紅細胞滲透脆性與白細胞染色實驗總結課件

1、紅細胞滲透脆性試驗 與羊血白細胞染色藥學2班 陳旭宇 李佳朋講解內容實驗概述預實驗情況正式實驗情況創(chuàng)新實驗實驗概述 一、實驗目的1、觀察不同濃度的低滲鹽溶液對紅細胞的影響，加深理解細胞外液晶體滲透壓相對穩(wěn)定對維持細胞正常形態(tài)與功能的重要意義。2、掌握白細胞染色的方法，理解瑞氏染液的作用。二、實驗原理紅細胞滲透脆性實驗開始出現(xiàn)溶血現(xiàn)象的低滲鹽溶液濃度為該血液紅細胞的最小抵抗力開始出現(xiàn)完全溶血時的低滲鹽溶液的濃度則為該紅細胞的最大抵抗力實驗器材及藥品器材及藥品： 小試管、試管架、微量移液管 （1000uL與200uL兩種規(guī)格）顯微鏡、 載物玻璃片、170mmol/L NaCl溶液實驗對象： 抗凝羊

2、血 （抗凝血劑為檸檬酸鈉）預實驗情況預實驗目的：1、觀察不同濃度的低滲鹽溶液對紅細胞的影響，加深理解細胞外 液晶體滲透壓相對穩(wěn)定對維持細胞正常形態(tài)與功能的重要意義2、熟練白細胞染色的操作，理解瑞氏染液、吉姆薩染色的作用3、查閱相關文獻，加深對實驗的理解，掌握更全面信息4、總結實驗的一些注意事項和操作技巧，預知實驗可能出現(xiàn)的問題，做好應對措施5、清楚實驗的大致結果，給同學們作為參考染色原理：血紅蛋白、嗜酸性顆粒為堿性蛋白質，與酸性染料伊紅結合，染粉紅色，稱為嗜酸性物質；細胞核蛋白、淋巴細胞、嗜堿性粒細胞胞質為酸性，與堿性染料美藍或天青結合，染紫藍色或藍色，稱為嗜堿性物質；預習探究一：由于開始的兩

3、次實驗，我們都習慣先將羊血存于冰箱中保存，然后取出再在室溫下實驗。考慮到正式實驗當天，我們會使用剛取回的羊血（未經(jīng)冰箱冷卻實驗）進行試驗?？紤]到這些溫度和時間上的差異，我們有必要進行模擬實驗，來探究正式實驗環(huán)境下的合理范圍。試管號試液12345678910170mmol/LNaCl（ml）1.41.31.21.11.00.90.80.70.60.5蒸餾水（ml）0.60.70.80.91.01.11.21.31.41.5NaCl濃度（mmol/L）12011210495867869605243表1：各種低滲鹽溶液的制備實驗溫度/離體時間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/l）最小抵抗力

4、組別最小抵抗力濃度（mmol/l）181769586193769495225678310420858631041912495310417243104表2：第一次取血紅細胞滲透脆性實驗結果 表3：第二次取血紅細胞滲透脆性實驗結果 實驗溫度/離體時間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/l）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/l）171769586203678495225678310421858631041712495310415243104 表4：第三次取血紅細胞滲透脆性實驗結果 實驗溫度/離體時間/h最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/l）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/

5、l）19178658621367849525567849523858631042112586310420243104結論：1、血紅細胞離體時間越長滲透脆脆性越大；2、實驗室內同一天內的溫度變化在 1528范圍內，對實驗結果影 響不明顯。3、羊血不經(jīng)冰箱儲存冷卻，在實驗室溫度環(huán)境下，離體35h,預計實驗結果為：最小抵抗力濃度：95104mmol/L最大抵抗力濃度：6978mmol/L實驗操作總結：（供以后實驗同學們參考）a.溶液用前應現(xiàn)配，以免水分蒸發(fā)，改變離子濃度。b.溶血的結果判斷，應首先在室溫下靜置一個小時湖再觀察結果，先從高濃度觀察，上層初現(xiàn)透明紅色為開始溶血管，溶液透明深紅色、管底紅細

