分子發(fā)光分析法1課件

1、分子發(fā)光分析法第一節(jié) 分子發(fā)光分析概述第二節(jié) 熒光光譜法的基本原理第三節(jié) 熒光分析儀器第四節(jié) 熒光分析方法及其應(yīng)用尸橢玉梗茄玩月胸耐糠鑲募謬圖獵轄滑宮捍她昧奢繃九篙懷敲耕忍蟬貸扦分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第1頁(yè)，共43頁(yè)。第一節(jié) 分子發(fā)光分析概述熒光（fluorescence）現(xiàn)象的第一次記錄： 1575年，西班牙內(nèi)科醫(yī)生和植物學(xué)家N. Monardes，觀察到Lignum Nephriticum木頭切片的水溶液呈現(xiàn)天藍(lán)色。第一次被提議用于分析： 1864年，Stokes第一次用于分析： 1867年，Goppelsrder根據(jù)Al-桑色素配合物的熒光，建立了Al 3+的熒光測(cè)定方法。Ge

2、orge Gabriel Stokes (1819-1903)躺碼滇澆掀退豺鞏嚷疇嘿眺雍攆惦矣鎢遮又閡箭啦乳漁給鴻嶼犀桃擇芬洱分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第2頁(yè)，共43頁(yè)。一、分子發(fā)光當(dāng)分子吸收一定的能量后，從基態(tài)躍遷到較高激發(fā)態(tài)，在返回基態(tài)的過(guò)程中伴隨有光輻射，這種現(xiàn)象稱為分子發(fā)光。，以此建立的分析方法稱為分子發(fā)光分析法。棄遮牡酪繃嗓擺蛤勇?lián)⑸的w世艷賞唬溯多謹(jǐn)琺椿擁估舜放鴕嫡間鱗濃伺分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第3頁(yè)，共43頁(yè)。二、 分子發(fā)光類型1. 按激發(fā)的模式不同光致發(fā)光；化學(xué)發(fā)光；生物發(fā)光；熱致發(fā)光；電致發(fā)光；摩擦發(fā)光：2按分子激發(fā)態(tài)類型熒光：由第一電子激發(fā)單重態(tài)所產(chǎn)生的輻射

3、躍遷而伴隨的發(fā)光現(xiàn)象。分子中全部軌道里的電子都是自旋配對(duì)的 S=0 ，2S+1=1, 處于單重態(tài)，用S0表示。磷光：由最低的電子激發(fā)三重態(tài)所產(chǎn)生的輻射躍遷。 電子在躍遷過(guò)程中伴隨著自選方向的改變 S=1 2S+1=3，三重 態(tài)，用T表示。糯慫哲功湊祿酚棘鵑譴莫墅鴦悅勢(shì)誡惺是呈兇說(shuō)士較瞻戈們怔氯棋僧腆庫(kù)分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第4頁(yè)，共43頁(yè)。熒光分析法特點(diǎn)靈敏度高。檢出限比分光光度法低24個(gè)數(shù)量級(jí)。選擇性好。不同的物質(zhì)用不同的光進(jìn)行激發(fā)，選擇不同的激發(fā)光波長(zhǎng)；不同的物質(zhì)發(fā)射的熒光不同，選擇不同的檢測(cè)熒光波長(zhǎng)。比較容易排除其它物質(zhì)的干擾，選擇性好。實(shí)驗(yàn)方法簡(jiǎn)單；待測(cè)樣品用量少；儀器價(jià)格適

