生物樣品檢測與質(zhì)量控制

1、 生物監(jiān)測與質(zhì)量(zhling)控制中國疾病預(yù)防控制中心職業(yè)衛(wèi)生(wishng)與中毒控制所閆慧芳共六十六頁 生物監(jiān)測與檢測標準方法 生物樣品(yngpn)的采集和保存檢測過程質(zhì)量控制共六十六頁生物(shngw)監(jiān)測 生物監(jiān)測(jin c)可分為接觸的生物監(jiān)測(jin c)、效應(yīng)的生物監(jiān)測(jin c)和敏感性的生物監(jiān)測(jin c)。 接觸性標志物 效應(yīng)性標志物 敏感性標志物共六十六頁生物(shngw)監(jiān)測暴露劑量評估職業(yè)(zhy)健康監(jiān)護職業(yè)病診斷生物接觸限值職業(yè)病診斷參考值共六十六頁生物監(jiān)測，更多的是接觸強度的評估，而不是健康危險度的評估。當內(nèi)劑量和有害健康作用之間的定量關(guān)系已確定，例如

2、血鉛、尿鎘、碳氧血紅蛋白，生物接觸指標可認為是健康危險度的指標。當內(nèi)劑量與有害作用和外接觸都有定量關(guān)系時，這個生物接觸指標提供(tgng)了接觸和健康危險度的信息 。共六十六頁理想的生物接觸(jich)指標：應(yīng)具有以下幾個特點(tdin)：1、是接觸有害物質(zhì)的特異指標；2、有監(jiān)測接觸低水平有害物質(zhì)人群的足夠靈敏度；3、接觸劑量與有害作用及危險度有定量的關(guān)系；共六十六頁4、比空氣監(jiān)測獲得更多的健康危險度的 信息；5、有足夠的樣品穩(wěn)定性；6、沒有明顯的采樣不適和任何健康危害；7、有足夠靈敏度、準確度和特異性的分 析方法(fngf)，且操作簡單、快速和價廉。共六十六頁生物樣品(yngpn)的采集和保

3、存 生物材料(cilio)的選擇 采樣時間的選擇 容器的選擇和清洗 樣品采集的要求 共六十六頁在職業(yè)衛(wèi)生工作中，常用的生物材料有尿、血、呼出氣是較理想的生物監(jiān)測(jin c)的生物材料。已經(jīng)制訂出生物限值的，應(yīng)按其規(guī)定采集生物樣品。參照國外相關(guān)材料進行 共六十六頁生物(shngw)材料的選擇選擇原則： 根據(jù)(gnj)有害物質(zhì)在體內(nèi)的代謝動力學研究結(jié)果，選擇具有特異性和很好劑量-效應(yīng)關(guān)系的監(jiān)測指標的生物材料；共六十六頁（一）血液(xuy)各種有害物質(zhì)進入人體，不論經(jīng)過哪個途徑進入，都進入血液，再輸送到機體的各部分，血液中有害物質(zhì)和其代謝物的濃度通常反映了接觸的水平。優(yōu)點：反映接觸水平。缺點：血液

4、的采集會造成一些(yxi)損傷。 共六十六頁血液(xuy)的采集和保存 血液按照(nzho)采血渠道分為靜脈血和末稍血；靜脈血是用注射器通過靜脈血管取得的血液；末梢血是指血或耳血。共六十六頁注意事項：當取血量在0.5m1以上時，當收集樣品的環(huán)境(hunjng)有外源性化學物質(zhì)存在增加了污染可能性時，以及測定血中易揮發(fā)性的化學物質(zhì)時，均不宜采集末稍血，應(yīng)采集靜脈血。共六十六頁有些有害物質(zhì)及代謝物在全血、血漿、血清和血細胞中分布是不同的，因此，在采樣(ci yn)時必須根據(jù)檢測的需要，采集不同的血液部分。在進行金屬分析時，必須考慮EDTA抗凝劑對金屬離子的絡(luò)合作用，影響測定結(jié)果，最好采用肝素抗凝。

