微生物遺傳和菌種選育新

1、關(guān)于微生物遺傳與菌種選育新第一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月遺傳（heredity inheritance） ：親代與子代相似變異（variation） ：親代與子代、子代間不同個(gè)體不完全相同遺傳（inheritance）和變異（variation）是生命的最本質(zhì)特性之一第二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（1）遺傳型（genotype）生物的全部遺傳因子及基因 又稱(chēng)基因型，指某一生物個(gè)體所含有的全部遺傳因子即基因組（genome）所攜帶的遺傳信息。遺傳型是一種內(nèi)在可能性或潛力，其實(shí)質(zhì)是遺傳物質(zhì)上所負(fù)載的 特定遺傳信息第三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年

2、6月（2）表型（phenotype）具有一定遺傳型的個(gè)體，在特定環(huán)境條件下通過(guò)生長(zhǎng)發(fā)育所表現(xiàn)出來(lái)的形態(tài)等生物學(xué)特征的總和。 又稱(chēng) 表現(xiàn)型，指某一生物體所具有的一切外表特征和內(nèi)在特性的總和，是其遺傳型在合適環(huán)境下通過(guò)代謝和發(fā)育而得到的具體表現(xiàn)。 第四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月表型是由遺傳型所決定，但也和環(huán)境有關(guān)。第五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）變異遺傳型變異（基因變異、基因突變）：指生物體在某種外因或內(nèi)因的作用下所引起的遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)或數(shù)量的改變，亦即遺傳型的改變。遺傳物質(zhì)改變，導(dǎo)致表型改變特點(diǎn)：遺傳性、群體中極少數(shù)個(gè)體的行為（自發(fā)突變頻率通常為10-5

3、-10-10）第六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月表型飾變：指不涉及遺傳物質(zhì)結(jié)構(gòu)改變而只發(fā)生在轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)譯水平上的表型變化。表型的差異只與環(huán)境有關(guān)特點(diǎn)：暫時(shí)性、不可遺傳性、表現(xiàn)為全部個(gè)體的行為橘生淮南則為橘，生于淮北則為枳。（4）飾變（modification）第七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月表 型 飾 變：表型的差異只與環(huán)境有關(guān)暫時(shí)性、不可遺傳性、表現(xiàn)為全部個(gè)體的行為例如：粘質(zhì)沙雷氏菌：25下培養(yǎng)，產(chǎn)生深紅色的靈桿菌素；37下培養(yǎng)，不產(chǎn)生色素； 重新將溫度降25，又恢復(fù)產(chǎn)色素的能力。斜面培養(yǎng)液體培養(yǎng)第八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月微生物是遺傳學(xué)

4、研究中的明星： 微生物細(xì)胞結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，營(yíng)養(yǎng)體一般為單倍體，方便建立純系 很多常見(jiàn)微生物都易于人工培養(yǎng)，快速、大量生長(zhǎng)繁殖。 對(duì)環(huán)境因素的作用敏感，易于獲得各類(lèi)突變株，操作性強(qiáng)。第九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)種質(zhì)連續(xù)理論：18831889年間Weissmann提出。認(rèn)為遺傳物質(zhì)是一種具有特定分子結(jié)構(gòu)的化合物。F Crick在研究DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)第十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月基因?qū)W說(shuō)：1933年摩爾根（Thomas Hunt Morgan）發(fā)現(xiàn)了染色體，并證明基因在染色體上呈直線(xiàn)排列，提出了基因?qū)W說(shuō)，使得遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)的范圍縮小到染色體

5、上。DNA是遺傳變異的物質(zhì)基礎(chǔ)的證明：1944年以后，先后有利用微生物為實(shí)驗(yàn)對(duì)象進(jìn)行的三個(gè)著名實(shí)驗(yàn)肺炎球菌的轉(zhuǎn)化試驗(yàn)噬菌體感染試驗(yàn)病毒的拆開(kāi)與重建試驗(yàn) 人們普遍接受核酸才是真正的遺傳物質(zhì)。第十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 一、3個(gè)經(jīng)典實(shí)驗(yàn) （一）經(jīng)典轉(zhuǎn)化試驗(yàn) 最早進(jìn)行 轉(zhuǎn)化（transformation）實(shí)驗(yàn)的是F. Griffith（1928年），他以Streptococcus pneumoniae（肺炎鏈球菌，舊稱(chēng)“肺炎雙球菌”）作為研究對(duì)象。第十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月光滑型（S）粗糙型（R）有 莢 膜菌落光滑分泌毒素致 病無(wú) 莢 膜菌落粗糙無(wú)

6、 毒不 致 病實(shí)驗(yàn)材料： 肺炎雙球菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)第十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月說(shuō)明：加熱殺死的 S 型細(xì)菌中有一種具有遺傳轉(zhuǎn)化能力的物質(zhì)，它通過(guò)某種方式進(jìn)入 R 型細(xì)胞，并使 R 型細(xì)菌獲得表達(dá) S 型莢膜形狀的遺傳特性1928年Griffith進(jìn)行的細(xì)菌轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)（1）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)第十四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn)第十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）S型菌的無(wú)細(xì)胞抽提液試驗(yàn)第十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月Avery在四十年代以更精密的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)重復(fù)了以上實(shí)驗(yàn)第十七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年