6、胞完全消失者為完全溶血。如不易判斷可低速離心1分鐘后觀察。c.器材必須清潔干燥，避免引起其他異物影響所致溶血。d. 紅細胞脆性實驗中，可以先向每個試管中加氯化鈉然后再加蒸餾水，加的時候還有個小技巧，以氯化鈉為例，先將幾個大于1000uL的試管中都加上1000uL的氯化鈉，然后再按900,800到100uL遞減的順序依次加這樣可以節(jié)省時間e.血必須直接注入試劑中，不可沿著管壁。試驗中我們直接用的滴管取血，可能試管中的血量有差距，建議后面用微量移液器定量取血排除觀察溶血狀況時，血量不同帶來的影響f.血液和鹽溶液時不要用力震蕩，靜置及觀察時不要移動試管。g.染色必須得等到血片干燥后進行，否則染不上色

7、h.血膜的沖洗時水流不能太急，防止將血膜沖掉，應用蒸餾水沖血片的上方，然后滑落下的水流沖洗血膜實驗2：細胞染色實驗藥品準備：緩沖液配制：1%KH2PO4+1%NaHPO4(20ml),加水至1000ml，置室溫黑暗處，瓶口密封，防止霉菌污染。姆薩染液配制：藥品：吉姆薩染料（粉末）0.5g、甲醇 （AR）33ml、甘油（AR）33ml方法：先將吉姆薩染料放入研缽中，逐漸到甘油研磨溶于甘油中，置于58水溫箱內90-120min，然后加入甲醇，搖勻后放置數(shù)天，過濾后或不過濾即可使用。 （此染液放置室溫陰暗處，時間越長越好）(2）實驗過程開始時，一切從零開始，我們的血片制備很不合格，要么過厚，要么不均

8、勻。在耿姝學姐手把手講解之后，我們不耐其煩，連續(xù)聯(lián)系制作了近30個血片，終于能夠制作出厚度適宜，效果成功的血涂片，并掌握了制片的技巧。聯(lián)系生物實驗一中白細胞計數(shù)時應用白細胞液破壞紅細胞的經(jīng)驗，我們在染色之前對血液使用白細胞稀釋液排除干擾，但是染色結果與不加白細胞染色液相比反而較差，影響染色效果。分析原因有可能是白細胞染色液引起了PH的改變，或產(chǎn)生液膜稀釋了染液，最后否定了加白細胞稀釋液進行染色的方案。經(jīng)驗總結推片經(jīng)驗： 用移液槍頭沾取羊血點置于載玻片上，呈米粒大小，將推玻片保持與載玻片約30度角，置于血滴正前方，稍往后移與血滴接觸，即可見血液沿推片下緣散開，再勻速沿載玻片平面平穩(wěn)向后滑動，至血

9、膜鋪勻。圖1 瑞氏染色法 圖2 吉姆薩氏染色法 通過預實驗總結出的各染色法染色效果：瑞氏染色法：白細胞核、細胞漿層次分明，嗜中性白細胞漿中可見淡紅色染色顆粒。吉姆薩氏染色法：白細胞核呈藍色，層次清楚。瑞吉復合染色法：白細胞層次清晰，細胞漿中染色顆?？梢?。正式實驗實驗準備：我們在周三下午將PPT交與李老師征求修改意見，并在當天晚上修改完畢。于周四晚上，準備好實驗所需各項儀器與藥品，并寫好板書。周五早上上課前取回羊血。實驗過程：實驗過程無遲到、曠課、早退現(xiàn)象，同學們熱情度很高，認真實驗。對同學的操作過程進行嚴格把關，使絕大多數(shù)同學的實驗取得了預期的結果，其中章夢甜、陶倩組白細胞染色觀察效果非常好，

10、能觀察到多個白細胞清晰鏡像。白細胞染色出現(xiàn)問題主要為以下幾點： 1、血膜涂得過厚，造成觀察困難； 2、對染液進行沖洗時不徹底，造成著色過深，出現(xiàn)一大片藍的現(xiàn)象； 3、沖洗過猛，觀察不到白細胞。在老師和我們的幫助下，同學們很好解決了這些問題。掌握好染色時間、染液量和染液沖洗是關鍵不好，上圖為典型的染液沖洗不好的結果實驗報告批改情況存在的問題與不足：漏寫：有些同學實驗儀器及藥品未寫全;或廠家未標注;實驗室溫度濕度等環(huán)境記錄;實驗原理未寫或寫的不全面。討論：實驗結果分析不到位；實驗操作中的討論過于寬泛；文獻內容過多引用，缺乏自己的語言；一些討論不夠嚴謹，理論支持太少。創(chuàng)新：創(chuàng)新方面未結合實驗室實際情

