《基因工程完》word版

1、A一單項(xiàng)選擇題1.F因子從一個細(xì)胞轉(zhuǎn)移至另一個細(xì)胞的基因轉(zhuǎn)移過程稱為： A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)導(dǎo)C.轉(zhuǎn)染D.接合2.通過自動獲取或人為地供給外源DNA使受體細(xì)胞獲得新的遺傳表型,稱為： A.轉(zhuǎn)化 B.轉(zhuǎn)導(dǎo) C.轉(zhuǎn)染 D.轉(zhuǎn)座3.由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因移位或重排稱為： A.轉(zhuǎn)化 B.轉(zhuǎn)染 C.轉(zhuǎn)座 D.接合4.由整合酶催化、在兩個DNA序列的特異位點(diǎn)間發(fā)生的整合稱： A.位點(diǎn)特異的重組 B.同源重C.基本重組 D.人工重組5.發(fā)生在同源序列間的重組稱為： A.位點(diǎn)特異的重組 B.非位點(diǎn)特異的重組 C.基本重組（同源重組） D.人工重組6.限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生： A.5磷酸基和3羥基基團(tuán)

2、的未端 B.3磷酸基和5羥基基團(tuán)的末端 C.5磷酸基和3磷酸基團(tuán)的末端D.5羥基和3羥基基團(tuán)的末端7.可識別并切割特異DNA序列的稱： A.限制性核酸外切酶 B.限制性核酸內(nèi)切酶 C.非限制性核酸外切酶D.非限制性核酸內(nèi)切酶8.在重組DNA技術(shù)中催化形成重組DNA分子的是DNAA.聚合酶 B.解鏈酶C.連接酶 D.拓?fù)涿?.不能用作克隆載體的DNA是： A.質(zhì)粒DNAB.噬菌體DNA C.細(xì)菌基因組DNAD.腺病毒DNAl0.在下述雙鏈DNA序列(僅列出其中一條鏈序列)中不屬于完全回文結(jié)構(gòu)的是： A.AGAATTCT B.TGAATTCA C.GGAATTCC D.CGTTAAGC11.無性繁

3、殖依賴DNA載體的最基本性質(zhì)是： A.青霉素抗性 B.自我復(fù)制能力 C.自我轉(zhuǎn)錄能力 D.自我表達(dá)能力12.在已知序列的情況下獲得目的DNA最常用的是： A.化學(xué)合成法B.篩選基因組文庫 C.篩選cDNA文庫D.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)13.重組DNA技術(shù)領(lǐng)域常用的質(zhì)粒DNA是： A細(xì)菌染色體DNA的一部分B.細(xì)菌染色體外的獨(dú)立遺傳單位 C.病毒基因組DNA的一部分D.真核細(xì)胞染色體DNA的一部分14.某限制性內(nèi)切核酸酶按： GGGCGCCC CCCGCGGG 方式切割產(chǎn)生的末端突出部分含： A.1個核苷酸 B.2個核苷酸C.3個核苷酸 D.4個核苷酸15 .克隆某一目的DNA的過程不包括： A.基因載

4、體的選擇與構(gòu)建B.外源基因與載體的拼接 C.重組DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞D.表達(dá)目的基因編碼的蛋白質(zhì)16 .表達(dá)人類蛋白質(zhì)的最理想的細(xì)胞體系是： A.E.coli表達(dá)體系B.原核表達(dá)體系 C.酵母表達(dá)體系D哺乳類細(xì)胞表達(dá)體系二.填空題1. 通過自動獲取或人為地供給外源_，使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的_，這就是轉(zhuǎn)化作用。2. 由_和_介導(dǎo)的基因移位或重排，稱為轉(zhuǎn)座。3. 基因重組有3種類型，即_、_和_。4. 依賴整合酶、在兩個DNA序列的_發(fā)生的整合稱_。5. 發(fā)生在同源序列間的重組稱為_，又稱_。6. 一個完整的基因克隆過程應(yīng)包括:目的基因的獲取, _的選擇與改造, _的連接,重組DNA分子

5、導(dǎo)入受體細(xì)胞,篩選出含感興趣基因的重組DNA轉(zhuǎn)化細(xì)胞。7. 限制性核酸內(nèi)切酶是一類識別_的_核酸酶。8. 科學(xué)家感興趣的外源基因又稱_，其來源有幾種途徑：化學(xué)合成,酶促合成cDNA,制備的基因組DNA及_技術(shù)。9.外源DNA離開染色體是不能復(fù)制的。將_與_連接,構(gòu)建成重組DNA分子,外源DNA則可被復(fù)制。10.根據(jù)采用的克隆載體性質(zhì)不同,將重組DNA分子導(dǎo)人細(xì)菌的方法有_、_及感染。三.名詞解釋題1.plasmid2.restriction endonuclease3.vector4.DNA cloning5.目的基因6.同源重組7.cDNA文庫8.基因組DNA文庫9.回文結(jié)構(gòu)10.轉(zhuǎn)座四.問

