變更場地的可比性研究-以注射用重組人生長激素為例

1、.：.；摘要研討背景：在研發(fā)過程中或正式同意后生物制品的消費商經常會發(fā)生一些變卦。變卦的緣由為改良消費工藝、增大規(guī)模、擴建/新建車間、提高產品穩(wěn)定性和符合法規(guī)規(guī)定。當發(fā)生這些變卦時，消費商通常需求評價產品的相關質量目的，以證明變卦沒有對藥品的平安和有效性產生不利的影響。研討目的：經過新建車間和老車間消費的注射用重組人生長激素比較研討，分析兩個車間注射用重組人生長激素產質量量能否有差別，證明新車間產品是平安性和有效性。研討方法：1、工藝的研討：根據老車間的歷史數(shù)據，從被變卦的工藝參數(shù)和關鍵質量屬性的關系出發(fā)，在確定關鍵工藝參數(shù)和關鍵物料屬性的根底上，研討能否由于變卦而導致終產質量量的改動。2、所

2、涉及廠房的評價：根據工藝研討結果對涉及到的變卦進展風險評價，對變卦的潛在影響進展分析。3、產品平安性和有效性研討：用產品放行規(guī)范為根據，經過比較兩個車間原液、半廢品和廢品的關鍵質量屬性，評價兩個產品的一致性。研討結果：用產品放行規(guī)范為根據，我們以新車間消費的20批原液和老車間原液歷史上數(shù)據為比較的根底，進展了生物學活性、免疫化學性質，原液純度、雜質和污染情況比較，證明兩個車間的產品沒有顯著差別。強迫降解實驗對比闡明沒有發(fā)現(xiàn)兩個車間原液的降解產物的降解產物種類和降解速率有顯著差別。兩個車間3批原液的長期穩(wěn)定性沒有顯著差別。構造確證研討闡明兩個車間的一級和二級沒有差別。大鼠體內生物學活性符合要求，

3、沒有顯著差別。加速和長期穩(wěn)定性研討闡明，兩者從雜質分布和降解速率上沒有顯著差別。產質量量的類似性主要是由于新車間的在滿足產品的工藝要求的根底上，并沒有關鍵工藝參數(shù)的變卦。發(fā)酵和凍干規(guī)模的放大沒有對關鍵工藝參數(shù)的控制產生影響。這些證聽闡明新車間廠房和設備的驗證闡明其到達了設計要求，并可以滿足注射用重組人生長激素的工藝要求。研討結論：由于市場對于產品需求增大經常導致了廠房變卦。用消費注射用重組人生長激素廠房變卦為案例清楚闡明：假設設計合理，在符合cGMP原那么的理念的指點下，經過產質量量放行規(guī)范進展嚴厲的比較學研討證明了在中國廠房變卦的可實現(xiàn)性。關鍵詞：重組人生長激素；可比性研討；場地變卦，新建車

4、間 Comparability Study of Injectable Recombinant Human Growth Hormone Produced from Original Facility and Newly Built FacilityAbstractBackground: Due to market increased demand of biological therapeutics, a new facility is required to meet the market need. A critical systemic evaluation using product

5、 quality specification for lot release is designed and implemented for the products produced from both of original facility and newly built facility. This has been demonstrated a very successful approach for the case study of recombinant therapeutic protein human growth hormone in Shanghai, CHINA.Re

6、search Objective: By analysis and comparison of the CQA of the products produced from original facility and newly built facility, we would to convince our self and Chinese drug approval agencies that the facility change not only meet our market demand, but most importantly also meet the requirement

7、of drug quality.Methods: The methods used were the risk analysis and control for all the possible changes in bio-process due to facility change, and the effects of differences between original facility and new facility on the quality of drug product. Finally, bioassays and regular analytical assays

8、were used to show the quality similarity of Drug Substances and Drug Product.Results: Our analytical data using 20 lots of drug substances from newly built facility to compare the data generated for the drug substances from the original facility for biological potency, in-vivo activity, immunochemic

9、al properties, purity and impurity shows great similarity. Degradation of the products under stress conditions displayed similar profiles for degradation products and degradation rates. In addition, our structural analysis indicated the similarity of primary and secondary structures of the final pro

10、ducts from the both facility. All the evidences determined the facility change has NO noticeable or very minimal concerns to manufacture our current product once the correct design and strategy were used.Conclusions: Our case study using injectable recombinant human growth hormone clearly indicated

11、that, in China, a successful facility change for biological therapeutics with similar drug quality profile in comparison with the original facility can be achieved if a logical design and cGMP concept is correctly implemented.Keywords: recombinant human growth hormone, comparable research, facility

12、change, new facility目錄 TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc354163997 第1章概述 概述重組人生長激素的開展歷史人生長激素hGH是由腦垂體前葉，含有嗜酸性顆粒的生長激素GH分泌細胞所分泌，為191個氨基酸構成的肽類激素。正常情況下，生長激素hGH呈脈沖式分泌，生長激素HGH的分泌受 HYPERLINK baike.baidu/view/110042.htm t _blank 下丘腦產生的生長激素釋放素(GHRH)的調理，還受 HYPERLINK baike.baidu/view/26498.htm t _blank 性別、 HYPERL

13、INK baike.baidu/view/418639.htm t _blank 年齡和 HYPERLINK baike.baidu/view/116121.htm t _blank 晝夜節(jié)律的影響， HYPERLINK baike.baidu/view/48319.htm t _blank 睡眠形狀下 HYPERLINK baike.baidu/view/825467.htm t _blank 分泌明顯添加。生長激素的主要生理功能是促進 HYPERLINK baike.baidu/view/66841.htm t _blank 神經組織以外的一切其他組織生長；促進 HYPERLINK bai

