腫瘤的免疫診斷及治療課件

1、大家好腫瘤的免疫診斷腫瘤的免疫診斷：通過(guò)生化和免疫學(xué)技術(shù)檢測(cè)腫瘤抗原、抗腫瘤抗體或其他腫瘤標(biāo)記物。腫瘤的免疫診斷包括三個(gè)方面：檢查腫瘤標(biāo)記物質(zhì)檢查特異性抗體檢查細(xì)胞免疫狀態(tài)腫瘤標(biāo)志物的定義： 腫瘤標(biāo)志物（tumor marker, TM）是指在腫瘤的發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞本身所產(chǎn)生的或者是由機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生的，反映腫瘤存在和生長(zhǎng)的一類物質(zhì)。一般可以從血或尿中檢測(cè)。常見的標(biāo)記物質(zhì)有：肝癌的甲胎蛋白（AFP）結(jié)腸癌的癌胚抗原（CEA）胰腺癌的糖鏈抗原（CA199）前列腺癌的前列腺特異性抗原（PSA）甲胎蛋白（AFP） 是胎兒早期血清中主要的蛋白質(zhì)。分泌型胚胎抗原，主要由胎肝和卵黃囊產(chǎn)

2、生的糖蛋白。當(dāng)肝細(xì)胞或生殖腺胚胎組織發(fā)生惡性病變時(shí)，AFP含量升高. AFP的檢測(cè): EIA 和RIA ；正常成人20 g/L 成人血清AFP升高見于： 原發(fā)性肝癌（80-90 %）可在癥狀出現(xiàn)前6-12個(gè)月作出診斷 非轉(zhuǎn)移性肝癌及肝外腫瘤，生殖腺胚胎癌、胃癌或胰腺癌 非腫瘤性疾??；先天性膽道閉鎖癥，急性肝炎，肝硬化等 孕婦血清AFP增高癌胚抗原（ CEA）主要存在于胎兒消化道上皮組織、胰臟和肝臟。正常情況下CEA入胃腸道，而腫瘤細(xì)胞分泌的CEA則進(jìn)入血液和淋巴液，故血中CEA含量會(huì)增高。 CEA的檢測(cè)： EIA 、RIA 參考值 5g/L （97%健康人低于此值） 血清CEA升高見于： 消化

3、道惡性腫瘤：整個(gè)胃腸道惡性腫瘤均可增高。 非消化道惡性腫瘤：如卵巢癌、肺癌有不同程度升高。 檢測(cè)胸、腹水或胃液的CEA含量對(duì)鑒別診斷有意義。 CEA與其它腫瘤標(biāo)志物結(jié)合測(cè)定可以提高對(duì)癌癥的檢出率。糖鏈抗原（CA199）（CA19-9）在消化道腺癌病人血清中的濃度可明顯升高，是胰腺癌和膽管癌的腫瘤標(biāo)志物。 參考值 ELISA法 03.7 ku /L（1）胰腺癌(80%95%)、肝癌、膽管癌、胃癌時(shí)CA19-9 可明顯升高。 （2）急性胰腺炎、膽汁淤積性膽管炎、膽石癥、急性肝炎、 肝硬化 等CA19-9有不同程度升高。（3） CA19-9、 CA50與CEA聯(lián)合檢測(cè)可提高陽(yáng)性檢出率 前列腺特異性抗

4、原(PSA) 血清PSA 分子形式：復(fù)合型PSA (t-PSA) 參考值 4.0 g /L F/T比值0.25游離型PSA (f-PSA) 參考值 1.0 g /L （PSA）是一種僅由前列腺上皮細(xì)胞分泌的糖蛋白，當(dāng)正常腺管結(jié)構(gòu)遭到良性、惡性腫瘤或炎癥的破壞時(shí)，其血漿中PSA水平升高。正常人血清中PSA4g /L判斷陽(yáng)性，則陽(yáng)性率可達(dá)50%-80%。t-PSA血清濃度和陽(yáng)性率隨著病程的進(jìn)展而增高，因此，PSA可作為監(jiān)測(cè)前列腺癌病情變化和療效的重要指標(biāo)。（2）前列腺肥大、前列腺炎，也可見t-PSA和f-PSA水平輕度升高，必須結(jié)合其它檢查進(jìn)行鑒別。（3）單獨(dú)使用t-PSA和f-PSA升高來(lái)診斷前