7、6月（1）從活的S菌中抽提各種細(xì)胞成分（DNA，蛋白質(zhì)，莢膜多糖等）（2）對(duì)各組分進(jìn)行轉(zhuǎn)化試驗(yàn)只有S型細(xì)菌的DNA才能將S. pneumoniae的R型轉(zhuǎn)化為S型且DNA純度越高，轉(zhuǎn)化效率也越高。說(shuō)明：S型菌株轉(zhuǎn)移給R型菌株的DNA是遺傳因子。第十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 1952年，A.D.Hershey和M.Chase發(fā)表了證明DNA是噬菌體的遺傳物質(zhì)基礎(chǔ)的著名實(shí)驗(yàn) 噬菌體感染實(shí)驗(yàn)（二）噬菌體感染實(shí)驗(yàn) （p188）第二十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月蛋白質(zhì) 只含S不含PDNA只含P不含S原理步驟1：

8、用含同位素35, P32的培養(yǎng)基分別培養(yǎng)大腸桿菌2：讓T2感染上述大腸桿菌使其打上S35 、P32標(biāo)記第二十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月第二十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月35S蛋白質(zhì)外殼的噬菌體32PDNA核心的噬菌體第二十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月在DNA中存在著包括合成蛋白質(zhì)外殼在內(nèi)的整套遺傳信息。第二十四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）噬菌體感染實(shí)驗(yàn)A. D. Hershey和M. Chase， 1952年（1）含32P-DNA的一組：放射性85%在沉淀中10分鐘后用搗碎器使空殼脫離吸附離心沉淀細(xì)胞進(jìn)一步培

9、養(yǎng)后，可產(chǎn)生大量完整的子代噬菌體上清液中含15%放射性沉淀中含85%放射性第二十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月沉淀中含25%放射性以35S標(biāo)記蛋白質(zhì)外殼做噬菌體感染實(shí)驗(yàn)（2）含35S-蛋白質(zhì)的一組：放射性75%在上清液中10分鐘后用搗碎器使空殼脫離吸附離心沉淀細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)后，可產(chǎn)生大量完整的子代噬菌體上清液中含75%放射性第二十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 為了證明核酸是遺傳物質(zhì)，H. Fraenkel-Conrat（1956）用含RNA的 煙草花葉病毒（TMV）進(jìn)行了著名的 植物病毒重建實(shí)驗(yàn)。（三）植物病毒的重建實(shí)驗(yàn) （p189）第二十七張，PPT共一

10、百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 植物病毒蛋白質(zhì)和RNA可以人為地分開(kāi),同時(shí)又可把它們重新組合成具感染性的病毒.植物病毒的重建實(shí)驗(yàn) 甲乙r 感染癥狀同甲病毒；分離得到甲病毒 乙甲r 感染癥狀同乙病毒；分離得到乙病毒 第二十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月TMVHRVHRVTMV原始株 拆 開(kāi) 重 建 感 染 分離純化 植物病毒的重建實(shí)驗(yàn) 第二十九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月遺傳物質(zhì)類(lèi)型核染色體核外染色體真核生物細(xì)胞器原核生物質(zhì)粒二、遺傳物質(zhì)在微生物細(xì)胞內(nèi)的存在部位和方式第三十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月核外DNA的種類(lèi)核外染色體真核生物的“質(zhì)

11、?！痹松锏馁|(zhì)粒線(xiàn)粒體細(xì)胞質(zhì)基因葉綠體中心體動(dòng) 體共生生物：卡巴顆粒酵母菌的2m質(zhì)粒F因子R因子Col質(zhì)粒Ti質(zhì)粒巨大質(zhì)粒降解性質(zhì)粒第三十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）核酸存在的 7 個(gè)水平細(xì)胞水平：存在于細(xì)胞核或核質(zhì)體，單核或多核細(xì)胞核水平: 原核與真核生物的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)不同，核外 DNA染色體水平: 倍性 ( 真核 ) 和染色體數(shù)核酸水平：在原核中同染色體水平、存在部分二倍體 DNA或RNA，復(fù)合或裸露，雙鏈或單鏈基因水平：具自主復(fù)制能力的遺傳功能單位，長(zhǎng)度與信 息量，轉(zhuǎn)錄翻譯密碼子水平：信息單位, 起始和終止,核苷酸水平：突變或交換單位，四種堿基第三十二張，PPT