11、況，有些不實用。有不少同學在報告中反映瑞士染色效果好于吉姆薩染色，這可能是由于正式實驗中所使用吉姆薩染液比較新的原因。在吉姆薩染液放置一個月后，染色效果有很大提高，在我組后期染色操作中發(fā)現(xiàn)，吉姆薩染色效果要優(yōu)于瑞氏染液，因此總結到經(jīng)驗：吉姆薩染液最好提前一個月配置，暗處放置。創(chuàng)新實驗1、進一步探究溫度、離體時間對紅細胞形態(tài)及滲透脆性 的影響；2、利用紫外分光光度計測不同地深鹽溶液中的溶血度；3、探究白細胞染色片中的藍紫色小顆粒聚集物來源4、改良白細胞染色方法一、探討離體時間、溫度對紅細胞形態(tài)及滲透脆性的影響紅細胞滲透脆性受細胞膜結構、細胞膜流動性、以及紅細胞幾何特性及紅細胞膜抗張強度等多個因素

12、的影響，其中與紅細胞表面面積和體積的比值有很大關系。通過批閱報告，我們發(fā)現(xiàn)大多數(shù)同學沒有對不同濃度低滲鹽溶液中的血紅細胞進行鏡檢,而且往屆助教也沒有進行形態(tài)變化的觀察。1.2 方法:對三次取的羊血材料分別進行了相同的實驗操作。取適量新鮮羊血（A液）分別置于4個潔凈燒杯，標號A1.A2.A3.A4 。實驗過程中，各組羊血、低滲鹽溶液、A滴入B、均勻、靜置、觀察各步驟均在各自的恒溫環(huán)境中進行。 表6 各種低滲鹽溶液(B液）的制備試管號試液12345678910170mmol/LNaCl（mL）1.41.31.21.11.00.90.80.70.60.5蒸餾水（mL）0.60.70.80.91.01

13、.11.21.31.41.5NaCl濃度 （mmol/L）120112104958678696052431下羊血紅細胞均出現(xiàn)表面凹凸不平，呈不規(guī)則球形。有萎縮趨勢。紅細胞變化明顯，細胞膜結構變形嚴重，易發(fā)生溶血。聯(lián)系生物化學知識，降低溫度會抑制細胞各類酶的活性，如呼吸酶、轉氨酶等。導致細胞生物活性降低。細胞膜通透性能改變，紅細胞脆性增大。室溫下羊血紅細胞的變化比較明顯，部分細胞形狀變化嚴重，大多變癟，甚至有鐮刀狀紅細胞出現(xiàn)。可以推斷在正中情況下檢測出的紅細胞脆性肯定與在體的規(guī)則球形紅細胞的滲透脆性不同。38下保存的羊血紅細胞變化情況不如25的明顯，但是依然可以看出紅細胞已經(jīng)發(fā)生變形，表面凹凸不

14、平，呈現(xiàn)不規(guī)則塊狀、橢圓狀、三角狀。51下保存的羊血紅細胞發(fā)生嚴重的變形。大多數(shù)紅細胞變癟，呈鐮刀狀或飛碟狀。我們推測高溫使血液蒸發(fā)失水，血液中離子等溶質濃度升高，滲透壓增大，導致紅細胞失水變癟。在加入少量 51蒸餾水稀釋后，部分細胞干癟情況減輕，形狀又恢復，但仍有許多飛碟狀、鐮刀狀細胞。可見這種變化是多方面的，高溫對紅細胞的活性產(chǎn)生了不可逆的影響。 表7. 離體3h不同溫度下的羊血紅細胞脆性標號實驗溫度/最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/L）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/L）A11678586A225678495A338678586A451678586 表8. 離體5h不同溫

15、度下的羊血紅細胞脆性標號實驗溫度/最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/L）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/L）A11678495A225678495A338678586A451678586 表9. 離體12h不同溫度下的羊血紅細胞脆性標號實驗溫度/最大抵抗力組別最大抵抗力濃度（mmol/L）最小抵抗力組別最小抵抗力濃度（mmol/L）A11678495A225678495A338678586A451678586 表10. 25 下探究更準確的最大最小抵抗力試管號試液123 45678170mmol/LNaCl（ml）1.281.261.241.221.081.061.041.02蒸