5、共六十六頁當測定血樣中揮發(fā)性有害物質(zhì)或代謝物時，為了避免(bmin)因揮發(fā)而造成損失，使測定結(jié)果偏低，必須采集靜脈血，而不能用末稍血。而且應(yīng)迅速密閉容器，在低溫下保存。共六十六頁采血過程中要避免污染，采樣要在清潔無污染的場所進行，對采血部位的皮膚除常規(guī)(chnggu)消毒外，必要時還必須先清洗干凈。在需要采集血清或血漿或血細胞時，采血過程中要防止溶血。用注射器采靜脈血時，在轉(zhuǎn)移血液時應(yīng)先把注射器針頭取下，再將血樣慢慢注入容器內(nèi)，可避免發(fā)生溶血。取未梢血時，不得用力擠壓采血部位，要盡量讓其自然流出，避免因滲出組織液使血液稀釋，并棄去第一滴血。共六十六頁在運輸過程中，血樣應(yīng)避免強烈振動(zhndn

6、g)和大的溫度改變。血液冷凍后會溶血，為了防止溶血，可以將血液的各部分（血漿和血細胞）分別冷凍貯存。如果血樣臨時存放過夜，可放在4保存，否則必須冷凍保存。用于測酶活性的血樣，必須盡快分析，放置時間過長會使酶活性降低。 共六十六頁（二）尿液 許多有害物質(zhì)及其代謝物通過尿液排泄，其濃度與接觸劑量有一定的相關(guān)關(guān)系；優(yōu)點：采集簡單方便(fngbin) 沒有傷害，容易接受。缺點：受多種因素影響 必須進行校正 共六十六頁尿樣的采集(cij)和保存采樣的時間很重要，一定要按照規(guī)定的時間進行采樣。尿樣的采集通常(tngchng)采集一次尿液，例如晨尿、班前尿、班中尿或班后尿，每次采樣最好收集全部尿液，尿量應(yīng)在

7、50ml以上。24小時尿樣采集方法是在一個規(guī)定時間，先將尿液排空棄掉，然后在24小時內(nèi)，將所有的尿液收集到容器中，直到開始規(guī)定的時間再將尿液收集起來。 共六十六頁校正(jiozhng)采用尿比重校正法進行校正時，應(yīng)在采樣后未加防腐劑或保護劑以前盡快測量尿比重。如果條件允許，應(yīng)在采集(cij)樣品現(xiàn)場進行。測量時，將收集的尿樣移入25ml量筒中，放入尿比重計，進行尿比重測定。對于比重低于1.010g/ml和大于1.030g/ml的樣品應(yīng)當舍棄，應(yīng)重新進行采樣。測量比重后的尿液，最好棄去不用。 共六十六頁校正(jiozhng)采用肌酐校正法進行校正的尿樣，需要返回實驗室后盡快進行肌酐檢測，肌酐濃度

8、大于3g/L和小于0.5g/L的尿樣應(yīng)當(yngdng)舍棄。 共六十六頁注意事項：采樣時，采樣對象應(yīng)離開工作場所，更換工作服，洗凈手和臉，最好洗澡后，在清潔的環(huán)境下，將尿液收集到清潔的容器內(nèi)。在采集班中尿或班后尿時，必須防止(fngzh)外來物的污染。在收集的過程中，應(yīng)盡量避免尿樣被多次轉(zhuǎn)移。 共六十六頁為了防止尿樣變質(zhì)，通常(tngchng)需要加入防腐劑。常用的防腐劑是鹽酸或硝酸、氯仿等。在測定金屬化合物的尿樣中加入酸，還起到保護金屬離子不被容器壁吸附的作用。通常100ml尿樣加1ml防腐劑，加后搖勻。共六十六頁采集的尿樣若不能及時測定，應(yīng)放在冰箱中保存；需要長期(5天以上)貯存的樣品，

