細菌染色和涂片觀察方法

1、關(guān)于細菌染色和涂片觀察的方法第一張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第一節(jié) 不染色標本檢查法所謂不染色標本檢查法是將細菌標本不經(jīng)染色直接鏡檢，從而觀察生活狀態(tài)下細菌的形態(tài)及運動狀況的一種檢查方法。這種檢查方法雖可看到細菌的大致輪廓，但主要用于觀察細菌的動力。第二張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月一、不染色標本檢查法的具體方法1 、壓滴法2、懸滴法3、毛細管法第三張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第二節(jié) 染色標本檢查法所謂染色標本檢查法是用特殊的手段對細菌進行染色，而后再檢查其形態(tài)、大小、排列方式、染色反應(yīng)以及特殊結(jié)構(gòu)的一種檢查方法,有助于細菌的初步識別或診斷。第四張，PP

2、T共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 細菌染色的一般程序細菌染色的基本程序是：涂片 固定 （媒染） 染色 （脫色）（復(fù)染）第五張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月1、 涂片制備：隨標本的種類而略有不同。一般臨床標本大多可直接涂抹于潔凈載玻片上；培養(yǎng)的細菌，若為液體培養(yǎng)液，亦可直接涂于載玻片上；若為固體培養(yǎng)基上的細菌，則先取一接種環(huán)生理鹽水于載玻片中央，然后從培養(yǎng)基上取菌少許，在鹽水中研磨均勻，使呈輕度乳濁，以接種環(huán)擴成1cm2或2份硬幣大小的涂面，在室溫下自然干燥或放在火焰上方的熱空氣中慢慢烘干。但切忌緊靠火焰烤干。第六張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月2、 固定：染色前必須先行固

3、定。其目的在于凝固細胞質(zhì)和其它細胞結(jié)構(gòu)成分而殺死細菌；使菌體粘附于玻片上以及改變細菌對染料的通透性（因活菌通常不易使染料透入細胞內(nèi)）。 固定的方法一般采用火焰加熱法，在特殊目的時也可用冷凍干燥法或化學(xué)法如醇、酸、氯化高汞、重金屬鹽或氧化劑等進行固定。第七張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月3、 媒染：媒染的目的是增加染料和被染物的親和力。凡使染料固定于被染物；或引起細胞膜通透性改變的物質(zhì)統(tǒng)稱為媒染劑。常用的媒染劑有明礬、苦味酸、金屬鹽、碘等。也可用加熱法媒染。媒染劑可用于固定之后，亦可含于固定液或染液中，也可在初染之后復(fù)染之前進行。第八張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月4、 染色

4、：隨目的而選用適宜的染液。染色時，滴加染液以覆蓋涂面為度，染色時間隨方法而定。單染法只用一種染料如呂氏美蘭、稀釋石炭酸復(fù)紅等；而多數(shù)染色法需用第二種染液進行復(fù)染。第九張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月5、 脫色：脫色：是使被染物脫去已染上的顏色。脫色的目的是觀察細菌與染料結(jié)合的穩(wěn)定程度，故可作為鑒別染色之用。凡具有脫色作用的化學(xué)試劑稱脫色劑。脫色劑或呈溶媒作用，如醇類、丙酮等；或能影響蛋白質(zhì)的電離程度，改變其電荷性質(zhì)或數(shù)量，因而影響細菌與染料的結(jié)合程度，如酸類能減少細菌的負電荷，故可作堿性染料的脫色劑。第十張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月6、 復(fù)染：已經(jīng)脫色處理的細胞或其結(jié)構(gòu)

5、常以復(fù)染液作復(fù)染以便于觀察。復(fù)染液與初染液的顏色不同而成鮮明對比，所以復(fù)染也稱為對比染色。復(fù)染液不宜太強，以免掩蓋初染的顏色而失去對比作用。第十一張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月常用染色法細菌的常用染色法有：單染色法、復(fù)染色法、特殊結(jié)構(gòu)染色法、負染色法以及熒光染色法等。第十二張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（一）、單染色法： 單染色法是指用一種染料進行染色的方法。如用美蘭或稀釋石炭酸復(fù)紅等，使各種細菌均染成同一種單一的顏色。故此法只能顯示細菌的形態(tài)及大小，對細菌的鑒別價值不大。第十三張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（二）、復(fù)染色法： 復(fù)染色法是用二種以上染料進行染

