培養(yǎng)基以及其配制

1、關(guān)于培養(yǎng)基及其配制第一張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)基形態(tài)不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基培養(yǎng)過(guò)程不同：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基其作用不同：誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基 營(yíng)養(yǎng)水平不同：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基一、培養(yǎng)基的種類第二張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、培養(yǎng)基的組成 植物體內(nèi)至少含有幾十種化學(xué)元素，其中大部分元素在植物體內(nèi)起到一定的生理作用：a、組成各種化合物，參與機(jī)體的建造，成為結(jié)構(gòu)物質(zhì)；b、構(gòu)成一些特殊的生理活性物質(zhì)，參與活躍的新陳代謝；c、元素之間相互協(xié)調(diào)，以維持離子濃度平衡、膠體穩(wěn) 定、電荷平衡等點(diǎn)化學(xué)方面的作用；d、發(fā)育方面，特定的元素影響植物的形態(tài)

2、發(fā)生和組織、 器官建成。第三張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月其它添加物固化劑植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分培養(yǎng)基組成無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分+有機(jī)營(yíng)養(yǎng)成分=基本培養(yǎng)基第四張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月Arnon和Stout（1939）提出的確定植物必需營(yíng)養(yǎng)元素的3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)A、缺乏該元素，植物生育發(fā)生障礙，不能完成其生活史。B、缺乏該元素，就表現(xiàn)為專一的病癥，且這種缺素癥可以用補(bǔ)充該元素來(lái)預(yù)防和恢復(fù)。C、該元素在植物營(yíng)養(yǎng)生理上表現(xiàn)直接的效果，而不是由于土壤的物理、化學(xué)、微生物條件的改進(jìn)而產(chǎn)生的間接效果。第五張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的高等植物所必需的營(yíng)養(yǎng)

3、元素有16（17）種： C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni） 在植物中含量差別很大，同一元素在植物不同時(shí)期、不同條件下含量也不同。第六張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月根據(jù)植物體內(nèi)含量多少，可把這些元素分為大量營(yíng)養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的0.1%以上； C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S 9種微量營(yíng)養(yǎng)元素：占干物質(zhì)重量的0.1%以下 有的只含0.1mg/kg Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl 7種按照國(guó)際植物生理協(xié)會(huì)的建議： 所需濃度 0.5mmol/L的元素為大量元素 所需濃度 0.5mmol/L的元素為微量元素第七張，PPT

4、共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、大量元素N是蛋白質(zhì)、酶、葉綠素、維生素、核酸、磷脂、生物堿等的組成成分，在植物生命活動(dòng)中占有重要的位置。 P是磷脂的主要成分。培養(yǎng)基中常用KH2PO4 NaH2PO4等。 K對(duì)碳水化合物合成，轉(zhuǎn)移，以及氮素代謝等有密切關(guān)系。第八張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月Mg、S、Ca是葉綠素的組成成分，又是激酶的活化劑，對(duì)核蛋白體結(jié)構(gòu)具有穩(wěn)定作用；S是含S氨基酸的蛋白質(zhì)的組成成分。Ca是構(gòu)成細(xì)胞壁的成分，對(duì)細(xì)胞分裂，穩(wěn)定質(zhì)膜結(jié)構(gòu)有顯著作用，此外，Ca及鈣調(diào)素在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。第九張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、微量元素 在微量元素中，

5、鐵的使用最大 ： 一些氧化酶的組成成分 葉綠素形成的必要條件 使用乙二胺四乙酸鐵（EDTA-Fe）鰲合物防止鐵的沉淀第十張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 硼與蛋白質(zhì)合成、糖類運(yùn)輸有著密切的關(guān)系 銅是某些氧化酶的成分，能夠促進(jìn)離體根的生長(zhǎng) 錳參與植物的光合、呼吸代謝 鉬參與氮素的代謝 氯是光合作用水光解的活化劑 微量元素的主要作用是作為酶的輔助因子或激活劑參與代謝的調(diào)節(jié)。第十一張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月缺鐵癥狀：葉面呈綠色網(wǎng)紋狀失綠。隨病勢(shì)發(fā)展，葉片失綠程度加重，出現(xiàn)整葉變?yōu)榘咨?，葉緣枯焦，引起落葉。嚴(yán)重缺鐵時(shí)，新梢頂端枯死。 桃樹(shù)第十二張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于20