12、共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二)原核生物的質(zhì)粒 （p194）功能：帶有一些基因，如產(chǎn)生毒素、抗藥性、固氮、產(chǎn)生酶類(lèi)、降解功能等，并可進(jìn)行細(xì)胞間轉(zhuǎn)移。結(jié)構(gòu)與大?。嘿|(zhì)粒通常以共價(jià)閉合環(huán)狀的超螺旋雙鏈DNA分子狀態(tài)存在于細(xì)胞中。約為11000kb，上面攜帶有數(shù)個(gè)到數(shù)十個(gè)甚至上百個(gè)基因。定義：存在于細(xì)菌、真菌等微生物細(xì)胞中，獨(dú)立于染色體外，能進(jìn)行自主復(fù)制的遺傳因子。第三十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月質(zhì)粒 核外環(huán)狀小型DNA獨(dú)立復(fù)制穩(wěn)定遺傳F因子 與有性接合有關(guān)種類(lèi) R因子 與抗藥性有關(guān)COL 編碼免疫蛋白Ti質(zhì)粒 誘癌質(zhì)粒降解性質(zhì)粒：編碼降解有害物質(zhì)的酶用途 基因工程中作

13、為目的基因載體質(zhì)粒原核生物遺傳物質(zhì)存在的另一種方式第三十四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月基 因 突 變突變與育種第二節(jié) 基因突變和誘變育種第三十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、基因突變（gene mutation）一個(gè)基因內(nèi)部遺傳結(jié)構(gòu)或DNA序列的任何改變 簡(jiǎn)稱(chēng) 突變，是變異的一種，泛指細(xì)胞內(nèi)（或病毒粒內(nèi)）遺傳物質(zhì)的 分子結(jié)構(gòu) 或 數(shù)量 突然發(fā)生的可遺傳的變化，可自發(fā)或誘導(dǎo)產(chǎn)生。突變幾率一般很低（10-610-9）第三十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月從自然界分離到的菌株，簡(jiǎn)稱(chēng) 野生型。 野生型經(jīng)突變后形成的帶有新性狀的菌株，又稱(chēng)突變體 或

14、突變型。突變株（mutant）野生型菌株（wild type strain）第三十七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（一）突變類(lèi)型 凡能用選擇性培養(yǎng)基（或其他選擇性培養(yǎng)條件）快速選擇出來(lái)的突變株。選擇性突變株（selective mutant）非選擇性突變株（non-selective mutant）反之。第三十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月突變株的表型非選擇性突變株選擇性突變株抗性突變型（株）營(yíng)養(yǎng)缺陷型（株）條件致死突變型（株）形態(tài)突變型（株）抗原突變型（株）產(chǎn)量突變型（株）第三十九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1. 營(yíng)養(yǎng)缺陷型（auxotro

15、ph） 某一野生型菌株因發(fā)生基因突變而喪失合成一種或幾種生長(zhǎng)因子、堿基或氨基酸的能力，只有從周?chē)h(huán)境或培養(yǎng)基中獲得這些營(yíng)養(yǎng)或其前體物（precursor）才能正常生長(zhǎng)繁殖的變異類(lèi)型，稱(chēng)為營(yíng)養(yǎng)缺陷型。第四十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月?tīng)I(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株在遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳育種和遺傳工程等研究中十分重要表型判斷的標(biāo)準(zhǔn)：在基本培養(yǎng)基上能否生長(zhǎng)第四十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月?tīng)I(yíng)養(yǎng)缺陷型的表示方法：基因型：所需營(yíng)養(yǎng)物的前三個(gè)英文小寫(xiě)斜體字母表示：hisC（組氨酸缺陷型，其中的大寫(xiě)字母C同一表型中不同基因的突變）表型：同上，但第一個(gè)字母大寫(xiě)，且不用斜體：HisC

16、第四十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月hisC缺陷型hisC野生型第四十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2. 抗性突變型（resistant mutant） 指野生型菌株因發(fā)生基因突變，使菌株對(duì)對(duì)某化學(xué)藥物或致死物理因子，特別是抗生素，產(chǎn)生抗性的 抗性變異類(lèi)型。第四十四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月特 點(diǎn)：正選擇標(biāo)記（突變株可直接從抗性平板上獲得在加有相應(yīng)抗生素的平板上，只有抗性突變能生長(zhǎng)。所以很容易分離得到。）第四十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月表示方法：所抗藥物的前三個(gè)小寫(xiě)斜體英文字母加上“r”表示。strr對(duì)鏈霉素的抗性s

17、trs對(duì)鏈霉素的敏感性第四十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月抗性突變菌株在遺傳學(xué)、分子生物學(xué)、遺傳育種和遺傳工程等研究中極為重要第四十七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3. 條件致死突變型（conditional lethal mutant） 某菌株或病毒經(jīng)基因突變后，在某種條件下可 正常地生長(zhǎng)、繁殖并呈現(xiàn)其固有的表型，而在另一種條件下卻 無(wú)法 生長(zhǎng)、繁殖，這種突變類(lèi)型稱(chēng)為條件致死突變型。第四十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月在25下可感染其E. coli宿主在37卻不能感染Ts突變株 即 溫度敏感突變株（temperature sensitive

18、 mutant，Ts mutant）是一類(lèi)典型的條件致死突變株。E. coli的某些菌株在37下正常生長(zhǎng)不能在42下生長(zhǎng)某些T4噬菌體突變株第四十九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月產(chǎn)生Ts突變的原因在某特定的溫度下具有功能在另一溫度（一般為較高溫度）下則無(wú)功能突變使某些重要蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生改變，第五十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月4. 形態(tài)突變型（morphological mutant）指由于突變而引起的個(gè)體或菌落形態(tài)的 非選擇性變異。個(gè)體變異孢子有無(wú)、孢子顏色、鞭毛有無(wú)或莢膜有無(wú)等的突變菌落變異菌落表面光滑、粗糙、噬菌斑的大小或清晰度等的突變第五十一張，

