藥物分析藥物定量分析與方法驗(yàn)證課件

1、 藥物定量分析與方法驗(yàn)證 第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法一、概述 一般藥物用水或酸堿溶液就可將待測(cè)組分溶于試液中，但含金屬或鹵素的藥物，如葡萄糖酸銻鈉、硬脂酸鎂、碘苯酯等，在分析前需要經(jīng)過不同方法處理后才能進(jìn)行測(cè)定。 藥物的分析方法可分為兩大類：即不經(jīng)有機(jī)破 壞的分析法；經(jīng)有機(jī)破壞的分析法。1第1頁，共89頁。 不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 直接測(cè)定;經(jīng)水解后測(cè)定;經(jīng)氧化還原反應(yīng)后測(cè)定。 經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 濕法破壞(硝酸-高氯酸法;硝酸-硫酸法;硫酸-硫酸鹽法等);干法破壞；氧瓶燃燒法。2第2頁，共89頁。二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（一） 直接測(cè)定凡金屬原子不直接與碳原子相連的含金屬藥物或C-

2、M鍵結(jié)合不牢固的有機(jī)金屬藥物，在水溶液中可以電離出金屬陽離子的可直接用此法測(cè)定。3第3頁，共89頁。原理Fe2+ + Ce4+ Ce3+ + Fe3+ Fe2+ + Ce4+ Fe3+紅色淺藍(lán)色OOCCHOHCCO+Fe2+d H2SO4滴定終點(diǎn)富馬酸富馬酸亞鐵+ Ce3+富馬酸亞鐵 的含量測(cè)定鄰二氮菲指示劑4第4頁，共89頁。測(cè)定方法： 取本品約0.3g，精密稱定，加稀硫酸 15ml，加熱溶解后，放冷，加新煮沸過的冷水50ml與鄰二氮菲指示液2 滴，立即用硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml硫酸鈰滴定液 (0.1mol/L) 相當(dāng)于富馬酸亞鐵 16.9

3、9mg 。ChP (2000)5第5頁，共89頁。1. 直接回流后測(cè)定法 本法是將含鹵素有機(jī)藥物溶于適當(dāng)溶劑（如乙醇）中，加入氫氧化鈉溶液（或一定量過量的硝酸銀滴定液）后，加熱回流使其水解，將有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)的鹵素離子，然后采用銀量法（Volhard法）測(cè)定。（二）經(jīng)水解后測(cè)定6第6頁，共89頁。 本法適用于含鹵素有機(jī)藥物結(jié)構(gòu)中鹵素原子結(jié)合不牢固的藥物（如鹵原子和脂肪碳原子相連者）。 7第7頁，共89頁。 原理 三氯叔丁醇在氫氧化鈉溶液中加熱回流水解，氯元素全部轉(zhuǎn)變成氯化鈉，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量過量的硝酸銀滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，過量的硝酸銀，

4、以Fe3+為指示劑，用硫氰酸銨液回滴定。 例:三氯叔丁醇的測(cè)定 ChP（2000）8第8頁，共89頁。CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH 回流(CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2ONaCl + AgNO3 AgCl + NaNO3 AgNO3 + NH4SCNAgSCN + NH4NO3（淡棕紅色）(Ksp=1.561010 )(Ksp=1.010-12 )Fe3+ + SCN Fe (SCN) 2+ 過量，定量剩余終點(diǎn)回滴9第9頁，共89頁。測(cè)定方法：取本品約0.1g，精密稱定，加乙醇5ml溶解后，加20%氫氧化鈉溶液5ml，加熱回流15min，放冷至

5、室溫，加水20ml與硝酸5ml，精密加硝酸銀滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加鄰苯二甲酸二丁酯5ml，密塞，強(qiáng)力振搖后，加硫酸鐵胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于6.216mg的三氯叔丁醇（C4H7Cl3O1/2H2O）。10第10頁，共89頁。反應(yīng)摩爾比為13T滴定度，每1ml滴定液相當(dāng)于被測(cè)組分的mg數(shù)c滴定液濃度，mol/LM被測(cè)物的摩爾質(zhì)量，g/moln1mol樣品消耗滴定液的摩爾數(shù)，常用反應(yīng)摩爾比體現(xiàn)， 即反應(yīng)摩爾比為1n11第11頁，共89頁。 （三） 經(jīng)氧化還原后測(cè)定 本法