6、22年6月缺銅癥狀： 新梢頂端葉片的葉尖失綠變黃，葉片出現(xiàn)褐色斑點(diǎn)至擴(kuò)大變成深褐色，引起落葉。 枝頂端生長(zhǎng)不良，其下部的芽開(kāi)始生長(zhǎng)，形成叢生的細(xì)枝。 菊花第十三張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月缺錳典型癥狀： 葉脈間失綠褪色，但葉脈仍保持綠色，脈間出現(xiàn)壞死斑，缺素癥狀由幼葉開(kāi)始。 菜豆第十四張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月缺鉬典型癥狀：葉較小，葉脈間失綠,有壞死斑點(diǎn)，且葉邊緣焦枯，向內(nèi)卷曲。十字花科植物缺鉬時(shí)葉片卷曲畸形，老葉變厚且枯焦。 白菜第十五張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月缺硼典型癥狀： 受精不良,籽粒減少 ，“花而不實(shí)”， “蕾而不花”； 根尖、莖尖的生長(zhǎng)

7、點(diǎn)停止生長(zhǎng)，而形成簇生狀； 常引起各種腐爛病。 馬鈴薯第十六張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3、碳源 碳源物質(zhì)包括糖類物質(zhì)、醇類物質(zhì)和有機(jī)酸，以糖類物質(zhì)最重要。 糖類物質(zhì)特點(diǎn)： 具有熱易變的性質(zhì) 利于吸收和利用 使用濃度一般在2%5% 提供能源和調(diào)節(jié)滲透壓第十七張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4、維生素類 以各種輔酶的形式存在 參與多種代謝活動(dòng) 對(duì)生長(zhǎng)，分化等有很好的促進(jìn)作用 主要分為脂溶性維生素和水溶性維生素 常用維生素有VB1和VB6 第十八張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5、肌醇 環(huán)己六醇 細(xì)胞壁的構(gòu)建材料 參與碳水化合物、磷脂代謝及離子平衡等生理活動(dòng) 促進(jìn)

8、活性物質(zhì)發(fā)揮作用第十九張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6、氨基酸 蛋白質(zhì)的組成成分 有機(jī)氮源 可直接被細(xì)胞吸收利用 培養(yǎng)基中常用的是甘氨酸7、天然復(fù)合物 促進(jìn)某些愈傷組織和器官的生長(zhǎng) 化學(xué)成分不明、復(fù)雜 天然營(yíng)養(yǎng)混合物如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物第二十張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月8、瓊脂 是使用最普遍的凝固劑用量一般在610g/L之間顏色以淺、透明度高好，潔凈為上品 除了瓊脂外，在組織培養(yǎng)中還可以使用瓊脂糖、結(jié)冷膠等。第二十一張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月9、活性炭 吸附培養(yǎng)基及培養(yǎng)物分泌物中的抑制物質(zhì) 抑制外植體褐變 防止玻璃苗的產(chǎn)生 促進(jìn)培養(yǎng)物生