16、餾水（ml）0.720.740.760.780.920.940.960.98NaCl濃度（mmol/L）10910710510492908887實驗結果 1、2、3、4、5、6管皆為上層透明紅色，下層渾濁紅7、8管為透明紅色1.4得出結論：溫度對紅細胞的形態(tài)有影響，其中高溫（51）對紅細胞形態(tài)影響最大；相同溫度下，紅細胞的脆性隨時間的增長而變大；相同時間下，1和51下紅細胞脆性變大速度較室溫和體溫快，溫度偏離體溫程度越大，越容易使紅細胞脆性增大；保存環(huán)境的溫度對紅細胞的形態(tài)有很大影響。實驗2、紅細胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定2.1概述：傳統(tǒng)的測定方法采用目測觀察其溶血情況,需要靜置

17、一小時后觀察, 觀察過程中不能晃動。此法僅能觀察到溶血的大致情況, 不能量化紅細胞破裂的程度。本試驗采用分光光度法精確測定紅細胞在低滲氯化鈉溶液中的溶血情況。進一步了解血紅蛋白的脆性。2.3實驗步驟2.3.1配制不同濃度低滲氯化鈉溶液取口徑相同、清潔干凈的小試管做好編號, 制成不同濃度的低滲鹽溶液, 每管總量為3.0mL，第11管為蒸餾水,具體配制情況見如下表所示：試管號試液123456789101112170mmol/LNaCl（ml）2.11.951.81.651.51.351.21.050.90.752.70蒸餾水（ml）0.91.051.21.351.51.651.81.952.12.

18、270.33.0NaCl濃度（mmol/L）1201121049586786960524319402.3.2 最大吸收波長測定取12管加入0. 1 mL血液, 輕輕顛倒混勻5 min,3 000 r/min離心10 min, 取上清液至比色皿中, 以11管(生理鹽水）為空白對照,754N紫外可見分光光度計上掃描,測得其最大吸收波長為590nm.2.3.3 紅細胞在不同濃度低滲氯化鈉溶液中溶血率的測定依次向12支試管內各加0.1ml血液,輕輕顛倒混勻5min置入干燥離心管中以3000r/min 離心10min,取上清在分光光度計590nm波長處檢測。用11管生理鹽水的上清調零,測其他每管吸光度。

19、以12管測出的吸光度作最大溶血的吸光度,分別計算出1- 10支管的溶血率。溶血率 = （樣品吸光度/最大溶血吸光度）100% 。 表12 不同濃度低滲氯化鈉溶液對紅細胞滲透脆性的影響 試管標號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）目測法11200.0799.5-21120.0829.8-31040.20724.8-4950.31237.3+5860.62474.6+6780.6678.9+7690.73888.3+8600.75490.2+9520.76791.7+10430.79595.1+11194001200.836100+ (注：-表示不溶血, +表示部分溶血, +表示完全

20、溶血)探究究竟對人體血液的影響，不應該想當然的在血液中直接加入酒精，而應該分析究竟在人體的代謝產(chǎn)物，進入血液的代謝產(chǎn)物是什么。酒精進入體內后在乙醇脫氫酶(ADH) 和乙醛脫氫酶(ALDH) 的作用下逐步氧化成乙酸,其中間代謝產(chǎn)物乙醛對機體的毒性作用最大。2.4.2酒精、葡萄糖對紅細胞滲透脆性的影響 酒精代謝過程：乙醇乙醛乙酸 乙醇乙醛 2CH3CH2OH + O2 2 CH3CHO + 2H2O 乙醛乙酸 2CH3CHO + O2 2CH3COOH 探究1：取血方法同上, 依次向14支試管內各加0. 1mL血液后, 用加樣器再分別加入0.790g/mL無水乙醛5uL。來模擬人在大量飲酒后代謝在

21、血液中乙醛濃度對血紅細胞脆性影響。探究2：取血方法同上,依次向14支試管內各加0.1mL血液后,用加樣器再分別加入0.05g/mL葡萄糖溶液10UL。來模擬人在大量攝入糖活著患有糖尿病后血液中高糖濃度對血紅細胞脆性影響。拓展探究表13 乙醛對紅細胞滲透脆性的影響 試管標號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）11200.0637.221120.0788.831040.12514.44950.25128.95860.58967.86780.67477.67690.76986.38600.78288.69520.79190.210430.80792.911194001200.86910

22、02.4.2酒精、葡萄糖對紅細胞滲透脆性的影響 表13 乙醛對紅細胞滲透脆性的影響 試管標號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）11200.0637.221120.0788.831040.12514.44950.25128.95860.58967.86780.67477.67690.76986.38600.78288.69520.79190.210430.80792.911194001200.869100表14 葡萄糖對紅細胞滲透脆性的影響 試管標號NaCl溶液濃度（mmol/L）OD值溶血率（%）11200.0758.421120.0788.631040.0819.14950.

