新疆維吾爾自治區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥民族藥制劑

1、 新疆維吾爾自治區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥民族藥制劑安全性研究技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）根據(jù)醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊管理辦法（試行）、新疆維吾爾自治區(qū)實施醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑注冊管理辦法（試行）細(xì)則的有關(guān)要求，參照藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（GLP）以及國家食品藥品監(jiān)督管理總局頒布的相關(guān)研究技術(shù)指導(dǎo)原則，基于“使用安全、質(zhì)量基本可控、方法適用可行、資料完整規(guī)范”的基本要求，結(jié)合我區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)中藥民族藥制劑特點，制定本技術(shù)指導(dǎo)原則。其目的是指導(dǎo)我區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)進(jìn)行中藥民族藥制劑的臨床前安全性研究，并為其安全性評價提供明確統(tǒng)一的研究技術(shù)要求。一、一般要求實驗管理藥物臨床前安全性研究應(yīng)遵循藥物非臨床研究質(zhì)量管理規(guī)范（GLP）。研究機(jī)構(gòu)條件

2、研究機(jī)構(gòu)必須是已在國內(nèi)外相關(guān)機(jī)構(gòu)注冊（或備案）、從事藥品安全性研究的具有法人資格的機(jī)構(gòu)。研究人員應(yīng)取得相關(guān)資質(zhì)，并具有相應(yīng)的設(shè)施設(shè)備。實驗環(huán)境應(yīng)具備與實驗動物級別相應(yīng)的實驗環(huán)境。實驗動物使用單位必須取得相應(yīng)實驗動物使用許可證。1研究人員資質(zhì)所有參加研究的人員應(yīng)接受過相關(guān)培訓(xùn)，其項目負(fù)責(zé)人必須是相關(guān)專業(yè)領(lǐng)域的中級及以上專業(yè)技術(shù)職稱。受試物受試物應(yīng)采用能充分代表臨床試驗擬用樣品和/或上市樣品質(zhì)量和安全性的樣品。應(yīng)采用工藝路線及關(guān)鍵工藝參數(shù)確定后的工藝制備，一般應(yīng)為中試或中試以上規(guī)模的樣品，否則應(yīng)有充分的理由。應(yīng)注明受試物的名稱、來源、批號、含量（或規(guī)格）、保存條件、有效期及配制方法等，并提供質(zhì)量檢

3、驗報告。由于中藥的特殊性，建議現(xiàn)用現(xiàn)配，否則應(yīng)提供數(shù)據(jù)支持配制后受試物的質(zhì)量穩(wěn)定性及均勻性。當(dāng)給藥時間較長時，應(yīng)考察配制后體積是否存在隨放置時間延長而膨脹造成終濃度不準(zhǔn)的因素。如果由于給藥容量或給藥方法限制，可采用藥材原粉或浸膏等進(jìn)行試驗。試驗中所用溶媒和/或輔料應(yīng)標(biāo)明名稱、標(biāo)準(zhǔn)、批號、有效期、規(guī)格及生產(chǎn)單位。對照藥物原則上應(yīng)采用已上市的、適應(yīng)癥相同或類似且療效公認(rèn)的藥物。試驗設(shè)計試驗設(shè)計應(yīng)符合隨機(jī)、對照、重復(fù)的原則。其他中藥民族藥制劑情況復(fù)雜，在進(jìn)行研究時應(yīng)遵循具體問題具體分析的原則。二、基本內(nèi)容1.急性毒性試驗急性毒性是指藥物在單次或24小時內(nèi)多次給予后一定時間內(nèi)所產(chǎn)生的毒性反應(yīng)。1.1實