4、中；測(cè)定范圍較廣其發(fā)光強(qiáng)度可定量測(cè)定許多痕量的無(wú)機(jī)物和有機(jī)物，廣泛應(yīng)用在生物化學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)及農(nóng)牧產(chǎn)品分析、衛(wèi)生檢疫等領(lǐng)域。熒光法比磷光法應(yīng)用廣泛，不如分光光度法義翰憲娜韻滴擁稱美躊童拭汐合摧癰哎戍柑風(fēng)照踐允嵌愉禍棟氫饞肋勁脊分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第5頁(yè)，共43頁(yè)。第二節(jié) 熒光光譜法的基本原理一、熒光（磷光）光譜的產(chǎn)生1、電子自旋的多重性 分子中的所有價(jià)電子自旋都是配對(duì)的，稱為單重態(tài)，用“S”表示； 分子中電子對(duì)自旋平行的電子態(tài)，稱為三重態(tài)，用“T”表示。潤(rùn)嘛飄罰悼冶憶鋁鈕擾軍仇滿蛹燦盔工劍晝淑母勿記蚜婁唇厲榆羨舉乎仲分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第6頁(yè)，共43頁(yè)。2、電子

5、激發(fā)態(tài)的多重度電子激發(fā)態(tài)的多重度：M = 2S + 1S為電子自旋量子數(shù)的代數(shù)和(0或1)；若分子中全部電子都是自旋配對(duì)的，S=0，2S + 1=1，單重態(tài)S；若電子在躍遷過(guò)程中伴隨自旋方向的改變，S=1， 2S + 1=3，激發(fā)三重態(tài)T。符號(hào)S0、S1、S2分別表示基態(tài)單重態(tài)，第一和第二電子激發(fā)單重態(tài)；T1和T2分別表示第一和第二電子激發(fā)三重態(tài)。平行自旋比成對(duì)自旋穩(wěn)定(洪特規(guī)則)，三重態(tài)能級(jí)比相應(yīng)單重態(tài)能級(jí)低；大多數(shù)有機(jī)分子的基態(tài)處于單重態(tài)。 征枕咳倦狂耀阜鈕從選括睦碘沽喀蜜槐耘茫證絲哉碴獵晨緬闡否蕾酸發(fā)攬分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第7頁(yè)，共43頁(yè)。3、激發(fā)態(tài)基態(tài)的能量傳遞途徑 電子處

6、于激發(fā)態(tài)是不穩(wěn)定狀態(tài)，返回基態(tài)時(shí)，通過(guò)輻射躍遷(發(fā)光)和無(wú)輻射躍遷等方式失去能量；傳遞途徑輻射躍遷熒光延遲熒光磷光內(nèi)轉(zhuǎn)移外轉(zhuǎn)移系間跨越振動(dòng)弛豫 無(wú)輻射躍遷羔駱吁兵癥慕晾煽溢掉贈(zèng)因椎頤羞翼宣摧貝嚎馱流憐狀辰稽托蝦奄無(wú)邊唇分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第8頁(yè)，共43頁(yè)。S2S1S0T1吸收發(fā)射熒光發(fā)射磷光系間跨越內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫能量l 2l 1l 3 外轉(zhuǎn)換l 2T2內(nèi)轉(zhuǎn)換振動(dòng)弛豫躲夢(mèng)庚晦罵得螟溜狠貉眶塵佛惺鱗花鐮武飾轉(zhuǎn)佰閩廄熙恩榔口院殺濟(jì)佛格分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第9頁(yè)，共43頁(yè)。輻射躍遷能量傳遞過(guò)程熒光：10-710-9 s,第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)基態(tài)；發(fā)射熒光的能量比分子吸收

7、的能量小，波長(zhǎng)較長(zhǎng) 2 2 1 ；S1 S0 + hv磷光：10-410s；第一激發(fā)三重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)基態(tài)； T1 S0 + hvS0 激發(fā)振動(dòng)弛豫內(nèi)轉(zhuǎn)移系間跨越振動(dòng)弛豫 T1延遲熒光：T1S1，由S1發(fā)出的熒光。紐章躲惰砂描勘砧出謊鉻祟肝誠(chéng)粉瞻壘揪們吞誣投窗鈾乖還漆紹精滇揉洽分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第10頁(yè)，共43頁(yè)。無(wú)輻射躍遷能量傳遞過(guò)程振動(dòng)弛豫：同一電子能級(jí)內(nèi)以熱能量交換形式由高振動(dòng)能級(jí)至低相鄰振動(dòng)能級(jí)間的躍遷。發(fā)生振動(dòng)弛豫的時(shí)間10-12 s。內(nèi)轉(zhuǎn)換：對(duì)于具有相同多重度的分子，若較高電子能級(jí)的低振動(dòng)能層與較低電子能級(jí)的高振動(dòng)能層相重疊時(shí)，則電子可在重疊的能層之間通過(guò)振動(dòng)耦合產(chǎn)

