一蛋白質(zhì)化學課件

1、第一章 蛋 白 質(zhì) 蛋白質(zhì)的生物學意義 蛋白質(zhì)的元素組成 蛋白質(zhì)的氨基酸組成 肽 蛋白質(zhì)的結構 蛋白質(zhì)分子結構與功能的關系 蛋白質(zhì)的性質(zhì) 蛋白質(zhì)的分類蛋白質(zhì) 是由許多不同的-氨基酸按一定的序列通過酰胺鍵（肽鍵）縮合而成的，具有較穩(wěn)定的構象并具有一定生物功能的大分子。Protein：最原初的，第一重要的一、蛋白質(zhì)的生物學意義生物體的組成成分酶運輸運動抗體干擾素遺傳信息的控制細胞膜的通透性高等動物的記憶、識別機構二、蛋白質(zhì)的元素組成C（5055%）、H（68%）、O（2023%）、N（1518%）、 S（04%）、 N的含量平均為16% 凱氏（Kjadehl）定氮法的理論基礎蛋白質(zhì)含量 = 蛋白氮

2、 6.25 (100/16)氨基酸 （amino acids）是蛋白質(zhì)的基本組成單位。從細菌到人類，所有蛋白質(zhì)都由20種標準氨基酸組成。三、蛋白質(zhì)的氨基酸組成（一）蛋白質(zhì)的水解完全水解：各種aa混合物部分水解：肽段和aa蛋白質(zhì)可被酸、堿、蛋白酶催化水解酸水解：6M HCl，4M H2SO4（105）回流煮沸20h左右完全水解優(yōu)點：不引起消旋作用，Laa缺點：色氨酸完全破壞；羥基氨基酸（絲氨酸、蘇氨酸）部分水解；Asn、Gln酰胺基被水解下來堿水解：5M NaOH共煮1020h完全水解產(chǎn)生消旋；精氨酸脫氨生成鳥氨酸和尿素；色氨酸穩(wěn)定酶水解部分水解不產(chǎn)生消旋也不破壞aa（一）氨基酸的結構通式：19

3、種氨基酸具有一級氨基（-NH3+）和羧基（-COOH）結合到碳原子（C），同時結合到（C）上的是H原子和各種側(cè)鏈（R）；Pro具有二級氨基（-亞氨基酸） COO-R group Amino group Carboxylic group L-Form Amino Acid StructureaH = GlycineCH3 = AlanineH N3+H-碳：有機物中主鏈與官能團連接的最近的一個碳位Mirror Images of Amino AcidaaMirrorimageSame chemical propertiesStereo isomers不帶電形式 H2NCHCOOHR +H3NCH

4、COO-R兩性離子形式C如是不對稱C（除Gly），則：具有兩種立體異構體 D-型和L-型2. 具有旋光性 左旋（-）或右旋（+）不對稱碳原子（手性碳）：四個不同的原子或原子基團共價連接并因而失去對稱性的四面體碳LeuL-C-C-CONH2-C-CONH2-C-COOH-C-C-COOH-H-CH3-C-OH-C-SH-C-C-S-CPPro-C-C C N N+ -C-C-C-C-NH3+-C-C- -OH-C-NAliphaticAmideAcidicImino,CircularBasicSulfurHydroxyAromatic-C-C-C-N-C-N N+= C-C-C-C C-C-C-

5、C C C-C C C C HN C-COOH a-C-C OHGlnQAsnNAspDGluEPheFArgRLysKHisHGlyGAAAlaVValI IleYTyrSerSThrTMetMCysC（三）氨基酸的分類TrpWClassified by Chemical StruturePOLARNON-POLARTyrHisGlyAcidicNeutralBasicAspGluGlnCysAsnSerThrLysArgAlaValIleLeuMetPheTrpProClassification of Amino Acids by PolarityPolar or non-polar, i

6、t is the bases of the amino acid properties.不常見的蛋白質(zhì)aa123456123545-羥脯氨酸5-羥賴氨酸必需氨基酸：人體不能合成，但是人體必需的成人 ： Phe 、 Met、 Lys 、Thr 、 Trp、 Leu、Ile、Val記憶口訣：笨蛋來宿舍，晾一晾鞋嬰兒期：Arg和His半必需aa（四）氨基酸的重要理化性質(zhì)一般物理性質(zhì) 無色晶體，熔點極高（200以上，離子晶格-靜電引力），不同味道；水中溶解度差別較大（極性和非極性），不溶于有機溶劑。兩性解離和等電點 氨基酸在水溶液中或在晶體狀態(tài)時都以離子形式存在，在同一個氨基酸分子上帶有能放出質(zhì)子的N

