設施園藝工廠化高效安全生產關鍵技術研究

1、國家科技攻關計劃課題國家科技攻關計劃課題 工廠化農業(yè)關鍵技術研究與示范 2001BA503B 設施園藝工廠化高效、安全生產關鍵技術研究 2001BA503B03北京市農林科學院蔬菜研究中心北京市農林科學院蔬菜研究中心陳殿奎陳殿奎一、課題總體概述一、課題總體概述二、工作進展二、工作進展三、階段性成果三、階段性成果四、經費支出四、經費支出五、存在的問題五、存在的問題匯匯 報報 內內 容容一、課題總體概述一、課題總體概述課 題 執(zhí)課 題 執(zhí)行 單 位行 單 位（）* 啟動子課題8項，簽定課題任務書5份。* 經費全部下?lián)芙o各分項執(zhí)行單位。一、課題總體概述一、課題總體概述一、課題總體概述一、課題總體概述

2、參加課題研究的科技人員共計41人。 其中：高級職稱的18人， 中級職稱14人。學歷構成為：博士6人、碩士8人、本科18人。一、課題總體概述一、課題總體概述 * (1) 蔬菜工廠化宜地育苗技術研究(2) 花卉苗木工廠化組培快繁技術研究(3) 授粉蜂繁育技術研究(4) 設施蔬菜有害殘留快速檢測技術研究一、課題總體概述一、課題總體概述* 嫁接苗的工廠化生產 花卉組培苗無糖培養(yǎng)技術 熊蜂的繁育與工廠化生產 有機磷農藥殘留酶聯(lián)檢測與重金屬單克隆檢測一、課題總體概述一、課題總體概述 * 主要考核指標主要考核指標 ：（1）研究篩選新的育苗基質配方2-3種；建立黃瓜、番茄、西瓜等主要蔬菜商品苗及嫁接苗的工廠化

3、生產技術體系；嫁接苗的成活率達95%以上；研究開發(fā)擁有自主知識產權的蔬菜自動嫁接機1套，嫁接速度較傳統(tǒng)方法提高4倍以上。一、課題總體概述一、課題總體概述 * 主要考核指標主要考核指標 ：(2)研究蝴蝶蘭等3種名貴花卉苗木組培脫毒快繁技術體系, 新的體系比傳統(tǒng)方法生長速度提高1倍左右，生產成本降低10%左右，勞動生產率提高20%左右，成苗率提高10%以上。一、課題總體概述一、課題總體概述 * 主要考核指標主要考核指標 ：(3)查明我國熊蜂資源種類及分布，篩選出3種適合不同地區(qū)、不同設施條件的熊蜂品種；明確不同蜂種飼養(yǎng)的最佳環(huán)境條件，使筑巢率提高30；提出CO誘導滯育蜂王產卵的最佳處理時間和技術規(guī)

4、程,查明飼養(yǎng)過程中病蟲害的發(fā)生危害規(guī)律，針對不同敵害找出相應的防治方法12種。一、課題總體概述一、課題總體概述* 主要考核指標主要考核指標 ：(4)提出溫室蔬菜10種有機磷、5種重金屬快速檢測技術和方法，提出硝酸鹽、亞硝酸鹽快速檢測規(guī)范。一、課題總體概述一、課題總體概述科科 目目預算數預算數（萬元）國家攻關計劃撥款國家攻關計劃撥款 80國家其它撥款國家其它撥款 /部門撥款部門撥款 /地方匹配地方匹配 80單位自籌單位自籌 310其它來源其它來源 /合計合計470二、工作進展二、工作進展(1) (1) 蔬菜工廠化宜地育苗技術研究蔬菜工廠化宜地育苗技術研究西瓜斷根嫁接西瓜斷根嫁接14C17 C21

5、 C25 C嫁接后嫁接后1515天天嫁接后嫁接后2525天天根際溫度根際溫度對西瓜斷根嫁接苗對西瓜斷根嫁接苗根系生長發(fā)育根系生長發(fā)育的影響的影響 西瓜斷根嫁接后一葉一心時噴施多效唑，嫁接后25天時生長發(fā)育狀況。噴施噴施對斷根嫁接苗對斷根嫁接苗生長發(fā)育生長發(fā)育的影響的影響西瓜西瓜斷根嫁接斷根嫁接技術在龐各莊技術在龐各莊大面積示范推廣大面積示范推廣不同基質配方對番茄穴盤育苗葉面積的影響對照對照不同處理不同處理不同基質配方對番茄穴盤育苗根系體積的影響對照對照不同處理不同處理0.0000.2000.4000.6000.8001.0001.2001.400壯苗指數壯苗指數花生糠蛭石花生糠蛭石玉米芯蛭石玉

