急性腎功能衰竭及腎功對藥物作用的影響

1、急性腎功能衰竭及腎功對藥物作用的影響 腎臟是人體重要器官之一，對調(diào)節(jié)和維持人體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定有重要作用。當(dāng)各種病因引起腎臟的泌尿功能在短期內(nèi)急劇下降，機(jī)體內(nèi)環(huán)境將會發(fā)生嚴(yán)重紊亂，臨床表現(xiàn)有尿量和尿成份的變化、氮質(zhì)血癥、高鉀血癥和代謝性酸中毒。其發(fā)病機(jī)制主要與腎血液灌流減少、腎小管阻塞、腎小管原尿返漏等因素有關(guān)。 【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?復(fù)制中毒性腎功能衰竭的動物模型。觀察急性腎功能衰竭時家兔出現(xiàn)的各種功能代謝變化，進(jìn)一步探討急性腎功能衰竭發(fā)生的機(jī)理。 【實(shí)驗(yàn)原理】 用升汞引起急性腎小管壞死（ATN）復(fù)制中毒性腎病，并觀察少尿期主要機(jī)能代謝變化。 【實(shí)驗(yàn)對象】 家兔(體重在2-2.5kg) 【器材、藥品】

2、1%HgCl2、0.9%NaCl溶液、1%普魯卡因、0.2%肝素鈉溶液、肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液、苦味酸、氫氧化鈉、碳酸鈉、碳酸氫鈉、3%焦銻酸鉀溶液、無水乙醇、氫氧化鈣、鈉標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液、pH 12.0磷酸鹽氫氧化鈉緩沖液、724型分光光度計(jì)、離心機(jī)、恒溫水筒、5ml離心管、5ml注射器、0.5ml、2ml、5ml刻度吸管、手術(shù)器械、火焰光度計(jì)、血?dú)夥治鰞x。 【方法步驟與觀察項(xiàng)目】 本實(shí)驗(yàn)以一般狀態(tài)、尿量、尿蛋白、血漿肌酐、尿肌酐、內(nèi)生肌酐清除率、血漿鈉、尿鈉、血漿鉀、濾過鈉排泄分?jǐn)?shù)、酚紅排泄率、腎形態(tài)學(xué)觀察為觀察指標(biāo)。復(fù)制模型：在實(shí)驗(yàn)前24小時取兩只家兔稱重后，一只肌肉(或皮下)注射1%HgCl2(1.

3、2mlkg)造成急性腎功能衰竭，另一只在相同部位注射等量的生理鹽水作為正常對照。取上述兩只家兔分別稱重固定于兔臺上，耳緣靜脈注射5%葡萄糖溶液（15ml/kg），以保證有足夠的尿量。頸部剪毛、局麻、作頸動脈插管，取血置于盛有肝素的離心管內(nèi)，離心(2000rpm，15min)后取血漿以備測定血中肌酐鈉濃度。腹部剪毛、局麻，在恥骨聯(lián)合上1.5cm處作腹正中切口，分離皮下組織，沿腹白線切開腹膜，暴露膀胱，抽取膀胱中的尿液以備作尿肌酐、尿鈉濃度測定，分離兩側(cè)輸尿管，作輸尿管插管，收集1h尿液，換算成每分鐘排尿量。觀察實(shí)驗(yàn)組及對照組家兔的一般狀態(tài)、呼吸、尿量等。P.S.P試驗(yàn) 1.從家兔耳緣靜脈內(nèi)準(zhǔn)確快

4、速注入酚紅溶液6mg/ml，立即記時。 2.用50ml注射器抽取生理鹽水30ml及20%葡萄糖20ml，由耳緣靜脈注入。 3.分別于注射酚紅后30分鐘、1小時后收集尿量。 4.將每次收集的尿量放入500ml量筒內(nèi)，加10%NaOH5ml，再加水至500ml，攪拌均勻后，從中取10ml置于標(biāo)準(zhǔn)管內(nèi)徑相等的試管中與標(biāo)準(zhǔn)管比色，得出不同時間內(nèi)酚紅排除率。尿蛋白定性試驗(yàn) 將膀胱中收集的尿液取5ml置于試管中在酒精燈上加熱至沸騰，待尿變混濁后加10%醋酸3-5滴，如混濁不退(或加熱混濁仍不退)為蛋白定性試驗(yàn)陽性，按其混濁程度與下面標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果，如加醋酸后尿變清，是尿中無機(jī)鹽所致。 “” 表示尿液清晰不顯

5、混濁 “” 尿液出現(xiàn)輕度白色混濁，呈白霧狀(含蛋白質(zhì)約0.01-0.05克%) “” 尿液呈顆?；鞚?含蛋白質(zhì)約0.05-0.2克%) “” 尿液呈絮狀混濁(含蛋白質(zhì)約0.2-0.5克%) “” 尿液呈塊狀混濁(含蛋白質(zhì)0.5克%)應(yīng)用焦銻酸鉀比濁法按下表的操作測定血清和尿鈉含量。取膀胱中尿液5ml，移入含氫氧化鈣的試管中，用玻璃棒攪拌混勻，放置15min后離心(2000rpm，5min)，吸取上清尿液(已除去磷酸鹽類)至另一試管供作尿鈉測定。 鈉測定操作步驟 標(biāo)準(zhǔn)管(ml) 測定管(ml) 血清或尿?yàn)V液 - 0.2 鈉標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 0.2 - 無水乙醇 1.8 1.8 混和測定管離心(2000