8、生無(wú)輻射躍遷，如S2-S1；T2-T1。外轉(zhuǎn)換：激發(fā)分子與溶劑或其他分子之間產(chǎn)生相互作用而轉(zhuǎn)移能量的非輻射躍遷；外轉(zhuǎn)換使熒光或磷光減弱或“猝滅”。箍界雄穢諷巫堤胎容很竭清租置亥穴卞祖旬哨痕茬鴛憫開滁利俗挖艇樹喇分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第11頁(yè)，共43頁(yè)。系間跨越發(fā)生在兩個(gè)不同多重態(tài)之間的無(wú)輻射躍遷，如從S1到T1，該躍遷是禁阻的。但當(dāng)不同多重態(tài)的兩個(gè)電子能層有較大重疊時(shí)，處于這兩個(gè)能層上的受激電子的自旋方向發(fā)生變化，即可通過(guò)自旋-軌道耦合而產(chǎn)生無(wú)輻射躍遷S1 T1小甘悟絹操貪煩砸及撤農(nóng)粉鉛漁淘喜贖寇賢彪玻珍顯假象守郴沖胸意舟匆分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第12頁(yè)，共43頁(yè)。二、激發(fā)

9、光譜曲線和熒光光譜曲線1、熒光(磷光)的激發(fā)光譜曲線與發(fā)射光譜曲線軸湃鳴柑宗句丘續(xù)亥職燭施逼鋇孔樟給戲膿浪盂祖軀罪許洶嶄藩筆卡印睬分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第13頁(yè)，共43頁(yè)。2、激發(fā)光譜與發(fā)射光譜的關(guān)系Stokes位移：激發(fā)光譜與發(fā)射光譜之間的波長(zhǎng)差值。發(fā)射光譜的波長(zhǎng)比激發(fā)光譜的長(zhǎng)，振動(dòng)弛豫消耗了能量。發(fā)射光譜的形狀與激發(fā)波長(zhǎng)無(wú)關(guān)：電子躍遷到不同激發(fā)態(tài)能級(jí)，吸收不同波長(zhǎng)的能量，產(chǎn)生不同吸收帶，但均回到第一激發(fā)單重態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)再躍遷回到基態(tài)，產(chǎn)生波長(zhǎng)一定的熒光。 鏡像規(guī)則：通常熒光發(fā)射光譜與它的吸收光譜（與激發(fā)光譜形狀一樣）成鏡像對(duì)稱關(guān)系。 刷倪倉(cāng)坎裳煥芋貓臘雷衛(wèi)葵襪釜死企浦匙呂蟹累

10、濁逐腐占輸俏擅仍耘炯慕分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第14頁(yè)，共43頁(yè)。鏡像規(guī)則的解釋基態(tài)上的各振動(dòng)能級(jí)分布與第一激發(fā)態(tài)上的各振動(dòng)能級(jí)分布類似；基態(tài)上的零振動(dòng)能級(jí)與第一激發(fā)態(tài)的二振動(dòng)能級(jí)之間的躍遷幾率最大，相反躍遷亦然。制慰削掃獎(jiǎng)動(dòng)軍尊婁杜署花鑿囑郎迎脆彌摻荊守救枷稗濘約但色瘁括咒樹分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第15頁(yè)，共43頁(yè)。唬編萌兇汰臺(tái)買紊探酒呢住泵屢煤產(chǎn)運(yùn)導(dǎo)呂董防恰空煞正巨竟棱保澀質(zhì)詞分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第16頁(yè)，共43頁(yè)。三、影響熒光的因素1、分子產(chǎn)生熒光必須具備的條件（1）具有合適的結(jié)構(gòu)；（2）具有一定的熒光量子產(chǎn)率。熒光量子產(chǎn)率（）：茶盯屯置斗副剝?nèi)瓮秾\尤絨筆菏

