檢驗方法評價

1、檢測系統(tǒng)的性能評價、檢測系統(tǒng)的性能評價、確認和驗證確認和驗證1.1.測量誤差：測量誤差：測量結(jié)果測量結(jié)果減去被測量的減去被測量的真值真值的差，簡稱誤差。的差，簡稱誤差。2.2.隨機誤差：隨機誤差：測量結(jié)果與在重復(fù)條件下，對同一被測量進測量結(jié)果與在重復(fù)條件下，對同一被測量進行無限多次測量所得結(jié)果的平均值之差。行無限多次測量所得結(jié)果的平均值之差。3.3.系統(tǒng)誤差：在重復(fù)性條件下，對同一被測量進行無限多系統(tǒng)誤差：在重復(fù)性條件下，對同一被測量進行無限多次測量所得結(jié)果的平均值與被測量的真值之差稱為系統(tǒng)次測量所得結(jié)果的平均值與被測量的真值之差稱為系統(tǒng)誤差。亦稱為誤差。亦稱為正確度正確度復(fù)習基礎(chǔ)知識復(fù)習基礎(chǔ)

2、知識4 4、正確度：檢測結(jié)果離真值的偏移程度、正確度：檢測結(jié)果離真值的偏移程度5 5、精密度：、精密度：表示測量結(jié)果中隨機誤差大小的程表示測量結(jié)果中隨機誤差大小的程度。度。6 6、準確度：、準確度： 準確度是測量結(jié)果中準確度是測量結(jié)果中系統(tǒng)誤差（正確度）系統(tǒng)誤差（正確度）與與隨機誤差（精密度）隨機誤差（精密度）的綜合的綜合。檢驗結(jié)果應(yīng)該：檢驗結(jié)果應(yīng)該：準確準確精確精確迅速迅速1.實驗方法實驗方法分級分級實驗方法學(xué)與量值實驗方法學(xué)與量值溯源溯源2.參考物的參考物的分級分級3.值溯源值溯源4.方法學(xué)評方法學(xué)評價價第一節(jié)、方法學(xué)與量值溯源第一節(jié)、方法學(xué)與量值溯源 是指準確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳

3、是指準確度最高，系統(tǒng)誤差最小，經(jīng)過詳細的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些細的研究，沒有發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生誤差的原因或在某些方面不夠明確的方法。方面不夠明確的方法。決定性方法決定性方法參考方法參考方法 是指準確度與精密度已經(jīng)充分證實的分是指準確度與精密度已經(jīng)充分證實的分析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測定的析方法，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測定的隨機誤差相比可以忽略不計，有適當?shù)撵`敏度、隨機誤差相比可以忽略不計，有適當?shù)撵`敏度、特異性及較寬的分析范圍。特異性及較寬的分析范圍。常規(guī)方法常規(guī)方法 是指性能指標符合臨床或其他目的是指性能指標符合臨床或其他目的需要，有足夠的精密度、準確度、特異性和需要，有足

4、夠的精密度、準確度、特異性和適當?shù)姆治龇秶医?jīng)濟實用。適當?shù)姆治龇秶?，而且?jīng)濟實用。 一一臨床生化檢驗方法分級臨床生化檢驗方法分級表3-1 臨床生化檢驗項目的決定性方法、參考方法、常規(guī)方法 項目決定性方法 參考方法 常規(guī)方法鈣鈣ID-MSID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、鄰甲酚酞絡(luò)合酮法、MTBMTB法法氯氯ID-MSID-MS、中子活化法、中子活化法電流滴定法電流滴定法硫氰酸汞法、選擇性電極法硫氰酸汞法、選擇性電極法鎂鎂ID-MSID-MS原子吸收分光光度法原子吸收分光光度法MTB MTB 法法鉀鉀ID-MSID-MS、中子活化法、中子活化法火焰光度法火焰光