19、PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月特點(diǎn)：非選擇性突變突變株和野生型菌株均可生長(zhǎng)，但可從形態(tài)特征上進(jìn)行區(qū)分。第五十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月舉例：菌落顏色變化半乳糖苷酶基因的插入失活重組子菌落白色非重組子菌落蘭色第五十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月5. 抗原突變型（antigenic mutant） 指由于基因突變引起的細(xì)胞抗原結(jié)構(gòu)發(fā)生的變異類(lèi)型，一般也屬 非選擇性突變。例如，細(xì)胞壁缺陷變異（L型細(xì)菌等）、 莢膜或鞭毛成分變異等。第五十四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月6. 產(chǎn)量突變型（metabolite quantitative

20、mutant） 通過(guò)基因突變而產(chǎn)生的在代謝產(chǎn)物產(chǎn)量上明顯有別于原始菌株的突變株，稱(chēng)為 產(chǎn)量突變型?！罢冎辍保╬lus-mutant）產(chǎn)量 高于 原始菌株“負(fù)變株”（minus-mutant）產(chǎn)量 低于 原始菌株第五十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月篩選高產(chǎn)正變株的工作對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐極其重要在育種實(shí)踐上誘變育種重組育種遺傳工程育種第五十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月突變率每一細(xì)胞在每一世代中發(fā)生某一性狀突變的幾率例如，突變率為10-8的，指該細(xì)胞在1億次細(xì)胞分裂中，會(huì)發(fā)生1次突變。某一單位群體在每一世代（即分裂1次）中產(chǎn)生突變株（mutant，即突變型）的數(shù)目來(lái)表

21、示例如，一個(gè)含108個(gè)細(xì)胞的群體，當(dāng)其分裂為2108個(gè)細(xì)胞時(shí)，即可平均發(fā)生一次突變的突變率也是10-8。（二）突變率（mutation rate）第五十七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月基因突變的 7 個(gè)共同點(diǎn)（1）自發(fā)性各種性狀的突變，可在無(wú)人為的誘變因素處理下自發(fā)地產(chǎn)生。（三)基因突變的特點(diǎn) （p200）第五十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）非對(duì)應(yīng)性突變的性狀與引起突變的原因間無(wú)直接的對(duì)應(yīng)關(guān)系。這是突變的一個(gè)重要特點(diǎn)，也是容易引起爭(zhēng)論的問(wèn)題（3）稀有性自發(fā)突變雖可隨時(shí)發(fā)生，但其突變率卻是極低和穩(wěn)定的，一般在10-610-9間。第五十九張，PPT共一百四十

22、一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月某基因的突變率不受它種基因突變率的影響。（5）可誘變性自發(fā)突變的頻率可因 誘變劑（mutagen）的影響而大為提高（10105倍）。（4）獨(dú)立性第六十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月基因突變后的新遺傳性狀是穩(wěn)定的、可遺傳的。野生型菌株某一性狀可發(fā)生 正向突變（forward mutation），也可發(fā)生相反的 回復(fù)突變（reverse mutation或back mutation ，也稱(chēng)回變）。（7）可逆性（6）穩(wěn)定性第六十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月誘發(fā)突變 簡(jiǎn)稱(chēng) 誘變，是指通過(guò)人為的方法，利用物理、化學(xué)或生物因素顯著提高基因自發(fā)突

23、變頻率的手段1.誘發(fā)突變（induced mutation）凡具有誘變效應(yīng)的任何因素，都稱(chēng) 誘變劑（mutagen）。（五）基因突變及機(jī)制 p202第六十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月誘變機(jī)制 移碼突變 染色體畸變 堿基的置換 第六十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（1）堿基的置換 直接引起置換的誘變劑HNO2CNH2腺嘌呤CO次黃嘌呤(Hk)A.THe.THk. THk. CA.THk. CG. CCOH次黃嘌呤(He)第六十四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月間接引起置換的誘變劑堿基的置換 COHT：烯醇式CT ： 酮式OA.TT. AG. C

24、A.T酮式T. G烯醇式第六十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）移碼突變 分子中缺失或增加少數(shù)幾個(gè)堿基對(duì)而引起造成突變點(diǎn)以后全部遺傳密碼轉(zhuǎn)錄與轉(zhuǎn)釋發(fā)生錯(cuò)誤ABCABCABCABCABCABCABCABCAB+ABCABCCBACBACBACBACBAABCBCABCABCABCABCABCABCA增添一個(gè)堿基缺少一個(gè)堿基第六十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3)染色體畸變 某些理化因子，如射線(xiàn)，紫外線(xiàn)， 亞硝酸等，除能引起點(diǎn)突變外，還會(huì)引起DNA分子大損傷，包括染色體易位，倒位，缺失，重復(fù)等，即為染色體畸變。 第六十七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于202

