儀器分析-藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證

1、第四章第四章 藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證n第一節(jié)定量分析樣品的前處理方法定量分析樣品的前處理方法 n不經(jīng)有機(jī)破壞不經(jīng)有機(jī)破壞: 直接測(cè)定法 (富馬酸亞鐵的含量測(cè)定) 經(jīng)水解后測(cè)定法(硬脂酸鎂的含量測(cè)定) 經(jīng)氧化還原后測(cè)定(泛影酸的含量測(cè)定)n需經(jīng)有機(jī)破壞需經(jīng)有機(jī)破壞 ： 濕法破壞 干法破壞 氧瓶燃燒法定量分析樣品的前處理方法-不經(jīng)有機(jī)破壞 n直接測(cè)定法直接測(cè)定法 適用于金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬藥物或金屬原子與碳原子結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物。如富馬酸亞鐵的含量測(cè)定。結(jié)構(gòu)式如下：OOHHOFeOn經(jīng)水解后測(cè)定法經(jīng)水解后測(cè)定法1）直接回流后測(cè)定法（如三氯叔丁醇）原

2、理 三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量過(guò)量的硝酸銀滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，過(guò)量的硝酸銀，以Fe3+為指示劑，用硫氰酸銨溶液回滴定。2）用硫酸水解后測(cè)定法（如硬脂酸鎂-指示劑?）CCH3O HCH3CCl3定量分析樣品的前處理方法-不經(jīng)有機(jī)破壞 n經(jīng)氧化還原后測(cè)定經(jīng)氧化還原后測(cè)定 1）堿性還原后測(cè)定（如泛影酸-指示劑曙紅鈉）本法適用于測(cè)定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直接相連，且一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)碘原子的含鹵素有機(jī)藥物。 COOHIIINHCOCH3CH3CONH定量分析樣品的前處理方法-不經(jīng)有機(jī)破壞 2）酸性還原后測(cè)定（

3、如碘番酸-指示劑四溴酚酞）IH2NIICH2CHCOOHC2H5定量分析樣品的前處理方法-不經(jīng)有機(jī)破壞 3）利用藥物中可游離的金屬離子的氧化性測(cè)定含量葡萄糖酸銻鈉的測(cè)定葡萄糖酸銻鈉的測(cè)定-淀粉指示劑ChP2005）K2ISbKI2Sb23H56423222OSNaNaI2OSNa2I定量分析樣品的前處理方法-不經(jīng)有機(jī)定量分析樣品的前處理方法-需經(jīng)有機(jī)破壞n濕法破壞濕法破壞n硝酸-高氯酸法：適用于生物樣品的破壞；不適用于含氮雜環(huán)藥物的破壞n硝酸-硫酸法：適用于多數(shù)有機(jī)藥物的破壞；不適用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞n硫酸-硫酸鉀法：適用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞n硝酸-硫酸-高氯酸法等 n干法破壞干法

4、破壞n適用于濕法不易破壞完全的有機(jī)物及不能用硫酸破壞的；不適用于含易揮發(fā)性金屬有機(jī)藥物。n氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法n本法特點(diǎn)是本法特點(diǎn)是設(shè)備簡(jiǎn)單，快速分解、破壞完全，、破壞完全，尤其適用于微量樣品的分析尤其適用于微量樣品的分析定量分析樣品的前處理方法-需經(jīng)有機(jī)破壞氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法原理原理n氧瓶燃燒法：氧瓶燃燒法：將有機(jī)藥物放入將有機(jī)藥物放入充滿氧氣充滿氧氣的的密密閉閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒瓶中進(jìn)行燃燒燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測(cè)物質(zhì)測(cè)物質(zhì)吸收吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，然后根?jù)欲于適當(dāng)?shù)奈找褐校缓蟾鶕?jù)欲測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢

5、查或含量測(cè)定別、檢查或含量測(cè)定n適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析析儀器裝置儀器裝置稱(chēng)樣要求稱(chēng)樣要求具體操作具體操作 吸收液的作用吸收液的作用: 是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種是將樣品經(jīng)燃燒分解所產(chǎn)生的各種價(jià)態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變價(jià)態(tài)的鹵素、硫、氮、硒等，定量地吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y(cè)定的價(jià)態(tài)為一定的便于測(cè)定的價(jià)態(tài)吸收液的選擇吸收液的選擇n氟氟 水水 n氯氯 NaOH溶液溶液n溴溴 H2O2-NaOHn NaOH-硫酸肼飽和溶液硫酸肼飽和溶液n碘碘 NaOH硫酸肼飽和溶液硫酸肼飽和溶液n硫硫 NaOH或或H2O2 n硒硒 硝酸溶液硝

6、酸溶液第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)容量分析法容量分析法 光譜分析法光譜分析法色譜分析法色譜分析法 一、容量分析法1.概念概念 容量分析法是將已知濃度的滴定液由滴定管滴加到待測(cè)藥物的溶液中，直到所加滴定液與被測(cè)藥物按化學(xué)計(jì)量反應(yīng)完全為止，然后根據(jù)滴定液的濃度和消耗的體積，就可以計(jì)算出被測(cè)藥物的含量。 2、容量分析法的特點(diǎn)n需要重量分析中沉淀的過(guò)濾、洗滌、灼燒、恒重等一系列操作。n通常用于測(cè)定高含量或中含量組分，即被測(cè)組分的含量在1%以上。 n比較準(zhǔn)確，一般情況下相對(duì)誤差可達(dá)0.2%以下。n所用儀器普通易得 。 3、容量分析法-需注意的問(wèn)題n滴定誤差滴定誤差 滴定終點(diǎn)與等當(dāng)點(diǎn)不一定恰好符合，二者之間

7、存在誤差 。 需要選擇合適的指示劑，使滴定終點(diǎn)盡需要選擇合適的指示劑，使滴定終點(diǎn)盡可能接近等當(dāng)點(diǎn)?？赡芙咏犬?dāng)點(diǎn)。 4、容量分析法-計(jì)算n滴定度滴定度 指每1 ml某摩爾濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的重量。 中國(guó)藥典用毫克(mg)表示。如：用碘量法測(cè)定維生素C含量時(shí)，規(guī)定“每1ml的碘滴定液(0.1molL)相當(dāng)于8.806mg的維生素C”； 容量分析法-滴定度（T）被測(cè)藥物(B)與滴定液(A)之間按一定的摩爾比進(jìn)行反應(yīng)：aA+bBcC+dD 滴定度(T)可按下式計(jì)算： T=M*b/a*B (mgml)M：滴定液的摩爾濃度b：被測(cè)藥物的摩爾數(shù)a ：滴定液的摩爾數(shù)B：被測(cè)藥物的分子量 容量分析法

8、-百分含量計(jì)算n直接滴定法直接滴定法 用滴定液直接滴定，以求得被測(cè)藥物的含量。 n回滴定法回滴定法 (剩余滴定法剩余滴定法) 先加入定量過(guò)量的滴定液A，使其與被測(cè)藥物反應(yīng)，待此反應(yīng)進(jìn)行完全后，再用另一滴定液B來(lái)回滴反應(yīng)中剩余的滴定液A。 直接滴定法直接滴定法含量含量%=V*T/W*l00nW：供試品取量nV：消耗滴定液的體積nT：滴定度實(shí)際工作中，所配制的的滴定液的摩爾濃度與藥典中規(guī)定的摩爾濃度不一定恰好符合，此時(shí)就不能直接應(yīng)用藥典上所給出的滴定度(T)，但可換算成實(shí)際的滴定度(T)：T=T*FF（校正因數(shù)）=實(shí)際摩爾濃度/規(guī)定摩爾濃度被測(cè)藥物的百分含量可由下式求得：%100%100%WFTV