6、是將含鹵素有機(jī)藥物在堿性或酸性下，加還原劑（如鋅粉）加熱回流，藥物產(chǎn)生還原裂解反應(yīng)，使有機(jī)結(jié)合的鹵素轉(zhuǎn)變?yōu)闊o機(jī)的鹵素離子，然后采用銀量法（Fajans法）測(cè)定。12第12頁，共89頁。 本法適用于測(cè)定結(jié)構(gòu)中碘與苯環(huán)直接相連，且一個(gè)苯環(huán)上含多個(gè)碘原子的含鹵素有機(jī)藥物。 13第13頁，共89頁。 （1） 堿性還原后測(cè)定例 泛影酸的測(cè)定 ChP (2000) 取本品約0.4g，精密稱定，加氫氧化鈉溶液30ml與鋅粉1.0g，加熱回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗滌，濾過，燒瓶與濾器用水洗滌3次，每次15ml，洗液與濾液合并，加冰醋酸5ml與曙紅鈉指示液5滴，用硝酸銀滴定液(0.1mol/L)滴定

7、。每1ml硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。14第14頁，共89頁。COOHINHCOCH3IIH3COCHN+ 11NaOH + Zn回流COONaNH2 H2N+ 3NaI + 2CH3COONa+ 2Na2ZnO2 + H2O15第15頁，共89頁。 USP (24)、BP（1998） ChP(2000)收載的膽影酸、碘番酸、膽影葡胺、泛影葡胺、碘他拉酸等均采用同法測(cè)定。 16第16頁，共89頁。 （2）酸性還原后測(cè)定 例 葡萄糖酸銻鈉的測(cè)定 ChP（2000） 取本品約0.3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加水100ml、鹽酸15ml與碘化

8、鉀試液10ml，密塞、振搖后，在暗處靜置10min，用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于6.088mg的Sb。 17第17頁，共89頁。18第18頁，共89頁。三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法 適用于金屬原子與碳原子結(jié)合牢固的有機(jī)金屬藥物。19第19頁，共89頁。1. 濕法破壞樣品加混合酸加熱至冒煙酸溶 濕法破壞所用儀器一般為硅玻璃或硼玻璃制成的凱氏燒瓶，所用試劑和水都不得含有待測(cè)組分和干擾成分，且同時(shí)做空白試驗(yàn)，操作時(shí)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。 濕法破壞的樣品用量須視藥物樣品

9、中金屬元素的含量而定，一般而言固體： 10g 左右；液體：1050mL。20第20頁，共89頁。（1） 硝酸-高氯酸法 本法適用于血、尿、等生物樣品的破壞，有機(jī)金屬藥物經(jīng)破壞后，得到的無機(jī)金屬離子一般呈高價(jià)態(tài)。 本法不能用于含氮雜環(huán)藥物的破壞。21第21頁，共89頁。 （2） 硝酸-硫酸法 本法適用于大多數(shù)有機(jī)藥物的破壞，破壞得到的無機(jī)金屬離子均為高價(jià)態(tài)。 但本法不能用于含堿土金屬有機(jī)藥物的破壞。22第22頁，共89頁。 （3） 硫酸-硫酸鹽法 本法是在樣品中加入濃硫酸作氧化劑，加入硫酸鹽以提高硫酸的沸點(diǎn)，增強(qiáng)硫酸的氧化破壞能力，且防止硫酸的分解損失。 本法常用于含砷或銻有機(jī)藥物的破壞，破壞得

10、到的無機(jī)離子多為低價(jià)態(tài)。23第23頁，共89頁。 （4） 其它濕法 硝酸硫酸高氯酸法； 硫酸氧化劑法（過氧化氫、高錳酸鉀）。 可適用于大多數(shù)藥物的分解，破壞后的金屬離子均呈高價(jià)態(tài)。24第24頁，共89頁。2. 干法破壞 本法是將有機(jī)物灼燒灰化以達(dá)到分解的目的。 該方法適用于濕法不易破壞完全的有機(jī)藥物以及某些不能用濕法進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。不適用于含易揮發(fā)性金屬（如汞、砷、硒等）有機(jī)藥物的破壞。25第25頁，共89頁。方法： 將適量樣品置于瓷坩堝或鉑坩堝中，加入無水碳酸鈉或氧化鎂以助灰化，混勻后先小火使樣品完全炭化后再在高溫爐中灰化。26第26頁，共89頁。注意事項(xiàng)：（1）加熱或灼燒時(shí)，應(yīng)控制溫度