5、列腺癌時(shí)很難排除前列腺增生癥，特別是當(dāng)t-PSA在5 g /L-10 g /L時(shí)。此時(shí)應(yīng)用t-PSA和f-PSA來(lái)判斷。t-PSA/f-PSA25%時(shí)提示前列腺增生癥。其特異性達(dá)90%, 正確率80%。 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA ）（Enzyme linked lmmunosorbent Aassay） 【原理】把抗原抗體的免疫反應(yīng)和酶（主要有辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等）的高效催化作用有機(jī)地結(jié)合起來(lái)，并仍保持其免疫和酶的活性。結(jié)合在抗原抗體復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)的底物時(shí)，可以催化底物水解、氧化或還原，從而產(chǎn)生有色的物質(zhì)。顏色反應(yīng)的深淺與抗體或抗原的量成正比。 【方法】主要有間接法和雙抗體

6、夾心法放射免疫指導(dǎo)外科（ RIGS ）radioimmunoguided surgery腫瘤外科手術(shù)有些難以確定腫瘤的浸潤(rùn)的深度，具體邊緣及隱藏的部分。RIGS 恰好能解決上述難題。該方法是將放射性核素如131I與特異性抗腫瘤單抗結(jié)合后，從靜脈或腔內(nèi)注入體內(nèi)可將放射性核素導(dǎo)向腫瘤的所在部位，顯示清晰的腫瘤影像，此種放射免疫顯像法是一種有較好應(yīng)用前景的腫瘤診斷技術(shù)。 腫瘤的免疫學(xué)治療腫瘤的免疫學(xué)治療1 主動(dòng)免疫治療 給機(jī)體輸入具有抗原性的瘤苗，刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗腫瘤免疫以達(dá)到治療腫瘤、預(yù)防腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的目的 。2 被動(dòng)免疫治療 給機(jī)體輸入外源性的免疫效應(yīng)物質(zhì)，使其在宿主體內(nèi)發(fā)揮抗腫瘤作用。

7、3細(xì)胞因子治療4 腫瘤的基因治療 一 主動(dòng)免疫治療腫瘤的特異性主動(dòng)免疫治療(ASI)是指利用腫瘤細(xì)胞或腫瘤抗原物質(zhì)誘導(dǎo)機(jī)體的特異性細(xì)胞免疫和體液免疫，增強(qiáng)機(jī)體的抗瘤能力，阻止腫瘤的生長(zhǎng)擴(kuò)散和復(fù)發(fā)以治療腫瘤的方法。（一）細(xì)胞疫苗 1 基因修飾的腫瘤細(xì)胞 細(xì)胞因子的基因或MHCI分子的基因等轉(zhuǎn)移入腫瘤細(xì)胞，降低致瘤性，增強(qiáng)免疫原性。 2 基因修飾的樹突狀細(xì)胞（DC） （二）分子疫苗腫瘤抗原疫苗包括TAA/TSA疫苗、MHC抗原多肽復(fù)合疫苗、HSP-肽復(fù)合體疫苗，以及人工合成腫瘤肽疫苗等。熱休克蛋白(HSP)是在生物進(jìn)化中高度保守、廣泛分布的蛋白質(zhì)，具有“分子伴侶”(molecule chapero

8、ne)作用，參與多種胞內(nèi)蛋白的折疊、裝配及轉(zhuǎn)運(yùn)。從腫瘤組織中提取的HSP-肽復(fù)合體含有多種腫瘤相關(guān)肽，可誘導(dǎo)多個(gè)腫瘤特異性CTL克隆，發(fā)揮特異性殺傷作用，而且不受MHC類抗原限制，因此，HSP-肽復(fù)合體疫苗展示一定的應(yīng)用前景。與腫瘤發(fā)生有關(guān)的病毒疫苗病毒疫苗不僅可以預(yù)防病毒性疾病，更重要的可以預(yù)防或治療人類許多與病毒感染密切相關(guān)的腫瘤，如乙型肝炎病毒疫苗。目前，以病毒為載體與其他腫瘤抗原或多肽組成的重組病毒疫苗(如重組痘苗病毒)正在研制和I期臨床試驗(yàn)之中?？躬?dú)特型抗體疫苗抗獨(dú)特型抗體作為抗原的內(nèi)影像，可模擬抗原的結(jié)構(gòu)并代替腫瘤抗原成為疫苗，誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答。制備簡(jiǎn)便，只需以腫瘤