6、答題1.簡述基因位點(diǎn)特異的重組和同源重組的差別。2.簡述基因克隆的基本過程。3.寫出大多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶識別DNA序列的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。4.寫出目的基因的主要來源或途徑。 B一、A型題1 在分子生物學(xué)領(lǐng)域，分子克隆主要是指（ ） ADNA的大量復(fù)制 BDNA的大量轉(zhuǎn)錄 DNA的大量剪切 DRNA的大量反轉(zhuǎn)錄ERNA的大量剪切2在分子生物學(xué)領(lǐng)域，重組DNA又稱（ ）A酶工程 B蛋白質(zhì)工程 C細(xì)胞工程 D基因工程 EDNA工程3在重組DNA技術(shù)中，不常用到的酶是（ ）A限制性核酸內(nèi)切酶 BDNA聚合酶 CDNA連接酶 D反轉(zhuǎn)錄酶 EDNA解鏈酶4多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶切割后的DNA末端為（ ）A平頭末端

7、 B3突出末端 C5突出末端 D粘性末端 E缺口末端5可識別DNA的特異序列，并在識別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類酶稱為（）A限制性外切核酸酶 B限制性內(nèi)切核酸酶 C非限制性外切核酸酶 D非限制性內(nèi)切核酸酶 EDNA內(nèi)切酶6cDNA是指（ ）在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與RNA互補(bǔ)的DNA B在體外經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與DNA互補(bǔ)的DNA在體外經(jīng)轉(zhuǎn)錄合成的與DNA互補(bǔ)的RNA D在體內(nèi)經(jīng)反轉(zhuǎn)錄合成的與RNA互補(bǔ)的DNAE在體內(nèi)經(jīng)轉(zhuǎn)錄合成的與DNA互補(bǔ)的RNA7基因組代表一個細(xì)胞或生物體的（ ）A部分遺傳信息 B整套遺傳信息 C可轉(zhuǎn)錄基因 D非轉(zhuǎn)錄基因 E可表達(dá)基因8在基因工程中通常所使用的質(zhì)粒存在于（

8、）A細(xì)菌染色體 B酵母染色體 C細(xì)菌染色體外 D酵母染色體外 E以上都不是9就分子結(jié)構(gòu)而論，質(zhì)粒是（ ）A環(huán)狀雙鏈DNA分子 B環(huán)狀單鏈DNA分子 C環(huán)狀單鏈RNA分子 D線狀雙鏈DNA分子E線狀單鏈DXlA分子10聚合酶鏈反應(yīng)可表示為（ ）APEC BPER CPDR D BCR EPCR11在已知序列信息的情況下，獲取目的基因的最方便方法是（ ）A化學(xué)合成法 B基因組文庫法 CcDNA文庫法 D聚合酶鏈反應(yīng) E差異顯示法12重組DNA的基本構(gòu)建過程是將（ ）A任意兩段DNA接在一起 B 外源DNA接入人體DNAC目的基因接入適當(dāng)載體 D目的基因接入哺乳類DNA E外源基因接入宿主基因13催

9、化聚合酶鏈反應(yīng)的酶是（ ）ADNA連接酶 B反轉(zhuǎn)錄酶 C末端轉(zhuǎn)移酶 D堿性磷酸酶 ETaqDNA聚合酶14將內(nèi)切酶切割后的目的基因與用相同內(nèi)切酶切割后的載體DNA連接屬（ ）同聚物加尾連接 B人工接頭連接 C平端連接 D粘性末端連接 E非粘性末端連接15限制性核酸內(nèi)切酶切割DNA后產(chǎn)生（ ）A3磷酸基末端和5羥基末端 B5磷酸基末端和3羥基末端C3磷酸基末端和5磷酸基末端 D5羥基末端和3羥基末端E3羥基末端、5羥基末端和磷酸16重組DNA技術(shù)中實(shí)現(xiàn)目的基因與載體DNA拼接的酶是（ ）ADNA聚合酶 BRNA聚合酶 C DNA連接酶 DRNA連接酶 E限制性核酸內(nèi)切酶17以質(zhì)粒為載體，將外源基

10、因?qū)耸荏w菌的過程稱（ ）A轉(zhuǎn)化 B轉(zhuǎn)染 C感染 D，轉(zhuǎn)導(dǎo) E轉(zhuǎn)位18最常用的篩選轉(zhuǎn)化細(xì)菌是否含質(zhì)粒的方法是（ ）A營養(yǎng)互補(bǔ)篩選 B抗藥性篩選 C免疫化學(xué)篩選 DPCR篩選 E分子雜交篩選19互補(bǔ)篩選法屬于（ ）抗藥性標(biāo)志篩選 B酶聯(lián)免疫篩選 C標(biāo)志補(bǔ)救篩選 D原位雜交篩選 E免疫化學(xué)篩選20下列常用于原核表達(dá)體系的是（ ）酵母細(xì)胞 B昆蟲細(xì)胞 C哺乳類細(xì)胞 D真菌 E 大腸桿菌21在對目的基因和載體DNA進(jìn)行同聚物加尾時用（ ）A反轉(zhuǎn)錄酶 B多聚核苷酸激酶 C引物酶 DRNA聚合酶 E末端轉(zhuǎn)移酶22重組DNA技術(shù)常用的限制性核酸內(nèi)切酶為（ ）A類酶 B類酶 C類酶 D類酶 E類酶23在分子生

