實驗11 生物顯微制片技術(shù)

1、1實驗九實驗九 生物顯微制片技術(shù)生物顯微制片技術(shù)綜合性，12h2實驗?zāi)康呐c要求1.理解石蠟切片法各主要步驟的基本原理。理解石蠟切片法各主要步驟的基本原理。2.掌握各種試劑的配制和各種器材的使用方掌握各種試劑的配制和各種器材的使用方法。法。3.掌握石蠟切片法的具體操作方法。掌握石蠟切片法的具體操作方法。4.熟悉實驗過程中應(yīng)注意的事項。熟悉實驗過程中應(yīng)注意的事項。5.自己取材，植物、動物材料制備標(biāo)本片。自己取材，植物、動物材料制備標(biāo)本片。6.通過在顯微鏡下觀察魚肝細(xì)胞染色玻片標(biāo)通過在顯微鏡下觀察魚肝細(xì)胞染色玻片標(biāo)本，了解魚肝細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu)。本，了解魚肝細(xì)胞的顯微結(jié)構(gòu)。3生物制片技術(shù)概述生物制片技術(shù)

2、概述 生物顯微制片技術(shù)是觀察研究細(xì)胞、組織、生物顯微制片技術(shù)是觀察研究細(xì)胞、組織、胚胎、動物等的形態(tài)、結(jié)構(gòu)及病理變化的重胚胎、動物等的形態(tài)、結(jié)構(gòu)及病理變化的重要方法。由于生活時的生物體器官組織過大要方法。由于生活時的生物體器官組織過大或過厚不能在光學(xué)顯微鏡下觀察，或者能放或過厚不能在光學(xué)顯微鏡下觀察，或者能放在光學(xué)顯微鏡下，光線也不能透過，而且一在光學(xué)顯微鏡下，光線也不能透過，而且一些微細(xì)結(jié)構(gòu)的折光率相同，即使光線能夠透些微細(xì)結(jié)構(gòu)的折光率相同，即使光線能夠透過也看不清楚。因此，就必須運(yùn)用顯微技術(shù)過也看不清楚。因此，就必須運(yùn)用顯微技術(shù)中各種方法將其制成玻片標(biāo)本，使組織細(xì)胞中各種方法將其制成玻片標(biāo)

3、本，使組織細(xì)胞既能在光學(xué)顯微鏡下觀察又可長期保存，結(jié)既能在光學(xué)顯微鏡下觀察又可長期保存，結(jié)構(gòu)對比變明顯。一般可分為切片法和非切片構(gòu)對比變明顯。一般可分為切片法和非切片法兩類制片方法。法兩類制片方法。4 切片法：石蠟切片法；火棉膠切片法；冰切片法：石蠟切片法；火棉膠切片法；冰凍切片法等。凍切片法等。 非切片法：包括整體封藏法；涂布法；非切片法：包括整體封藏法；涂布法；壓片法，此外還有鋪片、磨片等。壓片法，此外還有鋪片、磨片等。 顯微制片需經(jīng)歷一系列操作，相當(dāng)細(xì)致而顯微制片需經(jīng)歷一系列操作，相當(dāng)細(xì)致而復(fù)雜，每一步驟的失誤都可導(dǎo)致整體的失復(fù)雜，每一步驟的失誤都可導(dǎo)致整體的失敗，因此需要耐心細(xì)致，手腦

4、并用。敗，因此需要耐心細(xì)致，手腦并用。 切片法：取材切片法：取材固定固定沖洗沖洗脫水脫水透明透明包埋包埋切片切片染色染色脫水脫水透明透明封藏。封藏。 非切片法：取材非切片法：取材固定固定沖洗沖洗脫水脫水透明透明染色染色脫水脫水 透明透明封藏封藏5切片法與非切片法比較切片法與非切片法比較 切片法能顯示出組織、細(xì)胞內(nèi)部的微細(xì)結(jié)構(gòu)切片法能顯示出組織、細(xì)胞內(nèi)部的微細(xì)結(jié)構(gòu), 且對比非常且對比非常明顯清晰。但操作步驟多明顯清晰。但操作步驟多, 手續(xù)復(fù)雜手續(xù)復(fù)雜, 制片速度慢制片速度慢,耗時較耗時較長。長。 如洋蔥根尖縱切片中對線粒體、有絲分裂的觀察如洋蔥根尖縱切片中對線粒體、有絲分裂的觀察; 小麥葉小麥葉