9、特異性單克隆抗體作為免疫原，制備抗體并篩選具有內(nèi)影像作用的抗獨(dú)特型抗體，不需要分離或鑒別腫瘤抗原?？躬?dú)特性疫苗的優(yōu)點(diǎn)在于不含抗原或抗原片段，制備起來(lái)經(jīng)濟(jì)，可大量人工合成?？躬?dú)特性抗體的分子量 小，其免疫原性往往不完全，故需與免疫載體結(jié)合。采用抗 獨(dú)特性抗體疫苗已治療了淋巴瘤、黑色素瘤、結(jié)腸癌、皮膚T 淋巴細(xì)胞瘤、卵巢癌等，其臨床療效有待觀察。一組臨床試驗(yàn) 用抗獨(dú)特型抗體疫苗治療了40例惡性淋巴瘤，15獲完全緩解 、50獲部分緩解，緩解期為6個(gè)月左右?？躬?dú)特型抗體疫苗治 療的主要障礙是腫瘤內(nèi)存在獨(dú)特型陰性的細(xì)胞，因而可逃脫 免疫反應(yīng)的攻擊。 （三）核酸疫苗DNA疫苗是指人工克隆一段編碼腫瘤特異性

10、抗原的DNA，并通過(guò)質(zhì)粒等方式注入機(jī)體，使其在體內(nèi)細(xì)胞中有效表達(dá)蛋白而成為腫瘤特異性抗原。這種抗原模仿了病毒蛋白等內(nèi)源性抗原的遞呈方式，解除了免疫耐受，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答。DNA疫苗雖有許多問題有待研究，但顯示了誘人的前景。 二 被動(dòng)免疫治療1 免疫導(dǎo)向治療2 過(guò)繼免疫療法免疫導(dǎo)向療法將具有細(xì)胞毒作用的殺傷因子與單克隆抗體偶聯(lián)制成“生物導(dǎo)彈”，利用單抗能特異性結(jié)合腫瘤抗原的特性將殺傷因子“導(dǎo)向”腫瘤病灶，殺傷腫瘤細(xì)胞常用的殺傷因子：放射性核素(131I)抗腫瘤藥物氨甲蝶呤臨床用于急性白血病，尤其是急性淋巴細(xì)胞性白血病，絨毛膜上皮癌及惡性葡萄胎等效果較好。對(duì)頭頸部腫瘤、乳腺癌、肺癌

11、及盆腔腫瘤均有一定療效。 阿霉素主要適用于急性白血病，對(duì)急性淋巴細(xì)胞白血病及粒細(xì)胞白血病均有效，一般作為第二線藥物，即在首選藥物耐藥時(shí)可考慮應(yīng)用此藥。惡性淋巴瘤，可作為交替使用的首先藥物。乳腺癌、肉瘤、肺癌、膀胱癌等其他各種癌癥都有一定療效，多與其他抗癌藥聯(lián)合使用。 毒素蓖麻毒素由A、B兩條鏈組成。A鏈比B鏈稍短，兩鏈之間以一個(gè)二硫鍵相連接。當(dāng)毒素進(jìn)入體內(nèi)，A、B鏈分開。A鏈通過(guò)滲透經(jīng)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞漿，主要使真核細(xì)胞的核糖體抑制失活，從而抑制蛋白質(zhì)的合成。B鏈與細(xì)胞表面結(jié)合，通過(guò)內(nèi)陷作用轉(zhuǎn)入細(xì)胞內(nèi)，它能促使A鏈進(jìn)入胞漿。主要通過(guò)抑制蛋白質(zhì)合成來(lái)殺傷癌細(xì)胞 白喉毒素綠膿桿菌外毒素其中放射性核素應(yīng)