4、驗動物動物應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定的等級要求（清潔級或SPF級），來源、品系、遺傳背景清楚，并具有實驗動物合格證。動物初始體重不應(yīng)超過或低于平均體重的20%。一般采用1種哺乳動物進(jìn)行，推薦使用小鼠或大鼠，雌雄各半，如臨床為單性別用藥，貝何采用相對應(yīng)的單一性別的動物。對于所用的動物數(shù)，應(yīng)根據(jù)動物的種屬和研究目的來確定。動物數(shù)應(yīng)符合試驗方法及其結(jié)果分析評價的需要。通常采用健康成年動物進(jìn)行試驗。如果受試物擬用于兒童，建議考慮采用幼年動物。1.2試驗分組除設(shè)受試物的不同劑量組外，還應(yīng)設(shè)空白和/或陰性對照組。1.3給藥途徑給藥途徑不同，受試物的吸收速度、吸收率和暴露量會有所不同。通常情況下給藥途徑應(yīng)至少包括臨

5、床擬用途徑。如不采用臨床擬用途徑，應(yīng)說明理由。經(jīng)口給藥前應(yīng)有一段時間（通常一夜）禁食不禁水。1.4給藥容量3經(jīng)口給藥，大鼠給藥容量一般每次不超過20ml/kg，小鼠一般每次不超過40ml/kg;其他動物及給藥途徑的給藥容量可參考相關(guān)文獻(xiàn)及根據(jù)實際情況確定。1.5觀察期限一般不小于14天，如果毒性反應(yīng)出現(xiàn)較慢，應(yīng)適當(dāng)延長觀察時間。觀察的間隔和頻率應(yīng)適當(dāng)，以便能觀察到毒性反應(yīng)出現(xiàn)的時間及其恢復(fù)時間、動物死亡時間等。1.6觀察指標(biāo)所有的試驗動物應(yīng)進(jìn)行大體解剖。試驗過程中因瀕死而安樂死的動物、死亡動物應(yīng)及時進(jìn)行大體解剖，其他動物在觀察期結(jié)束后安樂死并進(jìn)行大體解剖。當(dāng)組織器官出現(xiàn)體積、顏色、質(zhì)地等改變時

6、，應(yīng)進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。（具體觀察指標(biāo)見附件1）1.7結(jié)果處理和分析1.7.1根據(jù)所觀察到的各種反應(yīng)出現(xiàn)的時間、持續(xù)時間及嚴(yán)重程度等，分析各種反應(yīng)在不同劑量時的發(fā)生率、嚴(yán)重程度。對觀察結(jié)果進(jìn)行歸納分析，判斷每種反應(yīng)的劑量-反應(yīng)及時間-反應(yīng)關(guān)系。急性毒性試驗一般測定最大給藥量、最大耐受量、半數(shù)致死量LD50。1.7.2判斷出現(xiàn)的各種反應(yīng)可能涉及的組織、器官或系統(tǒng)（見附件1:急性毒性試驗常見的觀察指征及其可能涉及的組織、器官和系統(tǒng)表）等。1.7.3根據(jù)大體解剖中肉眼可見的病變和組織病理學(xué)檢查的結(jié)果，初步判斷可能的毒性靶器官。應(yīng)出具完整的組織病理學(xué)檢查報告，附有相應(yīng)的組織病理學(xué)照片，檢查報告應(yīng)詳細(xì)描

7、述，尤其是有異常變化的組織。1.7.4說明所使用的計算方法和統(tǒng)計學(xué)方法，必要時提供所選用方法合理性的依據(jù)。1.7.5根據(jù)各種反應(yīng)在不同劑量下出現(xiàn)的時間、發(fā)生率、劑量反應(yīng)關(guān)系、不同種屬動物及實驗室的歷史背景數(shù)據(jù)、病理學(xué)檢查結(jié)果以及同類藥物的特點，判斷所出現(xiàn)的反應(yīng)與受試物的相關(guān)性。判斷受試物引起的毒性反應(yīng)性質(zhì)、嚴(yán)重程度、可恢復(fù)性以及安全范圍；根據(jù)毒性可能涉及的部位，綜合大體解剖和組織病理學(xué)檢查的結(jié)果，初步判斷毒性靶器官。急性毒性試驗的結(jié)果可作為后續(xù)毒理試驗劑量選擇的參考，也可提示一些后續(xù)毒性試驗需要重點觀察的指標(biāo)。2.長期毒性試驗長期毒性試驗是描述動物重復(fù)接受受試物后的毒性特征，它是非臨床安全性評