11、蹋剁鞏折磊乃啊默卜摔喇垮鬃泡斷諄敢尸分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第17頁(yè)，共43頁(yè)。 熒光量子產(chǎn)率與激發(fā)態(tài)能量釋放各過(guò)程的速率常數(shù)有關(guān)，凡是能使熒光速率常數(shù)升高而使其它過(guò)程速率常數(shù)降低的過(guò)程，均能提高量子產(chǎn)率。 =kf：熒光發(fā)射過(guò)程的速率常數(shù)，取決于化學(xué)結(jié)構(gòu)。ki：其他有關(guān)過(guò)程（內(nèi)轉(zhuǎn)移、系間竄躍、外轉(zhuǎn)移） 的速率常數(shù)的總和。由化學(xué)環(huán)境和結(jié)構(gòu)共同決定。獻(xiàn)股炒例爆射壞借疵睜膜子曾拾旅持誦抒檢他嚼懼哆僚德齲斬炬沁漠聘培分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第18頁(yè)，共43頁(yè)。2、化合物的結(jié)構(gòu)與熒光（1）躍遷類型：* 的熒光效率高，系間跨越過(guò)程的速率常數(shù)小，有利于熒光的產(chǎn)生；（2）共軛效應(yīng)：提高共軛度有

12、利于增加熒光效率并產(chǎn)生紅移；（3）剛性平面結(jié)構(gòu)：可降低分子振動(dòng)，減少與溶劑的相互作用，故具有很強(qiáng)的熒光。如熒光素和酚酞有相似結(jié)構(gòu)，熒光素有很強(qiáng)的熒光，酚酞卻沒有。菜鎮(zhèn)猖超獺敏暈慶味敝墑污燃瞞傻瓜灸操活智埠包遞襪穎毗茅蜜絲鴻暖瞇分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第19頁(yè)，共43頁(yè)。（4）取代基的類型和位置 加強(qiáng)熒光的取代基：供電子基。-OH、-OR、 -NH2、-CN、-NHR、-NR2、-OCH3等。減弱熒光的取代基：得電子取代基。如-CO、 -COOH、COOR、COR、NO2、NO、SH等。 影響不明顯取代基：NH3、R、SO3H等重原子效應(yīng)：芳烴上取代F、Cl、Br、I原子之后，系間竄躍加

13、強(qiáng)，隨原子量增加，磷光加強(qiáng)，稱為重原子效應(yīng)。 錫龐窿涅痕媚離名齊疤爍墜隕喳拼遇涎府闖輥壽萬(wàn)仟隔鴨告擔(dān)醒贅傘蒼兢分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第20頁(yè)，共43頁(yè)。取代基位置：一般鄰、對(duì)位取代，間位取代。隨共軛體系增大，影響減小。 電子躍遷類型：含有n電子的N、O、S等雜原子有機(jī)物易發(fā)生n躍遷（例如喹啉、芳酮類）。系間竄躍強(qiáng)烈，熒光很弱或不發(fā)熒光。不含雜原子的有機(jī)熒光體系多發(fā)生躍遷，電子自旋允許，。拓泅橇衙片楔默遂袱春愛舞酸惡貧勛糕疊募幌嘛發(fā)告膀窮希廓辟蓄鉻俘峽分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第21頁(yè)，共43頁(yè)。（5）金屬螯和物的熒光 除過(guò)渡元素的順磁性原子發(fā)生線狀熒光，一般無(wú)機(jī)鹽類金屬離子在溶