9、長(zhǎng)和分化 促進(jìn)生根缺點(diǎn)： 沒(méi)有選擇性10、抗生素 防止外植體內(nèi)生菌造成的污染活性炭第二十二張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月11、生長(zhǎng)素類 促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)和分裂 促進(jìn)生根、抑制器官脫落、性別控制、延長(zhǎng)休眠、頂端優(yōu)勢(shì)、單性結(jié)實(shí) 誘導(dǎo)愈傷組織形成 溶于95%酒精或0.1mol/L的NaOH中，后者的溶解效果更好 常用的生長(zhǎng)素： IAA(吲哆乙酸) NAA (奈乙酸 ) 2,4-D(二氯苯氧乙酸) IBA(吲哆丁酸)第二十三張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月生長(zhǎng)素作用強(qiáng)弱順序：IAANAAIBA2,4-D強(qiáng)弱2，4-D常用于誘導(dǎo)愈傷組織，IBA和NAA常用于生根第二十四張，PPT共五十

10、一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月12、細(xì)胞分裂素類 促進(jìn)細(xì)胞分裂和分化 誘導(dǎo)胚狀體和不定芽的形成 延緩組織的衰老并增強(qiáng)蛋白質(zhì)的合成 用于離體成花的調(diào)控 溶于0.51.0mol/L的鹽酸或稀薄的NaOH中 常用的細(xì)胞分裂素： KT (激動(dòng)素) BA(6-卞基腺嘌呤) ZT(異戊烯氨基嘌呤)玉米素第二十五張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月13、赤霉素類和脫落酸 A、赤霉素類 組織培養(yǎng)中不常使用 加速細(xì)胞的伸長(zhǎng)生長(zhǎng) 促進(jìn)細(xì)胞的分裂 主要是GA3 B、脫落酸 抑制細(xì)胞分裂和伸長(zhǎng) 促進(jìn)脫落和衰老 促進(jìn)休眠和提高抗逆能力第二十六張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月14、水作用：是植物原生質(zhì)體的組成

11、成分，也是一切代謝過(guò)程的介質(zhì)和溶媒。 注意：用蒸餾水，最好是雙蒸水；以保持培養(yǎng)基成分的精確性。大規(guī)模生產(chǎn)時(shí)可用自來(lái)水。第二十七張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、MS培養(yǎng)基 無(wú)機(jī)鹽濃度高 高含量的氮、鉀，尤其是硝酸鹽 含有一定數(shù)量的銨鹽 營(yíng)養(yǎng)豐富 不需要添加更多的有機(jī)附加物（一）、幾種常見(jiàn)培養(yǎng)基的特點(diǎn)第二十八張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）、White培養(yǎng)基 1943年由White為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計(jì) 1963年作了改良，提高M(jìn)gSO4的濃度和增加硼元素 無(wú)機(jī)鹽濃度較低 使用廣泛 在生根培養(yǎng)、胚胎培養(yǎng)中有良好的效果第二十九張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（三

12、）、B5培養(yǎng)基 1968年由Gamborg等為培養(yǎng)大豆根細(xì)胞而設(shè)計(jì) 含有較低的銨鹽 較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素第三十張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（四）、N6培養(yǎng)基 1974年朱至清等為水稻等禾谷類作物花藥培養(yǎng)設(shè)計(jì) 成分較簡(jiǎn)單，KNO3和（NH4）2SO4含量高。在國(guó)內(nèi)已廣泛應(yīng)用于小麥、水稻及其他禾谷類植物的花粉和花藥培養(yǎng)。第三十一張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月AgNO3:作用：抑制乙烯活性，防止玻璃化苗的出現(xiàn)濃度：1-10mg/L抗生素：種類：青霉素、鏈霉素、慶大霉素等。作用：可防止外植體內(nèi)生菌污染。濃度：520mg/L。第三十二張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6

13、月1、 母液(stock solution)的配制和保存所謂母液是欲配制液的濃縮液。意義: 保證各物質(zhì)成分的準(zhǔn)確性 配制時(shí)的快速移取 便于低溫保藏。三、 培養(yǎng)基的配制第三十三張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月單配法：將培養(yǎng)基配方中的各種成分分別配成一定濃度的母液。一般用mg/ml ?；炫浞ǎ簩最悹I(yíng)養(yǎng)成分按配方中的用量擴(kuò)大一定倍數(shù)稱量，分別溶解后再混合成母液。母液配制時(shí)可分別配成大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)物和激素類等 母液的配制方法：第三十四張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 培養(yǎng)基母液的配制 第三十五張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月MS母液配制：MSI 大量元素

