2022年專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用-知識(shí)點(diǎn)總結(jié)

1、專題二微生物的培育與應(yīng)用學(xué)問點(diǎn)配制出供其生長(zhǎng)菌需添加維生素；培育霉菌需將pH調(diào)至酸性；培育細(xì)菌需將pH調(diào)至微生物的試驗(yàn)室培育中性或微堿性；培育厭氧型微生物需供應(yīng)無氧的條件；1培育基是人們依據(jù)微生物對(duì)養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求,5. 無菌操作技術(shù)包括：對(duì)試驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手,進(jìn)繁衍的養(yǎng)分基質(zhì),是進(jìn)行微生物培育的物質(zhì)基礎(chǔ)；行清潔和消毒；將用于微生物培育的器皿、接種用具和培育基等器2. 培育基按物理性質(zhì)分為液體培育基（應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)）、固具進(jìn)行滅菌；為防止四周環(huán)境中微生物的污染,試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精體培育基（應(yīng)用于微生物的分別和鑒定）和半固體培育基（常用于觀燈火焰鄰近進(jìn)行；試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)防止已經(jīng)

2、滅菌處理的材料用具與周察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等）；按成分分為合成培育基（用成分已知圍的物品相接觸；的化學(xué)物質(zhì)配制而成,成分種類比例明確,用于微生物的分別鑒定）6. 消毒與滅菌的區(qū)分是：消毒指使用較為溫順的物理或化學(xué)方法僅殺和自然培育基（用化學(xué)成分不明的自然物質(zhì)配制而成,用于實(shí)際工業(yè)死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）,生產(chǎn)）；按用途分為選擇培育基（加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要微包括煮沸消毒法,巴氏消毒法（酒精、氯氣、石炭酸）和紫外線消毒生物生長(zhǎng),促進(jìn)所需微生物的生長(zhǎng)）和鑒別培育基（依據(jù)微生物的特法；滅菌指使用劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物,包括芽點(diǎn),加入某種

3、指示劑或化學(xué)藥品,來鑒別不同類別的微生物）；孢和孢子,包括灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌；3. 培育基的化學(xué)成分包括：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源和生長(zhǎng)因子等；7. 滅菌方法：接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；玻璃碳源包括 CO2、NaHCO 3等無機(jī)碳源和糖類、石油、花生粉餅等有機(jī)碳源；器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法,所用器械是干熱滅菌箱；培育；異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源；單質(zhì)碳不能作為碳源；氮源包括N2、基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法,所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋；NH3、NO3-、 NH4 +等無機(jī)氮源和蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法,所用器械是紫

4、外燈等有機(jī)氮源；只有固氮微生物才能利用N2；8. 制作牛肉膏蛋白胨固體培育基4. 培育基仍需滿意pH、特別養(yǎng)分物質(zhì)和氧氣的要求；例：培育乳酸桿（ 1）方法步驟：運(yùn)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板；（2）倒平板操作的步驟包括：將滅過菌的培育皿放在酒精燈火焰旁 的桌面上,右手拿裝有培育基的錐形瓶,左手拔出棉塞；將錐形瓶冷卻后再進(jìn)行劃線的緣由是防止接種環(huán)溫度太高而殺死菌種；12. 涂布平板操作的步驟包括：將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中；的瓶口快速通過火焰（灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培育基）；取少量菌液,滴加到培育基表面；8將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃,待酒精燃盡后,冷卻將培育皿打開一條稍大于瓶口

5、的縫隙,再將錐形瓶中的培育基 （約 1020mL）倒入培育皿,立刻蓋上培育皿的皿蓋；等待平板冷卻凝當(dāng)然10s；用涂布器將菌液勻稱地涂布在培育基表面；后,將平板倒過來放置,使培育皿蓋在下、皿底在上（目的：使培育13. 菌種的儲(chǔ)存：頻繁使用,暫時(shí)儲(chǔ)存接種到固體斜面培育基,在4基表面的水分更好地?fù)]發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基,造下儲(chǔ)存；長(zhǎng)期儲(chǔ)存菌種用甘油管藏的方法；成污染）；土壤中分解尿素的細(xì)菌的分別與計(jì)數(shù)9. 倒平板時(shí)如不慎將培育基濺在皿蓋與皿底上,就這個(gè)平板不能用來 培育微生物,緣由是空氣中的微生物會(huì)在皿蓋與皿底上生長(zhǎng)；1. 尿素是重要的農(nóng)業(yè)氮肥,不能直接被植物吸??；土壤中有一類細(xì)菌 能

6、合成脲酶,將尿素分解成氨,被植物吸取利用；尿素最初是從人的10. 純化大腸桿菌的原理是：用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種,使尿液中發(fā)覺的；集合在一起的微生物分散成單個(gè)細(xì)胞,從而能在培育基表面形成單個(gè)2. 試驗(yàn)室中微生物選擇的原理是：人為供應(yīng)有利于目的菌株生長(zhǎng)的條 件（包括養(yǎng)分、溫度、PH等）,同時(shí)抑制或阻擋其他微生物生長(zhǎng)；的菌落（生態(tài)學(xué)上稱種群）,以達(dá)純化菌種的目的；3. 在微生物學(xué)中,將答應(yīng)特定種類的微生物生長(zhǎng),同時(shí)抑制或阻擋其11. 平板劃線操作時(shí)第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)的緣由 是：前者防止接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物,后者殺死上次劃線殘留在環(huán)上的菌種,使菌種逐步變少以便