5、度法離子選擇電極法、火焰光度離子選擇電極法、火焰光度法法鈉鈉中子活化法中子活化法火焰光度法火焰光度法離子選擇電極法、火焰光度離子選擇電極法、火焰光度法法清蛋白清蛋白- -免疫化學(xué)法免疫化學(xué)法溴甲酚綠法溴甲酚綠法總蛋白總蛋白- -凱氏定氮法凱氏定氮法雙縮脲法雙縮脲法肌肝肌肝ID-MSID-MS離子交換層析法離子交換層析法苦味酸法、酶法苦味酸法、酶法尿素尿素ID-MSID-MS尿素酶法尿素酶法二乙酰一肟法、酶法二乙酰一肟法、酶法尿酸尿酸ID-MSID-MS尿酸酶法（紫外）尿酸酶法（紫外）磷鎢酸比色法磷鎢酸比色法膽紅素膽紅素- -重氮反應(yīng)法重氮反應(yīng)法J-G J-G 法、釩酸鹽氧化法法、釩酸鹽氧化法葡

6、萄糖葡萄糖ID-MSID-MS已糖激酶法已糖激酶法葡萄糖氧化酶法葡萄糖氧化酶法膽固醇膽固醇ID-MSID-MSAbell-Kendall Abell-Kendall 法法酶法酶法甘酒三脂甘酒三脂ID-MSID-MS變色酸顯色法變色酸顯色法酶法酶法 （primary reference materials）也稱一級標準品，）也稱一級標準品，與決定性方法平行，用于驗證決定性方法、評價與與決定性方法平行，用于驗證決定性方法、評價與校準參考方法，以及為二級標準品定值。校準參考方法，以及為二級標準品定值。 原級參考物質(zhì)原級參考物質(zhì)次級參考物質(zhì)次級參考物質(zhì) （secondary reference mat

7、erialssecondary reference materials）也稱二）也稱二級標準品級標準品 ，二級標準品的定值源于一級標準，二級標準品的定值源于一級標準品和參考方法，主要用于評價常規(guī)方法，也可品和參考方法，主要用于評價常規(guī)方法，也可為質(zhì)控物定值。為質(zhì)控物定值。 常規(guī)校準品常規(guī)校準品 校準（校準（calibration）指的是對由儀器、方法和試）指的是對由儀器、方法和試劑所組成的檢測系統(tǒng)的校準過程。劑所組成的檢測系統(tǒng)的校準過程。電解質(zhì)、酶類、其他生化指標應(yīng)合理選擇校準品電解質(zhì)、酶類、其他生化指標應(yīng)合理選擇校準品二二臨床生化檢驗的參考物質(zhì)和校準臨床生化檢驗的參考物質(zhì)和校準品品 標準品標

8、準品校準品校準品質(zhì)控品質(zhì)控品一一級標準品用高純化學(xué)物質(zhì)。一般由國家標準計量局出具證書。級標準品用高純化學(xué)物質(zhì)。一般由國家標準計量局出具證書。二級標準品某種成分的濃度可用公認的參考方法測定。由參考二級標準品某種成分的濃度可用公認的參考方法測定。由參考實驗室或權(quán)威學(xué)術(shù)組織出具證書，如實驗室或權(quán)威學(xué)術(shù)組織出具證書，如SRMSRM、BCRBCR、IFCCIFCC。標準品標準品(standard）可用做校準品（）可用做校準品（calibrater），考慮），考慮血清成分復(fù)雜、難以避免基質(zhì)效應(yīng)血清成分復(fù)雜、難以避免基質(zhì)效應(yīng) 。質(zhì)控品多是成分相對穩(wěn)定的混合血清，分為定值和非定值、質(zhì)控品多是成分相對穩(wěn)定的混合

9、血清，分為定值和非定值、凍干或液體，添加了防腐劑和保護劑等。凍干或液體，添加了防腐劑和保護劑等。圖圖21-1 各級參考物質(zhì)和校準品的關(guān)系及其量值傳遞過程各級參考物質(zhì)和校準品的關(guān)系及其量值傳遞過程三三量值溯源量值溯源溯源性溯源性(traceability）是指通過一條具有規(guī)定是指通過一條具有規(guī)定不確定度（不確定度（uncertainty）的不間斷的比較鏈，使的不間斷的比較鏈，使測量結(jié)果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準測量結(jié)果或測量標準的值能夠與規(guī)定的參考標準（通常是國家或國際測量標準）聯(lián)系起來的特性，（通常是國家或國際測量標準）聯(lián)系起來的特性，稱為溯源性。其不間斷的比較鏈稱為溯源鏈。稱為溯源性