6、色的方法。此法除顯示細菌的形態(tài)、大小外，還有鑒別細菌種類的價值，因此也稱鑒別染色法。常用的鑒別染色法有革蘭氏染色法及抗酸染色法。第十四張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月1、 革蘭氏染色法（Grams Stain）是最常用的鑒別染色法之一。此染色法是由丹麥細菌學(xué)家 Christian Gram氏于18821884年發(fā)明的，至今已逾百年，仍在廣泛使用，是細菌學(xué)中最為經(jīng)典的染色方法。第十五張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（1）、革蘭氏染色的方法：第十六張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月固定初染媒染脫色 （結(jié)晶紫或龍膽紫） （ 盧戈氏碘液） （95%酒精） 復(fù) 染 （稀釋復(fù)紅

7、）第十七張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 固定 初染 媒染 脫色 復(fù)染 革蘭氏陽性菌，用符號“G+”或“GP” （Grams Positive）表示。 革蘭氏陰性菌，用符號“G”或“GN”（Grams Negative）表示。 第十八張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第十九張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏陽性葡萄球菌例子 (金黃色葡萄球菌 x 1000)第二十張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏陽性鏈球菌例子第二十一張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏陰性桿菌例子 (大腸桿菌 x 1000)第二十二張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年

8、6月革蘭氏陰性弧菌例子第二十三張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏陽性產(chǎn)芽孢桿菌例子 第二十四張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏陽性短桿菌例子 (李斯特菌 x 1000)第二十五張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏陰性彎曲菌例子第二十六張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏陽性棒狀桿菌例子第二十七張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏染色的結(jié)果與培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)條件、操作技術(shù)及菌齡等有密切的關(guān)系。培養(yǎng)基成分：在缺乏鎂鹽的培養(yǎng)基中，革蘭氏陽性菌可變?yōu)楦锾m氏陰性菌。培養(yǎng)條件：在酸性環(huán)境中細菌帶正電荷。操作技術(shù)：如涂片太厚影響酒精脫色，革蘭氏

9、陰性菌則可染成革蘭氏陽性菌；脫色時倘酒精作用時間太長，革蘭氏陽性菌又會染成革蘭氏陰性菌。菌齡：菌齡也能影響染色的結(jié)果，這和細菌生長過程中核酸含量的改變有關(guān)。例如本是革蘭氏陽性的老齡菌，因核酸減少則常有許多菌細胞變?yōu)楦锾m氏陰性。第二十八張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月革蘭氏陽性菌細胞壁中肽聚糖含量較多，脂類較少，與95%酒精接觸后可迅速導(dǎo)致細胞壁脫水，通透性降低，使在細菌細胞內(nèi)著色的染料結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物不易透出，所以保留了紫色。而革蘭氏陰性菌細胞壁含肽聚糖較少、脂類較多，與95%酒精接觸后肽聚糖脫水不明顯，而脂類被酒精溶解后使細胞壁通透性增加，酒精易透入菌體內(nèi)溶解染料碘復(fù)合物并使其透

10、出，因而使紫色被洗脫后又被染成紅色。第二十九張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月3）、革蘭氏染色法的臨床意義、鑒別細菌：該染色法可將細菌分為GP菌與GN菌兩大類，這樣可以初步識別細菌、縮小范圍，便于進一步鑒定。、了解細菌與致病性的關(guān)系：大多數(shù)GP菌的致病物質(zhì)主要為外毒素；而大多數(shù)GN菌的致病物質(zhì)主要為內(nèi)毒素。通過革蘭氏染色，可了解細菌的致病物質(zhì)，從而做出相應(yīng)的治療對策。第三十張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月、選擇抗菌藥物：GP菌和GN菌在細胞壁等結(jié)構(gòu)上有很大差別，因而對抗菌藥物的敏感性不同。如大多數(shù)GP菌對青霉素、紅霉素、頭孢菌素等敏感；而大多數(shù)GN菌對這幾種抗生素不敏感，但對