11、在 420以下。（2）一定要灰化完全。（3）灰化后不易溶解的殘?jiān)灰p易 棄去，用濕法處理后合并測(cè)定。27第27頁，共89頁。3. 氧瓶燃燒分解后測(cè)定法（1）原理 氧瓶燃燒法：將有機(jī)藥物放入充滿氧氣的密閉燃燒瓶中進(jìn)行燃燒，并將燃燒所產(chǎn)生的欲測(cè)物質(zhì)吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐?，然后根?jù)欲測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，采用適宜的分析方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。28第28頁，共89頁。適用于含鹵素、硫、氮、硒等有機(jī)藥物的分析。29第29頁，共89頁。 本法特點(diǎn)：簡便、快速、破壞完全，尤其適用于微量樣品的分析。30第30頁，共89頁。 （ 2） 儀器與材料 儀器裝置 燃燒瓶為500、1000或2000ml無色、磨口、厚壁、

12、硬質(zhì)玻璃錐形瓶；瓶塞空心，底部熔封鉑絲一根，鉑絲下端呈螺旋狀或網(wǎng)狀31第31頁，共89頁。稱樣用材料及稱樣 A. 固體樣品： 無灰濾紙； B. 液體樣品： 紙袋； C. 軟膏類樣品：將適量樣品置于不含 被測(cè)成分的蠟紙中包裹嚴(yán)密，外層 再用無灰濾紙包裹；32第32頁，共89頁。33第33頁，共89頁。 吸收液 A. 作用：定量吸收樣品燃燒分解所產(chǎn)生的的鹵素、硫、氮、硒等，并轉(zhuǎn)變?yōu)橐欢ǖ谋阌跍y(cè)定的價(jià)態(tài)。 氧氣 鉑絲: 固定樣品和催化作用。34第34頁，共89頁。B. 吸收液的選擇氟 水 氯 NaOH溶液溴 H2O2-NaOH NaOH硫酸肼飽和溶液碘 NaOH硫酸肼飽和溶液硫 NaOH或H2O2

13、硒 硝酸溶液35第35頁，共89頁。（3）操作方法燃燒瓶燃燒前的準(zhǔn)備 用洗液洗凈后，按各藥品項(xiàng)下的規(guī)定加入吸收液，將瓶口用水濕潤，小心急速地通入氧氣1min，立即用表面皿覆蓋瓶口,備用。樣品的準(zhǔn)備 取樣品適量，精密稱定后按規(guī)定方法包裹，固定于鉑絲下端的網(wǎng)內(nèi)或螺旋處。36第36頁，共89頁。 樣品的燃燒 點(diǎn)燃包有供試品的濾紙尾部，迅速放入燃燒瓶中，按緊瓶塞，加水少量封閉瓶口，燃燒完畢（應(yīng)無黑色碎片）后，充分振搖，使生成的煙霧完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量沖洗瓶塞及鉑絲，合并洗液及吸收液，同時(shí)做空白試驗(yàn)。然后按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法進(jìn)行鑒別、檢查或含量測(cè)定。37第37頁，共89頁。 根據(jù)

14、被燃燒分解的樣品量選用適宜 大小的燃燒瓶。（4）注意事項(xiàng)ChP（2000）規(guī)定的燃燒瓶體積為500、1000或2000ml三種，采用常量或半微量分析。38第38頁，共89頁。 待分解樣品量 燃燒瓶的體積 35mg（微量分析） 150250ml 2030mg（半微量分析） 300500ml 5060mg 1000ml 0.60.7g或更多 2000ml或特殊 結(jié)構(gòu)的燃燒瓶表 1. 樣品與燃燒瓶體積的關(guān)系:正確選用燃燒瓶的目的在于：樣品能在足夠的氧氣中燃燒分解完全；有利于將燃燒分解產(chǎn)物較快地吸收到吸收液中；防止爆炸的可能性。39第39頁，共89頁。 測(cè)定含氟有機(jī)藥物時(shí)，用石英制 燃燒瓶。 應(yīng)同時(shí)做