23、19621.95860.33161.86780.64171.87690.68979.18600.77681.99520.7983.510430.79685.211194001200.8931002.4.3 結果分析在加入乙醛之后羊血紅細胞對低滲鹽溶液抵抗力略增高，紅細胞脆性減小。78mmol-118mmol的NaCl溶液內紅細胞的溶血率比不加乙醛前降低5-12個百分點,溶血程度降低明顯, 說明紅細胞破裂明顯減少。我們查閱相關資料，發(fā)現(xiàn)紅細胞脆性下降的原因可能是乙醇分解后產(chǎn)生的乙醛濃度不斷增加對紅細胞膜的固化修飾所致4。此外，隨著血液中乙醛逐漸被分解,其對紅細胞的修飾作用解除,紅細胞膜結構和功能

24、恢復正常;而且乙醇代謝的產(chǎn)物-乙酸濃度比例不斷上升可能會使紅細膜性增高,這兩種作用的協(xié)調將使得紅細胞脆性逐步恢復正常。參考文獻：4 郭希超,陳曉剛,陳瑜，等. 急性酒精中毒后紅細胞膜脆性檢查.臨床檢驗雜志. 2001,19(3):186-188.由于實驗室條件限制，我們有設計了一組加葡萄糖的實驗，但做過之后思考發(fā)現(xiàn)，5%的葡萄糖溶液也常作為血漿等滲液使用。通常注射制劑的血漿等滲液的調配很重要，應用NaCl當量法,葡萄糖的NaCl當量為0.185。加入葡萄糖，從某一角度講相當于提高了NaCl低滲夜的濃度，無疑會產(chǎn)生紅細胞脆性減小的結果。不過可以大幅度提高葡萄糖濃度，來探究高糖環(huán)境對紅細胞脆性的影

25、響。有資料顯示6，高濃度葡萄糖會誘導的紅細胞磷脂酰絲氨酸暴露、滲透脆性增高和膜脂質過氧化損傷。參考文獻：5 崔福德. 藥劑學（第五版）. 北京：人民衛(wèi)生出版社. 2007，9：455-4576 權國波, 韓穎, 楊超,等. 海藻糖抑制高濃度葡萄糖誘導的紅細胞磷脂酰絲氨酸暴露、滲透脆性增高和膜脂質過氧化損傷的研究. 中國實驗血液學雜志 2008; 16( 6): 1442- 1446在加樣中, 我們改用微量加樣器加樣, 加樣準確消除了濃度誤差對實驗結果的影響。通過其溶血度變化從而證明用分光分度法可以用于臨床初步篩選對紅細胞膜穩(wěn)定的藥品以及對紅細胞膜破壞的藥品, 對靜脈注射制劑新藥的安全性是一種安

26、全有效準確的評價方法。此外，我們還可以依據(jù)本實驗，再加入維生素C（膳食、輔助性藥物）、乳酸（無氧運動）、血氨（人體正常數(shù)值不超過60umol/L）、甘油（注射用溶劑的一種）等物質來探究因為飲食、輸液、運動、疾病等原因導致的血液環(huán)境改變對紅細胞脆性的影響。進一步拓展三、染色中觀察到的小顆粒藍色聚集物是什么？猜想：1、制片問題？2、染液殘渣？3、紅細胞干擾？4、白細胞破裂釋放物質？5、細菌？6、血液中其他物質?1、制片問題？探究過程：我們最開始覺得這種現(xiàn)象的發(fā)生可能是因為操作不規(guī)范，血片制的太厚，重新制薄片后觀察，又出現(xiàn)些許小顆粒聚集現(xiàn)象，猜測可能是染料殘留物或者是破碎的紅細胞。于是我們又重新做了

27、一遍，將制片洗完全，觀察，仍然在視野中發(fā)現(xiàn)少量聚集物，于是排除染料殘留的可能性。白細胞破裂？對于白細胞破裂的猜測，我們的想法是從血液中分離處理白細胞直接進行染色，于是查閱文獻，找尋血液中分離白細胞的方法:1、簡單離心分離法：直接取樣血液于離心管中3000r/min離心分離10min，取上清液，做成血片，染色觀察； 2、Ficoll-泛影鈉（Ficoll-Hypaque）密度梯度及紅細胞裂解法，首先配制白細胞緩沖液，漢克斯液配置好。然后提取好白細胞后，使用對照的方法，對其中一組加不同濃度的低滲鹽溶液，或者加不等量的蒸餾水，將白細胞脹破。然后制片染色，顯微鏡下觀察，與對照組做對比，觀察是否有相同的