8、價的重要內(nèi)容。長期毒性試驗?zāi)康模侯A(yù)測受試物可能引起的臨床不良反應(yīng)，包括不良反應(yīng)的性質(zhì)、程度、量效和時效關(guān)系、以及可逆性等；判斷受試物重復(fù)給藥的毒性靶器官或靶組織；如果可能，確定未觀察到臨床不良反應(yīng)的劑量水平；推測第一次臨床試驗的起始劑量，為后續(xù)臨床試驗提供安全劑量范圍；為臨床不良反應(yīng)監(jiān)測及防治提供參考。2.1實驗動物5動物應(yīng)符合國家有關(guān)規(guī)定的等級要求（清潔級或SPF級）,來源、品系、遺傳背景清楚，并具有實驗動物合格證。一般選擇正常、健康、性成熟動物，同性別體重差異應(yīng)在平均體重的20%之內(nèi)。通常，嚙齒類動物首選大鼠、非嚙齒類動物首選Beagle犬，特殊情況下可選用其他種屬或品系動物進(jìn)行重復(fù)給藥毒

9、性試驗，必要時選用疾病模型動物進(jìn)行試驗。應(yīng)根據(jù)試驗期限和臨床擬用人群確定動物年齡，一般大鼠為69周齡，Beagle犬612月齡，猴35歲，動物年齡應(yīng)盡量接近，應(yīng)注明開始給藥時動物年齡。每個劑量組動物數(shù)，嚙齒類一般不少于15只/性別（主試驗組10只，恢復(fù)組5只），非嚙齒類一般不少于5只/性別（主試驗組3只，恢復(fù)組2只）。2.2給藥途徑原則上應(yīng)與臨床擬用藥途徑相同。如選擇其他的給藥途徑，應(yīng)說明理由。2.3給藥頻率原則上應(yīng)每天給藥，且每天給藥時間相同。試驗周期長（3個月或以上）者，也可采取每周給藥6天。特殊類型的受試物由于其毒性特點和臨床給藥方案等原因，應(yīng)根據(jù)具體藥物的特點設(shè)計給藥頻率。2.4給藥期

10、限長期毒性試驗給藥期限的長短，通常與擬定的臨床療程長短、臨床適應(yīng)癥、用藥人群相關(guān)，應(yīng)充分考慮預(yù)期臨床的實際療程，一般為擬臨床給藥期限的2倍或以上。當(dāng)受試物預(yù)期會長期使用，或用于反復(fù)發(fā)作性疾病等而需經(jīng)常反復(fù)給藥時，應(yīng)進(jìn)行大鼠6個月的長期毒性試驗。當(dāng)臨床適應(yīng)癥有若干項的，應(yīng)按照臨床最長療程的臨床適應(yīng)癥來確定長期毒性試驗的給藥期限。如臨床給藥需采用多個療程，療程之間間隔時間不足以使受試物可能對機(jī)體組織器官造成的損害恢復(fù)，則需按多個療程的時間之和作為參照的臨床療程。2.5給藥劑量重復(fù)給藥毒性試驗原則上至少應(yīng)設(shè)低、中、高3個劑量組，以及1個溶媒（或輔料）對照組，必要時設(shè)立空白對照組和/或陽性對照組；高劑