9、WTV含量含量回滴定法回滴定法不做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算：VA：先加入的定量過(guò)量的滴定液A體積VB ：為滴定液B消耗體積FA：滴定液A濃度校正因數(shù)FB：滴定液B濃度校正因數(shù)W：供試品取量T：滴定度。 %100)(%WTFVFVBBAA含量做空白試驗(yàn)時(shí)百分含量計(jì)算：V0：空白試驗(yàn)消耗硫酸滴定液體積VB：樣品測(cè)定試驗(yàn)消耗滴定液體積T：滴定度F：為滴定液濃度校正因數(shù)W：供試品取樣量(g) %100)(%0WFTVVB含量 二、光譜分析法當(dāng)物質(zhì)與輻射能相互作用時(shí)，物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生能級(jí)躍遷。記錄由能級(jí)躍遷所產(chǎn)生的輻射能隨波長(zhǎng)的變化所得的圖譜稱(chēng)為光譜，利用物質(zhì)的光譜進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的方法稱(chēng)為光譜分析法

10、，簡(jiǎn)稱(chēng)光譜法。n紫外可見(jiàn)分光光度法n熒光分析法n原子吸收分光光度法n紅外分光光度法 紫外可見(jiàn)分光光度法紫外可見(jiàn)分光光度法根據(jù)物質(zhì)分子對(duì)波長(zhǎng)為200nm 760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來(lái)的光譜分析方法。 原理：朗伯-比耳定律 靈敏度高，可達(dá)10-4gml10-7gml.n 準(zhǔn)確度高，相對(duì)誤差為25。n 儀器價(jià)格較低廉，操作簡(jiǎn)單；易于普及。n 應(yīng)用廣泛。(許多化合物都可以采用此法進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)用計(jì)算分光光度法可不經(jīng)分離而直接測(cè)定混合物中各組分的含量。)紫外可見(jiàn)分光光度法原理紫外可見(jiàn)分光光度法原理 朗伯-比耳定律可表示如下：A=E*C*lA：吸收度；l：液層厚度；C：溶液濃度；E：吸收系

11、數(shù)，即單位濃度、單位液層厚度時(shí)的吸收度。 紫外可見(jiàn)分光光度法吸收系數(shù)紫外可見(jiàn)分光光度法吸收系數(shù)n摩爾吸收系數(shù)（） ： 在一定波長(zhǎng)下，溶液濃度為1molL，厚度為1cm時(shí)的吸收度，多用于研究分子結(jié)構(gòu) 。n百分吸收系數(shù)（ ）： 在一定波長(zhǎng)下，溶液濃度為1%(WV)，厚度為1cm時(shí)的吸收度，多用于定量測(cè)定 。 兩者之間的關(guān)系為=*10 / M M：吸光物質(zhì)的分子量(即摩爾質(zhì)量) %11cmE%11cmE紫外可見(jiàn)分光光度法吸收系數(shù)紫外可見(jiàn)分光光度法吸收系數(shù)n值的大小反映了物質(zhì)對(duì)某一波長(zhǎng)光的吸收能力，也反映測(cè)定反應(yīng)的靈敏度。n 一般不超過(guò)105數(shù)量級(jí)，通常達(dá)104的為強(qiáng)吸收；102104為中吸收；小于1

12、02的為弱吸收。n吸收系數(shù)都不能直接測(cè)得，而必須采用適宜的已知準(zhǔn)確濃度的稀溶液測(cè)得吸收度A后計(jì)算求得。 紫外可見(jiàn)分光光度法儀器校正和檢定紫外可見(jiàn)分光光度法儀器校正和檢定由于溫度變化對(duì)機(jī)械部分的影響，儀器的波長(zhǎng)經(jīng)常會(huì)略有變動(dòng)。n定期對(duì)所用儀器進(jìn)行全面校正檢定n測(cè)定前校正測(cè)定波長(zhǎng)。 常用汞燈中的較強(qiáng)譜線或用儀器中氘燈的譜線進(jìn)行校正。n吸收度的準(zhǔn)確度 可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。 紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)溶劑的要求紫外可見(jiàn)分光光度法對(duì)溶劑的要求 測(cè)定供試品之前，應(yīng)先檢查所用的溶劑在供試品所用的波長(zhǎng)附近是否符合要求，即用1cm石英吸收池盛溶劑，以空氣為空白（即光路中不置任何物質(zhì)）測(cè)定其吸收度，溶劑和吸收池