6、米芯蛭石玉米芯蛭石牛糞 玉米芯蛭石牛糞 花生糠蛭石牛糞花生糠蛭石牛糞草炭蛭石草炭蛭石椰糠蛭石椰糠蛭石蘑菇渣蛭石牛糞 蘑菇渣蛭石牛糞 葦糠 葦糠 椰糠蛭石牛糞 椰糠蛭石牛糞 蘑菇渣蛭石蘑菇渣蛭石不同基質配方對番茄穴盤育苗質量的影響對照對照不同處理不同處理二、工作進展二、工作進展(2) (2) 花卉苗木工廠化組培快繁技術研究花卉苗木工廠化組培快繁技術研究 研究百合、紅掌、蝴蝶蘭等名貴花卉組培脫毒快繁技術研究百合、紅掌、蝴蝶蘭等名貴花卉組培脫毒快繁技術 研究工廠化無糖培養(yǎng)快繁新技術；研究工廠化無糖培養(yǎng)快繁新技術； 開發(fā)環(huán)境可自動調控的工廠化組培快繁專用設施開發(fā)環(huán)境可自動調控的工廠化組培快繁專用設施主

7、要危害性病毒的以百合感病毒植株鱗莖的中部鱗片為外植體，經常規(guī)滅菌后，在MS+BA1.0/L +NAA0.1/L中培養(yǎng)成生根苗，作為莖尖剝取的對象 。可測出110ng/ml的病毒（CMV的檢測結果）使免疫反應在包被有抗原或抗體固相支持物上進行，借助于結合在抗原或抗體上的酶與底物反應所產生產物的顏色來檢測相應的抗原或抗體。主要危害性病毒的-DAS-ELISADAS-ELISA靈敏度高，可檢測出極微量的病毒RNA，適用于病毒濃度低的組培苗檢測；操作方便、簡單，檢測時間大為縮短；所需試劑全都商品化，每個樣品的直接檢測費用為25元左右?？稍O計多引物，在一個PCR反應體系內同時檢測兩種病毒 。蝴蝶蘭CyM

8、V和ORSV的檢測電泳圖 主要危害性病毒的- RT-PCRRT-PCR操作簡單，占用面積少，再侵染可能性小，需規(guī)?；a時可及時投入生產。無病毒愈傷組織、不定芽的低溫保存技術。百合瓶內小鱗莖的保存技術研究。8-10%的糖或10 mg/L的多效唑有利于小鱗莖的形成。無毒體系的-組培方式種植在專用的原種保存溫室中，室內具備防蟲設備，采用單盆定植；器具經消毒、保持清潔衛(wèi)生。定期噴藥。注意對原種株系進性真菌、細菌等病原的檢測與觀察。定期進行病毒抽測，監(jiān)控和淘汰帶毒株，保證繁殖圃的低帶毒率。每個株系都留有部分植株開花，以便觀測有無變異發(fā)生。無毒體系的-栽培條件下保存種苗工廠化種苗工廠化百合愈傷組織和小鱗

9、莖在M S + B A 0 . 5 m g / l - 1 . 0 mg/l+NAA0.2-0.5 mg/l時，增殖率最高；生根培養(yǎng)較易；過渡受移栽季節(jié)和管理水平的影響較大，成活率不穩(wěn)定?？偨Y出了一套適用于脫毒種苗快繁生產的方法。蝴蝶蘭無菌苗的莖段，在MS+ BA10 mg/l 時，直接快速增殖叢芽是一種新而有效的途徑。紅掌愈傷組織和不定芽增殖和分 化 在 M S + B A 0 . 5 m g / l +IAA0.5 mg/l時效果較佳；工廠化工廠化技術的研究技術的研究非洲菊組培苗的常規(guī)常規(guī)培養(yǎng)非洲菊組培苗的無無糖糖培養(yǎng)百合的無糖培養(yǎng)效果無糖培養(yǎng)場景馬蹄蓮無糖培養(yǎng)20天情人草無糖生根培養(yǎng)20

10、天紅掌的無糖培養(yǎng)二、工作進展二、工作進展(3) (3) 授粉蜂繁育技術研究授粉蜂繁育技術研究飼養(yǎng)室一角已經能夠嚴格的按照熊蜂的生育特性，地進行人工環(huán)境下的周年繁育。經熊蜂授粉后的西紅柿花經熊蜂授粉后的西紅柿花二、工作進展二、工作進展(4) (4) 設施蔬菜有害殘留快速檢測技術研究設施蔬菜有害殘留快速檢測技術研究510204080160320640dilution0.000.200.400.600.801.00Absorbance of 450nm/650nm2C12 cell supernatant activity assaydifferent dish and stageSep18 ISe