7、H3+正離子和能接受質(zhì)子的COO-負離子，為兩性電解質(zhì)。調(diào)節(jié)氨基酸溶液的pH，使氨基酸分子上的NH3+基和COO-基的解離程度完全相等時，即所帶凈電荷為零，此時氨基酸所處溶液的pH值稱為該氨基酸的等電點（pI）。 pI時，aa的溶解度最小，容易沉淀H3NCHCOOHR+在酸性溶液中的氨基酸（pHpI）H3NCHCOO-R+在晶體狀態(tài)或水溶液中的氨基酸（pH=pI）H2NCHCOO-R在堿性溶液中的氨基酸（pHpI）（當氨基酸相互連接成蛋白質(zhì)時，只有其側(cè)鏈基團和末端的-氨基、-羧基是可以離子化的。）丙氨酸的電離平衡等電點時：Ala+ = Ala-丙氨酸的等電點 p I =（2.34 + 9.69

8、 ) / 2 = 6.02-lgH+2=-lgK1-lgK2側(cè)鏈上有解離基團的aa的pI如何計算？Glu、LysK1K2K32.194.259.67GluGlu+Glu-Glu2-堿性氨基酸 p I =1/2 (p K2 +p KR)酸性氨基酸 p I =1/2 (p K1 +p KR)氨基酸等電點的確定：1）酸堿滴定（滴定曲線）2）根據(jù)pK值（該基團在此pH一半解離）計算：等電點等于兩性離子兩側(cè)pK值的算術平均數(shù)。pI = pK1+pK22or（ pI = ）pK2+pK32129630OH pK1pK2pHpIH-C-RCOO-NH2 H+Isoelectric point = pK1 +

9、 pK22Amino Acids Isoelectric pointJuang RH (2004) BCbasicsAo=A-A+=Ao 在等電點以上的任一pH，aa帶凈負電荷，因此在電場中向正極移動。在低于等電點的任一pH，aa帶有凈正電荷，在電場中向負極移動。在一定范圍內(nèi)，aa溶液的pH離等電點愈遠，aa所帶靜電荷愈大。 aa化學性質(zhì) R RH2N-CH-COOH H3N+-CH-COO-(1) -氨基參加的反應a. 與亞硝酸反應 在標準條件下測定生成N2體積，即可計算出aa的量。Van Slyke法測定氨基氮的基礎。可用于aa定量和Pr水解程度的測定。 N2一半來自aa，一半來源于HNO

10、2。b. 烴基化反應 與2,4-二硝基氟苯（DNFB）的反應 該反應首先被英國的Sanger用來鑒定多肽、蛋白質(zhì)的N末端aaH2與異硫氰酸苯酯（PITC） 該反應首先被Edman用來鑒定多肽、蛋白質(zhì)的N末端aa。重復測定多肽鏈N端氨基酸排列順序，設計出“多肽順序自動分析儀”。苯氨基硫甲酰氨基酸苯硫乙內(nèi)酰尿氨基酸c. 形成西佛堿反應西佛堿：氮原子與碳原子用雙鍵連接形成的一類化合物 是以aa為底物的某些酶促反應如轉(zhuǎn)氨基反應的中間物 d. 脫氨基反應e. 熒光胺反應(2) -羧基參加的反應a. 成鹽或成酯反應b. 脫羧基反應c. 疊氮反應酰化氨基酸甲酯 Y=?；；被狨ｋ迈；被岑B氮(3) -

11、氨基和-羧基共同參加的反應a.與茚三酮的反應：加熱還原型茚三酮水合茚三酮藍紫色物質(zhì) Pro產(chǎn)生黃色物質(zhì)，其它為藍紫色。在570nm（藍紫色）或440nm（黃色）定量測定（幾g）。黃 色b.成肽反應一個aa的NH2與另一個aa羧基可以縮合成肽二酮吡嗪（甘氨酸酐）GlyOc. 與甲醛的反應：氨基酸的甲醛滴定法RCHCOO-NH3+RCHCOO-NH2+ H+OH-中和滴定HCHORCHCOO-NHCH2OHHCHORCHCOO-N(CH2OH)2氨基酸能直接用酸、堿滴定來進行定量測定嗎？H2NCHCH2SSHNO2HOOCSNO2COOHCOOH+SSNO2NO2HOOCCOOHH2NCHCOOH