14、ke.baidu/view/1051481.htm t _blank 機體合成代謝和蛋白質合成；促進 HYPERLINK baike.baidu/view/16.htm t _blank 脂肪分解；對 HYPERLINK baike.baidu/view/1340.htm t _blank 胰島素有 HYPERLINK baike.baidu/view/462536.htm t _blank 拮抗作用；抑制 HYPERLINK baike.baidu/view/16023.htm t _blank 葡萄糖利用而使 HYPERLINK baike.baidu/view/42545.htm t _

15、blank 血糖升高等作用。生長激素主要生理作用是對人體各種組織尤其是 HYPERLINK baike.baidu/view/15472.htm t _blank 蛋白質有促進合成作用，能刺激骨 HYPERLINK baike.baidu/view/205579.htm t _blank 關節(jié)軟骨和骨骺軟骨生長，因此能增高。人體一旦缺乏生長激素就導致生長停滯。1886年Pierre Marie 第一次在臨床上察看到腦下垂體的功能，發(fā)如今肢端肥大病人中腦下垂體增大。20世紀約翰霍普金斯醫(yī)院的Harvey Cushing第一次實驗發(fā)現(xiàn)垂體前葉在人、小鼠和狗中具有促生長作用14。1921年，Evan

16、s和Long牛垂體前葉的提取物可以刺激正常大鼠的生長5，很快又發(fā)現(xiàn)此提取物可以使去垂體的大鼠堅持生長6。促進生長的提取物發(fā)現(xiàn)可以刺激合成代謝效應，降低尿中氮、鈣和磷的排泄 7,8。尿中這些元素的測定提供了一個簡便的生物活性檢測方法，并用于在垂體提取物中分別活性組分。1944年Li和Evans第一次從牛垂體中分別如今知為生長激素的多肽激素9。 由于牛生長激素沒有勝利的促進人的長高10，因此人們開場從尸體或去除垂體的乳腺按患者的垂體中提取人生長激素11-13。在臨床實驗中，人和猴子的生長激素產生了合成代謝，并刺激了長高14-15。猿和非猿的生長激素的的生物化學差別被鑒別出來，同時解釋了生理效應的物

17、種特異性14。在1957和1985年之間，從尸體垂體提取的人生長激素被用于很多生長激素缺乏兒童的激素替代治療中16。在此期間，生長激素治療發(fā)現(xiàn)是有效并沒有什么副反響。然而，人垂體生長激素是稀缺和昂貴的。其他治療的運用開發(fā)，或人生長激素的細胞作用機理的研討時不能夠的。科學的提高改動了人生長激素領域的開展。人生長激素的DNA被克隆到了細菌質粒上17，從此開辟了基因工程人生長激素商業(yè)化的道路。1985年被報道18發(fā)現(xiàn)兒童期運用人生長激素的兒童，成年后發(fā)現(xiàn)罹患致命的神經退行性疾病-克雅病，因此美國食品藥品監(jiān)視管理局FDA在上世紀80年代命令停頓一切提取自死人腦垂體的hGH，并不準運用于人體上。這一事件

18、促發(fā)了重組人生長激素在臨床上商業(yè)化運用。隨著在細菌中大規(guī)模消費人生長激素，人生長激素的供應不再成為人體或實驗室進展各種治療研討的限制。20世紀80年代，基因工程興起。1981年Genentech公司利用大腸桿菌E. Coli包涵體技術研制出含192氨基酸的基因重組人生長激素Met-rhGH。與天然hGH相比，在N-末端多了一個蛋氨酸殘基，又稱為somatrem (Protropin)。隨著基因工程技術的開展，1986年經過基因重組技術合成出含天然序列的重組人生長激素。上世紀90年代人們純化了人生長激素受體蛋白，并克隆了基因19,20。經過X射線晶體衍射解析了人生長激素受體蛋白和人生長激素的相互

19、作用的三維構造21。生長激素受體構造的知識對生長激素信號傳導機理的研討提供了新的視野和方向。直接單位點突變技術被用于對生長激素配體-受體相互作用的研討22，分子方法也被用于生長激素受體激動劑的設計。人生長激素基因簇大約有66,500個堿基，位于第17染色體的長臂上23。由GH-N正常生長激素基因，CS-L類絨毛膜生長激素，CS-A絨毛膜生長激素A，GH-V生長激素變體基因，也是胎盤生長激素和CS-B絨毛膜生長激素B5個基因家族組成。GH-N和GH-V有時也稱為GH-1和GH-2。絨毛膜生長激素也是胎盤催乳素基因。這5個基因的DNA序列高度同源。因此猜測生長激素基因家族經過基因復制而產生的。只需

20、GH-N是正常安康必需的。切除或突變GH-N基因引起IA型生長激素缺乏，這是最嚴重的生長激素缺乏。具有這個缺陷的個體不能產生內源性生長激素。在出生或出生36個月引起有明顯的重度低血糖和生長延緩24。這些患者初始對生長激素替代有呼應，但治療1年內由于生長激素抗體產生而抑制了生長。GH-N基因在垂體前葉表達，是在兒童和成年人中循環(huán)的主要方式25。生長激素是分泌蛋白，它的合成是一個含26個氨基酸的激素前體。當生長激素跨過內質網膜轉運到貯藏粒中時信號肽被切除。GH-N表達的生長激素是一個22kDa，191個氨基酸的單鏈多肽。生長激素生物活性構象含有兩個二硫鍵橋。22kDa GH-N基因產物在人的肝臟和

