同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科ISO15189體系文件04戊型肝炎病毒IgM抗體 (抗HEV-IgM)

1、同濟(jì)大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫組項(xiàng)目操作指導(dǎo)書TJYYJYKMY/XMZ204第2版標(biāo)題：戊型肝炎病毒IgM抗體 (抗HEVIgM)測定第2章 第04號第 PAGE 5 頁 共 NUMPAGES 5 頁1. 目的：檢測血清標(biāo)本中的抗HEV-IgM抗體。2. 適用范圍：同濟(jì)醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室。3. 項(xiàng)目名稱：戊型肝炎病毒IgM抗體。4. 檢測方法：酶聯(lián)免疫法。5. 檢測原：本試劑盒采用捕獲法原理檢測血清或血漿樣品中戊型肝炎病毒IgM抗體，微孔中預(yù)包被鼠抗人-IgM（）鏈，加入待檢人的血清或血漿樣品后，所有的IgM抗體都被捕獲，未結(jié)合的其他成分（包括特異的IgG抗體）都被洗滌除去。第二步，加入酶標(biāo)記

2、物，酶標(biāo)記物是辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的基因重組抗原HEV NE2。特異性的HEV-IgM會與辣根過氧化物酶標(biāo)記的HEV重組抗原結(jié)合，洗去其他未結(jié)合物。最后用TMB底物顯色，通過酶標(biāo)儀檢測吸光度（OD）從而判定樣品中HEV-IgM抗體的存在與否。6. 試劑：6.1 品牌: 北京萬泰生物藥業(yè)有限公司。6.2 包裝規(guī)格:48人份。6.3 內(nèi)含物:每盒試劑含以下成分：6.3.1 HEV-IgM酶標(biāo)板:12孔4；6.3.2 HEV-IgM陽性對照：0.5mll瓶；6.3.3 HEV-IgM陰性對照：0.5mll瓶；6.3.4 HEV-IgM樣品稀釋液：12mll瓶；6.3.5 HEV-IgM酶聯(lián)試

3、劑：12mll瓶；6.3.6 濃縮洗滌液 (20)：50mll瓶；6.3.7 顯色劑A：6mll瓶；6.3.8 顯色劑B：6mll瓶；6.3.9 終止液(2M硫酸)：6mll瓶；6.3.10自封袋：1個；6.3.11封板膜：3張；6.3.12說明書：1份。7. 儀器：意大利Alisei全自動酶免分析儀。8. 操作步驟8.1 打印工作單:8.1.1 打開電腦及打印機(jī)電源，8.1.2 雙擊齊效檢驗(yàn)系統(tǒng)，登陸工號與密碼；8.1.3 雙擊報(bào)告處理，單擊標(biāo)本申請信息打開標(biāo)本申請明細(xì)信息查詢，打開左上角的所有信息，選擇未生成報(bào)告信息。8.1.4 在檢驗(yàn)項(xiàng)目處選擇HEV執(zhí)行查詢，點(diǎn)擊打印申請單，打印出工作單

4、。8.2 排列待測標(biāo)本:根據(jù)工作單上的庫位號從標(biāo)本架中找出相應(yīng)標(biāo)本，并按工作單上的順序排列在Alisei全自動酶免分析儀的樣本架上。8.3 裝載試劑：開啟Alisei全自動酶免分析儀，根據(jù)待測標(biāo)本數(shù)量，點(diǎn)擊編輯工作列表，出現(xiàn)試劑及酶標(biāo)板界面。按照屏幕所示放好洗板液，洗針液，標(biāo)本試管，預(yù)稀釋管和試劑。8.4 裝載酶標(biāo)板：點(diǎn)擊Alisei全自動酶免分析儀界面的裝卸反應(yīng)板按鈕進(jìn)行裝載反應(yīng)板，按項(xiàng)目順序進(jìn)行裝載。等所有項(xiàng)目酶標(biāo)板裝載完成后，點(diǎn)擊開始按鈕，機(jī)器開始檢測。8.5 Alisei分析儀檢測參數(shù)：試劑空 白陽性對照陰性對照標(biāo) 本加樣單 孔雙 孔三 孔單 孔（10ul標(biāo)本+100ul樣品稀釋液）/