13、的吸收度 220nm240nm：不得超過(guò)0.40； 24lnm250nm：不得超過(guò)0.20； 251nm300nm：不得超過(guò)0.10； 300nm以上：不得超過(guò)0.05。 紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定法紫外可見(jiàn)分光光度法測(cè)定法 以配制供試品溶液的同批溶劑為空白對(duì)照，采用1cm的石英吸收池，在規(guī)定的吸收峰波長(zhǎng)2nm以內(nèi)測(cè)試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度，以核對(duì)供試品的吸收峰波長(zhǎng)位置是否正確。吸收峰波長(zhǎng)應(yīng)在該品種項(xiàng)下規(guī)定的波長(zhǎng)士1nm以內(nèi)；否則應(yīng)考慮試樣的真?zhèn)?，純度以及儀器波長(zhǎng)的準(zhǔn)確度，并以吸收度最大的波長(zhǎng)作為測(cè)定波長(zhǎng)。一般供試品溶液的吸收度讀數(shù)，以在0.3-0.7之間的誤差較小。由于吸收池和溶劑本身可能有空白吸收，所

14、以測(cè)定供試品溶液的吸收度后應(yīng)減去空白讀數(shù)，再計(jì)算含量。 紫外可見(jiàn)分光光度法含量測(cè)定方法紫外可見(jiàn)分光光度法含量測(cè)定方法n對(duì)照品比較法 n吸收系數(shù)法 n計(jì)算分光光度法 紫 外 可 見(jiàn) 分 光 光 度 法 含 量 測(cè) 定 方 法紫 外 可 見(jiàn) 分 光 光 度 法 含 量 測(cè) 定 方 法 對(duì)照品比較法對(duì)照品比較法 分別配制供試品溶液和對(duì)照品溶液，對(duì)照品溶液中所含被測(cè)成分的量應(yīng)為供試品溶液中被測(cè)成分標(biāo)示量的10010%，所用溶劑也應(yīng)完全一致，在規(guī)定的波長(zhǎng)測(cè)定供試品溶液和對(duì)照品溶液的吸收度后計(jì)算。 Cx：供試品溶液的濃度；Ax：供試品溶液的吸收度； Cr：對(duì)照品溶液的濃度；Ar：對(duì)照品溶液的吸收度； D：

15、稀釋倍數(shù)；W：供試品取樣量。 ）其中含量rrxxxCAACWDC(%100紫外可見(jiàn)分光光度法含量測(cè)定方法紫外可見(jiàn)分光光度法含量測(cè)定方法 吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法配制供試品溶液，在規(guī)定的波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計(jì)算含量。 用本法測(cè)定時(shí)，應(yīng)注意儀器的校正和檢定。 %100%收系數(shù)對(duì)照品或標(biāo)準(zhǔn)品百分吸供試品的百分吸收系數(shù)含量紫外可見(jiàn)分光光度法含量測(cè)定方法紫外可見(jiàn)分光光度法含量測(cè)定方法 計(jì)算分光光度法計(jì)算分光光度法 采用計(jì)算分光光度法應(yīng)慎重。方法有多種，使用時(shí)均應(yīng)按各品種項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行。當(dāng)吸收度處在吸收曲線的陡然上升或下降的部位測(cè)定時(shí)，影響精度的因素較多，故對(duì)照品和供試品測(cè)

16、試條件應(yīng)盡可能一致。若測(cè)定時(shí)不用對(duì)照品，如維生素A測(cè)定法，則應(yīng)在測(cè)定時(shí)對(duì)儀器作仔細(xì)地校正和檢定。 熒光分析法熒光分析法某些物質(zhì)受紫外光或可見(jiàn)光照射激發(fā)后能發(fā)射出比激發(fā)光波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光。當(dāng)激發(fā)光停止照射后，熒光隨之消失。同一種分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，用同一波長(zhǎng)的激發(fā)光照射，可以發(fā)射相同波長(zhǎng)的熒光。當(dāng)激發(fā)光強(qiáng)度、波長(zhǎng)、所用溶劑及溫度等條件固定時(shí)，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其熒光強(qiáng)度(也叫發(fā)射光強(qiáng)度)與溶液中該物質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可以用作定量分析。 熒光分析法的熒光分析法的 特點(diǎn)特點(diǎn)n靈敏度高，可達(dá)10-10gml10-12g/mln熒光分析法應(yīng)在低濃度溶液中進(jìn)行。n干擾因素也多，因此必須做空白試驗(yàn)。n對(duì)易被