11、量原則上使動物產(chǎn)生明顯的毒性反應(yīng)，低劑量原則上相當(dāng)或高于動物藥效劑量或臨床使用劑量的等效劑量，中劑量應(yīng)結(jié)合毒性作用機(jī)制和特點在高劑量和低劑量之間設(shè)立，以考察毒性的劑量一反應(yīng)關(guān)系。以上僅是給藥劑量的一般原則，應(yīng)根據(jù)實際情況進(jìn)行合理的劑量設(shè)計。局部給藥時，應(yīng)盡可能保證給藥劑量的準(zhǔn)確性及與局部充分接觸的時間。2.6觀察指標(biāo)見附件2:長期毒性試驗應(yīng)檢測指標(biāo)。7 2.7觀察指標(biāo)的時間和次數(shù)給藥期間，根據(jù)試驗期限的長短和受試物的特點確定檢測時間和檢測次數(shù)。原則上應(yīng)盡早發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng)，并反映出觀測指標(biāo)或參數(shù)變化與試驗期限的關(guān)系。給藥前應(yīng)對動物進(jìn)行適應(yīng)性飼養(yǎng)，嚙齒類動物應(yīng)不少于5天，非嚙齒類動物不少于2周。在適

12、應(yīng)性飼養(yǎng)時，對實驗動物進(jìn)行外觀體征、行為活動、攝食情況和體重檢查，非嚙齒類動物至少應(yīng)進(jìn)行2次體溫、血液學(xué)、血液生化學(xué)和至少1次心電圖檢測。試驗期間，一般狀況和征狀的觀察，應(yīng)每天觀察一次，飼料消耗和體重應(yīng)每周記錄一次。大鼠體重應(yīng)雌雄分開進(jìn)行計算。試驗結(jié)束時應(yīng)進(jìn)行一次全面的檢測。當(dāng)給藥期限較長時，應(yīng)根據(jù)受試物的特點選擇合適的時間進(jìn)行中期階段性的檢測。長期毒性試驗應(yīng)在給藥結(jié)束時留存部分動物進(jìn)行恢復(fù)期觀察，以了解毒性反應(yīng)的可逆程度和可能出現(xiàn)的延遲性毒性反應(yīng)。恢復(fù)期觀察期間除不給受試物外，其他觀察內(nèi)容與給藥期間相同。在試驗期間，對瀕死或死亡動物應(yīng)及時檢查并分析原因。2.8結(jié)果及分析2.8.1試驗結(jié)果的分

13、析分析長期毒性試驗結(jié)果，判斷動物是否發(fā)生毒性反應(yīng)及毒性靶器官，描述毒性反應(yīng)的性質(zhì)和程度（包括毒性反應(yīng)的起始時間、程度、變化規(guī)律和消除時間），如果有動物死亡應(yīng)分析死亡原因，確定安全范圍，并探討可能的毒性作用機(jī)制2.8.2正確判斷毒性反應(yīng)給藥組和對照組之間檢測結(jié)果的差異可能來源于受試物有關(guān)的毒性、動物對受試物的適應(yīng)性改變或正常的生理波動，也可能源于試驗操作失誤和動物應(yīng)激。在分析試驗結(jié)果時，應(yīng)關(guān)注參數(shù)變化的劑量一反應(yīng)關(guān)系、組內(nèi)動物的參數(shù)變化幅度和性別差異，同時綜合考慮多項毒理學(xué)指標(biāo)的檢測結(jié)果，分析其中的關(guān)聯(lián)和受試物作用機(jī)制，以正確判斷藥物的毒性反應(yīng)。單個參數(shù)的變化往往并不足以判斷制劑是否引起毒性反應(yīng)