11、物學(xué)領(lǐng)域，分子克隆專指( )A細(xì)胞克隆 BRNA克隆 CDNA克隆 D抗體克隆 EmRNA克隆24用于重組DNA的限制性核酸內(nèi)切酶識別核苷酸序列的( )A正超螺旋結(jié)構(gòu) B負(fù)超螺旋結(jié)構(gòu) C螺旋結(jié)構(gòu) D回文結(jié)構(gòu) E鋅指結(jié)構(gòu)25在基因工程中通常所使用的質(zhì)粒是( )A細(xì)菌的染色體DNA B細(xì)菌染色體外的DNA C病毒染色體DNA D病毒染色體外的DNA E噬菌體DNA26構(gòu)建基因組DNA文庫時，首先需分離細(xì)胞的（ ）A染色體DNA B線粒體DNA C總mRNA DtRNA ErRNA27建cDNA文庫時，首先需分離細(xì)胞的（ ）A染色體DNA B線粒體DNA C總mRNA DtRNA ErRNA28設(shè)計

12、聚合酶鏈反應(yīng)的引物時，應(yīng)考慮引物與模板的（ ）A5端特定序列互補(bǔ) B5端任意序列互補(bǔ)C3端特定序列互補(bǔ) D3端任意序列互補(bǔ) E中間序列互補(bǔ)29用于鑒定轉(zhuǎn)化子細(xì)胞是否含重組DNA的最常用方法是（ ）A抗藥性選擇 B分子雜交選擇 CRNA反轉(zhuǎn)錄 D免疫學(xué)方法 E體外翻譯30確切地講，cDNA文庫包含 （ ）A一個物種的全部基因信息 B一個物種的全部mRNA信息C 一個生物體組織或細(xì)胞的全部基因信息D一個生物體組織或細(xì)胞的全部mRNA信息 E一個生物體組織或細(xì)胞所表達(dá)mRNA信息31利用聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增特異DNA序列重要原因之一是（ ）A 反應(yīng)體系內(nèi)存在特異DNA模板 B反應(yīng)體系內(nèi)存在特異RNA模板

13、C反應(yīng)體系內(nèi)存在特異DNA引物 D反應(yīng)體系內(nèi)存在特異RNA引物E 反應(yīng)體系內(nèi)存在的TaqDNA聚合酶具有識別特異DNA序列的作用32表達(dá)人類蛋白質(zhì)的最理想的細(xì)胞體系是（ ）AEcoli表達(dá)體系 B原核表達(dá)體系 C酵母表達(dá)體系D昆蟲表達(dá)體系 E哺乳類細(xì)胞表達(dá)體系33下列描述最能確切表達(dá)質(zhì)粒DNA作為克隆載體特性的是（ ）A小型環(huán)狀雙鏈DNA分子 B攜帶有某些抗藥性基因C在細(xì)胞分裂時恒定地傳給子代細(xì)胞 D具有自我復(fù)制功能 E獲得目的基因二、B型題A抗藥性選擇 B分子雜交選擇 CRNA反轉(zhuǎn)錄 D免疫學(xué)方法 E體外翻譯1用于鑒定是否有質(zhì)粒轉(zhuǎn)入受體菌的一般方法是（ ）2用于鑒定轉(zhuǎn)化子細(xì)胞是否含目的基因的

14、常用方法是 （ ）3利用目的基因表達(dá)產(chǎn)物的特異性抗體來篩選含目的基因的轉(zhuǎn)化子細(xì)胞的方法是（ ） A限制性核酸內(nèi)切酶 BDNA連接酶 C反轉(zhuǎn)錄酶 TaqDNA聚合酶 E堿性磷酸酶 4識別DNA回文結(jié)構(gòu)并對其雙鏈進(jìn)行切割的是（ ）5用于聚合酶鏈反應(yīng)的酶是（ ）6將目的基因與載體DNA進(jìn)行拼接的酶是（ ）A支原體 B衣原體 C噬菌體 D細(xì)菌 E酵母7常用作原核表達(dá)體系的是（ ）8常用作真核表達(dá)體系的是（ ）A基因組文庫 BcDNA文庫 CmRNA文庫 DtRNA文庫 ErRNA文庫9分離細(xì)胞染色體DNA可制備（ ）10分離細(xì)胞總mRNA可制備（ ）A轉(zhuǎn)染 B轉(zhuǎn)化 C感染 D轉(zhuǎn)導(dǎo) E轉(zhuǎn)位11以質(zhì)粒為載