21、受體結合，并刺激IGF-1的產生和長高。一切的人生長激素都是采用注射的方式給藥。皮下和肌內注射時等價的26。由于有較小的疼痛感，皮下注射更好。腹部的皮下注射比大腿的皮下注射有更高的生長激素血清濃度，然而刺激IGF-1的程度相當27。在循環(huán)系統(tǒng)內生長激素和高親和的生長激素結合蛋白GHBP結合，和這個蛋白結合延伸了生長激素在循環(huán)系統(tǒng)的半衰期。給藥的時間不影響血清中生長激素的程度，晚上給藥模擬了生理的生長激素峰值28。生長激素的去除半衰期大約在2到3小時之間。經過在肝臟和腎臟的代謝而去除的，成年人比兒童去除速率更快29。人生長激素是非糖基化的，因此目前國際上曾經同意上市的重組人生長激素主要是由細菌E

22、. Coli消費的，如Genentech的Nutropin，Eli Lilly的Humatrope，Novo Nordisk的Norditrope等。也有用哺乳動物細胞消費的，如Serono的Saizen；以及由酵母消費的，如LG的Valtropin。 REF _Ref354145858 h 表 1列出了目前主要重組人生長激素的消費商和在美國和中國同意上市的時間。我國內已上市產品均是由大腸桿菌E. Coli消費的。表 SEQ 表 * ARABIC 1 主要重組人生長激素的消費商消費商商品名美國同意日期中國同意日期美國禮來制藥Humatrope1987年3月2021年6月美國基因技術公司 HYP

23、ERLINK /scripts/cder/drugsatfda/index.cfm?fuseaction=Search.Set_Current_Drug&ApplNo=019676&DrugName=NUTROPIN&ActiveIngred=SOMATROPIN%20%5BrDNA%20origin%5D&SponsorApplicant=GENENTECH&ProductMktStatus=1 Nutropin1993年11月/輝瑞制藥Genotropin1995年8月2021年7月默克雪蘭諾Saizen1996年10月2021年4月 HYPERLINK

24、 novonordisk/ t _blank 諾和諾德制藥 HYPERLINK /scripts/cder/drugsatfda/index.cfm?fuseaction=Search.Overview&DrugName=NORDITROPIN Norditropin Flexpro2000年6月2021年6月 HYPERLINK /WS01/CL0860/56293.html t _blank 山德士制藥 HYPERLINK /scripts/cder/drugsatfda/index.cfm?fuseac

25、tion=Search.Overview&DrugName=OMNITROPE Omnitrope2006年5月/上海結合賽生物工程珍怡/1999年7月 HYPERLINK search.51job/list/co,c,2046275,000000,10,1.html t _blank 長春金賽藥業(yè)有限責任公司賽增/1998年 HYPERLINK ankebio/ t _blank 安徽安科生物工程股份安蘇萌/1999年*met-hGH已下市重組人生長激素在大腸桿菌中的表達有兩種方式，第一種方式是甲硫氨酸生長激素m-hGH，他和天然生長激素有一個氨基酸的差別，在N端多了一個甲硫氨酸，美國基因技

26、術公司和諾和諾德最初的產品就是m-hGH，目前這種方式的重組人生長激素曾經下市。第二種方式是真實的人生長激素。一些研討闡明甲硫氨酸生長激素比真實的人生長激素產生較高的抗體30，美國禮來公司的Humatrope是第一個同意的和天然序列一致的重組人生長激素31。甲硫氨酸殘基和細菌蛋白結合的痕量的人生長激素比單純的甲硫氨酸人生長激素產生更高的免疫原性，這個問題可以經過純化而緩解?？贵w的產生很少干擾人生長激素的生物活性，由于抗體的親和性和濃度均較低31。生長激素抗體程度使得市場不再跟隨甲硫氨酸人生長激素。哺乳動物細胞的人生長激素有非常低的免疫原性32。目前主要的重組人生長激素的消費商均提供的是和天然人

27、生長激素一致的重組人生長激素。大多數(shù)消費商采用的是大腸桿菌系統(tǒng)，由于目前同意上市的產品證明大腸桿菌系統(tǒng)表達的人生長激素的免疫原性并未對產品的有效性和平安性產生不利的影響采用大腸桿菌系統(tǒng)是最經濟的，而且大腸桿菌系統(tǒng)曾經是比較成熟的基因工程技術，上游構建和下游純化均有比較成熟的技術，工藝控制比較穩(wěn)定。重組人生長激素是一個單鏈多肽激素，通常以生物活性的單體存在，但正像大家所知的他易聚集為二聚體，并在熱和機械應力下如制備過程中的搖動等轉化為多聚體而失去活性。生長激素的藥物配方趨向于不穩(wěn)定，尤其在溶液中，生長激素容易生成降解產物，如脫氨和氧化產物。主要的降解反響是1直接水解脫氨或經過環(huán)狀琥珀酰亞胺中間體

28、而構成L-asp-hGH，L-iso-asp-hGH， D-asp-hGH以及D-iso-asp-hGH；2在14和125位上甲硫氨酸殘基的氧化；3聚集；4肽骨架的截斷。凍干形狀以及溶液形狀的生長激素的主要降解產物是脫氨組分。脫氨發(fā)生在149的Asn天冬酰胺上，在152的天冬酰胺殘基上也會產生少量的脫氨。在溶液中人生長激素在14和125位上的甲硫氨酸極易氧化。溶液中hGH氧化構成亞砜主要緣由是配方中的溶解氧。蒸餾水中氧氣的溶解度大約是200uM，而對于4IU/ml的生長激素來說，其濃度相當于60nM。在正常的儲存條件下，溶解氧的量超越了3000倍生長激素的化學計量，所以是不能經過塞蓋或包裝前對