5、片橫切和玉米葉橫切中對細(xì)胞木質(zhì)化細(xì)胞質(zhì)、纖維素細(xì)胞片橫切和玉米葉橫切中對細(xì)胞木質(zhì)化細(xì)胞質(zhì)、纖維素細(xì)胞質(zhì)的觀察。切片法是生物顯微制片技術(shù)中最常用和最主要質(zhì)的觀察。切片法是生物顯微制片技術(shù)中最常用和最主要的方法的方法, 其中又以石蠟切片法最為重要。其中又以石蠟切片法最為重要。 非切片法能保持生物體或某部分器官組織的原有狀態(tài)及其非切片法能保持生物體或某部分器官組織的原有狀態(tài)及其完整性完整性, 但因不經(jīng)過切片手續(xù)但因不經(jīng)過切片手續(xù), 不僅不能清晰地顯示各器官不僅不能清晰地顯示各器官組織之間的相互關(guān)系組織之間的相互關(guān)系, 更無法顯示組織和細(xì)胞之間的結(jié)構(gòu)更無法顯示組織和細(xì)胞之間的結(jié)構(gòu)關(guān)系。關(guān)系。 非切片法

6、中整體切片法僅能對很小的材料制片非切片法中整體切片法僅能對很小的材料制片, 如人體口如人體口腔上皮裝片腔上皮裝片, 草履蟲裝片。涂片法僅對含有大量水分或完草履蟲裝片。涂片法僅對含有大量水分或完全為液體的組織或器官適用。全為液體的組織或器官適用。61 非切片法非切片法1.1 1.1 涂片法涂片法 主要用于血液、精液、尿液、微生物液體培主要用于血液、精液、尿液、微生物液體培養(yǎng)物等不能用切片法制成薄片的液態(tài)顆粒性材料養(yǎng)物等不能用切片法制成薄片的液態(tài)顆粒性材料，可在載玻片上涂成單層細(xì)胞，還可再經(jīng)固定，可在載玻片上涂成單層細(xì)胞，還可再經(jīng)固定，脫水，染色等手段制成永久標(biāo)本。脫水，染色等手段制成永久標(biāo)本。1

7、.2 1.2 鋪片法鋪片法 主要用于動、植物組織的表皮層觀察，可活主要用于動、植物組織的表皮層觀察，可活體取待觀察動、植物組織，用尖鑷子撕去一層表體取待觀察動、植物組織，用尖鑷子撕去一層表皮，迅速平鋪在載玻片上。皮，迅速平鋪在載玻片上。 如如: : 洋蔥表皮細(xì)胞的洋蔥表皮細(xì)胞的鋪片制備。鋪片制備。71.3 1.3 壓片法壓片法 一些較幼嫩，柔軟的材料可將其置載玻片上，一些較幼嫩，柔軟的材料可將其置載玻片上，用小解剖刀將其分散，加染料一滴，再蓋上蓋玻用小解剖刀將其分散，加染料一滴，再蓋上蓋玻片，用拇指垂直用力擠壓，使組織散成一薄片，片，用拇指垂直用力擠壓，使組織散成一薄片，再進(jìn)行觀察，如植物根尖

8、壓片觀察染色體。再進(jìn)行觀察，如植物根尖壓片觀察染色體。1.4 1.4 磨片磨片 用于質(zhì)地堅硬的組織，如骨和牙。用于質(zhì)地堅硬的組織，如骨和牙。1.5 1.5 離析法離析法 此法是利用化學(xué)試劑使組織的細(xì)胞間質(zhì)溶解，此法是利用化學(xué)試劑使組織的細(xì)胞間質(zhì)溶解，使組織分散成單個游離細(xì)胞。如植物去壁低滲法使組織分散成單個游離細(xì)胞。如植物去壁低滲法制備染色體標(biāo)本。制備染色體標(biāo)本。82 2 切片法切片法切片是供光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡觀察的切片是供光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡觀察的動植物組織薄片。動植物組織薄片。 切片法是通過手工或切片機(jī)將組織切成薄切片法是通過手工或切片機(jī)將組織切成薄片來進(jìn)行觀察的方法。需先經(jīng)過一系列

