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1、分子生物學(xué)技術(shù)(二)臨床博士上海醫(yī)學(xué)院分子生物學(xué)實驗室講義: 醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)技術(shù)和 分子生物學(xué)實驗主編：潘鑾鳳， 13號樓9樓913室吳老師，25元參考書：1. 馮作化主編：醫(yī)學(xué)分子生物學(xué) 2. 谷志遠主編：現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)3. 曼尼阿帝斯主編：分子克隆實驗指南4. 高天祥主編：醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)5. 陳丙鶯主編：基礎(chǔ)與臨床分子生物學(xué)上課時間:周二上午8:00-9:40和周四9:55-11:35地點:周二新201,周四新301，9月2日-10月16日實驗:周二上午9:00-17:00和周四上午9:50-17:00地點13-9樓, 10月21日-11月13日答疑:11月18日,周二上午9:30-1

2、7:00,地點:13-920考試:11.25 周二, 時間和地點待定考試：閉卷考，理論和實驗相結(jié)合綜合性考試 50%實驗報告 35%實驗過程、結(jié)果和學(xué)習(xí)態(tài)度 15%培養(yǎng)目標:科研能力為主,理解能力、分析問題、解決問題能力。技術(shù)關(guān)鍵理論,實驗設(shè)計,技術(shù)應(yīng)用。基礎(chǔ)理論自學(xué)為主,歡迎實驗課內(nèi)提問和討論分子生物學(xué)基本原理概述1生物大分子 核酸 蛋白質(zhì) 糖類 脂類 小分子 核糖 堿基核酸 核苷酸 磷酸 核苷 嘌呤 嘧啶 A G T(U) C核苷酸鏈核苷酸磷酸2-脫氧核糖堿基H脫氧(C)(U)(G)(A)(T)堿 基（base)PurineDNA的一級結(jié)構(gòu):核苷酸的排列順序C：線條式B：簡化結(jié)構(gòu)式A：化學(xué)

3、結(jié)構(gòu)式pApCpTpG.ACTG.P5.3OH長度：核苷酸nucleotide, ntDNA二級結(jié)構(gòu)模式圖(雙螺旋結(jié)構(gòu))A-DNA B-DNAZ-DNAB-DNA長度：堿基對(base pair, bp)DNA三級結(jié)構(gòu) (超螺旋結(jié)構(gòu)）RNARNA: 由四種核苷酸 (G、A、 C、 U）組成戊糖為核糖RNA類型: 信使RNA (messenger RNA，mRNA) 轉(zhuǎn)運RNA (transfer RNA, tRNA) 核糖體RNA (ribosomal RNA, rRNA) 核酶 (ribozyme) 核內(nèi)不均一RNA (hnRNA) 小分子核內(nèi)RNA (snRNA) 反義RNA (antis

4、ense RNA) 小干擾RNA (small interference RNA, siRNA 小/微RNA(microRNA, miRNA)AUGAUGAUG蛋白1蛋白2蛋白3非翻譯區(qū)翻譯區(qū)mRNA結(jié)構(gòu)原核（多順反子）真核（單順反子）RNA結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì) (protein)蛋白質(zhì)的一級結(jié)構(gòu)：蛋白質(zhì)多肽鏈中氨基酸的排列順序20種氨基酸肽鍵丙氨酸精氨酸天冬酰胺天冬氨酸半胱氨酸谷氨酰胺谷氨酸甘氨酸組氨酸異亮氨酸亮氨酸賴氨酸甲硫氨酸苯丙氨酸輔氨酸絲氨酸蘇氨酸色氨酸酪氨酸纈氨酸蛋白質(zhì)二級結(jié)構(gòu)a-螺旋b-片層超二級結(jié)構(gòu)、三級結(jié)構(gòu)、四級結(jié)構(gòu)蛋白質(zhì)組學(xué)（proteomics） 生命現(xiàn)象的發(fā)生往往是多因素相互作用

5、的，涉及多個蛋白質(zhì) ，同時蛋白質(zhì)在執(zhí)行生理功能時的表現(xiàn)是多樣的、動態(tài)的 細胞內(nèi)全部蛋白質(zhì)的存在及其活動方式 已知基因蛋白質(zhì)表達譜比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究蛋白質(zhì)組學(xué)支撐技術(shù)平臺和生物信息學(xué)的研究基因 (gene): 是核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位，是指貯存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA序列信息及表達這些信息所必需的全部核苷酸序列基因組 (genome): 細胞或生物體中，一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和。人體23條染色體（核基因組）和線粒體上的遺傳物質(zhì)（線粒體基因組）順式調(diào)控元件 (順式作用元件)真核基因結(jié)構(gòu)順式調(diào)控元件（cis-acting elements):指那些與結(jié)構(gòu)基因表達調(diào)控相關(guān)、能夠被基

6、因調(diào)控蛋白特異性識別和結(jié)合的DNA序列反式作用因子（trans-acting elements): 可通過結(jié)合順式作用元件而調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)因子啟動子（promotor): RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合的DNA序列增強子（enhancer): 為一段DNA序列，其中含有多個能被反式作用因子識別與結(jié)合的順式作用元件順式調(diào)控元件：負增強子:沉默子 (silencer)增強子調(diào)變子 (modulator)反應(yīng)元件（response element): 與信息分子結(jié)合的特異DNA序列，介導(dǎo)基因?qū)毎獾哪撤N信號產(chǎn)生反應(yīng)。終止子（terminator): 基因編碼區(qū)下游的一段DNA序列，提供RN

7、A聚合酶停止工作的信號。1990年正式啟動由6個國家20個機構(gòu)完成2001年2月15日發(fā)表草圖2003年4月14日宣布完成人類基因組:31.6億個核苷酸3萬-3.5萬個基因, 占2%人類基因組計劃human genome project (HGP)基因和基因相關(guān)順序（2030）非編碼（90） 內(nèi)含子，啟動子5前順序，3 后順序假基因基因片斷 編碼順序（10）基因以外非編碼順序（7080） 中度/高度重復(fù)順序（2030）分散的重復(fù)順序（40）成簇的重復(fù)順序（60）單一/低度重復(fù)順序（7080）人類基因組人類基因組序列組成部分生物基因組中正常染色體數(shù)及基因數(shù)生物堿基數(shù)目（bp）染色體數(shù)基因數(shù)人3.2109233萬