17、光分解的樣品，可選擇一種激發(fā)光和發(fā)射光波長(zhǎng)與之近似而對(duì)光穩(wěn)定的物質(zhì)配成適當(dāng)濃度的溶液作為基準(zhǔn)溶液代替對(duì)照品溶液校正儀器的靈敏度。n熒光衍生試劑可擴(kuò)大熒光分析法的應(yīng)用范圍。n取樣少，方法快速。 熒光分析法的含量測(cè)定方法熒光分析法的含量測(cè)定方法由于不易測(cè)定絕對(duì)熒光強(qiáng)度，故熒光分析法都是在一定條件下，用對(duì)照品溶液測(cè)定熒光強(qiáng)度與濃度的線性范圍后，再在每次測(cè)定前，用一定濃度的對(duì)照品溶液校正儀器的靈敏度；然后在相同條件下，讀取對(duì)照品溶液及其試劑空白的熒光讀數(shù)與供試品溶液及其試劑空白的熒光讀數(shù)計(jì)算供試品濃度。 熒光分析法的含量測(cè)定的計(jì)算熒光分析法的含量測(cè)定的計(jì)算Ci：供試品溶液濃度；Cr：對(duì)照品溶液濃度；R

18、i：供試品溶液讀數(shù)；Rib：供試品溶液試劑空白的讀數(shù)；Rr：對(duì)照品溶液的讀數(shù)；Rrb：對(duì)照品溶液試劑空白的讀數(shù) *因熒光分析法中的濃度與讀數(shù)的線性較窄，故(Ri-Rib)(Rr-Rrb)應(yīng)在0.502.0之間，如有超過(guò)，應(yīng)在調(diào)節(jié)溶液濃度后再測(cè)。 rrbribiiCRRRRC三、色譜分析法色譜分析法 n色譜分析法是一種分離分析分離分析方法，它先將各組分從混合物中分離再逐個(gè)分析，因此是分析混合物的最有力手段。此法具有高靈敏度(可達(dá)10-12gml10-15g/ml)、高選擇性、高效能、高速度及應(yīng)用廣泛等特點(diǎn)。 n根據(jù)其分離原理可分為：吸附色譜、分配色譜、離子交換色譜與排阻色譜等。n根據(jù)分離方法分為

19、： 紙色譜法、薄層色譜法、柱色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法等。1、色譜分析法、色譜分析法-高效液相色譜法高效液相色譜法 用高壓輸液泵高壓輸液泵將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動(dòng)相流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱色譜柱，經(jīng)進(jìn)樣閥進(jìn)樣閥注入供試品，由流動(dòng)相帶入柱柱內(nèi)，在柱內(nèi)各成分被分離后，依次進(jìn)入檢測(cè)器檢測(cè)器，色譜信號(hào)由記錄儀或積分儀記錄儀或積分儀記錄。 高效液相色譜法一般要求高效液相色譜法一般要求n常用的色譜柱填充劑色譜柱填充劑：硅膠和化學(xué)鍵合硅膠(十八烷基硅烷鍵合硅膠、辛基硅烷鍵合硅膠、氰基或氨基鍵合硅膠）n離子交換填充劑離子交換填充劑：用于離子交換色譜；n凝膠或玻璃微