9、最好保持在冰凍狀態(tài)。有的尿樣如測定尿汞和揮發(fā)性有害物質(zhì)的要盡快(jnkui)分析，否則因容器壁的吸附或揮發(fā)使測定結(jié)果偏低。 共六十六頁1.校正(jiozhng)的方法有尿比重法和肌酐法 將尿樣中待測物濃度(nngd)校正到標準比重的方法。(我國規(guī)定標準比重為1.020g/ml)校正公式： 1.020 1.000 C c D 1.000 式中：C 校正后尿樣中待測物的濃度，mg/L或g/L； c 校正前尿樣中待測物的濃度，mg/L或g/L； d 尿樣的實測比重，g/ml。 共六十六頁2.肌酐校正(jiozhng)法將尿樣中的待測物濃度用尿中肌酐濃度進行(jnxng)校正的方法。(機體每日肌酐的排

10、泄量是比較穩(wěn)定的，不受飲食、出汗等因素影響)校正公式： c （ mg/L ） C cr （ g/L ） 式中：C 校正后尿樣中待測物的濃度，mg/g； c 校正前尿樣中待測物的濃度，mg/L； cr 尿樣的肌酐濃度，g/L。 共六十六頁采樣時間(shjin)的選擇 具有生物限值的化合物，其生物材料采集(cij)具有明確規(guī)定，應(yīng)嚴格執(zhí)行。沒有限值的生物樣品，采集時間應(yīng)根據(jù)毒物代謝動力學為依據(jù)： 半減期短的(幾分鐘幾小時)化合物，其在各種組織中的水平變化很快，所以采樣時間限制要嚴格； 半減期較長的毒物或代謝物，它們在各種組織中的濃度反映了較長時間的接觸程度，所以采樣時間可以不太嚴格。 共六十六頁生

11、物樣品(yngpn)的采集時間半減期小于2h 的有害物質(zhì)很難進行生物監(jiān)測；半減期為210h，最佳采樣時間為班末或下一班前；半減期為10100h，可提供前一日(y r)吸收的物質(zhì)總量（在16h 后采樣）或一周（周末采樣）吸收的有害物質(zhì)總量的評價。對于積蓄性有害物質(zhì)如重金屬，采樣時間不重要。 共六十六頁在生物(shngw)限值或檢測方法中規(guī)定的采樣時間：班前是指工作班前1小時。班中是指開始正常工作后2小時到下班前1小時。班末是指下班前1小時。班后是下班后1小時。下一班班前是指第二個工作班前1小時。工作周末(zhum)的班末是指一個工作周（通常為5個工作班）的最后一個工作班下班前1小時。 共六十六頁

12、容器(rngq)的選擇和清洗 一般根據(jù)待測物的化學性質(zhì)、樣品的性狀和樣品需要保存的條件來選擇容器。 待測物是無機金屬和類金屬化合物，可用高壓聚乙烯塑料(slio)、聚丙烯塑料(slio)、石英、硬質(zhì)玻璃等容器。待測物為有機化合物，采樣用的容器應(yīng)選用玻璃或聚乙烯等塑料制品。共六十六頁注意事項：要避免使用橡膠和添加染料的制品。如果樣品需要冷凍保存，則不宜用玻璃容器，以防凍裂(dn li)。采樣用的容器應(yīng)進行本底值抽檢，空白值要低于方法的檢出限。在采樣容器上必須貼上統(tǒng)一的標簽，標簽上注明采樣日期、樣品編號(與采樣記錄用統(tǒng)一的編號)、加入了什么防腐劑及加入量等項目。 共六十六頁采樣(ci yn)環(huán)境檢

13、測對象應(yīng)離開工作場所，脫去工作服，洗凈手、臉及取樣部位，有條件的要在洗浴后進行。采樣地點應(yīng)清潔，沒有污染；選擇避風和上風(shngfng)方向的場所進行，同時注意由于通風造成的污染。檢測原形化合物時，對環(huán)境的污染要特別注意。 共六十六頁采樣(ci yn)記錄采樣時應(yīng)在專用(zhunyng)記錄紙上填寫采樣記錄 記錄樣品編號檢測對象姓名性別年齡工種職業(yè)史共六十六頁應(yīng)檢項目 采樣時間采樣地點(ddin)采樣環(huán)境(簡單描述)采樣過程(簡述)、個人生活習慣(飲食、飲酒、吸煙等)采樣人及記錄填寫者等 共六十六頁樣品(yngpn)的貯存在樣品貯存及運輸時，應(yīng)防止被測物變質(zhì)和不引進干擾物質(zhì)，避免樣品中待測物