29、緩沖溶液除氣來處理溶解氧的問題。很多降解反響多可以經過凍干從蛋白質中移走水分而顯著降低，所以如今生長激素通常都是凍干的，在4以凍干方式儲存的凍干劑型，運用前再重新溶解，大部分的商品重組人生長激素是凍干方式的。除了常見的凍干方式制劑外，思索到運用方便和患者的依從性，人生長激素的溶液制劑和緩釋制劑的研討也很多。目前國際上諾和諾德和美國基因技術公司均有溶液劑型的生長激素上市，但由于人生長激素在溶液中很不穩(wěn)定，因此貨架期要比凍干劑型短很多，而且對運輸?shù)囊笠脖容^高，溶液劑型對溫度的敏感性比凍干劑型高很多。從二十世紀八九十年代至今，普遍以為在冷凍枯燥過程中冷凍和枯燥都會引起蛋白質的變性。Dean33以為

30、在冷凍過程中短少維護劑的情況下，蛋白質將失去活性；而脫水過程本身能使蛋白質損傷，從而復水后蛋白失去活性。維護劑的作用普通以為是經過與蛋白的氫鍵作用而維護了蛋白由于失去水分而裸露的基團。維護劑的濃度和凍干速率相關，由于對于藥物制劑來說維護劑的濃度不能過高，所以要有較大的凍干速率。人生長激素制劑的穩(wěn)定性是和水分以及氧有親密的關系，在低的水分含量以及最小氧的存在下制劑的穩(wěn)定性最好34。但是在不加維護劑的情況下，假設單純降低水分含量能夠適得其反，由于蛋白假設失去最后一層水分的維護，將由于基團的暴露而聚集變性。有報道35人生長激素在含水量4.6%時完全變性，而在含水量7.6%時沒有變性。所以凍干過程應該

31、參與適宜的維護劑以及其他輔料，并且含水量不是越低越好。較少氧對蛋白的氧化，可以經過充氮氣來維護36。冷凍枯燥過程中的降溫速率的選擇與維護劑的濃度有關，假設維護劑濃度很高，以不太大的降溫速率就能使溶液以玻璃態(tài)固化。很多人以為快速冷凍有益于生物活性，由于快速冷凍可以減少緩沖液結晶引起的pH變化，減低蛋白質部分高離子強度的接觸時間，減少變性能夠發(fā)生的時間。但是很多證聽闡明凍融和冷凍枯燥后，快速冷凍對蛋白的活性回收不利，并對貯藏期凍干產品的穩(wěn)定性也有影響37。用磷酸緩沖液和甘露醇作為賦形劑體系，在pH7.47.8時，冷凍速率對人生長激素的可溶性聚合物構成的影響檢測不到，可是對不溶性聚合物構成的影響是顯

32、著的，冷凍速率越高聚合物越多。不溶性聚合物的構成被冷凍前的低pH加速。凍干溶液的pH很重要，對脫氨的影響較大。選用不同的緩沖溶液對pH的要求也不一樣。中選用磷酸鹽作為緩沖液時，在較低的pH6.0下，有較少的脫氨組分，但在此pH下較易產生聚集38。人生長激素溶液劑型就是選用較低的pH，添加非離子外表活性劑防止聚集。人生長激素最常用的凍干維護劑是甘氨酸和甘露醇。兩種配方比很重要，根據劑量的不同兩種物質參與的比例是不同一樣的。甘露醇作為維護劑和甘氨酸一同起到穩(wěn)定凍干制劑的作用。為了保證重新溶解后人生長激素的穩(wěn)定，也有在溶解水中參與非離子外表活性劑來添加溶液的物理穩(wěn)定性，如諾和諾德的Norditrop

33、inSimpleXx，在溶解水中參與泊洛沙姆188以添加物理穩(wěn)定性。表2列出了價錢典型的商品化重組人生長激素的配方。表 SEQ 表 * ARABIC 2常見商品化重組人生長激素的凍干配方*商品名劑型規(guī)格賦形劑緩沖鹽rhGH甘氨酸甘露醇蔗糖NaH2PO4Na2HPO4pHGenotropin凍干劑型4.5IU1.527.60/0.300.306.71.8/0.320.326.7Humatrope155525/01.137.5186618/01.367.5Nutropin1551.745/0.451.37.4Saizen155/34.26.5-8.5*來源于FDA網站相關產品的

34、闡明書 REF _Ref354161124 h 表 2中可以看到大多數(shù)上市產品采用的甘氨酸和甘露醇配方系統(tǒng)。本文討論的產品就是采用冷凍枯燥技術制備的凍干粉針劑型，也采用和上市產品同樣的甘氨酸和甘露醇體系，配方均得到同意，長期穩(wěn)定性研討發(fā)現(xiàn)，凍干劑型和溶液劑型相比較在貨架期要穩(wěn)定的很多，這也是目前市場上還是主要以凍干劑型為主的緣由。場地變卦的緣由注射用重組人生長激素是上海結合賽生物工程已上市十多年的老產品，隨著市場的擴展，原消費車間已不能滿足市場需求，為此在舊址上新建了注射用重組人生長激素消費車間，用于注射用重組人生長激素的消費。由于在舊址上新建，原質量檢測、原輔資料采購和儲存，以及質量保證系統(tǒng)

