第三章多標記分析儀

1、2022-6-13現(xiàn)代儀器分析現(xiàn)代儀器分析modern Instrumental Analysis 2022-6-132022-6-13第三章第三章 多標記分析儀多標記分析儀 PE VictorTM X4 2022-6-13第三章第三章 多標記分析儀多標記分析儀功能：功能：比色讀數(shù)功能比色讀數(shù)功能化學發(fā)光功能化學發(fā)光功能熒光讀數(shù)功能熒光讀數(shù)功能時間分辨熒光讀數(shù)功能時間分辨熒光讀數(shù)功能第一節(jié)、多標記分析儀原理第一節(jié)、多標記分析儀原理2022-6-13一、比色讀數(shù)功能一、比色讀數(shù)功能b*c*IIlogAbsorbance02022-6-13酶聯(lián)免疫檢測酶聯(lián)免疫檢測ELISA*AntibodyEnz

2、yme ConjugateSubstrateStop SolutionPhotometricMeasurementCoating= Antibody= Enzyme*= Incubation, Washing, AspirationPatient Sample (Antigen)= AntigenTest Procedure2022-6-13二、化學發(fā)光功能二、化學發(fā)光功能Luminescence = the emission of light from any substance occurs from electronically excited statesChemiluminescen

3、ce = light emitted by a chemical reactionBioluminescence = type of chemiluminescence chemical reaction is catalyzed by an enzyme important in studies of gene expression and gene regulation2022-6-13三、熒光讀數(shù)功能三、熒光讀數(shù)功能分子熒光：分子熒光： 基態(tài)基態(tài)( (S0)激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)( (S1、S2激發(fā)態(tài)振動能級激發(fā)態(tài)振動能級) )：吸收特定頻：吸收特定頻率的輻射。率的輻射。符合什么公式？符合什么公式

4、？ 激發(fā)態(tài)激發(fā)態(tài)基態(tài)：多種途徑和方式；速度最快、激發(fā)態(tài)壽基態(tài)：多種途徑和方式；速度最快、激發(fā)態(tài)壽命最短的途徑占優(yōu)勢。命最短的途徑占優(yōu)勢。符合什么公式？符合什么公式？ 分子熒光是激發(fā)光將電子激發(fā)到激發(fā)態(tài)，由激發(fā)態(tài)最低分子熒光是激發(fā)光將電子激發(fā)到激發(fā)態(tài)，由激發(fā)態(tài)最低振動能級躍遷到基態(tài)所發(fā)出的輻射光。振動能級躍遷到基態(tài)所發(fā)出的輻射光。 濃度很低時，熒光強度濃度很低時，熒光強度 If = 2.3 I0 l c = Kc 2022-6-13 鑭系元素銪、釤、鋱、鏑的螯合物經(jīng)紫外光激發(fā)后不鑭系元素銪、釤、鋱、鏑的螯合物經(jīng)紫外光激發(fā)后不僅熒光強度高，而且其衰變時間也長，可達幾百個僅熒光強度高，而且其衰變時間

5、也長，可達幾百個 s s，而樣品中蛋白質(zhì)天然本底熒光的衰變時間為而樣品中蛋白質(zhì)天然本底熒光的衰變時間為1-10ns1-10ns，相差，相差5-65-6個數(shù)量級，因此在時間分辨熒光光度計上測量時，利個數(shù)量級，因此在時間分辨熒光光度計上測量時，利用延遲測量時間，待短半衰期的天然本底熒光完全衰變用延遲測量時間，待短半衰期的天然本底熒光完全衰變后測定，所測信號完全為稀土螯合物的熒光，從而消除后測定，所測信號完全為稀土螯合物的熒光，從而消除了非特異干擾的影響。了非特異干擾的影響。 四、時間分辨熒光讀數(shù)功能四、時間分辨熒光讀數(shù)功能2022-6-13背景熒光背景熒光激激 發(fā)發(fā) 周周 期期超長衰減時間超長衰減

6、時間發(fā)射光強度發(fā)射光強度時間時間檢測窗口檢測窗口四、時間分辨熒光讀數(shù)功能四、時間分辨熒光讀數(shù)功能2022-6-132022-6-13第二節(jié)第二節(jié) 多標記分析儀的光學系統(tǒng)多標記分析儀的光學系統(tǒng)2022-6-13Photodiode一一 光吸收模塊光路圖光吸收模塊光路圖2022-6-13二二 化學發(fā)光模塊光路圖化學發(fā)光模塊光路圖2022-6-13三三 熒光檢測模塊光路圖熒光檢測模塊光路圖2022-6-13激發(fā)光源、激發(fā)光單色器或濾光片，樣品池、熒激發(fā)光源、激發(fā)光單色器或濾光片，樣品池、熒光單色器及設有門控的檢測器光單色器及設有門控的檢測器四四 時間分辨熒光模塊光路圖時間分辨熒光模塊光路圖2022-

7、6-13五五 與分光光度計不同之處與分光光度計不同之處1 1、光路不同、光路不同2 2、樣品池不同、樣品池不同3 3、單色器不同、單色器不同4 4、通量不同、通量不同5 5、樣品量不同、樣品量不同6 6、應用學科不同、應用學科不同2022-6-132022-6-13第三節(jié)第三節(jié) 多標記分析儀的應用多標記分析儀的應用2022-6-13核酸和蛋白質(zhì)的光吸收檢測核酸和蛋白質(zhì)的光吸收檢測酶聯(lián)免疫檢測（酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）細胞活性檢測（細胞活性檢測（MTT）酶動力學分析酶動力學分析細菌內(nèi)毒素檢測細菌內(nèi)毒素檢測濃度測定濃度測定乙酰膽堿脂酶檢測乙酰膽堿脂酶檢測環(huán)境監(jiān)測環(huán)境監(jiān)測一、光吸收主要應用一、光吸

8、收主要應用2022-6-13報告基因基因檢測報告基因基因檢測化學發(fā)光免疫分析化學發(fā)光免疫分析核酸定量核酸定量 ( (PCR Quantification) )酶活分析酶活分析活性氧分析活性氧分析二、發(fā)光主要應用二、發(fā)光主要應用2022-6-13濃度檢測濃度檢測活性分析活性分析熒光熒光ELISA酶聯(lián)免疫檢測（酶聯(lián)免疫檢測（ELISA）研究分子之間相互作用研究分子之間相互作用三、熒光主要應用三、熒光主要應用2022-6-13時間分辨熒光免疫時間分辨熒光免疫激素：甲狀腺激素、甾體類激素。激素：甲狀腺激素、甾體類激素。病毒性肝炎標志物。病毒性肝炎標志物。腫瘤相關(guān)抗原。腫瘤相關(guān)抗原。藥物。藥物。多肽類。多肽類。四、時間分辨熒光主要應用四、時間分辨熒光主要應用2022-6-13 更廣的動力學范圍更廣的動力學范圍 更強的靈敏度更強的靈敏度 每孔更少的試劑每孔更少的試劑 更少的實驗步驟更少的實驗步驟 信號穩(wěn)定性超過信號穩(wěn)