15、空白試驗(yàn)。 燃燒時(shí)要注意防爆。 燃燒要完全。 燃燒產(chǎn)生的煙霧完全被吸收。40第40頁，共89頁。例 碘苯酯的含量測(cè)定 ChP（2000）原理 碘苯酯系有機(jī)碘化物，用氧瓶燃燒分解，轉(zhuǎn)變?yōu)榈饣铮^而氧化為游離的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氫氧化鈉反應(yīng)，生成碘化物與碘酸鹽，加入溴-醋酸溶液，使全部轉(zhuǎn)變?yōu)榈馑猁}，過量的溴以甲酸及通空氣去除。加入碘化鉀，使與碘酸鹽反應(yīng)析出游離碘，用硫代硫酸鈉液滴定，碘與淀粉結(jié)合所顯的藍(lán)色消失即為終點(diǎn) 41第41頁，共89頁。 操作：取本品約20mg，精密稱定，照氧瓶燃燒法進(jìn)行有機(jī)破壞，用2ml氫氧化鈉試液與l0ml水作為吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸鉀

16、10g，加冰醋酸適量溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振搖，放置數(shù)分鐘，加甲酸約lml，用水洗滌瓶口，并通入空氣流約35min以除去剩余的溴蒸氣，加碘化鉀2g，密塞，搖勻，用硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)滴定，近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每lml的硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L)相當(dāng)于1.388mg 的C19H29IO2。 定量方法42第42頁，共89頁。第二節(jié) 定量分析方法 測(cè)定藥物的含量是評(píng)價(jià)藥品質(zhì)量優(yōu)劣的重要手段。其測(cè)定方法多種多樣，各有各的特色，而容量分析法、光譜分析法和色譜分析法是Ch.P(2

17、000)收載最多的分析方法。43第43頁，共89頁。一、容量分析法 （一）方法與特點(diǎn)： 方法-將已知濃度的滴定液由滴定管滴加到待測(cè)藥物的溶液中，直到所加滴定液與被測(cè)藥物按化學(xué)計(jì)量關(guān)系反應(yīng)完全為止，然后根據(jù)滴定液的濃度和消耗的體積計(jì)算待測(cè)藥物的含量。44第44頁，共89頁。特點(diǎn)：儀器簡單滴定管、錐形瓶等玻璃儀器。操作方便通過觀察溶液顏色變化確定滴 定終點(diǎn)。測(cè)定快速一般12個(gè)小時(shí)可報(bào)出結(jié)果。結(jié)果準(zhǔn)確相對(duì)誤差（TE）99.5)或?qū)φ掌穪砜疾旆治龇椒ǖ木芏?，相?duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差一般應(yīng)不大于0.2；進(jìn)行回收率試驗(yàn)。回收率一般在99.7100.3之間。 76第76頁，共89頁。 2. UV法： 用適當(dāng)濃度的精制

18、品進(jìn)行測(cè)定，其RSD一般不大于1。制劑的測(cè)定，回收率一般應(yīng)在98102之間。 線性：吸光度A一般在0.20.7，濃度點(diǎn)n5。用濃度C 對(duì)A作線性回歸處理，得到的線方程，相關(guān)系數(shù)r應(yīng)大于0.999(n5)，方程的截距應(yīng)近于零。77第77頁，共89頁。 3. HPLC法： 要求RSD2，回收率98102之間。 線性范圍：用精制品配制一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度點(diǎn)n應(yīng)為57，用濃度c對(duì)峰高h(yuǎn)或被測(cè)物的響應(yīng)值之比進(jìn)行回歸處理，建立回歸方程，r應(yīng)大于0.999，截距應(yīng)趨于零。78第78頁，共89頁。 4. 生物樣品分析時(shí)，常用RSD表示精密度，并可細(xì)分為批內(nèi)（或日內(nèi)）精密度和批間（或日間）精密度。 批內(nèi)精密度：對(duì)同一批次藥品測(cè)定的精密度。所得RSD應(yīng)爭取達(dá)到5以內(nèi)，但不能超過10。 79第79頁，共89頁。 批間精密度：對(duì)不同批次藥品測(cè)定的精密度。所得RSD應(yīng)控制在15以內(nèi)。 附錄藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗(yàn)指導(dǎo)原則規(guī)定一般RSD應(yīng)小于15%，在LOQ附近RSD應(yīng)小于20%。第四節(jié) 生物樣品分析方法的基本要求-自學(xué)練習(xí)題80第80頁，共89頁。例15 請(qǐng)將下列評(píng)價(jià)指標(biāo)填在相應(yīng)位置：A精密度 ； B定量限 ；C兩者皆是 ； D兩者皆不是。1. 某法測(cè)得一組測(cè)量值間彼此符合程度（）2. 測(cè)量值和真值接近的程度（）3. 測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性（）4