35、均采用原來的系統(tǒng)，檢測、原輔資料和質量保證系統(tǒng)的風險較低。本次是在原廠址增建了一個注射用重組人生長激素的消費線，包括了原液消費車間和制劑消費車間，對于本次新建車間閱歷了下面幾個階段。表SEQ 表 * ARABIC3新增車間閱歷的階段流程階段要求設計前根據歷史研討和消費數(shù)據分析和評價原液和制劑的關鍵工藝參數(shù)，并分析其對終產質量量屬性的影響。廠房設計根據關鍵工藝參數(shù)的分析結果，提出對廠房和設備的工藝設計要求。廠房和設備應可以滿足有效控制關鍵工藝參數(shù)的要求。安裝確認完成廠房和設備3Q試制在新建車間進展試制，調查車間、設備、人員等能否可以按照預定的工藝參數(shù)進展消費，并得到合格的產品。工藝驗證根據是試制

36、的結果完善工藝規(guī)程和批記錄等，然后進展工藝驗證。比較研討新車間和老車間的原液和廢品進展全面的藥學比較研討。繼續(xù)改良新老車間進展繼續(xù)的調查和比較，對更多批次的原液和廢品進展回想性的驗證，進一步確認工藝的穩(wěn)定性。在新車間的設計前根據實踐需求，放大了發(fā)酵規(guī)模和凍干規(guī)模，堅持其他操作單元規(guī)模不變。對于生物制品，其消費工藝是關鍵的，因此在整個新車間開展階段，以不改動關鍵工藝參數(shù)和關鍵質量屬性為前提進展設計、實施和驗證。注射用重組人生長激素工藝流程注射用重組人生長激素是凍干粉針劑型，其原液經過基因工程技術將目的基因插入載體質粒中，然后將質粒轉化到大腸桿菌而得到可以表達重組人生長激素的大腸桿菌工程菌，再經過

37、大腸桿菌的培育使之消費目的蛋白重組人生長激素。由于重組人生長激素是經過大腸桿菌來消費的，因此需求將目的產物和大腸桿菌其他組分如宿主蛋白等進展分別。培育后的大腸桿菌需求經過一系列的工藝步驟進展分別純化后才干得到純真的重組人生長激素原液。得到的原液經過配制、除菌過濾、凍干和包裝等制劑過程，得到終產品注射用重組人生長激素凍干粉針。對于藥品的消費，圖1籠統(tǒng)的給出了關鍵物料屬性和關鍵工藝參數(shù)對關鍵質量屬性的影響。根據這一定義，工藝形狀取決于該工藝的關鍵工藝參數(shù)和輸出物料的關鍵物料屬性39。藥品消費單元操作CMAs輸入物料CQAs產出物CPPs關鍵工藝參數(shù)圖 SEQ 圖 * ARABIC 1關鍵物料屬性C

38、MAs和關鍵工藝參數(shù)CPPs對關鍵質量屬性CQAs的影響生物制品由于分子量大，構造復雜，對于分析方法和儀器設備要求頗高；雖然如此，現(xiàn)代分析技術難以按照個體分子的2級及3級構造進展完好表征化測定，因此主要經過控制其消費工藝來闡明批次消費的類似性；而消費工藝是經過多個消費單元操作來實現(xiàn)的。注射用重組人生長激素的消費工藝也被分為多個單元操作， REF _Ref353921443 h 圖 2給出了注射用重組人生長激素消費工藝流程圖。流程圖中根據 REF _Ref353921457 h 圖1的方法，給出了每個單元操作的輸入物料和產出物。從圖中可以看出，上一步驟的產出物是下一步驟的輸入物料，這里將工藝的產

39、出物除原液、半廢品和廢品外的工藝產出物均定義為中間品。根據多年的消費閱歷對每一個單元操作的物料屬性和工藝參數(shù)進展分析，并評價其對關鍵質量屬性的影響。當輸入物料的某個質量屬性如水分、純度的變化能顯著影響產出物的屬性時，那么定義其為關鍵物料屬性。當工藝參數(shù)運轉參數(shù)如流速、轉速或工藝形狀變量如溫度、壓力、pH的實踐變化能顯著影響產出物料的屬性時，那么定義該工藝參數(shù)是關鍵的40。新建車間輸入物料和產出物的關鍵屬性CMAs和CQA應和老車間堅持一致。細胞庫MCB和WCB 培育基、工藝空氣、純化水 發(fā)酵培育中間品1離心捕獲菌體中間品1 中間品2初純中間品2 各種鹽、純化水 中間品3精純重組人生長激素原液中

40、間品3 層析介質、過濾膜、注射用水 配制中間品4重組人生長激素原液 輔料、注射用水 除菌過濾半廢品中間品4 過濾膜、工藝空氣、注射用水 灌裝中間品5半廢品 膠塞、西林瓶、注射用水 凍干中間品6中間品5 氮氣 釓蓋廢品凍干品 鋁蓋 包裝包裝廢品廢品 瓶貼、闡明書、外包裝 輸入物料產出物消費操作單元圖 SEQ 圖 * ARABIC 2 注射用重組人生長激素工藝流程圖下劃線表示單元操作的產出物從總體的工藝流程上看原液是廢品關鍵物料，新車間原液的關鍵質量屬性和老車間不應有顯著差別，原液后面工藝的變卦不對原液的質量屬性產生不利的影響。研討目的與意義根據關于貫徹實施的通知國食藥監(jiān)安2021101號和國食藥

41、監(jiān)安2021106號要求，涉及無菌檢查工程制劑和原料藥均應在2021年12月31日前到達新修訂的藥品GMP要求。其他應在2021年12月31日前到達新修訂藥品GMP要求。生物制品均應在2021年12月31日前到達新修訂的藥品GMP要求。簡稱新版GMP41是一次艱苦的GMP修訂，特別是針對無菌藥品的消費提高了要求，很多消費商為符合新版GMP要求必需對原有廠房進展改建，與此同時很多生物制品經過改建或擴建淘汰老的工藝，采用新工藝。如何將變卦后的產品與變卦前的產品進展對比是很多消費商面臨的問題。消費方法、工藝、質控檢測方法以及產品表征檢測方法的改良，使消費商可以較好對變卦對消費工藝和消費設備的影響進展