11、鏈霉素、氯霉素、慶大霉素、卡那霉素等敏感，故臨床上可根據(jù)病原菌的革蘭氏染色性，選擇有效的藥物進行治療。第三十一張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月2、 抗酸染色法有些細菌如結(jié)核桿菌、麻風桿菌等分枝桿菌，用一般染色法不易著色，必須使用強染色劑（如石炭酸復(fù)紅）并采用加熱和延長染色時間的方法才能使其著色。且一旦染上顏色后又不易被酸性酒精脫色。這種能夠抵抗酸性酒精脫色的細菌，稱為抗酸桿菌。應(yīng)用這種原理進行染色的方法叫抗酸染色法?？顾崛旧ǔＳ玫挠休录{二氏染色法和潘本漢氏染色法。第三十二張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月染色的步驟： 直接涂片法第三十三張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年

12、6月夾層杯液基集菌法：第三十四張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月固定初染脫色復(fù) 染石炭酸復(fù)紅加熱 3%鹽酸酒精 呂氏美蘭第三十五張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月染色過程中的細菌顏色變化：抗酸桿菌非抗酸桿菌第三十六張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第三十七張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月鏡檢與報告： 用光學(xué)顯微鏡鏡檢(目鏡10，油鏡100)染色痰片。在淡藍色背景下，抗酸桿菌呈紅色，其它細菌和細胞呈藍色。所見結(jié)果按下列標準報告： 1)抗酸桿菌陰性：連續(xù)觀察300個不同視野，未發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌。 2)抗酸桿菌(1+)： 19條抗酸桿菌100視野。 3)抗酸桿菌(2+)

13、： l一9條抗酸桿菌10視野。 4)抗酸桿菌(3+)： 19條抗酸桿菌每個視野。 5)抗酸桿菌(4+)： 10條抗酸桿菌每個視野。第三十八張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月 抗酸染色的意義：用以鑒別抗酸菌（如結(jié)核桿菌和麻風桿菌）和非抗酸菌。第三十九張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（三）、特殊結(jié)構(gòu)染色法細菌的某些基本結(jié)構(gòu)如細胞壁、核質(zhì)、胞漿顆粒和特殊結(jié)構(gòu)如莢膜、芽孢、鞭毛等，用普通染色法不易著色，須用一些特殊染色法才能染上顏色。特殊染色法主要有莢膜染色法、鞭毛染色法、芽孢染色法、異染顆粒染色法等。這些染色法不僅能使特殊結(jié)構(gòu)著色，還可使特殊結(jié)構(gòu)染成與菌體不同的顏色，有利于觀察和區(qū)

14、別。第四十張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十一張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十二張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月在細菌檢驗工作中，除異染顆粒染色法較常用外，由于其它特殊結(jié)構(gòu)染色法操作費時，費用較高、染色過程要求非常嚴格，而普通染色法雖不能使特殊結(jié)構(gòu)本身著色，但菌體著色后，莢膜和芽孢部分由于不著色也能顯示出來，再加上特殊染色法比較復(fù)雜，故日常工作中較少使用這些特殊結(jié)構(gòu)染色法第四十三張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十四張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月第四十五張，PPT共四十九頁，創(chuàng)作于2022年6月（四）、負染色法所謂負染色法是指使背景著色而細菌本身不著色的一種染色方法。常用的有墨汁染色法。也可用酸性染料如剛果紅或水溶性苯胺黑等進行染色。因酸性染料帶負電荷，而細菌本身在近乎中性的環(huán)境中也帶負電荷，同種電荷相排斥，故染色時菌體不著色，而只能使背景