15、體，細(xì)菌為宿主的導(dǎo)人方式是（ ）12以噬菌體為載體，細(xì)菌為宿主的導(dǎo)人方式是（ ）13以病毒為載體，哺乳動物細(xì)胞株為宿主的導(dǎo)人方式是（ ）A抗藥性選擇 BRNA反轉(zhuǎn)錄 C免疫化學(xué)方法 D體外翻譯 EPCR14對重組體進(jìn)行直接選擇的方法是( )15通過鑒定基因表達(dá)產(chǎn)物篩選重組體的方法是( )ARNA聚合酶 B末端轉(zhuǎn)移酶 C堿性磷酸酶 D反轉(zhuǎn)錄酶 E核苷酸酶16切除DNA末端磷酸基用( )17在DNA3羥基末端進(jìn)行同聚物加尾用( )18合成cDNA用( )三、X型題 可用作克隆載體的DNA分子有( )A染色體DNA B病毒DNA C細(xì)菌染色體DNA D噬菌體DNA E特殊的蛋白質(zhì)2重組DNA基本過程

16、包括( )A目的基因的獲取 B克隆載體的構(gòu)建 C目的基因與載體的拼接 D重組分子導(dǎo)入受體菌 E轉(zhuǎn)化菌的篩選3基因克隆又稱(BC)重組RNA B重組DNA CDNA克隆 DRNA克隆 E蛋白質(zhì)克隆4組成PCR反應(yīng)體系的通常有( )ADNA引物 B耐熱的DNA聚合酶 C dNTP DDNA模板 EMg2+5對于重組體的篩選，屬直接選擇法的有( )A 免疫化學(xué)法 BSouthern 印跡 C酶聯(lián)免疫法 D標(biāo)志補(bǔ)救 EWesthern 印跡6對于重組體的篩選，屬非直接選擇法的有( )A免疫化學(xué)法 B Southern 印跡 C酶聯(lián)免疫法 D標(biāo)志補(bǔ)救 EWestthern 印跡7限制性核酸內(nèi)切酶切割DN

17、A時，通常產(chǎn)生( )A5突出黏端 B平末端 C 3磷酸末端 D 3突出黏端 E 5磷酸末端8基因工程中目的基因的來源可以是( )A 化學(xué)合成 BPCR合成 CLCR合成 DcDNA文庫 E 基因組中直接獲得9重組DNA時，外源基因又稱( )A目的基因 B目的RNA C目的DNA D外源RNA E 載體基因10可作為重組DNA的目的基因有( )AmRNA BcRNA CcDNA DDNA ErRNAB 四、填空題1通過自動獲取或人為地供給外源_，使細(xì)胞或培養(yǎng)的受體細(xì)胞獲得新的_，這就是轉(zhuǎn)化作用。2由_和_介導(dǎo)的基因移位或重排，稱為轉(zhuǎn)座。3一個完整的基因克隆過程應(yīng)包括：目的基因的獲取，_的選擇與改

18、造，_和_連接為重組DNA，重組DNA分子導(dǎo)入_，篩選出含感興趣基因的重組DNA轉(zhuǎn)化細(xì)胞。4限制性核酸內(nèi)切酶是一類識別并水解_的核酸_酶。5科學(xué)家感興趣的外源基因又稱_，其來源有幾種途徑：化學(xué)合成，酶促合成cDNA，制備的基因組DNA及_技術(shù)。6外源DNA離開染色體是不能復(fù)制的。將_與_連接，構(gòu)建成重組DNA分子，外源DNA則可被復(fù)制。 7根據(jù)克隆載體性質(zhì)不同，將重組DNA分子導(dǎo)人細(xì)菌的方法有_、_及感染。五、名詞解釋題1質(zhì)粒 2限制性核酸內(nèi)切酶 3載體 4DNA克隆 5目的基因 6同源重組 7cDNA文庫 8基因組DNA文庫 9轉(zhuǎn)座 六、簡答題1簡述基因位點(diǎn)特異的重組和同源重組的差別。 （4

19、分）2何謂限制性核酸內(nèi)切酶?寫出大多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶識別DNA序列的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。（3分）3解釋質(zhì)粒，為什么質(zhì)?？勺鳛榛蜉d體。 （4分）七、論述題1何謂基因克隆?簡述基因克隆的基本過程。 （7分）2何謂目的基因?寫出其主要來源或途徑。 （6分） 3 何謂基因載體，說出哪些DNA可作為基因的載體。（5分）C一、A型題1“Sourthem、Blotting指的是( )A將DNA轉(zhuǎn)移到膜上，用DNA做探針雜交 B將RNA轉(zhuǎn)移到膜上，用DNA做探針雜交 C將DNA轉(zhuǎn)移到膜上，用蛋白質(zhì)做探針雜交 D將RNA轉(zhuǎn)移到膜上，用RNA做探針雜交 E將DNA轉(zhuǎn)移到膜上，用RNA做探針雜交2以下那種不是核酸分子雜交