20、球等填充劑：凝膠或玻璃微球等填充劑：用于分子排阻色譜等 。n進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：一般為數(shù)微升。 n除另有規(guī)定外，柱溫柱溫為室溫，檢測(cè)器檢測(cè)器為紫外吸收檢測(cè)器。 n流動(dòng)相：流動(dòng)相：常以甲醇、水、乙腈、緩沖液、反離子物質(zhì)等。 高效液相色譜法一般要求高效液相色譜法一般要求n流動(dòng)相及供試品溶液：流動(dòng)相及供試品溶液：應(yīng)澄清，要求用濾器過(guò)濾后使用或進(jìn)樣。n如果流動(dòng)相中有緩沖劑流動(dòng)相中有緩沖劑，每日使用后應(yīng)用不含緩沖劑的流動(dòng)相將儀器管路、泵、進(jìn)樣閥、色譜柱、檢測(cè)池等充分沖洗。n色譜柱保存色譜柱保存：應(yīng)保持填料在濕潤(rùn)狀態(tài)，兩端密塞，可按說(shuō)明書(shū)要求保存。n十八烷基硅烷鍵合硅膠十八烷基硅烷鍵合硅膠可在甲醇甲醇中保存，

21、硅膠硅膠可在己烷己烷中保存。 高效液相色譜法一般要求高效液相色譜法一般要求色譜柱色譜柱型號(hào)選用及注意：n色譜柱長(zhǎng)度不能決定分離效果，較好的填料用短柱即可；n流動(dòng)相流速應(yīng)取決于柱內(nèi)徑及柱效；n由于柱效及柱子性能不同，流動(dòng)相各組分比例需調(diào)整；n在用十八烷基硅烷鍵合相色譜柱時(shí)，色譜峰如果保留時(shí)間太長(zhǎng)可增加甲醇比例，使其前移，反之可使之后移。n如果柱效略嫌低，可以適當(dāng)提高色譜柱柱溫。 高效液相色譜法高效液相色譜法-系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)n用規(guī)定的對(duì)照品對(duì)照品對(duì)儀器進(jìn)行試驗(yàn)和調(diào)整，應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求；n或規(guī)定分析狀態(tài)下色譜柱的最小理論板數(shù)、分最小理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性離度、重復(fù)性和拖尾因子拖尾因子

22、。 高效液相色譜法高效液相色譜法-系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)n色譜柱的理論板數(shù)色譜柱的理論板數(shù)(n)： 在選定條件下，注入供試品溶液或規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，記錄色譜圖，量出供試品主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的保留時(shí)間（tR）和半峰高寬(Wh/2) n=5.54(tRWh/2)2 如測(cè)得理論板數(shù)低于規(guī)定的最小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的條件(如柱長(zhǎng)、載體性能、色譜柱充填的優(yōu)劣等)，使理論板數(shù)達(dá)到要求。 高效液相色譜法高效液相色譜法-系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)n分離度：分離度：定量分析時(shí)：為便于準(zhǔn)確測(cè)量，要求定量峰與其他峰或內(nèi)標(biāo)峰之間有較好的分離度，分離度(R)的計(jì)算公式為： tR1：相鄰兩峰中后一峰的保留時(shí)

23、間； tR2：相鄰兩峰中前一峰的保留時(shí)間； Wl及W2：此相鄰兩峰的峰寬；*除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。 2121)(2WWttRRR高效液相色譜法高效液相色譜法-系統(tǒng)適用性試系統(tǒng)適用性試驗(yàn)驗(yàn)n重復(fù)性：重復(fù)性： 取各品種項(xiàng)下的對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值均相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0。 也可按各品種校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于80、100和120的對(duì)照品溶液并加入規(guī)定量的內(nèi)標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于2.0高效液相色譜法高效液相色譜法-系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系統(tǒng)適用性試驗(yàn)拖尾因子：拖尾因子

