jié)果；若pH值太低(酸度過(guò)高)，加入三氯化鐵溶液后氟乙酰胺顯色不敏銳或不顯色，易造成假陰性結(jié)果。pH值可用氫氧化鈉溶液和鹽酸溶液反向調(diào)整。8.2 空白對(duì)照試驗(yàn)，取與樣品相同（不含氟乙酰胺）的物質(zhì)與樣品同時(shí)操作，以便于觀察對(duì)比。對(duì)于嘔吐物、胃內(nèi)容物等樣品，應(yīng)加陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)。8.3 測(cè)定時(shí)做空白對(duì)照試驗(yàn)，陰性結(jié)果為淺黃或黃色，有些空白對(duì)照為黃棕色絮狀沉淀

24、，靜置后上層液變成無(wú)色或僅呈淺黃色。8.4 本方法不適于血液和組織器官樣品的測(cè)定。8.5 三氯化鐵溶液放置時(shí)間長(zhǎng)時(shí)會(huì)有少量沉淀產(chǎn)生，須搖勻后使用。組合試劑的有效期為1年，陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn)無(wú)反應(yīng)時(shí)不可再用。9 質(zhì)量控制檢測(cè)時(shí)，應(yīng)當(dāng)同時(shí)做陰性樣品及氟乙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品。附件4 全血中氟乙酸根離子液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法1 適用范圍適用于全血中氟乙酸根離子的定性定量分析。2 原理全血樣品經(jīng)乙腈沉淀蛋白后，采用液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用方法檢測(cè)分析，以保留時(shí)間和特征離子定性，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。3 方法重要參數(shù)3.1 線性范圍：5g/L500g/L；3.2精密度：批內(nèi)、批間 RSD10%；3.3準(zhǔn)確度（回收率）：80%

25、105%；3.4方法檢出限：1g/L。4 器材與試劑液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀，振蕩儀，離心機(jī)，微量加樣器，氮吹濃縮儀，0.22m微孔濾膜（水系），氟乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)，乙腈（色譜純），甲酸銨（色譜純）。5 操作步驟5.1 色譜參考條件色譜柱：CSH（氟苯基柱）或C18（50 mm2.1 mm, 1.7 m）；流動(dòng)相：0.4%甲酸銨溶液:乙腈=70:30；流速：0.2mL/min。5.2 質(zhì)譜參考條件離子源：電噴霧離子源（ESI）；檢測(cè)模式：負(fù)離子檢測(cè)模式；掃描模式：MRM模式；監(jiān)測(cè)離子：7733.1；離子源電壓：4.6 KV；離子源溫度：550。5.3樣品預(yù)處理將全血樣品放至室溫混勻后，取0.50ml于離心

26、管中，加3ml乙腈沉淀蛋白，振搖1min，10000rpm/min離心10min，取上清液，氮吹濃縮至干，加入流動(dòng)相0.5ml復(fù)溶，經(jīng) 0.22m微孔濾膜（極性）過(guò)濾后，濾液待測(cè)。5.4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制準(zhǔn)確稱取13mg氟乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品于10ml容量瓶中，用純水定容至刻度，配制成濃度為1300g/ml的氟乙酸鈉標(biāo)準(zhǔn)貯備液，即1000g/ml的氟乙酸根離子標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。置于冰箱4冷藏保存?zhèn)溆谩?.5樣品檢測(cè)5.5.1 樣品定性檢測(cè) 5.5.1.1特征離子和質(zhì)譜條件的確定取氟乙酸根離子標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，采用流動(dòng)相稀釋成濃度約為100g/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以蠕動(dòng)泵直接進(jìn)樣方式在電噴霧負(fù)離子模式下測(cè)定：首先在全掃描模

27、式中獲得氟乙酸的準(zhǔn)分子離子M-H-（m/z 77），優(yōu)化毛細(xì)管電壓及錐孔電壓，使響應(yīng)值最高。然后切換到子離子掃描模式，調(diào)節(jié)碰撞能量，獲得碎片離子（m/z 33.1、m/z 56.9、m/z 48.8等）及相對(duì)離子豐度，確定特征離子和相應(yīng)的質(zhì)譜條件。 5.5.1.2用流動(dòng)相稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液成20g/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述儀器參考條件，進(jìn)樣檢測(cè)后確定氟乙酸根離子的保留時(shí)間以及特征離子。 5.5.1.3檢測(cè)試劑空白、樣品空白、容器空白和空白對(duì)照樣品（正常人全血樣品），確認(rèn)無(wú)干擾。 5.5.1.4 檢測(cè)陽(yáng)性對(duì)照（以空白對(duì)照樣品加標(biāo)作為陽(yáng)性對(duì)照樣品，加標(biāo)濃度為2g/L），確認(rèn)陽(yáng)性對(duì)照樣品能夠檢出。 5.5.1