10、。其不間斷的比較鏈稱為溯源鏈。溯源性溯源性圖圖3-2 量值溯源和量值傳遞途徑量值溯源和量值傳遞途徑第二節(jié) 檢測系統(tǒng)的性能評價、確認和驗證教學(xué)：教學(xué)： 檢測系統(tǒng)的性能評價檢測系統(tǒng)的性能評價 檢測系統(tǒng)的性能確認檢測系統(tǒng)的性能確認 檢測系統(tǒng)的性能驗證檢測系統(tǒng)的性能驗證系系統(tǒng)統(tǒng)誤誤差差誤差分類誤差分類評價試驗評價試驗評價指標評價指標 理想結(jié)理想結(jié)果果比例系統(tǒng)誤差比例系統(tǒng)誤差回收試驗回收試驗回收率回收率95-105%95-105%恒定系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差干擾試驗干擾試驗干擾值干擾值接近接近0 0比例系統(tǒng)誤差比例系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差恒定系統(tǒng)誤差方法對比試驗方法對比試驗Y=a+bXY=a+bXb b接近接近

11、1.01.0a a接近接近0 0隨機隨機誤差誤差重復(fù)性試驗重復(fù)性試驗（批內(nèi)、批間、（批內(nèi)、批間、日間）、總不精日間）、總不精密度密度CVCV 0.97 0.97，或，或b b 1.031.03。 相關(guān)系數(shù)相關(guān)系數(shù)r r一般情況下，一般情況下，0.9750.975或或2 20.950.95 。二、檢測限的評價二、檢測限的評價 1. 可檢測的最低分析物濃度為檢測系統(tǒng)的可檢測的最低分析物濃度為檢測系統(tǒng)的分析靈敏度或稱檢測限。分析靈敏度或稱檢測限。 分析靈敏度：分析靈敏度：具有定性含義的：具有定性含義的： 檢測低限（檢測低限（LLD） 空白空白具有定量含義的：具有定量含義的： 生物檢測限（生物檢測限（

12、BLD） 加物加物 功能靈敏度（功能靈敏度（FS） CV2.檢測限的不同概念3.檢測限實驗檢測限實驗4.結(jié)果可接受性評價結(jié)果可接受性評價與儀器或試劑廠家標示比較與儀器或試劑廠家標示比較 所謂回收即分析方法正確測定加入所謂回收即分析方法正確測定加入常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。目常規(guī)分析樣品中的純分析物的能力。目的是測定比例系統(tǒng)誤差，以衡量候選方的是測定比例系統(tǒng)誤差，以衡量候選方法的準確度。法的準確度。方法方法 將被分析的純品標準液加入病人將被分析的純品標準液加入病人樣品中，成為分析樣品，原病人樣品樣品中，成為分析樣品，原病人樣品加入相同量的無分析物的溶液作基礎(chǔ)加入相同量的無分析物的溶液作基礎(chǔ)

13、樣品，然后用實驗方法分析，兩者測樣品，然后用實驗方法分析，兩者測定結(jié)果的差值為回收量。定結(jié)果的差值為回收量?；厥章视嬎慊厥章视嬎?以測定血清鈣為例說明如下：以測定血清鈣為例說明如下：樣品制備樣品制備 1)1)基礎(chǔ)樣品：血清基礎(chǔ)樣品：血清2ml2ml蒸餾水蒸餾水0.1ml0.1ml； 2)2)分析樣品：血清分析樣品：血清2ml2ml4mmol/L4mmol/L鈣標準液鈣標準液0.1ml0.1ml； 3)3)分析樣品：血清分析樣品：血清2ml2ml25mmol/L25mmol/L鈣標準液鈣標準液0.1ml0.1ml；故本例的管的加入量分別為：故本例的管的加入量分別為： 回收濃度分析樣品測得濃度基礎(chǔ)

