細(xì)胞內(nèi)多糖和過(guò)氧化物酶的定位_第1頁(yè)
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1、細(xì)胞內(nèi)多糖和過(guò)氧化物酶的定位 Experiment 81【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?掌握顯示細(xì)胞中多糖和過(guò)氧化物酶反應(yīng)的原理和方法2【實(shí)驗(yàn)原理】 高碘酸雪夫試劑反應(yīng)，簡(jiǎn)稱(chēng)PAS反應(yīng)。主要是利用高碘酸作為強(qiáng)氧化劑，這種強(qiáng)氧化劑能打開(kāi)C-C鍵，使多糖分子中的乙二醇變成乙二醛，氧化所得到的醛基與Schiff試劑反應(yīng)形成紫紅色化合物。顏色的深淺與糖類(lèi)的多少有關(guān)。 細(xì)胞內(nèi)的過(guò)氧化物酶能把聯(lián)苯胺氧化為藍(lán)色或棕色絡(luò)合物，根據(jù)藍(lán)色或棕色的出現(xiàn)來(lái)表示過(guò)氧化物酶的存在。 3【實(shí)驗(yàn)材料】一、儀器：顯微鏡、鑷子、染色缽、刀片、載玻片、蓋玻片、吸水紙等 二、材料：馬鈴薯塊莖、洋蔥根尖或洋蔥鱗莖 三、試劑： 1高碘酸溶液： 高碘酸（H

2、IO42H2O） 0.4g， 95%乙醇 35ml， M/5醋酸鈉溶液（2.72g醋酸鈉溶于100ml H2O） 5ml， 蒸餾水 10ml 2Schiff試劑3亞硫酸水溶液470%乙醇 5聯(lián)苯胺溶液：在0.85%鹽水內(nèi)加入聯(lián)苯胺至飽和為止，臨用前加入20%體積的H2O2 ，每2ml加一滴。 60.1%鉬酸銨溶液：稱(chēng)取0.1g鉬酸銨溶于100ml 0.85%鹽水 4【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】（一）細(xì)胞中多糖的測(cè)定：高碘酸雪夫（PAS）反應(yīng) 1把馬鈴薯塊莖用刀片徒手切成薄片。 2浸于高碘酸溶液515min 。 3移入70%乙醇中浸片刻。 4Schiff試劑染色15min 。 5亞硫酸溶液洗三次，每次1 min。 6蒸餾水洗片刻。 7裝片鏡檢。 （二）細(xì)胞中過(guò)氧化物酶的測(cè)定：聯(lián)苯胺反應(yīng) 1把洋蔥根尖徒手切成2040m厚的薄片或用鑷子撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮一小塊。 2浸在溶有0.1%鉬酸銨的0.85%鹽水溶液中5min（鉬酸銨的作用是催化劑）。 3浸在聯(lián)苯胺溶液內(nèi)2min至切片出現(xiàn)藍(lán)色。 4在0.85%鹽水溶液中洗1min 。 5將薄片置于載玻片上展開(kāi)，蓋上蓋玻片，顯微鏡檢查。 5【作 業(yè)】

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