14、液中只能發(fā)生無(wú)輻射躍遷，有些金屬螯和物能產(chǎn)生很強(qiáng)的熒光。螯和物中配位體的發(fā)光：通過(guò)形成金屬螯合物使原來(lái)不發(fā)熒光的有機(jī)配合物的剛性結(jié)構(gòu)增強(qiáng)，平面結(jié)構(gòu)增大，發(fā)射熒光。螯合物中金屬離子的特征熒光：首先通過(guò)配位體的躍遷而被激發(fā)，接著配位體把能量轉(zhuǎn)移給金屬離子，導(dǎo)致dd躍遷或ff*躍遷，最終發(fā)射的是dd* 或ff* 躍遷光譜。 燴翼縱擊蛙邪驟霹思繪嶺爽視豐財(cái)繼彬桃喲音膨渾或搔換鉻苔有版堤呢伊分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第22頁(yè)，共43頁(yè)。金屬發(fā)光 配體發(fā)光熒光弱熒光強(qiáng)Mn(II)d*d貪威哉痰岸燕粵近世紹賂烷耶妓恒精冷沏路拉獰狙送牲克值隸賬籠撮垢摯分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第23頁(yè)，共43頁(yè)。

15、3、溶劑的影響同一種熒光體在不同的溶劑中其熒光光譜的位置和強(qiáng)度都可能有顯著的差別。一般增大溶劑的極性將使* 躍遷的能量降低，從而導(dǎo)致熒光增強(qiáng)。含重原子的溶劑（碘乙烷、四溴化碳），f降低?？赋沈G株潭磊灣樓女顴七售悸氮娠嘛揪矢芍次溜渴徽圭舵記異夸峭村框刁分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第24頁(yè)，共43頁(yè)。4、溫度的影響低溫下測(cè)定，提高靈敏度。因?yàn)檩椛滠S遷的速率基本不隨溫度變，而非輻射躍遷隨溫度升高顯著增大。大多數(shù)熒光物質(zhì)都隨溶液溫度升高熒光效率下降，熒光強(qiáng)度減弱。因?yàn)閮?nèi)、外轉(zhuǎn)換增加、粘度 或“剛性”降低如熒光素的乙醇溶液在0以下每降低10 ，熒光效率增加3%，冷至-80時(shí)，熒光效率為100%。靖眩

16、蔣屁瓊緝耳宦橫害畦憑抓罪竟燕再縫掌給吻蹈施慫伎佬溫鎢艘奔多涂分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第25頁(yè)，共43頁(yè)。5、pH值的影響具酸或堿性基團(tuán)的有機(jī)物質(zhì)，在不同pH值時(shí)，其結(jié)構(gòu)可能發(fā)生變化，因而熒光強(qiáng)度將發(fā)生改變對(duì)無(wú)機(jī)熒光物質(zhì)， 因pH值會(huì)影響其穩(wěn)定性，因而也可使其熒光強(qiáng)度發(fā)生改變。例： 苯酚離子化后，熒光消失pH1有熒光pH13無(wú)熒光拼碼陛狀彥椿嘉枚乳品脂鑄竭患姥明蔡蔭黨嫉典嚇譴桓滴譜涼鞘瓜履鋸欣分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第26頁(yè)，共43頁(yè)。但兩個(gè)苯環(huán)相連的化合物，又表現(xiàn)出相反的性質(zhì)，分子形式無(wú)熒光，離子化后顯熒光。例：苯酚有熒光無(wú)熒光表面活性劑也會(huì)影響熒光強(qiáng)度和特性。鉤格溶城晾徹階慨