25、2年6月2.自發(fā)突變（spontaneous mutation）(p206)自發(fā)突變（spontaneous mutation）是指生物體在無(wú)人工干預(yù)下自然發(fā)生的低頻率突變。第六十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月自發(fā)突變的原因（1）背景輻射和環(huán)境因素（3）DNA復(fù)制過(guò)程中堿基配對(duì)錯(cuò)誤（2）微生物自身有害代謝產(chǎn)物一個(gè)1000bp的基因自發(fā)突變頻率約為10-6例如，過(guò)氧化氫等例如，天然的宇宙射線(xiàn)等第六十九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（六）紫外線(xiàn)對(duì)DNA的損傷及其修復(fù)嘧啶（敏感性）嘌呤紫外線(xiàn)（ultraviolet ray，U.V.）嘧啶二聚體（TT，TC，CC）和

26、水合物第七十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、突變與育種（p208）（一）自發(fā)突變與育種1. 從生產(chǎn)中選育2. 定向培育優(yōu)良品種（二）誘變育種 從青霉素產(chǎn)量看誘變育種誘變育種的基本環(huán)節(jié)誘變育種的原則第七十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（二）誘變育種（breeding by induced mutation） 誘變育種 是指利用物理、化學(xué)等誘變劑處理均勻而分散的微生物細(xì)胞群，在促進(jìn)其突變率顯著提高的基礎(chǔ)上，采用簡(jiǎn)便、快速和高效的 篩選方法，從中挑選出少數(shù)符合育種目的的突變株，以供科學(xué)實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)實(shí)踐使用。第七十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月篩選誘

27、變誘變育種定向的更重要隨機(jī)的第七十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 效價(jià)：指有效成分的濃度。1ug/ul稱(chēng)為1 單位1945時(shí)間1943194319431947195519711977目前發(fā)酵單位(u/ml)10025050085085080002萬(wàn)5萬(wàn)510萬(wàn) 從 青 霉 素 產(chǎn) 量 看 誘 變 育 種第七十四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月可獲得供工業(yè)和實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用的各種菌株；提高有用代謝產(chǎn)物的產(chǎn)量；減少雜質(zhì)、提高產(chǎn)品質(zhì)量、擴(kuò)大品種和簡(jiǎn)化工藝等。誘變育種具有重大的實(shí)踐意義第七十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月1. 誘變育種的基本環(huán)節(jié)（p209）大

28、多死亡少數(shù)存活存活率多數(shù)未變少數(shù)突變突變率多數(shù)負(fù)變少數(shù)正變正變率多數(shù)幅度小少數(shù)幅度大高產(chǎn)率投產(chǎn)率多數(shù)不宜投產(chǎn)少數(shù)適宜投產(chǎn)出發(fā)菌株計(jì)算出誘變第七十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月出發(fā)菌株純化、同步培養(yǎng)培養(yǎng)液離心收集細(xì)胞，洗滌，制菌懸液玻璃珠打散，過(guò)濾細(xì)胞或孢子懸液誘變處理平板分離初篩復(fù)篩保藏及擴(kuò)大試驗(yàn)活菌計(jì)數(shù)，誘變預(yù)備試驗(yàn)存活細(xì)胞計(jì)數(shù)，致死率計(jì)算變異率計(jì)算第七十七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月2. 誘變育種工作中應(yīng)考慮的幾個(gè)原則選優(yōu)良的出發(fā)菌株選擇簡(jiǎn)便有效的誘變劑處理單孢子（或單細(xì)胞）懸液選用最適劑量設(shè)計(jì)或采用高效篩選方案或方法利用復(fù)合處理的協(xié)同效應(yīng)利用和創(chuàng)造形態(tài)

29、，生理與產(chǎn)量間的相關(guān)指標(biāo)第七十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（1）選擇簡(jiǎn)便有效的誘變劑出發(fā)菌株含誘變劑的液體培養(yǎng)基接種培養(yǎng)培養(yǎng)接種分離紫外線(xiàn)選擇優(yōu)良突變株第七十九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月S.t.his回變S.t.his 吸入濾紙片保溫可疑“三致”試樣 鼠肝勻漿（含羥化酶）陽(yáng)性陰性 利用回變檢測(cè)致癌劑 艾姆斯試驗(yàn)法（p210）第八十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 平板上無(wú)大量菌落出現(xiàn)，說(shuō)明樣品不含誘變劑； 有抑制圈出現(xiàn)，并在外圍長(zhǎng)滿(mǎn)大量菌落，說(shuō)明濃度過(guò)高； 在濾紙片周?chē)L(zhǎng)滿(mǎn)菌落說(shuō)明濃度合適。 該法廣泛用于監(jiān)測(cè)食品飲料藥物等試樣中的致 癌物時(shí)