12、 +CH2SHpH8.0硫代硝基苯甲酸測定Cys含量（pH8.0412nm的摩爾消光系數(shù)=13600）(4) 側(cè)鏈R基參加的反應5，5-雙硫基雙（2-硝基苯甲酸）Ellman試劑4、aa混合物的分析分離（1）分配層析法的一般原理 常用分離方法：分配柱層析、紙層析、薄層層析、離子交換層析、氣液層析、高效液相層析 所有的層析系統(tǒng)通常都由2相組成，一個為固定相或靜相，一個為流動相或動相，混合物在層析系統(tǒng)中的分離決定于該混合物的組分在這兩相中的分配情況。 紙色譜為分配色譜，色譜過程在固定相構成的平面狀層下進行。濾紙為載體，固定相為濾紙上的水，流動相（展開劑）為用水飽和過的有機溶劑。紙色譜屬于分配色譜。

13、 衡量物質(zhì)向上移動的物理量是比移值（Rf）（相對遷移率）=XY例:大黃中游離蒽醌的紙色譜圖溶劑前沿大黃素甲醚蘆薈大黃素大黃素大黃酸點樣點XY五、肽 一個氨基酸的-羧基和另一個氨基酸的-氨基脫水縮合而成的化合物。 氨基酸之間脫水后形成的鍵稱肽鍵（酰胺鍵）。（一）肽和肽鍵的結構NH2COOH1NH2COOH2NH2C NCOOHOH21Amino acids are connected head to tailDehydration-H2OCarbodiimide蛋白質(zhì)分子中aa連接的基本方式是肽鍵實驗依據(jù)蛋白質(zhì)分子中游離的-氨基和-羧基很少某些人工合成的多肽能被水解蛋白質(zhì)的蛋白酶所水解包含-CO

14、-NH-基團的化合物如雙縮脲H2N-CO-NH-CO-NH2能與硫酸銅NaOH溶液產(chǎn)生雙縮脲顏色反應。人工合成的多聚aa的X射線衍射圖案和紅外吸收光譜與天然纖維狀Pr十分相似人工合成蛋白質(zhì)結晶牛胰島素二肽寡肽(oligo peptide)多肽(poly peptide)氨基酸殘基(residue):主鏈、側(cè)鏈環(huán)狀肽氨基末端(amino terminal)或N末端羧基末端（carboxyl terminal）或C末端肽單位 肽鏈寫法：游離-氨基在左，游離-羧基在右，氨基酸之間用“-”表示肽鍵。H2N-絲氨酸-亮氨酸-苯丙氨酸-COOHSer-Leu-Phe（S-L-F）肽平面（酰胺平面） 0.1

15、27nm鍵長=0.132nm 0.148nm肽鍵的構型 穩(wěn)定 不穩(wěn)定順式異構體Cis：兩個相同原子或基團在雙鍵同一側(cè)的為順式異構體，也用 cis- 來表示。 反式異構體Trans：兩個相同原子或基團分別在雙鍵兩側(cè)的為反式異構體，也用 trans- 來表示。 （二）肽的物理化學性質(zhì) 在pH 0-14范圍內(nèi)，肽鍵的酰胺氫不解離，肽的酸堿性主要決定于肽鍵中的游離末端的-NH2、游離末端的-COOH以及側(cè)鏈R基上的可解離功能團。 肽中的末端-COOH的pKa值要比游離aa中的大一些，而末端-NH2的比其小。R基的pKa值在兩者之間區(qū)別不大。 化學反應與aa一樣，游離的-NH2、-COOH和R基也可以發(fā)