14、，可能需要進(jìn)一步進(jìn)行相關(guān)的試驗。2.9刺激性、過敏性試驗刺激性、過敏性是指藥物制劑經(jīng)皮膚、粘膜、腔道等非口服途徑給藥，對用藥局部產(chǎn)生的毒性（如刺激性和局部過敏性等）和/或?qū)θ懋a(chǎn)生的毒性（如全身過敏性等），為臨床前安全性評價的組成部分?？蓞⒄沾碳ば?、過敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則有關(guān)技術(shù)要求進(jìn)行相應(yīng)的安全性試驗。2.10其他安全性試驗妊娠期、哺乳期婦女用藥或改善性功能的制劑可參照相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則及有關(guān)技術(shù)要求進(jìn)行相應(yīng)的安全性試驗。2.10綜合評價應(yīng)結(jié)合受試物的藥學(xué)特點，藥效學(xué)和其他毒理學(xué)的試驗結(jié)果，以及已取得的臨床試驗結(jié)果，進(jìn)行綜合評價。對于重復(fù)給藥毒性試驗結(jié)果的評價最終應(yīng)落實到受試物的臨床不

15、良反應(yīng)、臨床毒性靶器官或靶組織、安全范圍、臨床需重點檢測的指標(biāo)，以及必要的臨床監(jiān)護(hù)或解救措施。附件：急性毒性試驗常見的觀察指征及其可能涉及的組織、器官和系統(tǒng)表長期毒性試驗應(yīng)檢測指標(biāo)附件1急性毒性試驗常見的觀察指征及其可能涉及的組織、器官和系統(tǒng)表觀察指征可能涉及的組織、器官或系統(tǒng)I.鼻孔呼吸阻塞，呼吸頻率和深度改變，體表顏色改變A呼吸困難：呼吸困難或費力，喘息，通常呼吸頻率減慢1腹式呼吸：膈膜呼吸，吸氣時膈膜向腹部偏移CNS乎吸中樞，肋間肌麻痹，膽堿能神經(jīng)麻痹2喘息：吸氣很困難，伴隨有喘息聲CNS乎吸中樞，肺水腫，呼吸道分泌物蓄積，膽堿能功能增強(qiáng)B呼吸暫停：用力呼吸后出現(xiàn)短暫的呼吸停止CNS乎吸

16、中樞，肺心功能不全C紫紺：尾部、口和足墊呈現(xiàn)青紫色肺心功能不全，肺水腫D呼吸急促：呼吸快而淺呼吸中樞刺激，肺心功能不全E鼻分泌物：紅色或無色肺水腫，出血n.運動功能：運動頻率和特征的改變A自發(fā)活動、探究、梳理、運動增加或減少軀體運動，CNSB嗜睡：動物嗜睡，但可被針刺喚醒而恢復(fù)正?；顒覥NS垂眠中樞C正位反射（翻正反射）消失：動物體處于異常體位時所產(chǎn)生的恢復(fù)正常體位的反射消失CNS感覺，神經(jīng)肌肉D麻痹：正位反射和疼痛反應(yīng)消失CNS感覺E僵?。罕３衷藙莶蛔僀NS感覺，神經(jīng)肌肉，自主神經(jīng)F共濟(jì)失調(diào)：動物行走時無法控制和協(xié)調(diào)運動，但無痙攣、局部麻痹、輕癱或僵直CNS感覺，自主神經(jīng)G異常運動：痙攣，

17、足尖步態(tài)，踏步，忙碌，低伏CNS感覺，神經(jīng)肌肉H俯臥：不移動，腹部貼地CNS感覺，神經(jīng)肌肉I震顫：包括四肢和全身的顫抖和震顫神經(jīng)肌肉，CNSJ肌束震顫：包括背部、肩部、后肢和足趾肌肉的運動神經(jīng)肌肉，CNS自主神經(jīng)川驚厥（癲癇發(fā)A陣攣性驚厥：肌肉收縮和松弛交替性痙攣CNS呼吸衰竭，神經(jīng)肌肉，自主神經(jīng)觀察指征可能涉及的組織、器官或系統(tǒng)作）:隨意肌明顯的不自主收縮或痙攣性收縮B強(qiáng)直性驚厥：肌肉持續(xù)性收縮，后肢僵硬性伸展CNS呼吸衰竭，神經(jīng)肌肉，自主神經(jīng)C強(qiáng)直性一陣攣性驚厥：兩種驚厥類型交替出現(xiàn)CNS呼吸衰竭，神經(jīng)肌肉，自主神經(jīng)D窒息性驚厥：通常是陣攣性驚厥并伴有喘息和紫紺CNS呼吸衰竭，神經(jīng)肌肉，自