24、：為保證測(cè)量精度，特別當(dāng)采用峰高法測(cè)量時(shí)，應(yīng)檢查待測(cè)峰的拖尾因子(T)是否符合規(guī)定，或不同濃度進(jìn)樣的校正因子誤差是否符合要求。拖尾因子計(jì)算公式為：T=W0.05h/2d1W0.05h：0.05峰高處的峰寬；d1：峰極大至峰前沿之間的距離。*除另有規(guī)定外，除另有規(guī)定外，T應(yīng)在應(yīng)在0.951.05之間之間。高效液相色譜法測(cè)定法高效液相色譜法測(cè)定法定量測(cè)定時(shí)，可根據(jù)供試品的具體情況采用峰面積法或峰高法。測(cè)定供試品中主成分含量時(shí)，常用下面兩種方法：n內(nèi)標(biāo)法加校正因子 n外標(biāo)法 高效液相色譜法測(cè)定法高效液相色譜法測(cè)定法-內(nèi)標(biāo)法加校正因子內(nèi)標(biāo)法加校正因子 精密稱(chēng)(量)取藥物對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)，分別配成溶液，

25、精密量取各溶液，配成校正因子測(cè)定用的藥物對(duì)照溶液。取一定量注入儀器，記錄色譜圖。測(cè)量對(duì)照品和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算校正因子(f)：As：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積(或峰高)；AR：藥物對(duì)照品的峰面積(或峰高)；Cs：內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的濃度；CR：藥物對(duì)照品的濃度。 RRSSCACAf/ 再取各品種項(xiàng)下含有內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的供試品溶液，注入儀器，記錄色譜圖, 測(cè)量供試品中待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積或峰高，按下式計(jì)算含量： AX：供試品峰面積(或峰高)； Cx：供試品的濃度； f：校正因子， : 分別為內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的峰面積(或峰高)和濃度。 SSCA 和/.SSXXCAAfC高效液相色譜法測(cè)定法高效液相色譜法測(cè)定法

26、-內(nèi)標(biāo)法加校正因子內(nèi)標(biāo)法加校正因子/.SSXXCAAfCRRSSCACAf/RSRSXXSRSXRXSRRXSSSXXCAAAACAAAACCAACAACAAC*/*/./CA/CARRSS高效液相色譜法測(cè)定法高效液相色譜法測(cè)定法-外標(biāo)法外標(biāo)法 以供試品的對(duì)照品或標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照物質(zhì)，相對(duì)比較以求得供試品的含量。外標(biāo)法分為：n標(biāo)準(zhǔn)曲線法n外標(biāo)一點(diǎn)法。高效液相色譜法測(cè)定法-外標(biāo)法外標(biāo)法n標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法：配制一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)液，在同一操作條件下，按同量注入色譜儀，測(cè)量其峰面積(或峰高)，作出峰面積(或峰高)與濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。然后在相同的條件下，注入同量供試品，測(cè)得待測(cè)組分的峰面積(或峰高)，

27、根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線或它的回歸方程，計(jì)算供試品中待測(cè)組分的濃度。n外標(biāo)一點(diǎn)法：外標(biāo)一點(diǎn)法：精密稱(chēng)(量)取對(duì)照品和供試品，分別配制成對(duì)照品溶液(CR)和供試品溶液(Cx)，分別精密取一定量，注入儀器，記錄色譜圖，測(cè)量對(duì)照品的峰面積(AR)和供試品待測(cè)成分的峰面積(AX)(或峰高)，按下式計(jì)算含量：RXRXAACC.2、色譜分析法、色譜分析法-氣相色譜法介紹氣相色譜法介紹n載氣：載氣： 氣相色譜法的流動(dòng)相為氣體；氮?dú)鈔色譜柱：色譜柱：分為填充柱和毛細(xì)管柱兩種，填充柱內(nèi)裝吸附劑、高分子多孔小球或涂漬固定液的載體。毛細(xì)管柱內(nèi)壁或載體經(jīng)涂漬或交聯(lián)固定液。n原理：原理：注入進(jìn)樣口的供試品被加熱氣化，并被載氣帶入色