16、生與aa中相應基團類似的反應。NH2末端的aa殘基也能與茚三酮發(fā)生定量反應，生成成色物質(zhì)。 短肽的旋光度等于該肽中各個aa的旋光度的總和。 CO-NH-CH-CO-NH-CH2-COOHCH2CH2CHNH2COOHCH2SH谷胱甘肽存在與動、植物及微生物中： 1.參與體內(nèi)氧化還原反應 2.作為輔酶參與氧化還原反應 保護巰基酶或含Cys的蛋白質(zhì)中 SH的還原性 3.防止氧化物積累2GSHGS-SG1. 谷胱甘肽（GSH）（三）常見肽（二）催產(chǎn)素和升壓素 均為9肽，第3位和第9位氨基酸不同。催產(chǎn)素使子宮和乳腺平滑肌收縮，具有催產(chǎn)和促使乳腺排乳作用。升壓素促進血管平滑肌收縮，升高血壓，減少排尿。（

17、三）促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH） 39肽，活性部位為第410位的7肽片段： Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly。（四）腦肽腦啡肽具有強烈的鎮(zhèn)痛作用（強于嗎啡），不上癮。Met-腦啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-MetLeu-腦啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-內(nèi)啡肽（31肽）具有較強的嗎啡樣活性與鎮(zhèn)痛作用。（五）膽囊收縮素（六）胰高血糖素由胰島-細胞分泌（-細胞分泌胰島素），29肽。胰高血糖素調(diào)節(jié) 維持血糖濃度。五、 蛋白質(zhì)的結構一級結構（primary）二級結構（secondary）三級結構（tertiary）四級結構（quaternary）（一）蛋白質(zhì)

18、的一級結構（共價結構）一級結構就是蛋白質(zhì)分子中氨基酸殘基的排列順序，即氨基酸的線性序列。一級結構中包含的共價鍵（covalent bonds）主要指肽鍵（peptide bond）和二硫鍵（disulfide bond）蛋白質(zhì)有四種結構層次：HPhe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His- Leu-Val- Glu- Ala- Leu- Tyr Leu -Val-Cys-GlyGlu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-AlaOHB鏈15710151920212530HGly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Ala-

19、Ser-Val-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln-Leu-Glu-Asn-Tyr-Cys-AsnOH15102015A鏈711621SSSS牛胰島素的化學結構SS蛋白質(zhì)結構測序的策略：（1）測定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈數(shù)目（2）拆分蛋白質(zhì)分子的多肽鏈并分離提純 寡聚Pr：變性劑 8M 尿素；6M 鹽酸胍；高濃度鹽 共價二硫橋：氧化劑過甲酸 還原劑巰基乙醇（3）斷開多肽鏈內(nèi)的二硫橋（4）分析每一多肽鏈的aa組成（5）鑒定多肽鏈的N-末端和C-末端（6）裂解多肽鏈成較小的片段（7）測定各肽段的aa序列（8）重建完整多肽鏈的一級結構（9）確定半胱氨酸殘基間形成S-S交聯(lián)橋的位置 一級結構確定的原則：

20、將大化小，逐段分析，制成兩套肽片段，找出重疊位點，排出肽的前后位置，最后確定蛋白質(zhì)的完整序列。 目前往往采用從待測蛋白質(zhì)的基因序列反推出蛋白質(zhì)的一級結構。（二）蛋白質(zhì)的空間結構（構象、高級結構）Pr的天然折疊結構決定于三個因素：（1）與溶劑分子（一般H2O）的相互作用（2）溶劑的pH和離子組成（3）Pr的aa序列構象：Pr分子中所有原子在三維空間的排列分布和肽鏈的走向構型：立體結構中取代原子或基團在空間的取向1. 蛋白質(zhì)的二級結構指蛋白質(zhì)多肽鏈本身的折疊和盤繞方式（1）-螺旋（-helix）Pauling和Corey于1965年提出。結構要點：1）螺旋的每圈有3.6個氨基酸，螺旋間距離為0.5

21、4nm，每個殘基沿軸上升0.15nm，旋轉(zhuǎn)100。2）每個肽鍵的羰基氧與遠在第五個氨基酸氨基上的氫形成氫鍵（hydrogen bond），氫鍵的走向平行于螺旋軸，所有肽鍵都能參與鏈內(nèi)氫鍵的形成。C(NHCCO)3 NOHHR3.613 (ns)影響-螺旋形成的因素：aa組成和序列，多聚aa R基小，不帶電荷的多聚丙氨酸，在pH7的水溶液能自發(fā)地卷曲成-螺旋。但是多聚Lys在同樣pH條件下卻不能形成-螺旋，而是以無規(guī)卷曲形式存在。這是因為多聚Lys在pH7時R基具有正電荷，彼此間由于靜電排斥，不能形成鏈內(nèi)氫鍵。在pH12時，多聚賴Lys即自發(fā)地形成-螺旋。同樣，多聚Glu也與此類似。 多聚Pro