7、得到單個(gè)菌落；在劃線他種類微生物生長(zhǎng)的培育基,稱作選擇培育基；例如,培育基中不加 入有機(jī)物可以選擇培育自養(yǎng)微生物；培育基中不加入氮元素,可以選 擇培育能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培育金黃色葡萄球操作終止時(shí),仍舊需要灼燒接種環(huán)的緣由是準(zhǔn)時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的 菌等；菌種,防止細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者；在灼燒接種環(huán)之后,要等其4. 測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)；5. 稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目；原理是：當(dāng)樣品的30-37 1-2 天；放線菌25-28 5-7 天；霉菌 25-28 3-4 天；稀釋度足夠高時(shí),培育基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落,來源于樣品稀釋

8、液中 的一個(gè)活菌；統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù),就能估計(jì)出樣品中大約含有多少12. 每隔 24 小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目,選取菌落數(shù)目穩(wěn)固時(shí)的記錄作為 結(jié)果,這樣可以防止因培育時(shí)間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目；一般來活菌；為了保證結(jié)果精確,一般選擇3-5 個(gè)菌落數(shù)在30300 的平板說,在肯定的培育條件下（相同的培育基、唯獨(dú)及培育時(shí)間）,同種微進(jìn)行計(jì)數(shù),并取平均值；生物表現(xiàn)出穩(wěn)固的菌落特點(diǎn)（外形、大小、隆起程度和顏色基本一樣）6. 統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低,緣由是當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞 13. 每克樣品中的菌落數(shù) =（C/V） M （C：某一稀釋度下平板上生連在一起時(shí),平板上看到的只是一個(gè)菌落,因此,統(tǒng)計(jì)結(jié)

9、果一般用菌 長(zhǎng)的平均菌落數(shù)；V：涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（ml）；M：代表落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示；稀釋倍數(shù)）7. 設(shè)置對(duì)比的主要目的是排除試驗(yàn)組中非測(cè)試因素對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影 響,提高試驗(yàn)結(jié)果的可信度；對(duì)比試驗(yàn)是指除了被測(cè)試的條件以外,14. 在以尿素為唯獨(dú)氮源的培育基中加入酚紅指示劑,培育某種細(xì)菌 后,假如 PH上升,指示劑變紅, 可初步鑒定該種細(xì)菌能分解尿素為氨；其他條件都相同的試驗(yàn),其作用是比照試驗(yàn)組,排除任何其他可能原因的干擾,證明的確是所測(cè)試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果；8. 試驗(yàn)設(shè)計(jì)包括試驗(yàn)方案,所需儀器、材料、用具和藥品,詳細(xì)的實(shí)分解纖維素的微生物的分別 1. 纖維素是一種由葡萄糖首尾相

10、連而成的高分子化合物,是地球上含施步驟以準(zhǔn)時(shí)間支配等的綜合考慮和支配；量最豐富的多糖類物質(zhì)；棉花是自然界中纖維素含量最高的自然產(chǎn)物,9. 土壤取樣：鏟去表層土, 在距地表約 38cm的土壤層從富含有機(jī)物、木材、作物秸稈等也富含纖維素；潮濕、 pH7 的土壤中取樣；2. 纖維素酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少包括三種組分,即 C1酶、10. 樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長(zhǎng)的菌落數(shù)目；在實(shí)際操作CX 酶和葡萄糖苷酶,前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖,第三種酶將中,通常選用肯定稀釋范疇（細(xì)菌一般選用 10 4、10 5、10 6；放線菌一般 纖維二糖分解成葡萄糖,為微生物的生長(zhǎng)供應(yīng)養(yǎng)分；選用 10

11、3、10 4、10 5；真菌一般選用 10 2、10 3 、10 4）的樣品液進(jìn)行培育,3. 當(dāng)在含有纖維素的培育基中加入剛果紅時(shí),它能與培育基中的纖維以保證獲得菌落數(shù)在 30300 之間、適于計(jì)數(shù)的平板；素形成紅色復(fù)合物；當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后,剛果紅纖維素的11. 不同種類的微生物,往往需要不同的培育溫度和培育時(shí)間；細(xì)菌 復(fù)合物就無法形成,培育基中會(huì)顯現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透亮圈,依據(jù)是否產(chǎn)生透亮圈就可以來選擇纖維素分解菌,這種方法叫做剛果在菌落混雜問題,缺點(diǎn)是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類紅染色法；物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物顯現(xiàn)假陽性反應(yīng)；但由于培育4. 剛果紅染色法

12、選擇纖維素分解菌的原理：剛果紅（染料）可以與像 纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物,但并不和水解后的纖維二糖 和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)；基中纖維素占主要位置,纖維素酶產(chǎn)生的透亮圈更明顯；方法二的另 一缺點(diǎn)是：有些微生物具有降解色素的才能,它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培育過程 中會(huì)降解剛果紅形成明顯的透亮圈,與纖維素分解菌不易區(qū)分；5. 試驗(yàn)流程：土壤取樣選擇培育（此步是否需要,應(yīng)依據(jù)樣品中目10. 在選擇培育的條件下,可以使那些能夠適應(yīng)這種養(yǎng)分條件的微生物的菌株數(shù)量的多少來確定）梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分得到快速繁衍,而那些不適應(yīng)這種養(yǎng)分條件的微生物的繁衍被抑制,解菌的培育基上選擇產(chǎn)生透亮圈的菌落的試驗(yàn)；因此可以起到“ 濃縮” 的作用；6. 為確定得到的是纖維素分解菌,需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶纖維素酶的測(cè)定方法,一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測(cè)定；7. 由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系,在富含纖維素的環(huán)境中,纖維素 分解菌的含量相對(duì)提高,因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要