尿液維生素B2測(cè)定

1、負(fù)荷尿中維生素B2測(cè)定 熒光分析法1維生素B2（核黃素）黃色粉末狀結(jié)晶體，水溶液呈現(xiàn)黃綠色熒光。酸性及中性環(huán)境中對(duì)熱穩(wěn)定，堿性環(huán)境中易被熱和紫外線破壞代謝活性形式：黃素單核苷酸（FMN）， 黃素腺嘌呤二核苷酸輔酶（FAD）生理功能： 1、 參與體內(nèi)生物氧化與能量代謝 2 、參與維生素B6和煙酸的代謝 3、其他生化反應(yīng)，藥物代謝等。2 維生素B2缺乏與過量維生素B2缺乏：口腔：口角炎，唇炎，舌炎，地圖舌皮膚：脂溢性皮炎眼：對(duì)光有過度敏感的反應(yīng)、視物模糊等其他影響：干擾體內(nèi)鐵的吸收、貯存及動(dòng)員 影響生長(zhǎng)發(fā)育一般核黃素不會(huì)引起過量中毒。8/12/20223食物中維生素B2來源8/12/20224實(shí)驗(yàn)

2、目的應(yīng)用尿負(fù)荷試驗(yàn)評(píng)價(jià)人體維生素B2營(yíng)養(yǎng)狀況。8/12/20225實(shí)驗(yàn)原理 代謝角度：-水溶性維生素，在機(jī)體內(nèi)存留時(shí)間短，滿足機(jī)體需求后，多余部分迅速從尿中排出。-當(dāng)日常攝入量達(dá)不到機(jī)體需要量時(shí)，攝入的維生素制劑將首先留在體內(nèi)滿足機(jī)體需要，從而尿中排出量較少，反之亦然。因此，可由尿中排出的維生素量來判斷體內(nèi)水溶性維生素的水平。 8/12/20226 方法角度 -熒光化合物，在一定波長(zhǎng)的光波照射下發(fā)黃綠色熒光。 -熒光強(qiáng)度F與溶液濃度C成線性關(guān)系 F=KC8/12/20227儀器與試劑熒光光度計(jì)酸性水：取濃硫酸0.3ml，加蒸餾水稀釋至200ml;核黃素儲(chǔ)備液(已配好)：50g/ml。酸性水配制

3、，棕色瓶低溫保存核黃素標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液：1g/ml。吸取核黃素儲(chǔ)備液2ml，用酸性水稀釋至100ml，棕色瓶低溫保存，現(xiàn)用現(xiàn)配；低亞硫酸鈉（熒光熄滅劑）8/12/20228實(shí)驗(yàn)步驟1 收集負(fù)荷尿 清晨排空小便后，空腹口服維生素B25mg，根據(jù)季節(jié)飲水200-500ml，收集服藥后4h內(nèi)所有尿液，并在瓶中加入1g左右草酸，使尿液保持在PH3-5，防止維生素B2降解，必要時(shí)還可加甲苯防腐。用量筒量取總尿液量并記錄，做好標(biāo)記后4短期保存，-20長(zhǎng)期保存。2 測(cè)定前讀取尿液PH值，確保PH=353 負(fù)荷尿維生素B2測(cè)定8/12/20229負(fù)荷尿維生素B2的測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管樣品管尿樣(ml) 1 1B2標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液(

4、ml) 1.5 0酸性水(ml) 7.5 9混勻熒光光度計(jì)讀值（420、530nm） C A低亞硫酸鈉 1平匙 1平匙混勻背景熒光值（420、530nm） D B8/12/202210實(shí)驗(yàn)計(jì)算及結(jié)果 A-B 總尿量(ml) 尿中核黃素含量（g）= (C-D)-(A-B) 內(nèi)標(biāo)核黃素量（g） 分析用尿量(ml) F=KC C=F/K, K=F/C K= (C-D)-(A-B)內(nèi)標(biāo)核黃素量 缺乏（g）不足（g）正常（g）充裕（g）400400 799800 130013008/12/202211注意事項(xiàng)避光操作，酸性體系，迅速操作；低亞硫酸鈉不能加入過多，否則影響吸光值，加入后必需立即讀數(shù)，否則維生素B又會(huì)被空氣氧化成熒光型；