30、間3天，準(zhǔn)確率85%。第八十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）挑選優(yōu)良的出發(fā)菌株 （p211）生產(chǎn)中用過(guò)的自發(fā)變異菌株采用具有有利性狀的菌株采用已發(fā)生其他變異的菌株采用前體或最終產(chǎn)物代謝高的菌株采用增變菌株第八十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）處理單孢子（或單細(xì)胞）懸液芽孢桿菌應(yīng)處理芽孢放線(xiàn)菌，霉菌應(yīng)處理孢子細(xì)菌指數(shù)期，放線(xiàn)菌霉菌要稍加萌發(fā)后使用出發(fā)菌株應(yīng)制成均勻懸夜第八十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（4）選用最適劑量劑量以誘變劑濃度和處理時(shí)間來(lái)表示合適劑量：能擴(kuò)大變異幅度又能促使 變異移向正變范圍的劑量第八十四張，PPT共一百四十

31、一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（5）充分利用復(fù)合處理的協(xié)同效應(yīng)兩種或多種誘變劑先后使用同種誘變劑重復(fù)使用兩種或多種誘變劑同時(shí)使用第八十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（6）利用和創(chuàng)造形態(tài)，生理與產(chǎn)量間的相關(guān)指標(biāo)淀粉酶變色圈試驗(yàn)變色圈大的為淀粉酶高產(chǎn)菌落第八十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月在瓊脂平板上，通過(guò)觀察測(cè)定某突變菌落周?chē)鞍酌杆馊Φ拇笮　⒌矸勖缸兩Γㄓ玫庖菏沟矸埏@色）的大小，氨基酸顯色圈（將菌落用打孔機(jī)取下，轉(zhuǎn)移到濾紙上，再用茚三酮試劑顯色）的大小，檸檬酸變色圈（可在厚濾紙上培養(yǎng)，用溴甲酚綠作指示劑）的大小，抗生素抑制圈的大小，指示菌生長(zhǎng)圈的大小（測(cè)定生

32、長(zhǎng)因子產(chǎn)生），纖維素酶對(duì)纖維素水解圈（用剛果紅染色）的大小，外毒素的沉淀反應(yīng)圈的大小等，均可為初篩工作中估計(jì)某突變株代謝產(chǎn)物量的“形態(tài)”指標(biāo)。第八十七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（7）設(shè)計(jì)或采用高效篩選方案或方法設(shè)計(jì)簡(jiǎn)便、高效的科學(xué)篩選方案。初篩篩選工作復(fù)篩以量為主（選留較多有生產(chǎn)潛力的菌株）以質(zhì)為主（對(duì)少量潛力大的菌株的代謝產(chǎn)物量作精確測(cè)定）第八十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一個(gè)出發(fā)菌株誘變劑處理選出200個(gè)單 孢子菌菌株初篩（每株1瓶）選出50株復(fù)篩（每株4瓶）選出5 株第一輪第二輪五個(gè)出發(fā)菌株初篩（每株1瓶）選出50株復(fù)篩（每株4瓶）選出5 株40株

33、40株40株40株40株誘變劑處理第八十九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月初 篩復(fù) 篩對(duì)產(chǎn)量突變株生產(chǎn)性能的測(cè)定方法粗測(cè)為主在培養(yǎng)皿平板上在搖瓶中（8）創(chuàng)造新型篩選方法較精確的測(cè)定搖瓶培養(yǎng)or臺(tái)式自控發(fā)酵罐培養(yǎng)第九十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月3. 突變株的篩選方法 (p212） 高產(chǎn)突變菌株的篩選方法 抗性突變體的篩選方法 營(yíng)養(yǎng)缺陷型的的篩選方法 與突變株的篩選相關(guān)的幾個(gè)概念第九十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（1）產(chǎn)量突變株的篩選 1971年，國(guó)外有人報(bào)道了篩選春日霉素（kasugamycin，即“春雷霉素”）生產(chǎn)菌時(shí)所采用的一種 瓊脂塊培

34、養(yǎng)法，一年內(nèi)曾使該抗生素產(chǎn)量提高10倍。第九十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 此法的關(guān)鍵是用打孔器取出含有一個(gè)小菌落的瓊脂塊作分別培養(yǎng)。這樣，各瓊脂塊所含養(yǎng)料和接觸空氣面積基本相同，且產(chǎn)生的抗生素等代謝產(chǎn)物不致擴(kuò)散出瓊脂塊外。數(shù)據(jù)精確，效率高第九十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（2）抗藥性突變株的篩選 基因突變使菌株對(duì)某種或某幾種藥物，特別是抗生素，產(chǎn)生抗性。特點(diǎn)：正選擇標(biāo)記（突變株可直接從抗性平板上獲得-在加有相應(yīng)抗生素的平板上，只有抗性突變能生長(zhǎng)。所以很容易分離得到。）第九十四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 梯度平板法（gradient

35、plate）是 定向篩選抗藥性突變株 的一種有效方法，通過(guò)制備瓊脂表面存在藥物濃度梯度的平板、在其上涂布誘變處理后的細(xì)胞懸液、經(jīng)培養(yǎng)后再?gòu)钠渖线x取抗藥性菌落等步驟，就可定向篩選到相應(yīng)抗藥性突變株。第九十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月梯度平板法（gradient plate）是定向篩選抗藥性突變株的一種有效方法。第九十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月表示方法：所抗藥物的前三個(gè)小寫(xiě)斜體英文字母加上“r”。strrstrs對(duì)鏈霉素的抗性敏感性第九十七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月（3）營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株的篩選 營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株（auxotrophic