28、.5 檢測(cè)樣品，將樣品譜圖與空白對(duì)照樣品、標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)比分析，以保留時(shí)間和特征離子定性。5.5.2樣品定量檢測(cè) 5.5.2.1定量離子的選擇在5.5.1.1中選擇相對(duì)豐度最強(qiáng)的碎片離子，與準(zhǔn)分子離子組成特征離子對(duì)（參考：76.833.1）作為定量離子。 5.5.2.2 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制用流動(dòng)相將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋配制成5g/L、10g/L、100g/L、500g/L的氟乙酸根離子標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。 5.5.2.3樣品檢測(cè)取樣品濾液20l進(jìn)樣檢測(cè)，以標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。6 質(zhì)量控制6.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行確認(rèn)，各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到方法要求。6.2 檢測(cè)過(guò)程應(yīng)采取質(zhì)量控制措施，每個(gè)待測(cè)樣品檢測(cè)前必須進(jìn)行試劑

29、空白檢測(cè)，以確認(rèn)進(jìn)樣針和色譜質(zhì)譜儀器系統(tǒng)未受污染。附件5 全血中氟乙酰胺的氣相色譜質(zhì)譜檢測(cè)方法1 適用范圍適用于全血中氟乙酰胺的定性定量分析。2 原理全血中的氟乙酰胺用乙酸乙酯提取，氮吹濃縮后，用乙酸乙酯復(fù)溶，使用氣相色譜-質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，特征離子豐度比與保留時(shí)間定性，標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。 3 方法重要參數(shù) 3.1 線性范圍：5.0g/ml80g/ml；3.2 精密度：批內(nèi)、批間RSD10%； 3.3 準(zhǔn)確度（回收率）：90%105%；3.4 方法檢出限：0.2g/ml。4 器材與試劑 氣相色譜質(zhì)譜儀（四級(jí)桿），毛細(xì)管色譜柱（DB-1701MS或 DB-1MS，30m0.25mm0.2

30、5m），渦旋振蕩器，高速離心機(jī)，氮吹濃縮儀，乙酸乙酯（色譜純），氟乙酰胺標(biāo)準(zhǔn)品。5 操作步驟 5.1 色譜參考條件 進(jìn)樣口溫度：250；傳輸線溫度：280；柱溫：初始溫度80，保持2min，以20/min的速率升溫至280，保持5min；載氣：高純氦氣，流速 1.0ml/min；進(jìn)樣模式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣體積：1.0l。5.2 質(zhì)譜參考條件離子源：EI；離子源能量：70eV；離子源溫度：230；四極桿溫度：150；掃描模式：SIM模式；掃描離子：44 m/z、77 m/z（定量離子）。5.3 樣品預(yù)處理 將全血樣品放至室溫混勻后，取5ml置于試管中，加入5ml乙酸乙酯，充分振蕩混勻，以2000

31、r/min離心2min，分離上清液。重復(fù)提取一次，合并上清液至試管內(nèi)，用氮吹濃縮儀常溫濃縮近干，加入0.5ml乙酸乙酯復(fù)溶后進(jìn)行檢測(cè)。 5.4標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液的配制 用乙酸乙酯準(zhǔn)確配制濃度為800g/ml氟乙酰胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。置于冰箱4冷藏保存。5.5樣品檢測(cè)5.5.1 樣品定性檢測(cè) 5.5.1.1用乙酸乙酯稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液成10g/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述儀器參考條件，進(jìn)樣檢測(cè)后確定氟乙酰胺的保留時(shí)間和特征離子豐度比。 5.5.1.2檢測(cè)試劑空白、樣品空白、容器空白和空白對(duì)照樣品（正常人全血樣品），確認(rèn)無(wú)干擾。 5.5.1.3 檢測(cè)陽(yáng)性對(duì)照（以空白對(duì)照樣品加標(biāo)作為陽(yáng)性對(duì)照樣品，加標(biāo)量為每毫升全血含有1g氟

32、乙酰胺），確認(rèn)陽(yáng)性對(duì)照樣品能夠檢出。 5.5.1.4 檢測(cè)樣品，將樣品譜圖與空白對(duì)照樣品、標(biāo)準(zhǔn)譜圖對(duì)比分析，以保留時(shí)間和特征離子定性。5.5.2樣品定量檢測(cè) 5.5.2.1 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制用乙酸乙酯將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋配制成5.0g/ml、10g/ml、40g/ml、80g/ml氟乙酰胺標(biāo)準(zhǔn)系列溶液。 5.5.2.3樣品檢測(cè)取復(fù)溶樣品溶液進(jìn)樣檢測(cè)，以標(biāo)準(zhǔn)曲線定量。6 質(zhì)量控制 6.1 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)對(duì)檢測(cè)方法進(jìn)行確認(rèn)，各項(xiàng)指標(biāo)達(dá)到方法要求。6.2 檢測(cè)過(guò)程應(yīng)當(dāng)采取質(zhì)量控制措施，每個(gè)待測(cè)樣品檢測(cè)前必須進(jìn)行試劑空白檢測(cè)，以確認(rèn)進(jìn)樣針和色譜質(zhì)譜儀器系統(tǒng)未受污染。附件6 全血中氟乙酸根離子的離子色譜檢測(cè)方法1 適用范圍 適用于全血中氟乙酸根離子的定性定量分析。 2 原理 全血中的氟乙酸根離子用純水提取，用乙腈沉淀蛋白質(zhì)并定容，采用離子色譜法檢測(cè)分析，以保留時(shí)間定性，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量。3