14、樣品測得回收濃度分析樣品測得濃度基礎(chǔ)樣品測得濃度濃度回收率（）回收濃度回收率（）回收濃度/ /加入濃度加入濃度100100 理想的結(jié)果期望回收率達到理想的結(jié)果期望回收率達到100100，要求要求95%-105%95%-105%。現(xiàn)在平均回收現(xiàn)在平均回收率為率為95.795.7. .注意事項注意事項準確吸量。準確吸量。樣品中加入標準液后，總的濃度必須在測定方法的分樣品中加入標準液后，總的濃度必須在測定方法的分析范圍內(nèi)，須作加入高、中、低不同濃度的回收試驗，析范圍內(nèi)，須作加入高、中、低不同濃度的回收試驗，計算平均回收率。計算平均回收率。加入標準液后，使實驗樣品中被測濃度達到醫(yī)學(xué)上具加入標準液后，使

15、實驗樣品中被測濃度達到醫(yī)學(xué)上具有決定意義的濃度。有決定意義的濃度。加入標準液的體積在整個樣品中要少，一般在加入標準液的體積在整個樣品中要少，一般在1010以以內(nèi)。內(nèi)。四、臨床生化干擾試驗四、臨床生化干擾試驗 EP7-AEP7-A干擾：在臨床生化中，由于另一成分的影響或者樣本的特干擾：在臨床生化中，由于另一成分的影響或者樣本的特性，待測的一定濃度的分析物出現(xiàn)有臨床意義的偏倚。性，待測的一定濃度的分析物出現(xiàn)有臨床意義的偏倚。分析物：實驗室測試的物質(zhì)或者成分分析物：實驗室測試的物質(zhì)或者成分干擾物：樣本中不同于分析物的能引起測量偏倚的組分干擾物：樣本中不同于分析物的能引起測量偏倚的組分 。應(yīng)用舉例應(yīng)用

16、舉例尿酸對尿酸對GOD-PODGOD-POD法測定血糖的干擾：法測定血糖的干擾：樣本制備：樣本制備： 基礎(chǔ)樣本：基礎(chǔ)樣本： 血清血清0.9ml+0.1ml0.9ml+0.1ml蒸餾水蒸餾水 分析樣本分析樣本1 1： 血清血清0.9ml+4mmol/L0.9ml+4mmol/L尿酸尿酸0.1ml0.1ml 分析樣本分析樣本2 2： 血清血清0.9ml+8mmol/L0.9ml+8mmol/L尿酸尿酸0.1ml0.1ml 尿酸樣本：蒸餾水尿酸樣本：蒸餾水0.9ml+8mmol/L0.9ml+8mmol/L尿酸尿酸0.1ml0.1ml用用GOD-PODGOD-POD法測定，結(jié)果填入下表。法測定，結(jié)果

17、填入下表。干擾實驗檢測結(jié)果干擾實驗檢測結(jié)果葡萄糖測得值葡萄糖測得值（mmol/Lmmol/L）加入尿酸值加入尿酸值(mmol/L)(mmol/L)干擾值干擾值(mmol/L)(mmol/L)基礎(chǔ)樣本基礎(chǔ)樣本6.506.50分析樣本分析樣本1 16.206.200.400.400.300.30分析樣本分析樣本2 25.955.950.800.800.550.55尿酸樣本尿酸樣本0 0干擾實驗檢測結(jié)果干擾實驗檢測結(jié)果單位濃度尿酸使葡萄糖減少值單位濃度尿酸使葡萄糖減少值= mmol/L= mmol/L表明正常血清尿酸表明正常血清尿酸0.4mmol/L0.4mmol/L，使血糖測定結(jié)果約，使血糖測定結(jié)