5、孔溫育37，30分鐘洗滌洗滌液350ul/孔 5次酶聯(lián)試劑100ul/孔溫育混勻，37，30分鐘洗滌洗滌液350ul/孔 5次顯色50ul/孔B液50ul/孔溫育混勻，37，15分鐘終止50ul/孔終止液判讀450/630mn讀取OD值8.6 儀器自動記錄OD值并可打印測定結(jié)果，同時(shí)傳入LIS中，發(fā)送報(bào)告詳見免疫報(bào)告發(fā)送程序。8.7 結(jié)果判斷8.7.1 每個實(shí)驗(yàn)的結(jié)果獨(dú)立使用，通過（S/C.O.值）判斷結(jié)果。8.7.2 計(jì)算臨界值：Cut-off（C.O）=Nc+0.26（Nc=陰性對照的均值）如果其中一個陰性對照不在質(zhì)控范圍之內(nèi)，舍去，按照其他二孔的均值，如果其中二個以上陰性對照不在質(zhì)控范圍

6、之內(nèi)，實(shí)驗(yàn)無效，需要重新操作。8.7.3 質(zhì)量控制：8.7.3.1空白孔（只加顯色液和終止液）的吸光度值應(yīng)不大于0.0808.7.3.2陽性對照的吸光度值應(yīng)大于等于0.8008.7.3.3陰性對照的吸光度值應(yīng)小于等于0.100 如果質(zhì)控是有效的，實(shí)驗(yàn)結(jié)果就是有效的。建議每個實(shí)驗(yàn)室用質(zhì)控品或已知的患者標(biāo)本建立適合本實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)控體系。8.7.4 結(jié)果判定：（S=每孔的吸光度值）8.7.4.1陰性結(jié)果（S/C.O.1）:樣本的吸光度值小于Cut_off值為陰性，代表該標(biāo)本中尚未檢測出HEV-IgM抗體。8.7.4.2陽性結(jié)果（S/C.O.1）:樣本的吸光度值大于或等于Cut_off值為陽性，代表該標(biāo)

7、本中可以檢測出HEV-IgM抗體，推薦雙孔復(fù)試。9. 參考范圍：正常人陰性。10. 臨床意義：戊型肝炎既往稱腸道傳染性非甲非乙型肝炎，由戊型肝炎病毒（HEV）感染所致。HEV屬杯狀病毒科，所以戊型肝炎的臨床癥狀和流行病學(xué)都與甲肝相似。11. 病人準(zhǔn)備、標(biāo)本要求：標(biāo)本為血清時(shí)最好空腹采血，脂血、溶血不可使用。其它體液標(biāo)本無特殊要求。12. 注意事項(xiàng)： 此試劑盒為體外診斷試劑，供專業(yè)人員使用。為保證結(jié)果準(zhǔn)確，請嚴(yán)格按照說明書中的實(shí)驗(yàn)步驟操作。12.1不同批號的試劑或者不同廠家的試劑不能通用，同是萬泰產(chǎn)品的同批號試劑組份可以通用。12.2不要使用超過有效期的試劑。12.3操作注意事項(xiàng)：12.3.1使

8、用試劑前，將試劑放置于室溫（18-30）平衡15-30分鐘。12.3.2實(shí)驗(yàn)完畢立即將試劑置于2-8儲存。12.3.3不要接觸微孔底部，指紋劃痕會影響讀數(shù)。12.3.4判讀時(shí)，確保板底干燥且微孔內(nèi)無氣泡。12.3.5吸板是個關(guān)健步驟，注意吸板的次數(shù)，每孔洗滌時(shí)洗液需要注滿，不正確的洗滌方式將導(dǎo)致不正確的結(jié)果。12.3.6洗滌完畢后，不宜將干燥的酶標(biāo)板放置太長（超過10分鐘），應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。12.3.7定期校準(zhǔn)移液器，確保準(zhǔn)確，每個樣本用不同的加樣頭以避免交叉污染。12.3.8確保溫箱內(nèi)部的溫度為371。12.3.9加樣時(shí)避免加樣頭接觸微孔的底部。12.3.10陽性對照已經(jīng)無害化處理，但是實(shí)驗(yàn)時(shí)所有的標(biāo)本都應(yīng)視為傳染