白參和發(fā)酵白參抗疲勞及對免疫功能的影響

1、白參和發(fā)酵白參抗疲勞及對免疫功能的影響摘要： 目的：研究白參和發(fā)酵白參對于小鼠免疫功能的調(diào)節(jié)作用和對于小 鼠疲勞狀況的改善作用。 方法：根據(jù)白參、發(fā)酵白參、細(xì)胞因子等不同的處理 方式將小鼠分為6組，進(jìn)行溶血空斑實(shí)驗(yàn)、單核巨噬細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)、NK細(xì)胞活力測定、T細(xì)胞增殖情況測定、半溶血素測定，并用 SPSS18.0軟件分析所 得數(shù)據(jù)。 結(jié)果：中濃度的自制白參可以明顯的增加溶血空板的形成、吞噬率和 吞噬指數(shù)也明顯高于空白對照，NK細(xì)胞的活力和半溶血素（HC50也明顯強(qiáng)于 空白對照，但是對T細(xì)胞的增殖沒有明顯作用；兩個(gè)濃度的發(fā)酵白參對 NK細(xì)胞 的活力和T細(xì)胞的增殖都有很明顯的促進(jìn)作用。中濃度的白

2、參和高中兩個(gè)濃度的 發(fā)酵白參能夠增強(qiáng)小鼠的免疫力、提高小鼠的抗疲勞能力。 結(jié)論： 由此可知， 中濃度的白參和高中兩個(gè)濃度的發(fā)酵白參能夠增強(qiáng)小鼠的細(xì)胞免疫免疫力、 提高 小鼠的抗疲勞能力，且發(fā)酵白參的效果好于白參。關(guān)鍵詞：白參 免疫功能 抗疲勞 溶血空斑 吞噬功能 現(xiàn)今，隨著工作壓力的增加、 生活節(jié)奏的加快， 很多人都因?yàn)槠诘牟粩嗬?積而處在亞健康的身體狀態(tài)下、 對于疾病的免疫力也受到了影響。 近些年來， 有 很多關(guān)于如何改善疲勞狀態(tài)和增加機(jī)體免疫力的研究， 諸如健康飲食、 合理運(yùn)動(dòng)、 規(guī)律作息、 中藥調(diào)理等方式都為越來越多的人所接受。 其中， 對于中藥調(diào)理的研 究就涵蓋了藥材的選擇和搭配、

3、藥物劑量的確定、 藥物療效的研究。 已經(jīng)有很多 研究報(bào)道了多種中藥在抗疲勞和改善免疫功能中的作用， 這其中就包括白參對于 人體肝炎、腫瘤、糖尿病多種慢性疾病的調(diào)理和改善作用。 白參是一類性味甘平， 微苦稍寒，具有補(bǔ)氣生津、寧神益智功用的食藥兼用的珍有菌菇。在這里本實(shí)驗(yàn)室通過溶血空斑實(shí)驗(yàn)、單核巨噬細(xì)胞吞噬功能實(shí)驗(yàn)、NK細(xì)胞活力測定、T細(xì)胞增殖情況測定、半溶血素測定來研究白參和發(fā)酵白參對于小鼠 免疫功能的調(diào)節(jié)作用， 通過小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)來研究白參對于小鼠疲勞狀況的改 善作用。1 、材料與方法動(dòng)物選用購買于本校動(dòng)物中心的 ICR 小白鼠，雌性和雄性小鼠各一半，體重16-20g 。藥物制備白參取已粉碎

4、的白參 200 克，加 70%酒精 1600 毫升，浸泡、封口、過夜。次日，80C恒溫水浴90分鐘。冷卻后過濾、濾液移入大燒杯，剩余殘?jiān)尤?0%酉精1250毫升、 80攝氏度恒溫水浴 60分鐘。 冷卻后再次過濾， 將濾液與第一次濾液 混合、室溫冷卻后放置于4C保存發(fā)酵白參和細(xì)胞因子采購于XX公司的發(fā)酵白參、貨號XXXXXX，細(xì)胞因子XX、貨號XXXXXX。分組方法按照用藥不同分為以下幾組： 空白對照組給予生理鹽水； 高濃度白參組： 給 予XX濃度自制白參；中濃度白參組：給予XX濃度自制白參；高濃度發(fā)酵白參組： 給予XX濃度購買的發(fā)酵白參；中濃度發(fā)酵白參組：給予XX濃度購買的發(fā)酵白參； 細(xì)胞因