14、的揮發(fā)和在容器上滯留(zhli)，樣品的保存方法要與分析方法相配合。由于所用的生物材料和被測物不同，其貯存(包括運輸期間)要求也不一樣。標準檢測方法對于樣品的儲存和運輸都有明確的說明，在實際操作中要嚴格執(zhí)行。 共六十六頁質(zhì)量控制(kngzh)分為：職業(yè)衛(wèi)生生物監(jiān)測(jin c)質(zhì)量保證規(guī)范GBZ/T 173-2006實驗室內(nèi)質(zhì)量控制實驗室外質(zhì)量控制共六十六頁質(zhì)量體系文件(wnjin)質(zhì)量管理體系程序性文件作業(yè)(zuy)指導書記錄表格共六十六頁質(zhì)量控制(kngzh)的方面人員(rnyun)儀器設(shè)備實驗室環(huán)境技術(shù)方法試驗用品共六十六頁人員(rnyun)要求：技術(shù)培訓相關(guān)專業(yè)背景(bijng)持證上

15、崗監(jiān)督檢查共六十六頁儀器設(shè)備：性能滿足方法要求定期(dngq)檢定期間核查標示管理檔案管理使用記錄共六十六頁實驗室環(huán)境(hunjng)：環(huán)境條件滿足設(shè)備需求溫度、濕度、防酸、塵等環(huán)境條件滿足方法要求方法的關(guān)鍵(gunjin)技術(shù)指標排毒設(shè)施送風、排風共六十六頁技術(shù)(jsh)方法:方法的選擇國標、國際標準、文獻、研制方法的驗證依據(jù)程序文件、方法驗證的技術(shù)資料、審核批準、作業(yè)(zuy)指導書的制定、頒布技術(shù)培訓共六十六頁試驗(shyn)用品：驗收合格供應(yīng)商的評估管理(gunl)標準物質(zhì)的管理共六十六頁實驗室比對能力(nngl)驗證評審共六十六頁生物樣品檢測(jin c)的特點：基質(zhì)復雜共存物質(zhì)(w

16、zh)的影響共六十六頁常用定量(dngling)方法工作曲線法標準(biozhn)加入法工作曲線法共六十六頁檢測過程質(zhì)量(zhling)控制：采樣用品預(yù)處理、抽檢樣品采集過程環(huán)境、控制(kngzh)標準溯源一級標物過程控制指標共六十六頁實驗室外部(wib)質(zhì)量控制 實驗室外部質(zhì)量控制是在實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制的基礎(chǔ)上進行的，是由上一級實驗室對下級實驗室提供(tgng)質(zhì)控樣品或盲樣，檢測結(jié)果由分發(fā)質(zhì)控樣品或盲樣的實驗室進行統(tǒng)計評價，以考核實驗室的檢測質(zhì)量。共六十六頁可以發(fā)現(xiàn)(fxin)實驗室是否有效地進行了實驗室內(nèi)部質(zhì)量控制；也可以發(fā)現(xiàn)配制標準溶液時產(chǎn)生的誤差；應(yīng)用低質(zhì)量蒸餾水、其他溶劑、試劑等產(chǎn)