18、主神經(jīng)E角弓反張：背部弓起、頭向背部抬起的強(qiáng)直性痙攣CNS呼吸衰竭，神經(jīng)肌肉，自主神經(jīng)IV.反射A角膜性眼瞼閉合反射：接觸角膜導(dǎo)致眼瞼閉合感覺，神經(jīng)肌肉B基本條件反射：輕輕敲擊耳內(nèi)表面，引起外耳抽搐感覺，神經(jīng)肌肉C正位反射：翻正反射的能力CNS感覺，神經(jīng)肌肉D牽張反射：后肢被牽拉至從某一表面邊緣掉下時縮回的能力感覺，神經(jīng)肌肉E對光反射：瞳孔反射；見光瞳孔收縮感覺，神經(jīng)肌肉，自主神經(jīng)F驚跳反射：對外部刺激（如觸摸、噪聲）的反應(yīng)感覺，神經(jīng)肌肉V.眼檢指征A流淚：眼淚過多，淚液清澈或有色自主神經(jīng)B縮瞳：無論有無光線，瞳孔縮小自主神經(jīng)C散瞳：無論有無光線，瞳孔擴(kuò)大自主神經(jīng)D眼球突出：眼眶內(nèi)眼球異常突出

19、自主神經(jīng)E上瞼下垂：上瞼下垂，針刺后不能恢復(fù)正常自主神經(jīng)F血淚癥：眼淚呈紅色自主神經(jīng)，出血，感染G瞬膜松弛自主神經(jīng)H角膜渾濁，虹膜炎，結(jié)膜炎眼睛刺激W.心血管指征A心動過緩：心率減慢自主神經(jīng)，肺心功能不全 # 附件2 觀察指征可能涉及的組織、器官或系統(tǒng)B心動過速：心率加快自主神經(jīng)，肺心功能不全C血管舒張：皮膚、尾、舌、耳、足墊、結(jié)膜、陰囊發(fā)紅，體熱自主神經(jīng)、CNS心輸出量增加，環(huán)境溫度咼D血管收縮：皮膚蒼白，體涼自主神經(jīng)、CNS心輸出量降低，環(huán)境溫度低E心律不齊：心律異常CNS自主神經(jīng)、肺心功能不全，心肌梗塞vn.流涎A唾液分泌過多：口周毛發(fā)潮濕自主神經(jīng)忸豎毛A毛囊豎毛組織收縮導(dǎo)致毛發(fā)蓬亂自主

20、神經(jīng)IX.痛覺缺失A對痛覺刺激（如熱板）反應(yīng)性降低感覺，CNSX.肌張力A張力低下：肌張力全身性降低自主神經(jīng)B張力過高：肌張力全身性增高自主神經(jīng)幻.胃腸指征排便（糞）A干硬固體，干燥，量少自主神經(jīng)，便秘，胃腸動力B體液丟失，水樣便自主神經(jīng)，腹瀉，胃腸動力嘔吐A嘔吐或干嘔感覺，CNS,自主神經(jīng)（大鼠無嘔吐）多尿A紅色尿腎臟損傷B尿失禁自主感覺神經(jīng)劉.皮膚A水腫：液體充盈組織所致腫脹刺激性，腎功能衰竭，組織損傷，長時間靜止不動B紅斑：皮膚發(fā)紅刺激性，炎癥，過敏長期毒性試驗應(yīng)檢測指標(biāo)項目類別指標(biāo)1.臨床觀察外觀、體征、行為活動、腺體分泌、呼吸、糞便性狀、給藥局部反應(yīng)、死亡情況等。2.攝食量、體重、眼科檢查3.體溫和心電圖檢測（非