5、子對照組：給予XX濃度細(xì)胞因子。實(shí)驗(yàn)方法溶血空斑實(shí)驗(yàn)按照分組方法給藥， 給藥后腹腔注射 1:200 綿羊紅細(xì)胞 0.5 毫升，而后在無 菌條件下取出小鼠脾臟，根據(jù)文獻(xiàn)方法進(jìn)行溶血空斑實(shí)驗(yàn) 1 。單核巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)吞噬實(shí)驗(yàn)前4d腹腔注射0.5 %淀粉生理鹽水溶液0.5ml。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天腹腔注射 5雞紅細(xì)胞懸液 0、 5ml， 12h 后處死；仰位固定于鼠板上，正中剪開腹壁皮膚， 經(jīng)腹膜注入生理鹽水2ml，輕輕按揉鼠腹部1 min，然后吸出腹腔洗液Iml，分 滴于兩片載玻片上，方入墊有濕紗布的搪瓷盒內(nèi)，移置37C孵箱溫育30min。以 生理鹽水漂洗，以除去未與載玻片黏附的細(xì)胞，晾干。 1:1 丙酮-

6、甲醇溶液固定 5min。4%Giem-sa-磷酸鹽緩沖液染色3min，流水沖洗，晾干2。結(jié)果判定： 油鏡下計(jì)數(shù)巨噬細(xì)胞， 每片 200個(gè)按下試計(jì)算吞噬百分率和吞噬 指數(shù)。吞噬指數(shù)=（被吞噬的雞紅細(xì)胞 /200 個(gè)巨噬細(xì)胞 ）/2 ；吞噬百分率（%）= 吞 噬雞的巨噬細(xì)胞數(shù)紅細(xì)胞/200個(gè)巨噬細(xì)胞（吞及未吞噬的）X 100%NK 細(xì)胞活力按照分組給藥后，處死老鼠、無菌取脾，支撐單細(xì)胞懸液后、按照文獻(xiàn)報(bào)道的乳酸脫氫酶法測定NK細(xì)胞的活力，以此來指示各組小鼠脾臟中NK細(xì)胞的活性。T 細(xì)胞增殖情況的測定按照分組給藥后，處死老鼠、無菌取脾，制成單細(xì)胞懸液后用 ConA液體誘 導(dǎo)，而后用MTT法在酶標(biāo)儀上

7、以570nm測定光密度值，來指示各組小鼠脾臟中 T 細(xì)胞的增殖情況。1.4.5半溶血素（HC50的測定按照分組給藥后，處死老鼠、取血，根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道的方法測定半溶血素（HC50，來指示各組小鼠血液發(fā)生免疫反應(yīng)的能力。白細(xì)胞介素 2（ IL2 ）的測定采用購買于 xx 公司的小鼠白細(xì)胞介素 2 （IL-2 ）酶聯(lián)免疫分析試劑盒， 用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中白細(xì)胞介素 2 （IL-2 ）水平。負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)于體積約1m3的水桶中，水深約50ml，水溫25C，進(jìn)行游泳篩選。每10只一 組，游泳 10分鐘，將不會游泳的、下沉的以及 10分種游泳弱的小鼠淘汰。隨機(jī) 分組分為，白參高、中劑量組，發(fā)酵白參高、中劑

8、量組，正常組。共 5組。負(fù)重 標(biāo)準(zhǔn)：給予小鼠體重的 5%的鉛塊綁在小鼠尾巴根部。力竭標(biāo)準(zhǔn)：小鼠沉底10s，不能浮起，即表示力竭。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法運(yùn)用SPSS18.0軟件分析上述結(jié)果，根據(jù) Pv 0.05判斷為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、結(jié)果溶血空斑實(shí)驗(yàn)發(fā)酵高、中、藥物組比較0.05 ;藥物組與白參高組比較p0.05，與發(fā)酵高中無顯著性差異單核巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)吞噬指數(shù)：正常組與各組比較p0.05，白高、中、發(fā)酵高、中各組比較無差 異;吞噬率：正常組與各組比較 p0.01 ，白中與發(fā)酵高之間比較 p0.05。NK細(xì)胞活力正常組與各組比較p0.01，藥物組與白參高中組比較 p0.05，與發(fā)酵高中無顯著性差異T細(xì)胞增

9、殖情況正常組與發(fā)酵高、中組比較P0.05,正常組與藥物組比較PvO.01;藥物組與 白參高中組比較p0.05，與發(fā)酵高中無顯著性差異2.5半溶血素（HC50的測定正常組與白高、中組比較p0.05，與發(fā)酵高、中、藥物組比較p三0.01 ;藥 物組與白參高中組比較p0.05，與發(fā)酵高中無顯著性差異。2.6白細(xì)胞介素2的測定結(jié)果各個(gè)藥物處理組的IL2水平都要明顯大于正常對照組 （p0.05）。白高、中、 發(fā)酵高和發(fā)酵中兩組的IL2水平明顯大于白高和白中兩組（p0.05）,其中發(fā)酵 高濃度組的IL2水平又要大于發(fā)酵中濃度組（p0.05）。2.72.7負(fù)重游泳結(jié)果各個(gè)藥物處理組的力竭時(shí)間都要明顯長于正常