11、p18 ISep20 ISep20 ISep23經過篩選，選出分泌抗體的單細胞，培養(yǎng)此細胞，得到。通過連續(xù)收獲和抗體純化，可連續(xù)生產3-4個月，抗體的活性穩(wěn)定，效價基本上保持不變。1:1 1:2 1:4 1:8 1:161:321:64 1:128 1:256 1:5121:10241:20481:40961:81921:173841:34778dilution0.000.501.001.502.002.50absorbance of 450nm/650nmActivity of 2C12 and 5B22C12:9.3ug/ml 5B2:4.8ug/ml圖示：鉛（Pb）的單抗的結合專一性及穩(wěn)

12、定性在低濃度時的反應依然很好。510204080160320640dilution012Absorbance of 450nm/650nm8A11 cell supernatant activity assaydifferent dish and stageSep18 ISep18 ISep20 ISep20 ISep23圖示：鎘（Cd）的單抗的結合專一性及穩(wěn)定性在低濃度時的反應依然很好。蔬菜樣本中蔬菜樣本中農藥殘留農藥殘留前處理及測定：前處理及測定：取樣取樣提取提取固相萃取固相萃取GC-FPDGC-FPD檢測檢測蔬菜樣品中蔬菜樣品中農藥殘留農藥殘留快速儀器分析主要研究快速儀器分析主要研究結果

13、結果* 研究了幾種有機磷農藥在黃瓜、甘藍等蔬菜中殘留的SPEGC-NPD凈化測定方法。* 采用兩種SPE柱，通過比較不同淋洗劑的回收率，建立了幾種有機磷農藥GCNPD檢測方法，多種農藥分離良好，且檢測靈敏度遠低于酶速測法檢測靈敏度，可達0.05mg/Kg樣本。有機磷農藥有機磷農藥（甲基對硫磷）（甲基對硫磷）ELISAELISA免疫免疫試驗動物試驗動物甲基對硫磷通過連接臂和蛋白連接后，合成的抗原分子進行兔免疫實驗，制備特異性抗體。有機磷農藥（甲基對硫磷）有機磷農藥（甲基對硫磷）ELISAELISA免疫分析免疫分析v合成了針對甲基對硫磷的半抗原化合物，并將其與載體蛋白偶聯(lián)，得到免疫原及包被原。v通

14、過動物免疫得到了甲基對硫磷的特異性抗體，建立了甲基對硫磷的酶聯(lián)免疫分析方法。v利用所建立的間接ELISA方法將其合理的應用到土壤樣本基質中甲基對硫磷的殘留檢測，得到了較好的添加回收率結果。 v三個添加水平的平均添加回收率均在8095之間，變異系數為411之間，完全符合殘留分析的要求，同時與常規(guī)檢測方法相比，具有測定速度快，前處理簡便，特異性高等特點。三、取得的階段性成果三、取得的階段性成果出版專著 部；正式發(fā)表研究論論文文 篇；有關研究成果在中央電視臺科教節(jié)目制作中心和科教電影作為專題節(jié)目播出。三、取得的階段性成果三、取得的階段性成果 在我國北方地區(qū)首次采用西瓜斷根嫁接技術,2002年春季在北

15、京大興區(qū)龐各莊試驗示范園，育成西瓜斷根嫁苗，商品苗率達以上。 2002年工廠化穴盤育苗,在北京大興區(qū)長子營蔬菜高科技示范園銷售商品苗萬株。三、取得的階段性成果三、取得的階段性成果 開發(fā)出組培微環(huán)境溫濕度自動監(jiān)測和二氧化碳自動 監(jiān)測調控裝置一套； 建立無糖培養(yǎng)140M2中試車間,目前正在進行年產300萬株的規(guī)?；嚿a； 取得項專利，專利名稱為“組合式 植物光自養(yǎng)組培快繁裝置”，專利號為ZL022212051。三、取得的階段性成果三、取得的階段性成果 分別在北京、上海建立了一個年生產能力和 熊蜂工廠化繁育中試生產線； “熊蜂周年繁育技術與溫室蔬菜授粉應用”已通過（滬科鑒字2001第008號）； “熊蜂（Bombus spp.）工廠化周年繁育技術”申報國家發(fā)明專利（）。三、取得的階段性成果三、取得的階段性成果 已經初步建立了雜交瘤細胞系連續(xù)、大量制備鉛（Pb）、鎘（Cd）、汞（Hg）等單克隆抗體的的技術； 形成了鉛（Pb）、鎘（Cd）、汞（Hg）等重金屬單克隆抗體的純化和酶標免疫檢測方法； 合成了針對的半抗原化合物，得到了免疫原及包被原，通過動物免疫得到了甲基對硫磷的特異性抗體，建立了甲基對硫磷的酶聯(lián)免疫分析方法； 利用方法，應用土壤樣本甲基對硫磷的殘留檢測，三個添加水平的平均添加回收率均在8095之間，變異系數為411之間，完全符合殘留分析的要求。