20、( )A單鏈DNA分子之間的雜交B單鏈DNA與RNA分子之間的雜交C抗原與抗體分子之間的結(jié)合 D DNA與寡核苷酸之間的雜交 ERNA與RNA之間的雜交3探針是經(jīng)過什么標(biāo)記的核酸分子( ) A用放射性同位素標(biāo)記 B用生物素標(biāo)記 C用地高辛標(biāo)記 DA、B、C都對 E用抗體標(biāo)記4用于核酸雜交的探針至少應(yīng)符合下列哪條( ) A必須是雙鏈DNA B必須是雙鏈RNA C必須是單鏈DNA D必須是100bp以上的大分子DNA E必須是蛋白質(zhì)5核酸斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)中可省略的步驟是( ) A電泳 B核酸樣品固定于NC膜 C雜交信號檢測 D標(biāo)記探針 E制備樣本核酸6原位雜交是指( )A在硝酸纖維素膜上進(jìn)行雜交操作B

21、在組織切片或細(xì)胞涂片上進(jìn)行雜交操作 C直接將核酸點(diǎn)在NC膜上的雜交D在PVDF膜上進(jìn)行雜交操作 E在凝膠電泳中進(jìn)行的雜交7有關(guān)DNA鏈末端終止法的不正確說法是( ) A需要ddNMP B需要ddNTP CdNTP和ddNTP的比例要合適 D需要放射性同位素或熒光染料 E需要dNTP8免疫印漬技術(shù)指的是( ) A結(jié)合在膜上的蛋白質(zhì)分子與抗體分子結(jié)合 B結(jié)合在膜上的DNA分子與抗體結(jié)合 C結(jié)合在膜上的RNA分子與抗體結(jié)合 D結(jié)合在膜上的DNA分子與RNA分子結(jié)合 E結(jié)合在膜上的免疫分子與DNA的結(jié)合9同位素標(biāo)記探針檢測NC膜上的RNA分子( ) A叫做Northern Blotting B叫做So

22、uthem Blotting C叫做Western Blotting D蛋白分子雜交 E免疫印漬雜交10用做探針的DNA分子必須( ) A在雜交前變性 B在雜交前復(fù)性 C長于30個核苷酸D短于30個核苷酸 E是雙鏈分子二、B型題（每小題1分）ANorthern Blotting BSouthem Blotting CWestern BlottingD在組織切片或涂片雜交 E將樣品直接點(diǎn)在濾膜上與探針雜交1DNA印漬術(shù) ( )2蛋白質(zhì)印漬術(shù) ( )3RNA印漬術(shù) ( )4斑點(diǎn)雜交 ( )5原位雜交 ( )三、X型題1關(guān)于分子雜交正確說法是 ( ) A源于對DNA變性與復(fù)性現(xiàn)象的理解B只有DNA與

23、RNA之間才能雜交C雜交的分子雙方必須都是單鏈 D雜交的分子雙方堿基配對E不同來源的核酸分子之間才能雜交2生物大分子印漬技術(shù)包括( ) ADNA blotting BRNA blotting C蛋白質(zhì)印漬術(shù) D糖類分子的印漬術(shù) E脂類印漬術(shù) 3Western blotting雜交的操作包括( ) A裂解細(xì)胞制備樣品 B胺凝膠電泳 C將樣品轉(zhuǎn)移到膜上 D封閉無關(guān)位點(diǎn) E 膜上的RNA與探針雜交三、填空題1只要DNA或RNA的單鏈分子之間存在著一定程度的_,就可以在不同的分子間形成_。2存在于NC膜上的生物分子可以放到雜交液中，與_進(jìn)行_。3蛋白質(zhì)的印漬分析，也稱為_。4探針的種類有_ ，_，_等

24、。四、名詞解釋題1DNA印漬技術(shù) 2RNA印漬技術(shù) 3蛋白質(zhì)印漬技術(shù) 4探針（Probe） 五、問答題1 PCR技術(shù)的工作原理是什么？(5分)六、論述題1印漬雜交的主要實(shí)驗(yàn)方法有哪些?主要用途是什么?（6分）2核酸分子雜交的主要實(shí)驗(yàn)方法有哪些?主要用途是什么?（8分）D 一、選擇題 1、某蛋白質(zhì)pI為7.5，在pH6.0的緩沖液中進(jìn)行自由界面電泳，其泳動方向?yàn)椋?） A、向負(fù)極移動 B、向正極移動 C、不運(yùn)動 D、同時向正極和負(fù)極移動2、進(jìn)行酶活力測定時：（ ） A、底物濃度必須極大于酶濃度 B、酶濃度必須極大于底物濃度， D、酶能提高反應(yīng)的平衡點(diǎn) C、與底物濃度無關(guān) 3、不連續(xù)聚丙烯酰胺凝膠

25、電泳比一般電泳的分辨率高，是因?yàn)榫哂邢铝心姆N效應(yīng)？（ ） A、濃縮效應(yīng) B、電荷效應(yīng) C、分子篩效應(yīng) D、粘度效應(yīng) 4、分離鑒定氨基酸的紙層析屬于（ ） A、親和層析 B、吸附層析 C、離子交換層析 D、分配層析 二、是非題（在題后括號內(nèi)打或） 1、蛋白質(zhì)在小于等電點(diǎn)的pH溶液中，向陽極移動，而在大于等電點(diǎn)的pH溶液中，將向陰極移動。（ ） 2、酶的比活力可表示酶純度，因此比活力可用每克酶制劑或每ml酶制劑含有多少活力單位表示。（ ）3、提純酶時，只需求其總活力，就可以知其純度是否提高了。（ ）三、問答題： 1、鹽析法沉淀蛋白質(zhì)時，往往需要將pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點(diǎn)附近，為什么？2、試分別闡述分配