22、的-C原子參與R基吡咯的形成，環(huán)內(nèi)的C-N鍵和C-N肽鍵都不能旋轉(zhuǎn)，而且多聚Pro的肽鍵不具有酰胺H，不能形成鏈內(nèi)氫鍵，因此，多肽鏈只要存在脯氨酸（或羥脯氨酸）， -螺旋即被中斷，并產(chǎn)生一個“結節(jié)”。 除R基的電荷性質(zhì)外，R基的大小對多肽鏈能否形成螺旋也有影響。多聚Ile由于它的-C原子附近有較大的R基，造成空間阻礙，因而不能形成-螺旋。（2）-折疊結構（-pleated sheet）CCCCCCRRRRRRNNCNNCCC平行反平行-折疊片中，相鄰多肽鏈平行或反平行（較穩(wěn)定）。纖維狀蛋白：反平行；不同肽鏈形成氫鍵球蛋白：平行、反平行同樣廣泛，也可在同意肽鏈不同肽段之間形成-角蛋白絲心蛋白（3

23、）-轉(zhuǎn)角（-turn）N1CHCC2CHNHO=C3CHNC4CHNRRHOHRROHO-轉(zhuǎn)角經(jīng)常出現(xiàn)在連接反平行-折疊片的端頭。非重復性結構（4）無規(guī)卷曲（自由回轉(zhuǎn)）沒有一定規(guī)律的松散肽鏈結構。酶的活性部位。2. 超二級結構和結構域 超二級結構是指若干相鄰的二級結構中的構象單元彼此相互作用，形成有規(guī)則的，在空間上能辨認的二級結構組合體。是蛋白質(zhì)二級結構至三級結構層次的一種過渡態(tài)構象層次。、Rossmann折疊 結構域是球狀蛋白質(zhì)的折疊單位。多肽鏈在超二級結構的基礎上進一步繞曲折疊成緊密的近似球行的結構，具有部分生物功能。對于較大的蛋白質(zhì)分子或亞基，多肽鏈往往由兩個以上結構域締合而成三級結構。

24、3. 蛋白質(zhì)的三級結構指多肽鏈上的所有原子（包括主鏈和殘基側(cè)鏈）在三維空間的分布。肌紅蛋白亞基（單體）：四級結構的蛋白質(zhì)中每個球狀蛋白質(zhì)二聚體蛋白：兩個亞基組成四聚體蛋白寡聚蛋白質(zhì)：由兩個或兩個以上亞基組成的蛋白質(zhì)單體蛋白質(zhì)：僅由一個亞基組成并因此無四級結構的Pr同多聚雜多聚原體4. 蛋白質(zhì)的四級結構多肽亞基（subunit）的空間排布和相互作用。亞基間以非共價鍵連接。血紅蛋白 Hemoglobin (Hb)共價鍵次級鍵化學鍵 肽鍵一級結構氫鍵二硫鍵二、三、四級結構疏水鍵鹽鍵范德華力三、四級結構（三）蛋白質(zhì)分子中的共價鍵與次級鍵(1) 氫鍵羰基氧酰胺氫；側(cè)鏈側(cè)鏈；側(cè)鏈介質(zhì)水；主鏈肽基側(cè)鏈；主鏈

25、肽基水XHY X氫供體 Y氫受體特征方向性：相互吸引的方向沿氫受體Y的孤電子對軌道軸，受體Y和供體X之間的角度接近180度飽和性:X-H只能和一個Y原子相結合氫鍵負電性很強的原子（如氧或氮）和與氧或氮共價結合的氫原子相互吸引（2）范德華力定向效應：極性分子極性基團誘導效應：極性非極性物質(zhì)分散效應：非極性非極性分子（基團）由非極性基團受到水分子排斥相互聚集在一起的作用力疏水作用示意圖（3）疏水作用（5）二硫鍵（4）鹽鍵（離子鍵）：正、負電荷間靜電相互作用 蛋白質(zhì)的酸、堿性aa側(cè)鏈解離成離子，分布在球狀蛋白質(zhì)分子表面，而與介質(zhì)水分子發(fā)生電荷偶極之間相互作用，形成排列有序的水化層。ded 范德華力