18、果約減少減少0.28mmol/L0.28mmol/L。 70804005503002121加入尿酸值加入尿酸值干擾值干擾值五、評價測定線性范圍評價測定線性范圍 （EP6-AEP6-A法）法） 線性范圍（線性范圍（linear rangelinear range）是指系統(tǒng)最）是指系統(tǒng)最終的輸出值（濃度或活性）與被分析物的濃終的輸出值（濃度或活性）與被分析物的濃度或活性成比例的范圍。度或活性成比例的范圍。 線性檢測系統(tǒng)反應(yīng)，包括校準、線性化線性檢測系統(tǒng)反應(yīng)，包括校準、線性化技術(shù)、系數(shù)和儀器反應(yīng)。技術(shù)、系數(shù)和儀器反應(yīng)。 實驗標本實驗標本 線性實驗應(yīng)使用與病人標本相似的標本，最少使用線性實驗應(yīng)使用與病

19、人標本相似的標本，最少使用4 4個濃度水平，推薦個濃度水平，推薦5 5個水平。個水平。高值標本應(yīng)高于線性上限高值標本應(yīng)高于線性上限3030，低值標本應(yīng)低于線，低值標本應(yīng)低于線性低限。性低限。 樣本來源樣本來源病人標本病人標本低濃度的標本稀釋高濃度標本低濃度的標本稀釋高濃度標本用推薦的稀釋液稀釋病人樣本用推薦的稀釋液稀釋病人樣本 病人樣本中添加分析物病人樣本中添加分析物 商業(yè)質(zhì)控物商業(yè)質(zhì)控物/ /校準物校準物/ /線性驗證物質(zhì)線性驗證物質(zhì) 可準備如下血清：可準備如下血清：低濃度低濃度X1X1混合血清；混合血清；高濃度高濃度X5X5混合血清；混合血清；血清血清X2X2：3 3份份“X1”+1X1”

20、+1份份“X5”X5”；血清血清X3X3：2 2份份“X1”+2X1”+2份份“X5”X5”；血清血清X4X4：1 1份份“X1”+3X1”+3份份“X5”X5”。濃度由低到高順序：濃度由低到高順序：X1, X2, X3, X4, X5 X1, X2, X3, X4, X5 配制溶液濃度的計算配制溶液濃度的計算X X為標本濃度，為標本濃度，V V為標本體積為標本體積 實驗程序?qū)嶒灣绦?全部實驗和數(shù)據(jù)采集應(yīng)在同一工作全部實驗和數(shù)據(jù)采集應(yīng)在同一工作日內(nèi)完成。分析序列應(yīng)為隨機排列。有日內(nèi)完成。分析序列應(yīng)為隨機排列。有顯著攜帶污染時，應(yīng)用空白隔開標本。顯著攜帶污染時，應(yīng)用空白隔開標本。每個濃度標本重復(fù)

21、測定每個濃度標本重復(fù)測定4 4次紀錄測定結(jié)果。次紀錄測定結(jié)果。 方法線性實驗記錄表方法線性實驗記錄表 標本濃度標本濃度測定次數(shù)測定次數(shù)X X1 1Y Y1-11-1Y Y1-21-2Y Y1-31-3Y Y1-41-4X X2 2Y Y2-12-1Y Y2-22-2Y Y2-32-3Y Y2-42-4X X3 3Y Y3-13-1Y Y3-23-2Y Y3-33-3Y Y3-43-4X X4 4Y Y4-14-1Y Y4-24-2Y Y4-34-3Y Y4-44-4X X5 5Y Y5-15-1Y Y5-25-2Y Y5-35-3Y Y5-45-4數(shù)據(jù)評估數(shù)據(jù)評估 初步數(shù)據(jù)檢查初步數(shù)據(jù)檢查 離

22、群值檢查離群值檢查 確定線性范圍確定線性范圍 初步數(shù)據(jù)檢查初步數(shù)據(jù)檢查 目視檢查每一個分析的所有結(jié)果有無潛在目視檢查每一個分析的所有結(jié)果有無潛在的離群值。將測量數(shù)據(jù)作為的離群值。將測量數(shù)據(jù)作為Y Y值，計算濃度或相值，計算濃度或相對濃度作為對濃度作為X X值進行作圖。值進行作圖。 在圖上，每一個在圖上，每一個Y Y值有一個對應(yīng)的值有一個對應(yīng)的X X值，將值，將每個濃度水平重復(fù)測定的均值點在圖上，將這每個濃度水平重復(fù)測定的均值點在圖上，將這些點連接起來，觀察每個點與直線的大致偏差，些點連接起來，觀察每個點與直線的大致偏差，這樣容易發(fā)現(xiàn)異常點（明顯的抄寫錯誤或儀器這樣容易發(fā)現(xiàn)異常點（明顯的抄寫錯誤