26、層析和吸附層析法分離鑒定氨基酸的原理和操作步驟。3、什么是同工酶？說明用電泳法分離同工酶的原理。 4、電泳現(xiàn)象的產(chǎn)生與蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)有何關(guān)系？ 5、在pH6.5的谷氨酸和丙酮酸混合液中，加入適量的新鮮豬肝勻漿后于37水浴中保溫30分鐘，煮沸后蛋白質(zhì)沉淀，將上清液點(diǎn)在層析濾紙上，用酚水飽和液進(jìn)行層析，層析結(jié)束后用茚三酮顯色出現(xiàn)兩條帶，這兩條帶各是什么物質(zhì)：說明原因？ 6、測定酶活力時，應(yīng)注意哪些事項(xiàng)？為什么？ 7、聚丙烯酰胺凝膠電泳有什么特點(diǎn)？試述聚丙烯酰胺凝膠電泳分離血清蛋白質(zhì)的基本原理和主要操作步驟。 8、以DNA的分離純化為例，闡述生物大分子分離純化的基本原則原理和注意事項(xiàng)。 四、名詞解

27、釋吸附層析 分配層析 分子篩層析 離子交換層析 親和層析濃縮效應(yīng) PAGE 鹽析 透析參考答案A一.單項(xiàng)選擇題1.D.2.A.3.C.4.A.5.C.6.A.7.B.8.C.9.C10.D.11.B.12.D.13.B.14.B.15.D.16.D.二.填空題1.DNA, 遺傳表型2.插入序列, 轉(zhuǎn)座子3.位點(diǎn)特異的重組,同源重組，轉(zhuǎn)座重組。4.特異位點(diǎn)間,位點(diǎn)特異的重5.同源重組,基本重組.6.克隆基因載體,目的基因與載體7.DNA特異序列,內(nèi)切 8.目的基因,PCR9.外源基因,載體10.轉(zhuǎn)化,轉(zhuǎn)染三.名詞解釋1.plasmid（質(zhì)粒）：是存在于細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子。質(zhì)粒分

28、子本身是含有復(fù)制功能的遺傳結(jié)構(gòu),能在宿主細(xì)胞獨(dú)立自主地進(jìn)行復(fù)制,并在細(xì)胞分裂時恒定地傳給子代細(xì)胞。質(zhì)粒帶有某些遺傳信息,所以會賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀。因?yàn)橘|(zhì)粒DNA有自我復(fù)制功能及所攜帶的遺傳信息等特性,故可作為重組DNA操作的載體。2.restriction endonuclease（限制性核酸內(nèi)切酶）：就是識別DNA的特異序列,并在識別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類核酸內(nèi)切酶。限制性核酸內(nèi)切酶存在于細(xì)菌體內(nèi),與相伴存在的甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制性修飾體系,限制外源DNA、保護(hù)自身DNA,對細(xì)菌遺傳性狀的穩(wěn)定遺傳具有重要意義。限制性核酸內(nèi)切酶分為三類。重組DNA技術(shù)中常用的限制性內(nèi)切核

29、酸酶為類酶。3.vector（載體）：即基因載體,或稱克隆載體,是在基因工程中為攜帶感興趣的外源DNA、實(shí)現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子,具有自我復(fù)制和表達(dá)功能。其中,為使插入的外源DNA序列可轉(zhuǎn)錄、進(jìn)而翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計的克隆載體又稱表達(dá)載體?？寺≥d體有質(zhì)粒DNA、噬菌體DNA和病毒DNA,它們經(jīng)適當(dāng)改造后仍具有自我復(fù)制能力,或兼有表達(dá)外源基因的能力。4.DNA cloning （DNA克?。壕褪菓?yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將各種來源的遺傳物質(zhì)同源的或異源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA與載體DNA結(jié)合 成一具有自我復(fù)制能力的DNA分子復(fù)制子,繼而通

30、過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化細(xì)胞,再進(jìn)行擴(kuò)增、提取獲得大量同一DNA分子,即DNA克隆,又稱基因克隆、重組DNA或基因工程。5.目的基因：應(yīng)用重組DNA技術(shù)有時是為分離、獲得某一感興趣的基因或DNA序列,或是為獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)。這些感興趣的基因或DNA序列就是目的基因,又稱目的DNA。目的DNA有兩種類型,即cDNA和基因組DNA。6.同源重組：發(fā)生在同源序列間的重組稱為同源重組,又稱基本重組。同源重組的發(fā)生依賴兩分子之間序列的相同或類似性。如果通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)獲得的外源DNA與宿主DNA同源,那么外源DNA就可以通過同源重組方式整合進(jìn)宿主染色體。7.cDNA文庫