28、聚集現(xiàn)象。后來，由于實驗室缺乏所需藥品，而且該法對無菌條件的要求嚴格，我們在進行一半時不得不中途放棄，感到非常遺憾。但這將作為我們今后研究的課題，進一步激發(fā)我們對血液細胞研究的興趣!繼續(xù)征程!四、染色方法的改進1、瑞氏染色法的改進常規(guī)組：瑞氏染色液3-5滴於血膜染色12min 后加蒸餾水6-8滴，2-3min 鏡檢分類。改進組:血膜片在0.85%的生理鹽水溶液中浸泡1-1.5秒然后加入瑞氏染色液3-5滴染色10-15秒后用蒸餾水沖洗，鏡檢分類。鏡檢觀察改進組染色片在鏡下偶見紅細胞淡影，白細胞染色良好。討論：優(yōu)點：本方法可以縮短染色時間。白細胞清晰地鋪在玻璃片上，偶見紅細胞淡影。改進組主要是生理

29、鹽水傾溢血膜片上，在血膜外形成一層液態(tài)膜，阻止染色液與紅細胞直接接觸，延緩了紅細胞與染色液的結合。2、姬姆薩染色法改進1、染液配制取分析純姬姆薩氏粉0. 5 g, 甘油2. 5 ml , 甲醇2. 5 ml。將姬姆薩氏粉置于乳缽, 研溶于少量甘油中, 再加入全部甘油, 傾于燒瓶內, 置60水浴2 h, 并不斷振搖攪拌, 促其完全溶解, 再加入甲醇混合過濾, 存放23 周后使用。臨用時取原液以中性蒸餾水或離子水作10 倍稀釋。2、抹片制作 血液制成推片,組織制成觸片或抹片,滲出液、分泌物和培養(yǎng)物視其黏稠度直接或加生理鹽水稀調制作涂片,干燥,火焰固定。3、加溫染色 滴加姬姆薩氏染色液覆蓋整個抹片,

30、在酒精燈外焰上方約10cm處徐徐擺動玻片,溫染色0.5 min, 再自然染色3min,蒸餾水沖洗至不褪色時,吸水紙吸干玻片。4、鏡檢觀察討論：1、染色速度快, 從染色到鏡檢僅需6 min; 2、染色效果好, 抹片染色清晰度高; 3、節(jié)省染料, 固定時不用甲醇, 避免了在染色缸內浸泡抹片浪費染色液的問題鏡下背景為淡紅色, 出現(xiàn)大量染成藍紫色的紅細胞！ 有異?，F(xiàn)象！酒精燈固定后的血片3、血涂片的雙重染色法的改良原理：紅細胞呈淡紅色，中性粒細胞的胞質呈粉紅色，含有大小不等的紫紅色顆粒。嗜酸性粒細胞，胞質內充滿粗大均勻的嗜酸性顆粒，染成桔紅色，嗜堿性粒細胞，胞質內含有嗜堿性顆粒，分布不均勻，大小不等，

31、染成藍紫色，單核細胞，胞質內有嗜天青顆粒，胞質呈灰藍色，淋巴細胞胞質呈天藍色方法： 1、新鮮血涂片自然晾干 2、瑞氏染液染色5min蒸餾水沖洗數(shù)遍 3、0.05乙酸分色3s，蒸餾水沖洗兩遍 4、稀釋了的姬姆薩染液染色10min，蒸餾水沖洗數(shù)遍，吹干 5、無水酒精脫水15s左右鏡檢觀察討論：1、兩種染液分別進行染色，避免了成電的產(chǎn)生，用0.05乙酸分色。2、血涂片直接用瑞氏染液固定節(jié)省時間，配制染液蒸餾水的pH值為6.77.0，但染液染色的順序不能顛倒數(shù)目極多的紅細胞，再次出現(xiàn)異常!紙上得來終覺淺絕知此事要躬行討論：三個白細胞染色法改良的實驗中，只有第一個瑞氏的改良法是成功的，而從姬姆薩染色法的改進和雙重染色法的改良我們可以看