6、rpm，3min)后吸取上清液，標(biāo)準(zhǔn)管直接吸取，分別移入另一試管。上清液3%焦銻酸鉀溶液 混合、靜置5min后用520nm波長，以蒸餾水校正光密度至零點(diǎn)進(jìn)行比濁，記錄各管光密度讀數(shù)。 計(jì)算： 測定管光密度 140鈉mmol/l 標(biāo)準(zhǔn)管光密度按下表苦味酸沉淀蛋白的操作測定血清和尿肌酐含量。 取膀胱中尿液1ml，用蒸餾水作1：100稀釋，以備測定尿中肌酐含量。 肌酐測定操作步驟 標(biāo)準(zhǔn)管(ml) 測定管(ml) 空白管(ml) 血清或1：50稀釋尿 - 0.6 - 肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液 0.6 - - 蒸餾水 - - 0.6 50mmol/L苦味酸 2.4 2.4 2.4 充分混勻3min后離心(2000

7、rpm，10min)測定管，將上述三種試管中的上清液分別直接傾入另一試管內(nèi) PH12.0磷酸鹽 氫氧化鈉緩沖液 0.6 0.6 0.6 充分混合置37水箱中25min后取出室溫冷卻20min后，以波長525nm蒸餾水調(diào)零，比色記錄各管光密度讀數(shù) 計(jì)算： 測定管光密度空白管光密度 2肌酐mgdl 標(biāo)準(zhǔn)管光密度空白管光密度 尿中肌酐含量 內(nèi)生肌酐清除率： 尿量(mlmin) =mlmin 血中肌酐含量 肌酐mg%88.402=molL將上述測定的血清及尿的鈉和肌酐和肌酐含量，按下列公式計(jì)算FENa 尿Na+血Na+ FENa 100 尿肌酐血肌酐 應(yīng)用火焰光度分析法按下述的操作測定血鉀含量(或參見

8、實(shí)驗(yàn)四十七 高鉀血癥)血清的稀釋：取血清0.1ml置于15015mm試管內(nèi)，加重蒸餾水9.9ml，充分混勻。安裝調(diào)試好儀器，將鉀濾色片置于光路中，將樣液吸入管放入鉀標(biāo)準(zhǔn)液內(nèi)，待火焰呈黃色后，開啟快門，移動光柵，使檢流計(jì)讀數(shù)控制在80-100之間，作為鉀標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù)，關(guān)閉快門。用重蒸餾水噴霧洗滌至火焰恢復(fù)到空白時所呈的藍(lán)紫色。將樣液吸入管放入稀釋血清(1/100)中，待火焰呈黃色后，開啟快門，記錄檢流計(jì)上的讀數(shù)(鉀樣讀數(shù))關(guān)閉快門，依上法用重蒸水噴霧洗滌至火焰恢復(fù)到藍(lán)紫色。 計(jì)算： 鉀測定讀數(shù) 鉀測定讀數(shù) 0.04100 4mmolL 鉀標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù) 鉀標(biāo)準(zhǔn)讀數(shù) 形態(tài)學(xué)觀察1.處死動物，取出兩側(cè)腎臟，沿

9、腎之凸面中部作一水平切面，深達(dá)腎盂，注意腎包膜情況，切面的色澤、皮質(zhì)與髓質(zhì)分界是否清楚等，并與對照組兔腎作比較。2.組織切片示教：于顯微鏡下觀察皮質(zhì)腎小管上皮有無明顯的變性壞死、脫落，管腔內(nèi)有無蛋白、紅細(xì)胞和管型存在。 【注意事項(xiàng)】試管吸管等器材要求清潔。血清、尿液標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)液等試劑量必須準(zhǔn)確，所有操作均應(yīng)按生化要求嚴(yán)格進(jìn)行。于膀胱壁穿刺抽取尿液時，應(yīng)于無血管處部位穿入，避免出血以致影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。吸取酚紅液一定要注意量的準(zhǔn)確。做尿蛋白定性試驗(yàn)加熱時謹(jǐn)防管內(nèi)尿液噴出傷人。凡FENa2表明急性腎功能衰竭，F(xiàn)ENa1或2。 附：3%焦銻酸鉀溶液：稱取焦銻酸鉀(K2H2Sb2O74H2O)15g，加蒸

10、餾水350ml和10%KOH溶液15ml，煮沸溶解冷卻后加蒸餾水至500ml。鈉標(biāo)準(zhǔn)貯存液(1mol/L)：取NaCl少許置于燒杯中在110-120烘箱內(nèi)烤4h，取出后在干燥器內(nèi)待冷，精確稱取5.845g置于100ml容量瓶內(nèi)加蒸餾水至刻度。鈉標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(140mmol/L)：準(zhǔn)確吸取鈉標(biāo)準(zhǔn)貯存液14ml置于100ml容量瓶內(nèi)加蒸餾水至刻度。50mmol/L苦味酸溶液：試劑苦味酸11.4555g用溫蒸餾水(低于80)溶解并稀釋到1000ml 37溫箱保存。pH 12.0磷酸鹽氫氧化鈉緩沖液：1mol/L NaOH 250ml，加入89.555Na2HPO412H2O以蒸餾水稀釋到500ml，其中NaOH和NaHPO均為0.5mol/L。肌酐標(biāo)準(zhǔn)貯存液(100mg/dL)：精確稱取肌酐100mg，以少量0.1mol/L鹽酸溶解并移入100ml容量瓶內(nèi)，再以0.1ml鹽酸稀釋至刻度，置冰箱保存。肌酐標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)液(2mg/dL)：準(zhǔn)確吸取肌酐標(biāo)準(zhǔn)貯存液2.0ml移入100ml容量瓶內(nèi)，用蒸餾水稀釋至刻度，加氯仿數(shù)滴防腐(或每周新配)。鉀標(biāo)準(zhǔn)貯存液(10mmol/L)：取KCl數(shù)克，置稱量瓶中于120烤箱中恒重，取出置玻璃干燥器內(nèi)冷卻至室溫后準(zhǔn)確稱取0.7