23、或儀器故障等）。故障等）。 判斷離群點的方法判斷離群點的方法對于特定濃度對于特定濃度YiYi值的離群點進行檢測時，需將其值的離群點進行檢測時，需將其4 4個重復(fù)值從大個重復(fù)值從大到小排列（到小排列（Yi-1Yi-1到到Y(jié)i-4Yi-4）。）。計算級差計算級差D=Yi-1D=Yi-1Yi-4Yi-4。若若Yi-1Yi-1可能是離群點，計算：可能是離群點，計算：D1=D1=（Yi-1Yi-1Yi-2Yi-2）/D/D。若若Yi-4Yi-4可能是離群點，計算：可能是離群點，計算：D4= Yi-3D4= Yi-3Yi-4Yi-4）/D/D。計算結(jié)果（計算結(jié)果（D1D1或或D4D4）如果大于）如果大于0

24、.7650.765（0.050.05）或）或0.8890.889（0.010.01），），則該點判為離群點。則該點判為離群點。 全部數(shù)據(jù)中的離群點如果有全部數(shù)據(jù)中的離群點如果有2 2點，則應(yīng)保留全部數(shù)據(jù)點，則應(yīng)保留全部數(shù)據(jù)或重新進行實驗?；蛑匦逻M行實驗。離群點離群點2 2個或者以內(nèi)，保留全部數(shù)據(jù)。個或者以內(nèi)，保留全部數(shù)據(jù)。離群點離群點2 2個以上，重新實驗。個以上，重新實驗。數(shù)據(jù)的處理數(shù)據(jù)的處理 以分析物濃度為以分析物濃度為X X軸，反應(yīng)值或儀器輸出值軸，反應(yīng)值或儀器輸出值（均值）為（均值）為Y Y軸，繪制軸，繪制X-YX-Y線性圖（線性圖（Y=aX+bY=aX+b）。）。目測線性和進行統(tǒng)計學(xué)

25、分析，判斷是否符合要求。目測線性和進行統(tǒng)計學(xué)分析，判斷是否符合要求。確定線性范圍確定線性范圍 多項式回歸分析多項式回歸分析 非線性程度非線性程度 隨機誤差的影響隨機誤差的影響多項式回歸分析多項式回歸分析可以借助多種商業(yè)統(tǒng)計軟件完成?？梢越柚喾N商業(yè)統(tǒng)計軟件完成。SPSSSPSS和和SASSAS做數(shù)據(jù)庫做數(shù)據(jù)庫例如用例如用SPSSSPSS的話，選的話，選“分析分析” “ “回歸分析回歸分析” ” “ “曲線估計曲線估計” ” “ “因變量因變量” ” 、 “ “自自變量變量” ” 、“模型（線性、平方、三次模型（線性、平方、三次方）方）” 得三個方程得三個方程多項式回歸分析多項式回歸分析階別階別

26、 回歸方程回歸方程回歸自由度（回歸自由度（RdfRdf）一次一次Y=a+bY=a+b1 1X X2 2二次二次Y=a+bY=a+b1 1X+bX+b2 2X X2 23 3三次三次Y= a+bY= a+b1 1X+bX+b2 2X X2 2+b+b3 3X X3 34 4 將測定數(shù)據(jù)分別擬合一次、二次和三次多項式將測定數(shù)據(jù)分別擬合一次、二次和三次多項式多項式回歸分析多項式回歸分析一次多項式模型為直線，是判斷某種方法是否為線性一次多項式模型為直線，是判斷某種方法是否為線性的最適方程。的最適方程。二次多項式模型代表一種拋物線反應(yīng)曲線，有增加趨二次多項式模型代表一種拋物線反應(yīng)曲線，有增加趨勢（曲線上升）或減少趨勢（曲線下降）兩種。勢（曲線上升）或減