9、步驟片來進(jìn)行觀察的方法。需先經(jīng)過一系列步驟將組織內(nèi)滲入某些支持物質(zhì)，使組織變硬以將組織內(nèi)滲入某些支持物質(zhì)，使組織變硬以利于切成薄片，根據(jù)所用支持劑的種類不同，利于切成薄片，根據(jù)所用支持劑的種類不同，可分為可分為徒手切片法，石蠟切片法，火棉膠切徒手切片法，石蠟切片法，火棉膠切法，冰凍切片法法，冰凍切片法等類型，切成薄片后還需要等類型，切成薄片后還需要去蠟，染色，脫水，透明等步驟。去蠟，染色，脫水，透明等步驟。92.1 2.1 石蠟切片法石蠟切片法石蠟切片法包括以下各主要步驟：取材固定洗滌和脫水透明浸蠟包埋切片與粘片脫蠟染色脫水透明封片等步驟。一般的組織從取材固定到封片制成玻片標(biāo)本需要數(shù)日，標(biāo)本片

10、可以長期保存使用。 10詳細(xì)步驟和各個環(huán)節(jié)要求詳細(xì)步驟和各個環(huán)節(jié)要求取材：材料必須取材：材料必須新鮮、完整新鮮、完整，擱置時間過久則產(chǎn)，擱置時間過久則產(chǎn)生蛋白質(zhì)分解變性，導(dǎo)致細(xì)胞自溶及細(xì)菌的滋生，生蛋白質(zhì)分解變性，導(dǎo)致細(xì)胞自溶及細(xì)菌的滋生，且且避免擠壓、挫傷避免擠壓、挫傷而不能反映組織活體時的形態(tài)而不能反映組織活體時的形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)構(gòu)。注明采集時間、地點、名稱、組織部位等。注明采集時間、地點、名稱、組織部位等。組織塊大小以組織塊大小以0.50.50.50.50.2cm0.2cm為宜。為宜。固定：用化學(xué)藥液浸漬切成小塊的新鮮材料，迅固定：用化學(xué)藥液浸漬切成小塊的新鮮材料，迅速凝固或沉淀細(xì)胞和組織中

11、的物質(zhì)成分、終止細(xì)速凝固或沉淀細(xì)胞和組織中的物質(zhì)成分、終止細(xì)胞的一切代謝過程、防止細(xì)胞自溶或組織變化，胞的一切代謝過程、防止細(xì)胞自溶或組織變化，盡可能盡可能保持其活體時的結(jié)構(gòu)保持其活體時的結(jié)構(gòu)。此外固定還有使組。此外固定還有使組織織硬化作用，硬化作用，助染作用助染作用。此外還有物理方法如。此外還有物理方法如干干燥、高熱和低溫驟冷等方法固定。燥、高熱和低溫驟冷等方法固定。11 洗滌與脫水：洗滌與脫水：洗滌：固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固洗滌：固定后的組織材料需除去留在組織內(nèi)的固定液及其結(jié)晶沉淀，以免影響以后的染色效果。多定液及其結(jié)晶沉淀，以免影響以后的染色效果。多以流水沖洗。以流水沖洗。脫

12、水：洗滌后的組織內(nèi)充滿水分，需除去水分方脫水：洗滌后的組織內(nèi)充滿水分，需除去水分方可進(jìn)行之后的透明、浸蠟與包埋。脫水用一種既能可進(jìn)行之后的透明、浸蠟與包埋。脫水用一種既能與水又能與透明劑混溶的液體來逐漸置換樣品中游與水又能與透明劑混溶的液體來逐漸置換樣品中游離的水。脫水劑常采用乙醇或丙酮、離的水。脫水劑常采用乙醇或丙酮、正丁醇、叔丁正丁醇、叔丁醇醇進(jìn)行梯度脫水。每次時間為進(jìn)行梯度脫水。每次時間為1 1數(shù)小時。數(shù)小時。脫水的過程：通常從脫水的過程：通常從3030或或5050乙醇開始，一般乙醇開始，一般是是30%30%乙醇乙醇50%50%乙醇乙醇70%70%乙醇乙醇80%90%100% 100%8

13、0%90%100% 100%脫水劑濃度不應(yīng)跨度太大，以免引起組織強(qiáng)烈的脫水劑濃度不應(yīng)跨度太大，以免引起組織強(qiáng)烈的收縮或變形。收縮或變形。12 透明透明 透明是用一種既能與脫水劑（乙醇）又能與包埋透明是用一種既能與脫水劑（乙醇）又能與包埋介質(zhì)（石蠟）互溶的液體來置換樣品中的脫水劑（介質(zhì)（石蠟）互溶的液體來置換樣品中的脫水劑（乙醇），從而為最終的包埋創(chuàng)造一個有利的條件。乙醇），從而為最終的包埋創(chuàng)造一個有利的條件。 現(xiàn)采用的透明劑一般是二甲苯，甲苯，氯仿、香柏現(xiàn)采用的透明劑一般是二甲苯，甲苯，氯仿、香柏油等。油等。 一般過程為：一般過程為： 1/31/3二甲苯二甲苯+2/3+2/3乙醇混合液乙醇混合