42、識別和評價，這使得從藥學上證明其有可比性成為能夠。比如，近年來大分子分別技術、產品以及工藝相關技術大大改良，消費商在建立產品和生物活性表征方面閱歷證的靈敏方法以及對這些檢測中差別顯著性評價方面所具有的才干，有才干在不用反復進展臨床藥效研討的情況下，對產品可比性研討進展評價。假設可比性實驗證明消費變卦并未對產品的平安性、特性、純度和效價產生影響，可以為這兩種產品具有可比性?？杀刃匝杏懯菑S房變卦的關鍵，本文嘗試以注射用重組人生長激素新建廠房的可比性研討為例，對如何評價產品變卦前后的可比性進展討論。注射用重組人生長激素產品引見藥品的平安性和有效性是經過上市前非臨床和臨床實驗而評價，藥品的關鍵質量屬性

43、經過臨床期間的藥學研討而最終確定的，因此對于已上市產品的變卦，其關鍵質量屬性不應發(fā)生變卦，否那么需求追加非臨床或臨床實驗來確認其平安性和有效性。注射用重組人生長激素產品已上市10多年，歐洲藥典、美國藥典和中國藥典均收錄了此產品，具有比較成熟的分析方法，質量規(guī)范也是基于對產品和工藝的了解而建立的，因此質量規(guī)范反映了其關鍵質量屬性。下面從原液、半廢品和廢品3個方面分別引見新車間產品的研討方法和質量規(guī)范。原液的研討方法和質量規(guī)范重組人生長激素的關鍵質量屬性包括一級、二級和三級構造、理化性質、免疫化學性質、生物活性、純度和雜質以及產品的穩(wěn)定性，原液的研討方法應包含上述內容。重組人生長激素的構造 REF

44、 _Ref353918240 h 圖 3給出了人生長激素的一級氨基酸序列和二硫鍵位置。圖 SEQ 圖 * ARABIC 3人生長激素一級構造圖42重組人生長激素的分子式為C990H1528N262O300S7，分子量22125道爾頓。其他構造信息列于 REF _Ref353935249 h 表4中。新車間重組人生長激素原液應進展構造確實證，證明其和天然的人生長激素的構造具有一致的一級和二級構造。構造確證檢測包括：肽圖質譜覆蓋率、質譜分子量、N末端和C末端序列檢測、二硫鍵配對檢測和圓二色譜法檢測。兩個車間各取13批原液進展構造檢測， REF _Ref353935249 h 表4列出了檢測工程和兩

45、個車間原液構造的一致性評價規(guī)范。表 SEQ 表 * ARABIC 4人生長激素構造確證研討內容檢測工程實際值一致性規(guī)范質譜分子量22,125Dalton3批原液檢測，分子量和實際值誤差小于1%；和對照品平均分子量相差小于20Dalton肽圖質譜覆蓋率氨基酸序列兩種酶酶切，分子量覆蓋率應大于90%圓二色譜法alfa螺旋占多數(shù)一樣條件檢測，應和對照品譜圖一致二硫鍵配對兩對二硫鍵：Cys53-Cys165和Cys182-Cys189僅有C53-C165和C182和C189兩對分子內二硫鍵，沒有錯配和分子間二硫鍵N末端序列NH2-FPTIPLSRLFN末端10個殘基序列為NH2-FPTIPLSRLFC

46、末端序列SVEGSCGF-COOHC末端8個殘基序列為SVEGSCGF-COOH放行規(guī)范注射用重組人生長激素產品已上市10多年，并且是在中有收錄，因此質量規(guī)范反映了其關鍵質量屬性，下面從原液、半廢品和廢品3個方面分別引見新車間產品的研討方法和質量規(guī)范。原液的研討方法和質量規(guī)范重組人生長激素的關鍵質量屬性包括一級、二級和三級構造、理化性質、免疫化學性質、生物活性、純度和雜質，以及產品的穩(wěn)定性，因此原液的研討方法應從上述方面進展。重組人生長激素的構造 REF _Ref353918240 h 圖 3給出了人生長激素的一級氨基酸序列和二硫鍵位置。圖 SEQ 圖 * ARABIC 4人生長激素一級構造圖

47、重組人生長激素的分子式為C990H1528N262O300S7，分子量22125道爾頓。其他構造信息列于 REF _Ref353935249 h 表4中。新車間重組人生長激素原液，應進展構造確實證，證明其和天然的人生長激素的構造具有一致的一級和二級構造。兩個車間各取13批原液進展構造檢測，檢測包括：肽圖質譜覆蓋率、質譜分子量、N末端和C末端序列檢測、二硫鍵配對檢測和圓二色譜法檢測。 REF _Ref353935249 h 表4列出了這些檢測的實際值和兩個車間原液構造的一致性評價規(guī)范。表 SEQ 表 * ARABIC 5人生長激素構造確證研討內容檢測工程實際值一致性規(guī)范質譜分子量22,125Da