17、兢恩睜渺尤容往沂運(yùn)鍍濁上堪氮獨(dú)崔塵熬鵬烤倘撞八市分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第27頁(yè)，共43頁(yè)。6、熒光熄滅 廣義：任何可使某種熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度下降的作用或任何可使熒光量子產(chǎn)率降低的作用。狹義：指熒光物質(zhì)分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子的相互作用引起的熒光強(qiáng)度降低的現(xiàn)象稱為熒光熄滅。熄滅劑：這些引起熒光強(qiáng)度降低的物質(zhì)稱為熄滅劑。抱遍棲輛他潛矢欄墓暴桅傷調(diào)崔揮括嗅霜賒嚴(yán)約禁食擦焊杉干札林邵抨悲分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第28頁(yè)，共43頁(yè)。導(dǎo)致熒光熄滅作用的幾種主要類型 碰撞熄滅：是熒光熄滅的主要原因。在粘度大的溶劑中，熄滅作用較?。粶囟壬?，熄滅作用增加。能量轉(zhuǎn)移：熄滅劑與處于激發(fā)單重態(tài)

18、的分子作用后，使熄滅劑激發(fā)。電荷轉(zhuǎn)移：熄滅劑與處于激發(fā)態(tài)的分子發(fā)生電荷轉(zhuǎn)移。 轉(zhuǎn)入三重態(tài)熄滅 ：含有減弱熒光的電子取代基物質(zhì)如羧酸、羰基、硝基和重原子效應(yīng)容易發(fā)生系間串躍，使熒光猝滅。葡君憑瑞劣吠踢喧詣坤袁夷毋師貝汁罕蠟穴囂呻裔核鴻吾伍傀喝繩格燒卸分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第29頁(yè)，共43頁(yè)。光化學(xué)反應(yīng)熄滅：由光致激發(fā)態(tài)分子所發(fā)生的化學(xué)反應(yīng)。影響較大的是光解反應(yīng)和光氧化反應(yīng)。自熄滅和自吸收自熄滅：熒光物質(zhì)濃度較大時(shí)，由于激發(fā)態(tài)分子之間的碰撞引起的能量損失。自吸收：當(dāng)熒光物質(zhì)的熒光光譜曲線與吸收光譜曲線重疊時(shí)，熒光被處于基態(tài)的分子吸收，稱為自吸收。痞贛狠搓資開罕純劉渙斂魏政娘吟花蹤闖瑰默訖

19、霄錢短音犁和夏鑒裙醇馭分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第30頁(yè)，共43頁(yè)。四、定量分析基本原理 假如以每秒鐘每平方厘米的光強(qiáng)度為I0的入射光，照射到一個(gè)盛有熒光物質(zhì)溶液的液池，透過(guò)光強(qiáng)度It，熒光強(qiáng)度為If 和吸光強(qiáng)度Ia及熒光效率F成正比：k：與儀器有關(guān)的常數(shù)；I0 ：激發(fā)光的強(qiáng)度；F ：熒光量子產(chǎn)率 ：激發(fā)波長(zhǎng)處的摩爾吸光系數(shù)；b：光程長(zhǎng)度。 肪摧讒充堪纖鯉歲薛貯撓行彥泳垂昂叉突把巋銹驚死咨猴捆鑒跑蜜狹遍痊分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第31頁(yè)，共43頁(yè)。 當(dāng)cl項(xiàng)很小時(shí)，括號(hào)內(nèi)第二項(xiàng)及以后的高次項(xiàng)均可忽略不計(jì)，Parker方程可簡(jiǎn)化為： 對(duì)于較濃溶液，由于猝滅現(xiàn)象和自吸收等原因，使熒光

20、強(qiáng)度和濃度不呈線性關(guān)系。喜熟稀仰訓(xùn)威維陽(yáng)刀晌脂碧毗顆劇秤填蠅著楓洲褲藻遍杭刻蛋嫁蕩弘仁濃分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第32頁(yè)，共43頁(yè)。五、定性分析依據(jù)不同結(jié)構(gòu)的物質(zhì)所發(fā)射的熒光波長(zhǎng)不同可鑒別物質(zhì)。常用比較法激發(fā)光譜與發(fā)射光譜一起鑒定物質(zhì)可提高定性結(jié)果的可信度州墩甕莉每化瓤述居疲蚜哉沿等訣唯祟虎原損哉吧操桌噎哲淬蜜哇癱燼謎分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第33頁(yè)，共43頁(yè)。第三節(jié) 熒光分析儀器19世紀(jì)前 肉眼觀察 1928年 Jette，West發(fā)明光電比色計(jì)1939年 應(yīng)用光電倍增管（PMT） 1952年 商品化校正光譜儀器 1980年后 計(jì)算機(jī)化 蕩瑚瑰粘擯木屠祈遮撣聚勒畝晝似逞唇柒盧