14、液1/21/2二甲苯二甲苯+1/2+1/2乙醇混合液乙醇混合液2/32/3二甲苯二甲苯+1/3+1/3乙醇混合乙醇混合液液二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯 二甲苯是使用最廣泛的一種透明劑，滲透力強(qiáng)，二甲苯是使用最廣泛的一種透明劑，滲透力強(qiáng)，溶蠟量大，易揮發(fā)，缺點是易使組織收縮，變硬，溶蠟量大，易揮發(fā)，缺點是易使組織收縮，變硬，變脆。變脆。13 浸蠟浸蠟 將完成透明步驟的組織塊浸入透明劑與石蠟混將完成透明步驟的組織塊浸入透明劑與石蠟混合液中，梯度提高石蠟的比例，直至用石蠟完全置合液中，梯度提高石蠟的比例，直至用石蠟完全置換組織塊中的透明劑，便于之后的包理與切片。換組織塊中的透明劑，便于之后的包理與切片。

15、 浸蠟要在溫箱（浸蠟要在溫箱（6060，液態(tài)石蠟）中進(jìn)行，每液態(tài)石蠟）中進(jìn)行，每級級1-3h1-3h。 包埋包埋 樣品浸蠟后，內(nèi)部間隙已完全被石蠟占據(jù)，接樣品浸蠟后，內(nèi)部間隙已完全被石蠟占據(jù)，接著還需要用同種硬度的石蠟包埋成蠟塊以便切片。著還需要用同種硬度的石蠟包埋成蠟塊以便切片。用鑷子輕輕將浸蠟后的組織塊夾入盛有液態(tài)石蠟的用鑷子輕輕將浸蠟后的組織塊夾入盛有液態(tài)石蠟的紙盒，擺好位置，待石蠟冷卻成固態(tài)即包埋完畢。紙盒，擺好位置，待石蠟冷卻成固態(tài)即包埋完畢。可同時包埋多塊組織。可同時包埋多塊組織。至此，組織材料的前處理過程已完成，可用于切至此，組織材料的前處理過程已完成，可用于切片。片。14切片切

16、片修塊：切片前需修整蠟塊，先將大塊蠟塊切開，使每修塊：切片前需修整蠟塊，先將大塊蠟塊切開，使每一小塊都含有一塊組織，再修整成正方體或長方一小塊都含有一塊組織，再修整成正方體或長方體，從切面看組織周圍的石蠟厚度相等體，從切面看組織周圍的石蠟厚度相等(3mm)(3mm)。固著：將修好的蠟塊粘在大小適宜的樣品臺（臺木）固著：將修好的蠟塊粘在大小適宜的樣品臺（臺木）上，以便于固定在切片機(jī)上。上，以便于固定在切片機(jī)上。切片：調(diào)整切片機(jī)刀片位置與臺木上的蠟面平行切片：調(diào)整切片機(jī)刀片位置與臺木上的蠟面平行 。一手持毛筆，一手轉(zhuǎn)動切片機(jī)，切下的蠟片連成一手持毛筆，一手轉(zhuǎn)動切片機(jī)，切下的蠟片連成一長條蠟帶。切下

17、的蠟帶根據(jù)需要切成數(shù)段，放一長條蠟帶。切下的蠟帶根據(jù)需要切成數(shù)段，放在在4040水面上。水面上。貼片：蠟帶分別用粘片劑（蛋白甘油）貼在干凈載玻貼片：蠟帶分別用粘片劑（蛋白甘油）貼在干凈載玻片上。在恒溫展片臺上展平，烘干。片上。在恒溫展片臺上展平，烘干。1516脫蠟、水化、染色脫蠟、水化、染色蠟帶必須先用二甲苯去除石蠟再用乙醇去除蠟帶必須先用二甲苯去除石蠟再用乙醇去除二甲苯，再進(jìn)入水中，才能染色。二甲苯，再進(jìn)入水中，才能染色。染色的方法很多，要根據(jù)標(biāo)本要求顯示的目染色的方法很多，要根據(jù)標(biāo)本要求顯示的目的選擇不同的染劑，最常用的是蘇木精的選擇不同的染劑，最常用的是蘇木精- -伊紅染色（伊紅染色（H