48、lton3批原液檢測，分子量和實際值誤差小于1%；和對照品平均分子量相差小于20Dalton肽圖質譜覆蓋率氨基酸序列兩種酶酶切，分子量覆蓋率應大于90%圓二色譜法alfa螺旋占多數(shù)一樣條件檢測，應和對照品譜圖一致二硫鍵配對兩對二硫鍵：Cys53-Cys165和Cys182-Cys189僅有C53-C165和C182和C189兩對分子內二硫鍵，沒有錯配和分子間二硫鍵N末端序列NH2-FPTIPLSRLFN末端10個殘基序列為NH2-FPTIPLSRLFC末端序列SVEGSCGF-COOHC末端8個殘基序列為SVEGSCGF-COOH放行規(guī)范新車間重組人生長激素原液不僅應符合放行檢驗規(guī)范，還應基于

49、搜集的歷史數(shù)據，經過統(tǒng)計學方法建立兩個車間比較的驗收規(guī)范。根據分析方法的性質，可以將放行規(guī)范分為定量規(guī)范和定性規(guī)范，定性規(guī)范作為定量規(guī)范的補充，更全面的展現(xiàn)產品雜質增減情況。重組人生長激素主要相關雜質有：脫氨組分、氧化組分、多聚體、工藝中被截斷的人生長激素片段。主要工藝雜質有：內毒素、宿主菌體蛋白、外源DNA、微生物。內控放行規(guī)范的檢測方法涵蓋了上述雜質的分析。因此可以經過對放行檢測結果的比較，證明廠房的變卦對原液的理化性質、純度和雜質能否產生了不利影響。新車間采用至少10批次原液和老車間進展比較，原液應符合放行規(guī)范，同時對定量檢測數(shù)據的統(tǒng)計分析，比較兩個車間的平均值和規(guī)范偏向，判別兩者能否有

50、顯著差別。 REF _Ref353931977 h 表 6列出了主要的放行規(guī)范檢測工程，檢測方法根本是藥典方法，分析方法可靠并均經過驗證。表 SEQ 表 * ARABIC 6 重組人生長激素原液的放行規(guī)范檢測工程分析方法外觀目檢鑒別方法1二部重組人生長激素項下的鑒別1項方法反相色譜法方法2二部重組人生長激素項下的鑒別4項方法等電聚焦電泳IEF檢查相關蛋白二部注射用重組人生長激素項下的相關蛋白檢測方法反相色譜法高分子蛋白二部注射用重組人生長激素項下的高分子蛋白檢測方法分子排阻色潽法電荷異構體等電聚焦電泳細菌內毒素二部附錄XI E剩余宿主蛋白二部重組人生長激素項下的菌體蛋白剩余量檢測方法DNA殘留

51、二部重組人生長激素項下的外源性DNA殘留量下的方法含量二部注射用重組人生長激素項下方法生物學活性附錄XII P生長激素生物測定法是采用去垂體大鼠體重法和脛骨法進展的生物活性測定法，和生長激素的體內藥效學研討采用一樣的方法，因此去垂體大鼠體重法和脛骨法測定結果也反映了動物體內藥效結果。重組人生長激素各論中規(guī)定生物活性：照生長激素生物測定法附錄XII P依法檢查，每1mg蛋白中含生長激素不得少于2.5單位每年至少測定一次。兩個車間各取13批同時進展重組人生長激素體內生物學活性的檢驗，兩個車間原液的生物活性應符合重組人生長激素各論中的規(guī)定，兩者的活性平均值和規(guī)范偏向應沒有顯著差別，以此證明廠房的變卦

52、未改動其體內生物學活性。免疫化學性質免疫化學性質的檢測可以采用免疫斑點法或western blot方法，兩種方法均針對重組人生長激素的抗原特性進展檢測。免疫化學性質的研討，可以證明兩個車間消費的原液抗原特異性一致性，它的一致性可以進一步闡明兩者構造的一致。強迫降解實驗和長期穩(wěn)定性新車間消費的原液可以經過高溫暖光照強迫破壞實驗，檢測相關蛋白、高分子蛋白質、電荷異構體、含量，比較兩者之間降解物和降解速率。在工藝不變的情況下降解產物類型和降解速率應該沒有顯著變化，新車間原液和老車間強迫降解比較應不得產生新的降解產物。重組人生長激素原液為冷凍保管，因此無需進展加速穩(wěn)定性調查，僅進展長期穩(wěn)定性調查。將新

53、車間和老車間的長期穩(wěn)定性歷史數(shù)據進展統(tǒng)計分析和比較，降解速率和雜質類別上應沒有明顯的差別。重組人生長激素原液長期穩(wěn)定性調查方法如下：擬調查點為0、3、6、12、18、24、36個月。原液包裝方式和老車間一致，儲存溫度28。按照2021年版附錄XIX C“原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性實驗指點原那么，本品為注射劑，指點原那么規(guī)定的重點調查工程為：外觀色澤、含量、pH值、可見異物、有關物質。因此重點調查工程為：性狀、含量、pH值、可見異物、有關物質相關蛋白、高分子蛋白、水分目的。在0、24和36個月進展全項檢測。半廢品的研討方法和質量規(guī)范重組人生長激素原液和輔料按照處方比例進展混合后除菌過濾得到半廢品。半

54、廢品的放行規(guī)范包括：內毒素、無菌、蛋白含量。新車間半廢品應符合放行規(guī)范，和歷史數(shù)據比較沒有顯著差別。半廢品除放行規(guī)范的檢測還應添加穩(wěn)定性調查，在室溫下，調查0、8、16和24小時半廢品相關蛋白、高分子蛋白和含量，新車間半廢品在調查期內應符合廢品的放行規(guī)范，比較兩個車間上述目的平均值和相對規(guī)范偏向，兩個車間應無顯著差別。廢品的研討方法和質量規(guī)范注射用重組人生長激素曾經被錄入，因此其放行規(guī)范是不低于2021年版的各論的要求，放行檢測涵蓋了注射用重組人生長激素理化性質、純度和雜質、生物學活性等產品關鍵質量屬性。可以作為評價兩個車間產質量量的比較規(guī)范。新車間注射用重組人生長激素的研討，不僅要求符合放行