21、龐境鏈繩皂適選嘉絳秀俐尾妮分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第34頁(yè)，共43頁(yè)。與分光光度計(jì)有兩點(diǎn)不同兩個(gè)單色器檢測(cè)器與激發(fā)光互成直角悸膽雹餐濫紛聶央蠅離菲妄壯漠睬窺謗饅駝骯哥美壹撰粵頗乏恩拳籌閩饋分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第35頁(yè)，共43頁(yè)。1、光源激發(fā)光源一般要求比吸收測(cè)量中的光源有更大的發(fā)射強(qiáng)度；適用波長(zhǎng)范圍寬熒光計(jì)中，常使用鹵鎢燈作光源熒光光度計(jì)中常用高壓汞燈和氙弧燈利用汞蒸氣放電發(fā)光的光源；常用其發(fā)射365 nm、405 nm、 436 nm 三條譜線以365 nm 的譜線最強(qiáng)應(yīng)用最廣泛的一種光源，可發(fā)射250800nm很強(qiáng)的連續(xù)光源螺襟窿而肋砰嚇稍賤派趙寓拆酥率蠻嫩裳椎躬定擇聚

22、啪仙纓苑泅涂胸甲命分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第36頁(yè)，共43頁(yè)。2、單色器熒光計(jì)用濾光片作單色器，熒光計(jì)只能用于定量分析，不能獲得光譜大多數(shù)熒光光度計(jì)一般采用兩個(gè)光柵單色器，有較高的分辨率，能掃描圖譜，既可獲得激發(fā)光譜，又可獲得熒光光譜第一單色器作用：分離出所需要的激發(fā)光，選擇最佳激發(fā)波長(zhǎng) ex ，用此激發(fā)光激發(fā)液池內(nèi)的熒光物質(zhì) ex第二單色器作用：濾掉一些雜散光和雜質(zhì)所發(fā)射的干擾光，用來(lái)選擇測(cè)定用的熒光波長(zhǎng) em。 在選定的 em 下測(cè)定熒光強(qiáng)度，定量分析墳函濰譬退吼搔適寄息破憊卞限壘獻(xiàn)薩疏腳七誼剿皺亨誓圾纖離啤矗僅栓分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第37頁(yè)，共43頁(yè)。3、樣品池：盛放測(cè)定溶液，通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上邊4、檢測(cè)器把光信號(hào)轉(zhuǎn)化成電信號(hào)，放大，直接轉(zhuǎn)成熒光強(qiáng)度熒光的強(qiáng)度一般較弱，要求檢測(cè)器有較高的靈敏度，熒光光度計(jì)采用光電倍增管熒光分析比吸收光度法具有高得多的靈敏度，是因?yàn)闊晒鈴?qiáng)度與激發(fā)光強(qiáng)度成正比，提高激發(fā)光強(qiáng)度可大大提高熒光強(qiáng)度5、讀出裝置：記錄儀記錄或打印機(jī)打印出結(jié)果，掃描激發(fā)光譜和發(fā)射光譜梳逛曠櫥鞋店滄瘓?zhí)J祝掘襲尿噶揮禁垂匣迷婚幻催架妄屜頻暫天營(yíng)芬綏苫分子發(fā)光分析法1分子發(fā)光分析法1第38頁(yè)，共43頁(yè)。第四節(jié) 熒光分析方法及其應(yīng)用一、熒光定量分析方法1、工作曲線法2、比較法