18、 HE E 染色）。蘇木精使細(xì)胞核染色）。蘇木精使細(xì)胞核顯深紫色，伊紅使細(xì)胞質(zhì)顯粉紅色，可顯顯深紫色，伊紅使細(xì)胞質(zhì)顯粉紅色，可顯示清晰的細(xì)胞形態(tài)和核的大小，位置。示清晰的細(xì)胞形態(tài)和核的大小，位置。染色后再使帶水的切片經(jīng)歷脫水染色后再使帶水的切片經(jīng)歷脫水透明，最透明，最后用樹膠封片。后用樹膠封片。17HEHE染色：蘇木精（染色：蘇木精（HematoxylinHematoxylin）伊紅（）伊紅（EosinEosin）染色）染色堿性染料堿性染料將嗜堿性物質(zhì)（本將嗜堿性物質(zhì)（本身酸性）染成藍(lán)色身酸性）染成藍(lán)色酸性染料酸性染料將嗜酸性物質(zhì)（本將嗜酸性物質(zhì)（本身堿性）染成紅色身堿性）染成紅色細(xì)胞核中的細(xì)

19、胞核中的DNADNA、RNARNA細(xì)細(xì)胞質(zhì)中的胞質(zhì)中的RNARNA細(xì)胞質(zhì)、膜性結(jié)構(gòu)細(xì)胞質(zhì)、膜性結(jié)構(gòu)（線粒體、溶酶體、（線粒體、溶酶體、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）18 (l) (l)細(xì)胞核染色劑細(xì)胞核染色劑 用于細(xì)胞核的染色劑有天然染色劑的蘇木精、用于細(xì)胞核的染色劑有天然染色劑的蘇木精、洋紅以及合成染色劑中的番紅、結(jié)品紫、硫堇、洋紅以及合成染色劑中的番紅、結(jié)品紫、硫堇、甲苯胺藍(lán)、甲基綠、美藍(lán)、孔雀綠和焦油紫等。甲苯胺藍(lán)、甲基綠、美藍(lán)、孔雀綠和焦油紫等。 (2)(2)細(xì)胞質(zhì)染色劑細(xì)胞質(zhì)染色劑 用于細(xì)胞質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的曙紅、用于細(xì)胞質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的曙紅、亮綠、橘黃亮綠、橘黃G G、

20、酸性品紅、苦味酸和水溶性苯胺藍(lán)、酸性品紅、苦味酸和水溶性苯胺藍(lán)等。等。 （3 3）脂質(zhì)染色劑）脂質(zhì)染色劑 用于顯示脂質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的蘇用于顯示脂質(zhì)的染色劑有合成染色劑中的蘇丹丹IIIIII、蘇丹、蘇丹IvIv、硫酸尼羅藍(lán)及油紅等。、硫酸尼羅藍(lán)及油紅等。 19其步驟如下：其步驟如下： 二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯1/21/2二甲苯二甲苯+1/2+1/2乙醇混乙醇混合液合液100%100%乙醇乙醇95%95%乙醇乙醇85%85%乙醇乙醇70%70%乙醇乙醇50%50%乙醇乙醇30%30%乙醇乙醇蘇木精染液蘇木精染液0.01%0.01%鹽酸鹽酸0.01%0.01%氫氧化鈉氫氧化鈉蒸餾水蒸餾水3

21、0%30%乙醇乙醇50%50%乙醇乙醇70%70%乙醇乙醇85%85%乙醇乙醇伊紅染液伊紅染液95%95%乙醇乙醇100%100%乙醇乙醇100%100%乙乙醇醇1/21/2二甲苯二甲苯+1/2+1/2乙醇混合液乙醇混合液二甲苯二甲苯二甲苯二甲苯封片封片20鏡檢、貼標(biāo)簽、干燥、記錄。鏡檢、貼標(biāo)簽、干燥、記錄。213 石蠟切片實例石蠟切片實例魚肝制片魚肝制片 材料：魚肝（厚材料：魚肝（厚2-3mm， carnoy3-4h /bouin/Zenker固定固定24h）。）。 試劑：固定液，埃里希蘇木精染液，試劑：固定液，埃里希蘇木精染液，1%伊紅水溶液，伊紅水溶液，1%鹽酸乙醇溶液，氨水，二甲苯，鹽