28、譜柱，在柱內(nèi)各成分被分離后，先后進(jìn)入檢測(cè)器，色譜信號(hào)用記錄儀或數(shù)據(jù)處理器記錄。 氣相色譜法一般要求氣相色譜法一般要求n進(jìn)樣口溫度進(jìn)樣口溫度：應(yīng)高于柱溫3050；n進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：一般不超過(guò)數(shù)微升；柱徑越細(xì)進(jìn)樣量應(yīng)越少。n檢測(cè)器：檢測(cè)器：氫火焰離子化檢測(cè)器，檢測(cè)溫度一般高于柱溫，并不得低于100，以免水氣凝結(jié)，通常為250350。第三節(jié)第三節(jié) 藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證何時(shí)分析方法需經(jīng)驗(yàn)證：何時(shí)分析方法需經(jīng)驗(yàn)證： 1）在起草藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)； 2）在藥物生產(chǎn)方法變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)。一、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容一、需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目和驗(yàn)證內(nèi)容n需驗(yàn)證的分

29、析項(xiàng)目：需驗(yàn)證的分析項(xiàng)目： n鑒別試驗(yàn)；雜質(zhì)定量或限度檢查；原料藥或制劑中有效成分含量測(cè)定；以及制劑中其他成分(如降解產(chǎn)物、防腐劑等)的測(cè)定。n溶出度、釋放度等檢查中，測(cè)試方法也作驗(yàn)證。n 驗(yàn)證內(nèi)容：驗(yàn)證內(nèi)容：n準(zhǔn)確度、精密度(重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性)、專(zhuān)屬性、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。1、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證-準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度n準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度：指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般以回收率回收率(%)表示。準(zhǔn)確度應(yīng)在規(guī)定的范圍內(nèi)建立。 n回收率的回收率的RSD：一般應(yīng)在2%以內(nèi)。 用UV和HPLC法時(shí)，一般回收率可達(dá)到98% 102%。容量

30、分析法的回收率一般可達(dá)到99.7%100.3%。 2、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證-精密度精密度n精密度：精密度：指在規(guī)定的測(cè)試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果間的接近程度。 n容量分析法：容量分析法：用原料藥精制品考察方法的精密度，平行試驗(yàn)5個(gè)樣本，試驗(yàn)數(shù)據(jù)的RSD一般應(yīng)不大于0.2%；nUV法法用適當(dāng)濃度的精制品進(jìn)行測(cè)定精密度，其RSD一般不大于1%(n =35)；nHPLC法：法：要求RSD小于2%(n =35)藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證-精密度精密度n重復(fù)性重復(fù)性 n在相同條件下，由一個(gè)分析人員測(cè)定所得結(jié)果的精密度稱(chēng)為重復(fù)性。n

31、中間精密度中間精密度 n在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測(cè)定結(jié)果的精密度，稱(chēng)為中間精密度。 n重現(xiàn)性重現(xiàn)性 n在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測(cè)定結(jié)果的精密度，稱(chēng)為重現(xiàn)性。 3、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證-專(zhuān)屬性專(zhuān)屬性 n專(zhuān)屬性：專(zhuān)屬性：指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性。n 應(yīng)考察專(zhuān)屬性的實(shí)驗(yàn)應(yīng)考察專(zhuān)屬性的實(shí)驗(yàn)：鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法 。n 如方法不夠?qū)?，?yīng)采用多個(gè)方法予以補(bǔ)充4、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證-檢測(cè)檢測(cè)限限 （LOD） n檢測(cè)限檢測(cè)限 ：指試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最低濃度或量。n LOD是一種限度檢驗(yàn)效能指標(biāo)，既反映方法反映方法與儀器的靈敏度和噪音的大小與儀器的靈敏度和噪音的大小，也表明樣品經(jīng)樣品經(jīng)處理后空白處理后空白(本底本底)值的高低值的高低。n無(wú)需定量測(cè)定無(wú)需定量測(cè)定，只要指出高于或低于該規(guī)定的濃度或量即可。 5、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證、藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證-定量限定量限 （LOQ）n定量限：定量限： 指樣品中被測(cè)物能被定量測(cè)定的最低量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)定準(zhǔn)確度和精密度。n雜質(zhì)和降解產(chǎn)物定量測(cè)定雜質(zhì)和降解產(chǎn)物定量測(cè)定：應(yīng)確定定量限。n確定定量限常用方