26、e 二硫鍵六、蛋白質(zhì)分子結構與功能的關系蛋白質(zhì)分子具有多樣的生物學功能，需要一定的化學結構，還需要一定的空間構象。（一）蛋白質(zhì)一級結構與功能的關系1. 種屬差異蛋白質(zhì)一級結構的種屬差異十分明顯，但相同部分氨基酸對蛋白質(zhì)的功能起決定作用。根據(jù)蛋白質(zhì)結構上的差異，可以斷定它們在親緣關系上的遠近。2.分子病蛋白質(zhì)分子一級結構的氨基酸排列順序與正常有所不同的遺傳病。鐮狀細胞貧血（sick-cell anemia）從患者紅細胞中鑒定出特異的鐮刀型或月牙型細胞。-鏈 1 2 3 4 5 6 7Hb-A Val-His-Leu-Thr-Pro-Glu-LysHb-S Val-His-Leu-Thr-Pro-

27、Val-Lys Val 取代Glu含氧-HbAO2O2粘性疏水斑點含氧HbS脫氧HbS疏水位點血紅蛋白分子凝集HbS與HbA的區(qū)別-亞基第6位氨基酸正常人：Glu患者：Val（二）蛋白質(zhì)構象與功能的關系 別（變）構作用：含亞基的蛋白質(zhì)由于一個亞基的構象改變而引起其余亞基和整個分子構象、性質(zhì)和功能發(fā)生改變的作用。因別構而產(chǎn)生的效應稱別構效應。 血紅蛋白是別構蛋白，O2結合到一個亞基上以后，影響與其它亞基的相互作用。七、蛋白質(zhì)的性質(zhì)（一）蛋白質(zhì)的相對分子量測定方法: 滲透壓法、超離心法、凝膠過濾法、聚丙烯酰胺凝膠電泳等。最準確可靠的方法是超離心法（Svedberg于1940年設計）：蛋白質(zhì)顆粒在2

28、550104 g離心力作用下從溶液中沉降下來。沉降系數(shù)（s）：單位（cm）離心場里的沉降速度。 s = v2x v =沉降速度（dx/dt）=離心機轉(zhuǎn)子角速度（弧度/s） x =蛋白質(zhì)界面中點與轉(zhuǎn)子中心的距離（cm）沉降系數(shù)的單位常用S，1S=110-13（s）蛋白質(zhì)分子量（M）與沉降系數(shù)（s）的關系M = RTsD（1V）R氣體常數(shù)（8.314107ergsmol -1 度-1）T絕對溫度D擴散常數(shù)（蛋白質(zhì)分子量很大，離心機轉(zhuǎn)速很快，則忽略不計）V蛋白質(zhì)的微分比容（m3g-1）溶劑密度（20，gml-1） s沉降系數(shù)（二）蛋白質(zhì)的兩性電離及等電點蛋白質(zhì)在其等電點偏酸溶液中帶正電荷，在偏堿溶液

29、中帶負電荷，在等電點pH時為兩性離子。電泳：帶電顆粒在電場中移動的現(xiàn)象。分子大小不同的蛋白質(zhì)所帶凈電荷密度不同，遷移率即異，在電泳時可以分開。自由界面電泳：蛋白質(zhì)溶于緩沖液中進行電泳。區(qū)帶電泳：將蛋白質(zhì)溶液點在浸了緩沖液的支持物上進行電泳，不同組分形成帶狀區(qū)域。（2）凝膠電泳：用凝膠（淀粉、瓊脂糖、聚丙烯酰胺）作支持物。1）圓盤電泳：玻璃管中進行的凝膠電泳。+ 2）平板電泳：鋪有凝膠的玻板上進行的電泳。-+（1）紙上電泳：用濾紙作支持物。等電聚焦電泳：當?shù)鞍踪|(zhì)在其等電點時，凈電荷為零，在電場中不再移動。+5.06.07.0穩(wěn)定pH梯度5.06.07.0穩(wěn)定pH梯度通電+（三）蛋白質(zhì)的膠體性質(zhì)布郎運動、丁道爾現(xiàn)象、電泳現(xiàn)象，不能透過半透膜，具有吸附能力蛋白質(zhì)溶液穩(wěn)定的原因： 1）表面形成水膜（水化層