12、用方便、標(biāo)記簡(jiǎn)便，易顯像及定位定量檢測(cè)，并能破壞鄰近未被單抗結(jié)合的腫瘤細(xì)胞，因此應(yīng)用最多。二 被動(dòng)免疫治療將自身或異體抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞或其前體細(xì)胞在體外進(jìn)行誘導(dǎo)、激活和擴(kuò)增，然后轉(zhuǎn)輸給腫瘤患者，提高患者抗腫瘤免疫力，以達(dá)到治療和預(yù)防復(fù)發(fā)的目的常見的免疫效應(yīng)細(xì)胞有LAK、TIL、CD3AK、CTL2.過(guò)繼免疫療法LAK（lymphokine activated killer）用高濃度IL-2激活來(lái)自患者自體或正常供者的外周血單個(gè)核細(xì)胞，能夠殺傷NK不敏感腫瘤細(xì)胞 TIL（tumor infiltrating lymphocytes）從切除的瘤組織或癌性胸腹水中分離淋巴細(xì)胞，體外經(jīng)IL-2誘導(dǎo)激活擴(kuò)

13、增。TIL已應(yīng)用于臨床，主要治療皮膚、腎、肺、頭頸部、肝、卵巢部位的原發(fā)或繼發(fā)腫瘤。 CD3AK（CD3 antibody activated killer）抗CD3單抗輔以小劑量IL-2激活外周血單個(gè)核細(xì)胞。CD3AK細(xì)胞在體內(nèi)、外均有較強(qiáng)的抗瘤活性，目前已有報(bào)道在臨床應(yīng)用CD3AK細(xì)胞治療腎癌、黑色素瘤并取得一定的療效。但是由于腫瘤病人一般狀況較差，故從腫瘤病人身上大量抽取外周血誘導(dǎo)CD3AK細(xì)胞用于治療較為困難，采用健康成人外周血誘導(dǎo)CD3AK細(xì)胞經(jīng)體外激活擴(kuò)增后輸給腫瘤病人則是較為可行的治療方法。CTL用特異性多肽抗原體外誘導(dǎo)CTL克隆三 細(xì)胞因子療法將某些細(xì)胞因子注射體內(nèi)后，可調(diào)節(jié)、

14、增強(qiáng)一種或多種免疫細(xì)胞的活性，發(fā)揮更強(qiáng)的抗腫瘤免疫功能目前臨床常用的細(xì)胞因子有IL-2、TNF-、IFN-、CSF等增加MHC-I分子的表達(dá)緩解毛細(xì)胞白血病, 對(duì)癌癥有弱的效應(yīng)IFN-, IFN-IFN-增加MHC-I分子的表達(dá), 激活Tc 和 NK 細(xì)胞緩解卵巢癌IL-2使T細(xì)胞活化和增殖, 激活NK細(xì)胞緩解腎細(xì)胞癌和黑色素瘤TNF- 激活巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞減少惡性腹水細(xì)胞因子用于免疫治療四 基因療法克隆某些可用于腫瘤治療的目的基因，體外轉(zhuǎn)染受體細(xì)胞，然后回輸體內(nèi)直接將目的基因體內(nèi)注射，使目的基因在體內(nèi)有效表達(dá)增強(qiáng)體內(nèi)抗腫瘤作用或改善腫瘤微環(huán)境以增強(qiáng)抗腫瘤免疫力目前常用的抗腫瘤目的基因細(xì)胞因

15、子基因IL-212、IFN-、TNF-、CSF等基因腫瘤抗原基因MAGE、CEA等基因MHC基因協(xié)同刺激分子基因CD54、LFA-3等基因腫瘤自殺基因TK、CD基因等抑癌基因RB基因、p53基因等非特異性免疫治療是指應(yīng)用一些免疫調(diào)節(jié)劑通過(guò)非特異性地增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，激活機(jī)體的抗腫瘤免疫應(yīng)答，以達(dá)到治療腫瘤的目的。晚期腫瘤病人大多伴有免疫功能紊亂，在手術(shù)切除腫瘤后，使用免疫增強(qiáng)藥物有利于調(diào)整機(jī)體的免疫功能，提高機(jī)體抗腫瘤作用，減少腫瘤的復(fù)發(fā)。在腫瘤放療和化療以后，機(jī)體免疫功能受到明顯損害，使用免疫增強(qiáng)藥物可以促進(jìn)機(jī)體免疫功能的恢復(fù)。目前在腫瘤治療中應(yīng)用較多的如卡介苗，短小棒狀桿菌，酵母多糖，香菇多糖，OK432以及一些細(xì)胞因子如IL-2等均屬于此類。對(duì)病原體所致腫瘤的預(yù)防HBV或HCV感染與原