36、mutant）在生物學(xué)基礎(chǔ)理論和應(yīng)用研究以及生產(chǎn)實(shí)踐上都有極其重要的意義。第九十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月?tīng)I(yíng)養(yǎng)缺陷型的表示方法：基因型：所需營(yíng)養(yǎng)物的前三個(gè)英文小寫(xiě)斜體字母表示：hisC（組氨酸缺陷型，其中的大寫(xiě)字母C同一表型中不同基因的突變）表型：同上，但第一個(gè)字母大寫(xiě)，且不用斜體：HisC在具體使用時(shí)多用hisC-和hisC+，分別表示缺陷型和野生型。第九十九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月a. 基本培養(yǎng)基（MM，符號(hào)為） 與篩選營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株有關(guān)的3類(lèi)培養(yǎng)基 僅能滿(mǎn)足某微生物的野生型菌株生長(zhǎng)所需的最低成分的組合培養(yǎng)基，稱(chēng)MM。第一百?gòu)?，PPT共一百四十

37、一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月b. 完全培養(yǎng)基（complete medium，CM，符號(hào)為） 凡可滿(mǎn)足一切營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株?duì)I養(yǎng)需要的天然或半組合培養(yǎng)基，稱(chēng)為CM。 一般可在基本培養(yǎng)基中加入一些富含氨基酸、維生素、核苷酸和堿基之類(lèi)的天然物質(zhì)，如蛋白胨或酵母膏等配制而成。第一百零一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月c. 補(bǔ)充培養(yǎng)基（supplemental medium，SM，符號(hào)為A或B等） 凡只能滿(mǎn)足相應(yīng)的營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株生長(zhǎng)需要的組合或半組合培養(yǎng)基，稱(chēng)為SM。 在基本培養(yǎng)基上再添加對(duì)某一營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株所不能合成的某相應(yīng)代謝產(chǎn)物所組成，可專(zhuān)門(mén)選擇相應(yīng)的突變株。第一百零二張，PPT共一

38、百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月原養(yǎng)型（prototroph） 與營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變有關(guān)的3類(lèi)遺傳型個(gè)體野生型（wild type，wild strain）營(yíng)養(yǎng)缺陷型（auxotroph）從自然界分離到的原始菌株（AB）經(jīng)誘變劑處理后的突變株（AB）經(jīng)回復(fù)突變或重組后產(chǎn)生的菌株（AB）第一百零三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月?tīng)I(yíng)養(yǎng)缺陷型的篩選辦法 (p215)1. 誘變劑處理2. 淘汰野生型3. 檢出缺陷型夾層培養(yǎng)法限量補(bǔ)充培養(yǎng)法逐個(gè)檢出法影印平板法4. 鑒定缺陷型第一百零四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月基本培養(yǎng)基（MM）-：凡是能滿(mǎn)足野生型菌株?duì)I養(yǎng)要求的最低成分的合

39、成培養(yǎng)基。 完全培養(yǎng)基（CM）+：滿(mǎn)足一切營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株生長(zhǎng)的天然或半合成培養(yǎng)基。 補(bǔ)充培養(yǎng)基（SM）x：在MM中有針對(duì)性地加入一或幾種營(yíng)養(yǎng)成分以滿(mǎn)足相應(yīng)營(yíng)養(yǎng)缺陷型菌株生長(zhǎng)的合成培養(yǎng)基。 與篩選營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株相關(guān)的3類(lèi)培養(yǎng)基第一百零五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月三類(lèi)遺傳型野生型 A+B+營(yíng)養(yǎng)缺陷型型A+B-原養(yǎng)型 A+B+與營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變相關(guān)的3類(lèi)遺傳型個(gè)體 （p215）第一百零六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月夾層培養(yǎng)法 （p216）第一百零七張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月夾層培養(yǎng)法及結(jié)果小菌落是第二次長(zhǎng)起來(lái)的（營(yíng)養(yǎng)缺陷型）第一百零八張，PP

40、T共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月限量補(bǔ)充培養(yǎng)法 微量蛋白質(zhì)的完全培養(yǎng)基上 小菌落是營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變株第一百零九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 逐個(gè)檢出法涂布培養(yǎng)基本培養(yǎng)基上不長(zhǎng)菌落完全培養(yǎng)基上長(zhǎng)出菌落含誘變劑的液體培養(yǎng)基菌種營(yíng)養(yǎng)缺陷型第一百一十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月逐個(gè)檢出法缺陷型的檢出第一百一十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月影印接種法完全培養(yǎng)基影印接種基本培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)缺陷型第一百一十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月生長(zhǎng)譜法方法簡(jiǎn)便； 回變和污染不影響結(jié)果 測(cè)定物質(zhì)可為粉末或紙片補(bǔ)充：缺陷型的鑒定測(cè)定一般應(yīng)分兩階段：第