22、酸乙醇溶液，氨水，二甲苯，30%100% 各各級乙醇，甘油蛋白粘片劑，中性樹膠。級乙醇，甘油蛋白粘片劑，中性樹膠。蘇木精為堿性染料（含陽離子），伊紅為酸性染料，魚肝細(xì)胞核含酸性蘇木精為堿性染料（含陽離子），伊紅為酸性染料，魚肝細(xì)胞核含酸性物質(zhì)，易與堿性染料的陽離子結(jié)合染上藍(lán)色，胞質(zhì)含堿性物質(zhì)，易與酸物質(zhì)，易與堿性染料的陽離子結(jié)合染上藍(lán)色，胞質(zhì)含堿性物質(zhì)，易與酸性染料中陰離子結(jié)合而染上粉紅色。性染料中陰離子結(jié)合而染上粉紅色。22 實驗程序：實驗程序： 取材取材（ 2-355 mm3）固定固定（carnoy3-4h，bouin 12-24h）洗滌（洗滌（70%乙醇乙醇3-5次）次）脫水脫水（80%

23、、90、100、100%乙醇各乙醇各0.5h）透明透明（乙醇（乙醇+二甲苯等量混合二甲苯等量混合15min，二甲苯，二甲苯15min 2次）次）透蠟透蠟（二甲苯（二甲苯+石蠟各半石蠟各半35-37 ,0.5h ，石蠟，石蠟56-60 ,0.5h 2次）次）包埋包埋（凝（凝30min）切片切片（8m，水面展開），水面展開）貼片貼片（涂粘片劑，（涂粘片劑，滴水滴水1滴）滴）展片展片（40-45）烘干烘干（37 ，24h ） 脫蠟脫蠟（二甲苯（二甲苯2-5min，二甲苯，二甲苯+乙醇乙醇2-5min） 復(fù)水復(fù)水（100%、90、80、70、50%、蒸餾水各、蒸餾水各2min）染色染色（埃里希蘇木精染

24、液埃里希蘇木精染液15-20min）水洗水洗（2.5min 換換2次，次，共共5min）分色分色（分化，（分化， 1%鹽酸乙醇溶液數(shù)秒，再水洗鹽酸乙醇溶液數(shù)秒，再水洗1min，染色合適可不做此步，），染色合適可不做此步，）藍(lán)化（氨水藍(lán)化（氨水3-4s）水水洗洗（2次共次共5min）復(fù)染色復(fù)染色（ 1%伊紅水溶液伊紅水溶液1-5min）脫水脫水（50%數(shù)秒、數(shù)秒、70% 、80%、100、100%乙醇各乙醇各2min）透明透明（乙醇（乙醇+二甲苯二甲苯5min，二甲苯，二甲苯5min 2次）次）封藏封藏（中性樹膠（中性樹膠 50 ）。）。234 植物組織制片技術(shù)實例植物組織制片技術(shù)實例4.1 徒

25、手切片徒手切片重要的是切下一小片平而薄的組織，而不是切下完整的組織重要的是切下一小片平而薄的組織，而不是切下完整的組織片；片；左手持材料或夾持物（萵苣莖、胡蘿卜根、泡沫塑料等），左手持材料或夾持物（萵苣莖、胡蘿卜根、泡沫塑料等），右手平穩(wěn)持刀（刀片或手術(shù)刀），用臂力不用腕力；右手平穩(wěn)持刀（刀片或手術(shù)刀），用臂力不用腕力；刀刃平置經(jīng)削平的平面上，輕輕壓住刀片，以均勻的力量平刀刃平置經(jīng)削平的平面上，輕輕壓住刀片，以均勻的力量平穩(wěn)的動作，從刀刃的右側(cè)斜向左側(cè)切削，不可擠壓材料或穩(wěn)的動作，從刀刃的右側(cè)斜向左側(cè)切削，不可擠壓材料或拉鋸式切割；拉鋸式切割；材料切面上和刀刃上保持有水，以免材料干枯；材料切面上和刀刃上保持有水，以免材料干枯；切片可簡易染色切片可簡易染色1-2min，0.1%亞甲基藍(lán)，亞甲基藍(lán)，0.5%中性紅，中性紅，1%番紅（木質(zhì)化細(xì)胞壁及核染成紅色）番紅（木質(zhì)化細(xì)胞壁及核染成紅色）I I2 2-KI-KI溶液（淀粉粒溶液（淀粉粒藍(lán)