31、：以mRNA為模板,利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補(bǔ)的DNA,即cDNA,再復(fù)制成雙鏈cDNA片段,與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌。不同細(xì)菌包含了不同mRNA為模板的cDNA分子或片段,這樣生長的全部細(xì)菌所攜帶的各種cDNA分子或片段就代表了整個組織或細(xì)胞表達(dá)的各種mRNA信息,即cDNA文庫。8.基因組DNA文庫：利用限制性核酸內(nèi)切酶將染色體DNA切割成一定基因水平的許多片段,其中即含有人們感興趣的基因片段。將這些片段分子與適當(dāng)?shù)目寺≥d體拼接成重組DNA分子,繼而轉(zhuǎn)入受體菌,使每個細(xì)菌內(nèi)都攜帶一種重組DNA分子。不同細(xì)菌所包含的重組DNA分子可能為不同的染色體DNA片段,這樣全部轉(zhuǎn)化細(xì)菌所攜帶的各

32、種染色體片段就代表了染色體的整個基因組。存在于轉(zhuǎn)化細(xì)菌內(nèi)、由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA片段的集合稱基因組DNA文庫。基因組DNA文庫涵蓋了基因組全部基因信息。9.回文結(jié)構(gòu)：大部分限制性核酸內(nèi)切酶為II類酶,識別DNA位點(diǎn)的核苷酸序列呈二元旋轉(zhuǎn)對稱,通常稱這種特殊的結(jié)構(gòu)順序?yàn)榛匚慕Y(jié)構(gòu)。10.轉(zhuǎn)座：在基因組內(nèi)有些基因可以從一個位置移動到另一位置。這些可移動的DNA序列包括插人序列和轉(zhuǎn)座子。由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因移位或重排現(xiàn)象稱為轉(zhuǎn)座。四.問答題1.位點(diǎn)特異的重組需要整合酶、發(fā)生在兩個DNA序列的特異位點(diǎn)間；同源重組不需要特異DNA序列,而是依賴兩分子之間序列的相同或類似性,但也需要特異

33、酶催化。2.以質(zhì)粒為載體進(jìn)行DNA克隆的過程(為例)包括：目的基因的獲取,基因載體的選擇與構(gòu)建,目的基因與載體的拼接,重組DNA分子導(dǎo)人受體細(xì)胞,篩選并無性繁殖含重組分子的受體細(xì)胞。3.限制性核酸內(nèi)切酶分為三類。重組DNA技術(shù)中常用的限制性內(nèi)切核酸酶為類酶。其特點(diǎn)為：（1）識別DNA位點(diǎn)的核苷酸序列呈回文結(jié)構(gòu)：（2）一些酶切割后產(chǎn)生粘性末端，另一些酶切割后產(chǎn)生平端或鈍性末端；（3）不同的限制性內(nèi)切核酸酶識別DNA中核苷酸長短不一，為4、6或8個。（4）有些限制性內(nèi)切核酸酶識別不同序列但切割后產(chǎn)生相同類型的粘性末端，可進(jìn)行相互連接。4.獲取目的基因的途徑或來源如下：化學(xué)合成法、基因組DNA中篩選

34、、cDNA文庫中篩選、利用聚合酶鏈反應(yīng)獲取。BA.1AB .X.四、填空題1【DNA；遺傳表型】2【插入序列；轉(zhuǎn)座子】3【克隆載體；目的基因；載體DNA；受體細(xì)胞】4【雙鏈DNA特異序列；內(nèi)切】5【目的基因；PCR】6【外源基因；載體DNA】7【轉(zhuǎn)化；轉(zhuǎn)染】五、名詞解釋題1質(zhì)粒 【是存在于細(xì)菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈DNA分子。質(zhì)粒分子本身是含有復(fù)制功能的遺傳結(jié)構(gòu)，能在宿主細(xì)胞獨(dú)立自主地進(jìn)行復(fù)制，并在細(xì)胞分裂時恒定地傳給子代細(xì)胞。質(zhì)粒帶有某些遺傳信息，所以會賦予宿主細(xì)胞一些遺傳性狀。因?yàn)橘|(zhì)粒DNA有自我復(fù)制功能及所攜帶的遺傳信息等特性，故可作為重組DNA操作的載體。】2限制性核酸內(nèi)切酶 【就是識

35、別DNA的特異序列，并在識別位點(diǎn)或其周圍切割雙鏈DNA的一類核酸內(nèi)切酶。限制性核酸內(nèi)切酶存在于細(xì)菌體內(nèi)，與相伴存在的甲基化酶共同構(gòu)成細(xì)菌的限制修飾體系，限制外源DNA、保護(hù)自身DNA，對細(xì)菌遺傳性狀的穩(wěn)定遺傳具有重要意義。限制性核酸內(nèi)切酶分為三類。重組DNA技術(shù)中常用的限制性內(nèi)切核酸酶為類酶?！?載體 【即基因載體，或稱克隆載體，是在基因工程中為“攜帶”感興趣的外源DNA、實(shí)現(xiàn)外源DNA的無性繁殖或表達(dá)有意義的蛋白質(zhì)所采用的一些DNA分子，具有自我復(fù)制和表達(dá)功能。其中，為使插入的外源DNA序列可轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而翻譯成多肽鏈而特意設(shè)計的克隆載體又稱表達(dá)載體?？寺≥d體有質(zhì)粒DNA、噬菌體DNA和病毒DN