17、生的誤差。共六十六頁實驗室實際工作(gngzu)應(yīng)用:1.儀器設(shè)備: 量程、靈敏度和準確度等性能應(yīng)滿足檢測的要求; 計量儀器要依法進行定期檢定(jindng)，標有“準用”標志； 儀器設(shè)備必須處于正常的工作狀態(tài)。 共六十六頁 玻璃容量器皿如容量瓶、吸量管、移液管等和微量注射器、移液器等，必需使用一級產(chǎn)品，其量值須經(jīng)過(jnggu)檢查和校正; 玻璃和塑料器皿的內(nèi)壁應(yīng)洗滌至無固體沉積物和不掛水珠。 用于檢測微量元素的器皿，應(yīng)用硝酸等溶液浸泡。 用于檢測微量有機物的器皿，應(yīng)用重鉻酸鉀洗液或萃取液、解吸液淋洗內(nèi)壁。共六十六頁 盡量使用國家批準銷售的標準物質(zhì)和標準溶液。 配制標準溶液時，要用基準物質(zhì)或

18、分析純以上(yshng)級別的試劑，其分析性能應(yīng)與待測物質(zhì)具有相同或相似。使用的溶劑應(yīng)與樣品溶液相同或相似。配制后，要朔源到國家標準物質(zhì)。 共六十六頁測定方法的選擇(xunz) 要選用國家頒布的標準方法或統(tǒng)一的檢測方法。 無標準方法或統(tǒng)一方法時，可選用國內(nèi)外公認的檢測方法，但應(yīng)經(jīng)過驗證。要求此方法不受樣品中共存物的干擾，準確度、精密度和檢出限能滿足檢測的要求，并將操作規(guī)范化。 需要研制(ynzh)新方法時，必需按“研究規(guī)范”和“采樣規(guī)范”中規(guī)定的要求進行研究和驗證，并將操作規(guī)范比。 共六十六頁樣品(yngpn)的預(yù)處理 在測定過程(guchng)中，應(yīng)盡量避免或減少樣品預(yù)處理操作；必須處理時，

19、應(yīng)盡量減少操作步驟和試劑用量。 共六十六頁樣品(yngpn)測定 （1）在每批樣品測定(cdng)的同時至少要帶2個試劑空白。 空白值應(yīng)小于所用測定方法檢出限的1/2，其相對偏差應(yīng)符合下表中的數(shù)值。 共六十六頁檢測結(jié)果的濃度范圍（G/L，mg/g） 101 102 103104105106107最大容許相對偏差（） 12.5510203050共六十六頁（2）在測定樣品前，必須檢測12個質(zhì)控樣或標準物質(zhì)，測定結(jié)果滿足質(zhì)控要求后，才可開始(kish)測定樣品，測定結(jié)果才能有效。 共六十六頁（3）使用實驗室自制質(zhì)控樣測定時，用其均值質(zhì)控圖實施質(zhì)量控制。方法是：結(jié)合日常測定，按樣品測定操作步驟測定質(zhì)控

20、樣，至少積累20個測定數(shù)據(jù)，計算均值x 和標準差SD。 以測定次序(cx)或日期或時間為橫坐標，測定結(jié)果為縱坐標，平行于橫坐標x，x 2SD為上下警告線，x 3SD為上下控制線。 共六十六頁 將每次測定質(zhì)控樣的結(jié)果按測定次序或日期或時間點在質(zhì)控圖上，進行評價： 測定結(jié)果在警告線以內(nèi)，表示測定過程和儀器設(shè)備正常，滿足質(zhì)控要求。 測定結(jié)果雖在警告線之內(nèi)，但連續(xù)(linx)七次偏于均值的一邊，應(yīng)找出系統(tǒng)誤差的來源，加以改進。 共六十六頁測定結(jié)果在警告線以外控制線以內(nèi)，表示可以測定樣品，測定結(jié)果可以接受，但必須(bx)找出誤差來源，加以改正。測定結(jié)果超出控制線，必須立即停止測定，檢查誤差來源，采取改正措施，并作記錄后，重測質(zhì)控樣，直到測定結(jié)果回到控制線以內(nèi)，才能測定樣品。共六十六頁無質(zhì)控樣的測定(cdng)在測定樣品之前或同時用加標回收率和平行樣品進行質(zhì)量控制。群體樣品隨機取1020個樣品；個體樣品全部進行。 方法：從同一個樣品中取出數(shù)量相同的三份子樣，一份加入(jir