10、對照組 （p0.05）。白高、中、 發(fā)酵高和發(fā)酵中兩組的力竭時(shí)間明顯長于白高和白中兩組（ p0.05）,其中發(fā)酵 高濃度組的力竭時(shí)間又要長于發(fā)酵中濃度組（p0.05 ）。表1:溶血空斑、T細(xì)胞增殖、HC50及NK細(xì)胞活力空斑T細(xì)胞HC50NK細(xì)胞正常204.60 37.920.34 0.17123.69 2.0835.44 11.05白高165.60 57.560.33 0.10132.81 5.4760.99 12.18白中299.10 107.070.33 0.21133.40 9.9870.31 11.91發(fā)酵咼338.90 107.790.49 0.16143.13 8.5474.00

11、 12.76發(fā)酵中397.90 138.040.47 0.19142.23 4.8576.35 9.67藥物359.70 148.530.53 0.49142.28 15.7479.32 16.84表2:吞噬實(shí)驗(yàn)和負(fù)重游泳結(jié)果足跖力竭時(shí)間（min）IL-2 (n g/ml)正常0.46 0.0854.32 8.9816.60 3.75白高0.49 0.1571.23 4.4935.47 4.68白中0.51 0.1469.32 9.3431.23 4.77發(fā)酵咼0.60 0.1388.99 9.0945.42 7.54發(fā)酵中0.69土 0.1183.42 6.9239.54 5.39表3:吞噬

12、指數(shù)和吞噬率吞噬指數(shù)吞噬率正常0.95 0.2054.60 7.75白高1.20 0.1266.40 4.03白中1.18 0.1371.10 6.26發(fā)酵咼1.11 0.1064.60 4.43發(fā)酵中1.20 0.1468.10 3.753、討論白參是一類性味甘平，微苦稍寒，具有補(bǔ)氣生津、寧神益智功用的食藥兼用 的珍有菌菇3。在這里，我們用自制白參和購買的發(fā)酵白參來處理 ICR小鼠，用 細(xì)胞因子處理組作為陽性對照，用生理鹽水處理組作為空白對照， 來研究白參和 發(fā)酵白參在提高小鼠免疫力和增強(qiáng)抗疲勞能力中的作用 。從我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中看到，中濃度的自制白參可以明顯的增加溶血空板的形 成、IL2水平

13、、足跖增厚程度、吞噬率和吞噬指數(shù)也明顯高于空白對照， NK細(xì)胞 的活力和半溶血素（HC50）也明顯強(qiáng)于空白對照，但是對T細(xì)胞的增殖沒有明顯作 用。由此我們可以推測，白參通過對增加 NK細(xì)胞的活力和半溶血素的含量來增 強(qiáng)小鼠免疫力；但是高濃度的白參并沒有這種效果。 高中兩個(gè)濃度的發(fā)酵白參對 NK細(xì)胞的活力、T細(xì)胞的增殖和半溶血素（HC50、IL2水平、足跖增厚程度、 都有很明顯的促進(jìn)作用，溶血空板的形成、吞噬率和吞噬指數(shù)也明顯高于空白對 照，而且高中兩個(gè)濃度的發(fā)酵白參的作用間沒有明顯的差異。因此我們推測，發(fā)酵白參通增加NK細(xì)胞的活力、半溶血素的含量以及促進(jìn) T細(xì)胞的增殖來增強(qiáng)了 小鼠的免疫力。通

14、過進(jìn)一步分析，我們可知中高濃度的發(fā)酵白參增強(qiáng)小鼠免疫力 的能力強(qiáng)于中高濃度的自制白參（PV 0.05）。綜合以上結(jié)果，我們得知白參和發(fā) 酵白參可以增強(qiáng)小鼠的細(xì)胞免疫力，且發(fā)酵白參的效果好于自制白參。另外，用兩個(gè)濃度自制白參和發(fā)酵白參處理后， 小鼠在負(fù)重游泳試驗(yàn)中的力 竭時(shí)間明顯長于空白對照組，這就說明白參和發(fā)酵白參能夠增強(qiáng)小鼠的抗疲勞能 力。進(jìn)一步比較白參和發(fā)酵白參，可知發(fā)酵白參小鼠的力竭時(shí)間長于白參，這同 樣證明了發(fā)酵白參提高小鼠抗疲勞能力的效果好于白參。由此可知，中濃度的白參和高中兩個(gè)濃度的發(fā)酵白參能夠增強(qiáng)小鼠的細(xì)胞免 疫免疫力、提高小鼠的抗疲勞能力，且發(fā)酵白參的效果好于白參。參考文獻(xiàn)朱立平，陳學(xué)清免疫學(xué)常用實(shí)驗(yàn)方法 M 北京