36、A，它們經(jīng)適當(dāng)改造后仍具有自我復(fù)制能力，或兼有表達(dá)外源基因的能力?！?4DNA克隆 【就是應(yīng)用酶學(xué)的方法，在體外將各種來源的遺傳物質(zhì)同源的或異源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA與載體DNA結(jié)合成一個具有自我復(fù)制能力的DNA分子復(fù)制子，繼而通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞、篩選出含有目的基因的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，再進(jìn)行擴(kuò)增、提取獲得大量同一DNA分子，即DNA克隆，又稱基因克隆、重組DNA或基因工程。】5目的基因 【應(yīng)用重組DNA技術(shù)有時是為分離、獲得某一感興趣的基因或DNA序列，或是為獲得感興趣基因的表達(dá)產(chǎn)物蛋白質(zhì)。這些感興趣的基因或DNA序列就是目的基因，又稱目的DNA。目的DNA有兩種類型，即cDNA

37、和基因組DNA?！?6同源重組 【發(fā)生在同源序列間的重組稱為同源重組，又稱基本重組。同源重組的發(fā)生依賴兩分子之間序列的相同或類似性。如果通過轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)導(dǎo)獲得的外源DNA與宿主DNA同源，那么外源DNA就可以通過同源重組方式整合進(jìn)宿主染色體?！?cDNA文庫 【以mRNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄酶合成與mRNA互補(bǔ)的DNA，即cDNA，再復(fù)制成雙鏈cDNA片段，與適當(dāng)載體連接后轉(zhuǎn)入受體菌。不同細(xì)菌包含了不同mRNA為模板的cDNA分子或片段，這樣生長的全部細(xì)菌所攜帶的各種cDNA分子或片段就代表了整個組織或細(xì)胞表達(dá)的各種mRNA信息，即cDNA文庫。】8基因組DNA文庫 【利用限制性核酸內(nèi)切酶將染色體D

38、NA切割成一定基因水平的許多片段，其中即含有人們感興趣的基因片段。將這些片段分于與適當(dāng)?shù)目寺≥d體拼接成重組DNA分子，繼而轉(zhuǎn)入受體菌，使每個細(xì)菌內(nèi)都攜帶一種重組DNA分子。不同細(xì)菌所包含的重組DNA分子可能為不同的染色體DNA片段，這樣全部轉(zhuǎn)化細(xì)菌所攜帶的各種染色體片段就代表了染色體的整個基因組。存在于轉(zhuǎn)化細(xì)菌內(nèi)、由克隆載體所攜帶的所有基因組DNA片段的集合稱基因組DNA文庫?；蚪MDNA文庫涵蓋了基因組全部基因信息?！?轉(zhuǎn)座 【在基因組內(nèi)有些基因可以從一個位置移動到另一位置。這些可移動的DNA序列包括插入序列和轉(zhuǎn)座子。由插入序列和轉(zhuǎn)座子介導(dǎo)的基因移位或重排現(xiàn)象稱為轉(zhuǎn)座?！?六、簡答題1簡述基

39、因位點(diǎn)特異的重組和同源重組的差別。 （4分）【位點(diǎn)特異的重組和同源重組概念；前者需要整合酶，發(fā)生在兩個DNA序列的特異位點(diǎn)間；后者不需要特異DNA序列，而是依賴兩分子之間序列的相同或類似性，但也需要特異酶催化?！?何謂限制性核酸內(nèi)切酶?寫出大多數(shù)限制性核酸內(nèi)切酶識別DNA序列的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。（3分）【解釋限制性內(nèi)切核酸酶；酶識別DNA位點(diǎn)的核苷酸序列呈回文結(jié)構(gòu)】3解釋質(zhì)粒，為什么質(zhì)粒可作為基因載體。 （4分）【參見“質(zhì)?！泵~解釋；質(zhì)粒的復(fù)制及表達(dá)功能、選擇標(biāo)志基因?！科摺⒄撌鲱}1何謂基因克隆?簡述基因克隆的基本過程。 （7分）【以質(zhì)粒為載體進(jìn)行DNA克隆的過程(為例)包括：目的基因的獲取，基因載體的選擇與構(gòu)建，目的基因與載體的拼接，重組DNA分子導(dǎo)人受體細(xì)胞，篩選并無性繁殖含重組分子的受體細(xì)胞。】2何謂目的基因?寫出其主要來源或途徑。 （6分） 【參見“目的基因”名詞解釋?！? 何謂基因載體，說出哪些DNA可作為基因的載體。（5分）【參見“基因載體”名詞解釋?！緾A .B.X.四、名詞