55、規(guī)范，還應進展生物活性和穩(wěn)定性調查。新車間至少3個延續(xù)批和老車間進展比較，比較方法如下：半廢品和廢品放行檢測中的定量工程應采用統(tǒng)計分析的方法和老車間的歷史數(shù)據比較，比較平均值，相對規(guī)范偏向。兩個車間同期消費的產品均應符合質量規(guī)范。對兩個車間同期消費的產品雜質進展分析，應沒有新增雜質的出現(xiàn)。兩個車間的產品同時進展高溫暖光照的強迫降解實驗，比較兩個車間產品在高溫暖光照情況下降解速率能否有不同，雜質類型能否有差別。新車間延續(xù)3批產品進展加速穩(wěn)定性調查，采用市售小包裝儲存，溫度252，濕度60%5%。參照2005年版附錄XIX C以及設置調查時間點，調查點為0、1、3、4.5和6個月。重點調查工程為：

56、性狀、含量、pH值、可見異物和有關物質相關蛋白和高分子蛋白。0和6個月進展全項檢測。新車間和老車間產品的歷史數(shù)據進展比較，兩者在降解速率和雜質類別上應沒有明顯的差別。新車間每個規(guī)格至少3批進展長期穩(wěn)定性調查，采用市售小包裝儲存，儲存溫度53。按照2005年版附錄XIX C以及設置調查時間點。時間點在第一年普通為每3個月末一次，第二年每6個月末一次，以后每年末一次。即第0、3、6、9、12、18、24、36個月末取樣檢測調查目的。重點調查工程為：性狀、含量、pH值、可見異物和有關物質相關蛋白和高分子蛋白。0、24和36個月分別進展全項檢測。和老車間同規(guī)格產品進展比較，兩者在穩(wěn)定性上應沒有明顯差別

57、。表 SEQ 表 * ARABIC 7注射用重組人生長激素放行規(guī)范檢測方法檢測工程分析方法外觀目檢鑒別方法1二部重組人生長激素項下的鑒別1項方法反相色譜法方法2二部重組人生長激素項下的鑒別4項方法等電聚焦電泳IEF檢查水分費休氏法容量滴定法相關蛋白二部注射用重組人生長激素項下的相關蛋白檢測方法反相色譜法高分子蛋白二部注射用重組人生長激素項下的高分子蛋白檢測方法分子排阻色潽法電荷異構體等電聚焦電泳異常毒性二部附錄XI C細菌內毒素二部附錄XI E裝量差別二部附錄I B注射劑無菌二部附錄XI H 薄膜過濾法酸堿度二部附錄 VI H溶液的廓清度與顏色二部附錄IX A第一法和附錄IX B可見異物二部附

58、錄IX H燈檢法不溶性微粒二部附錄IX C第一法含量二部注射用重組人生長激素項下方法生物學活性二部重組人生長激素項下方法初步風險評價輸入物料的變卦分析和風險評價根據 REF _Ref353921443 h 圖 2的工藝流程圖，首先對注射用重組人生長激素工藝中的輸入物料分別進展分析，找出由于廠房變卦而引起變化的輸入物料，然后針對這些輸入物料進展變卦的風險識別和評價。 REF _Ref353922859 h 表8將注射用重組人生長激素的全部輸入物料列出，并對能夠引起變化的物料進展了識別。表SEQ 表 * ARABIC8輸入物料的變卦分析物料稱號能否變卦風險分析細胞庫MCB和WCB否生物制品的起始物

59、料，是關鍵物料，由于在舊址增建車間，因此種子批采用和原車間一樣的種子批，需規(guī)定采用一樣的轉運方式。發(fā)酵培育基否半合成培育基，是關鍵物料，來源和質量規(guī)范和原車間一致。儲存和稱量的地址均未變化。各種鹽否初純和精純運用了各種鹽，如作為緩沖劑的磷酸鹽等，這些化學物料的來源、質量規(guī)范未發(fā)生變化，檢測、儲存和稱量地址均無變化。層析介質否層析介質是關鍵物料，來源和種類對分別影響很大，因此是不能變卦的。采用和原車間一致的采購、質控、存儲。過濾膜否過濾膜的來源、材質非常重要，不能變卦。采用和原車間一致的采購、質控、存儲。工藝空氣是工藝空氣和產品接觸的單元操作主要是發(fā)酵和除菌過濾。發(fā)酵需求通氣堅持溶氧。過濾是經過

60、氣壓使半廢品濾過除菌過濾膜。工藝空氣系統(tǒng)進展了改造，涉及到變卦，風險較高需求進展全面驗證。純化水是發(fā)酵和初純采用純化水，由于大腸桿菌的發(fā)酵相對對水的要求沒有細胞培育高，同時大腸桿菌本身產生大量的內毒素，因此在工藝的上游采用純化水。注射用水是注射用水用于精純、半廢品配制、器具的最后清洗等過程。對于原液消費水是控制內毒素的關鍵要素，制劑的配料等均采用注射用水，因此注射用水非常重要。新建車間水系統(tǒng)進展了改造，涉及到變卦，風險較高，需求進展全面驗證。輔料否輔料是關鍵物料，采用和原車間一致的采購、質控、存儲，沒有變卦。包裝資料否內包裝資料和產品接觸，其來源、材質等均是關鍵屬性，新車間采用和原車間一樣的采