41、一階段：測(cè)定是哪類(lèi)物質(zhì)的缺陷型；第二節(jié)段：根據(jù)第一階段確定的范圍，進(jìn)一步確定是哪種具體化合物的缺陷型；第一百一十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月組合營(yíng)養(yǎng)物法步驟（以氨基酸缺陷型的鑒定為例）：a. 將多種營(yíng)養(yǎng)因子編組；b. 將組合液的紙片放在涂菌的基本培養(yǎng)基上培養(yǎng)；c. 結(jié)果分析； 一組：1 2 3 4 5 二組：2 6 7 8 9 三組：3 7 10 11 12 四組：4 8 11 13 14 五組：5 9 12 14 15營(yíng)養(yǎng)因子分組編排時(shí)注意；1）每組內(nèi)無(wú)重復(fù)的營(yíng) 養(yǎng)因子 2）每組中應(yīng)包含只出 現(xiàn)一次的因子 3）每組中其他因子應(yīng) 分別出現(xiàn)二次如：第一百一十四張，PPT共一百

42、四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月 一組：1 2 3 4 5 二組：2 6 7 8 9 三組：3 7 10 11 12 四組：4 8 11 13 14 五組：5 9 12 14 15第一百一十五張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月組合補(bǔ)充培養(yǎng)基法將待測(cè)的菌點(diǎn)種到各種補(bǔ)充培養(yǎng)基上，逐個(gè)分析各菌的缺陷類(lèi)型，或快速分離出所需缺陷類(lèi)型的菌株。ABFEDCHG第一百一十六張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月缺陷型的應(yīng)用作為菌株的遺傳標(biāo)記：進(jìn)行基因工程、誘變育種、研究代謝過(guò)程時(shí)用作親本標(biāo)記；作為生產(chǎn)菌種：aa、核苷酸等生產(chǎn)菌種； 作為aa、維生素、堿基的測(cè)定菌株。第一百一十七張，PPT共一

43、百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月一、微生物菌種的衰退二、微生物菌種的復(fù)壯三、微生物菌種的保藏第五節(jié) 微生物菌種的衰退、復(fù)壯和保藏P.231第一百一十八張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月性狀穩(wěn)定的菌種是微生物學(xué)工作最重要的基本要求，否則生產(chǎn)或科研都無(wú)法正常進(jìn)行。第一百一十九張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月衰退的含義：由于自發(fā)突變的結(jié)果，而使某物種原有一系列生物學(xué)性狀發(fā)生量變或質(zhì)變的現(xiàn)象。一 、微生物菌種的衰退 衰退的表現(xiàn)形式 1）原有的形態(tài)不典型 2）生長(zhǎng)速度變慢 3）代謝產(chǎn)物生產(chǎn)能力下降 4）致病力下降 5）抗性下降第一百二十張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年

44、6月（一）衰退的防止方法1）控制傳代的次數(shù) 2）創(chuàng)造良好培養(yǎng)條件 3）采用有效的菌種保藏方法 4）采用不易衰退的細(xì)胞進(jìn)行傳代 P.232第一百二十一張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月復(fù)壯的含義（二） 微生物菌種的復(fù)壯1）狹義：是一種消極的措施，它指的是菌種已發(fā)生衰退，再通過(guò)純種分離和性能測(cè)定等方法，從衰退的群體中找出少數(shù)尚未衰退的個(gè)體，以達(dá)到恢復(fù)該菌種原有典型性狀的一種措施。2）廣義：是一項(xiàng)積極的措施，即在菌種性能尚未衰退前就經(jīng)常有意識(shí)地進(jìn)行純種分離和生產(chǎn)性能的測(cè)定工作，以期從中選擇到自發(fā)的正突變體（以期菌種的生產(chǎn)性能逐步有所提高）。第一百二十二張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于20

45、22年6月 復(fù)壯的方法1.純種分離； A、平板劃線(xiàn)分離： 主要適合細(xì)菌，酵母菌， 可達(dá)到菌落純的水平。B、單孢子分離：主要適合產(chǎn)孢子的微生物，例霉菌和放線(xiàn)菌。用顯微操作器進(jìn)行分離，可達(dá)到細(xì)胞純的水平。2.通過(guò)寄主主體復(fù)壯3.淘汰已衰退的個(gè)體 P.232第一百二十三張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月二、微生物菌種的保藏目的：不死亡，不污染，不變異三不原則隨時(shí)為生產(chǎn)、科研提供優(yōu)良菌種。原理：選用優(yōu)良的純種（最好是休眠體，如分生孢子、芽孢等），在干燥、低溫、缺氧、缺營(yíng)養(yǎng)以及添加保護(hù)劑等環(huán)境條件下，降低微生物代謝活動(dòng)強(qiáng)度，抑制微生物生長(zhǎng)繁殖，并使其難以發(fā)生突變。P.233第一百二十四張，PPT共一百四十一頁(yè)，創(chuàng)作于2022年6月菌種保藏機(jī)構(gòu)的任務(wù)：廣泛收集科研和生產(chǎn)菌種、菌株，并加以妥善保管，使之達(dá)到不死