14、 20X MSII 微量元素 200X MSIII鐵 鹽 200X MSIV有機(jī) 物 200X MSV肌 醇 200X 激 素 0.1mg/ml第三十六張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月將1、2、4、5稱好放入燒杯分別溶解混合，將3最后混合，再定容到1L，放入試劑瓶貼標(biāo)簽，備用500mL甲1、2、4、5500mL乙3 定容貼標(biāo)簽1L MS I X20 2013.9.26 HXH注： Ca2+和S042-混合后易沉淀。第三十七張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月將17稱好放入燒杯分別溶解混合，定容到1L，放入試劑瓶貼標(biāo)簽，備用1000mL17 定容貼標(biāo)簽1L MS II X200

15、2013.9.26 HXH第三十八張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月MS (鐵鹽)配方用量mg/L200X（mg）稱量(g)1.FeSO47H2O27.855605.562.Na2EDTA2H2O37.374607.46將1稱好放入燒杯甲溶解，將2放入燒杯乙溶解，再混合定容到1L，放入試劑瓶貼標(biāo)簽，備用1L500mL甲1500mL乙2混合定容貼標(biāo)簽 MS I X200 2013.9.26 HXH第三十九張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月將1、2、3、4稱好放入燒杯分別溶解混合，定容到1L，放入試劑瓶貼標(biāo)簽，備用1000mL14 定容貼標(biāo)簽1L MS IV X200 2013.9

16、.26 HXH第四十張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月將肌醇稱好放入燒杯溶解定容到1L，放入試劑瓶貼標(biāo)簽，備用1000mL1溶解定容貼標(biāo)簽1L MS V X200 2013.9.26 HXH第四十一張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月母液配制時(shí)應(yīng)注意事項(xiàng)：母液配好后放人冰箱內(nèi)低溫保存（4），用時(shí)再按比例稀釋。其中III、IV、以及激素類物質(zhì)應(yīng)以棕色瓶盛裝。母液使用前搖動(dòng)瓶子，如有沉淀、絮狀物、微生物污染應(yīng)停止使用取樣時(shí)移液管要對(duì)應(yīng)取樣，防止交叉污染第四十二張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第四十三張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、培養(yǎng)基的配制：MSBA2NAA

17、0.2糖3.0瓊脂0.7 pH=5.8 MS：MS I 50 mlMS II 5 mlMS III 5 mlMS IV 5 mlMS V 5 ml BA：20ml; NAA：2ml 糖：30g; 瓊脂：7gV貯備液用量V配制/濃縮倍數(shù)V激素貯備液 C激素*V配制/0.1mg/ml第四十四張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月培養(yǎng)基的選擇培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基 植物激素 培養(yǎng)基的選擇在實(shí)質(zhì)上講就是設(shè)計(jì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)與激素（種類、用量）的最佳組合。第四十五張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月篩選培養(yǎng)基常用的試驗(yàn)方法： 單因子試驗(yàn) 多因子試驗(yàn) 逐步添加和逐步排除試驗(yàn)第四十六張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1、 單因子試驗(yàn)只變動(dòng)一個(gè)因子，通過(guò)試驗(yàn)找出該因子的影響及影響程度。如： MS+BA2+NAA （0.1、0.5、1.0mg/L） MS+BA+NAA0.1 （1.0、2.0 、3.0 mg/L）不能反映各種單因子成分之間的組合效果與相互影響 第四十七張，PPT共五十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2、 多因子試驗(yàn)對(duì)培養(yǎng)基中兩個(gè)或兩個(gè)以上因素進(jìn)行研究的試驗(yàn)稱為多因子實(shí)驗(yàn)。 第四十八張