半薄切片技術介紹

1、半薄切片技術介紹第1頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二半薄切片圖片第2頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二鈣化骨組織切片 眼球附近組織的連續(xù)切片 第3頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二半薄切片：(厚度為 0.5m 1m )第4頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二半薄切片進行光學顯微鏡觀察的目的：可以根據(jù)半薄切片精確定位。了解樣品包埋質量，以確定是否繼續(xù)做超薄切片；與石蠟切片、超薄切片進行對比研究第5頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二半薄切片的優(yōu)點：克服了超薄切片的盲目性和電鏡視野的局限性清晰度、分辨

2、率遠優(yōu)于石蠟切片，視野也大于超薄切片，有利于獲得高質量的光鏡圖像也是電鏡超薄切片技術中一種有效的定位方法。第6頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二電鏡超薄技術中如何應用呢？電鏡是觀察組織細胞超微結構的一種手段。但由于切片太小，有時難于觀察到目標結構，為此需大量制備樣品，造成工作量大且消耗多。為使超薄切片能精確地切到目標部位，在做超薄切片前要做半薄切片來進行定位。第7頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二應用： 胚胎學，病理學，動植物細胞學研究中一種普遍的切片方式第8頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二半薄切片主要步驟取材固定漂洗、脫水滲透、包

3、埋半薄切片半薄切片染色每一步都是關鍵,任何環(huán)節(jié)的疏忽都會導致制片的失敗第9頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二FAA固定液制備：福爾馬林5-冰醋酸5-70%酒精90應用：半薄/石蠟切片適用：一般固定根、莖、葉、花藥、子房組 織切片。補充說明： 幼嫩材料用50%酒精代替70%酒精，防止材料收縮；加入5%甘油可防固定液蒸發(fā)和材料變硬。第10頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二卡諾固定液12純酒精15ml30ml氯仿5ml 冰醋酸5ml1ml滲透迅速，固定根尖和花藥只需30-60分鐘，但固定時間不能太久，一般不超過一天第11頁，共18頁，2022年，5月20日，2

4、點4分，星期二Leica RM2265旋轉薄切片機第12頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二Leica RM2265旋轉薄切片機制作半薄切片（厚度0.25-5m）使用步驟：1接通電源，打開主開關2選擇切片厚度3安放包埋塊于切片頭中央位置，旋轉固定螺絲，將樣品按要求固定挾緊4安放粘有水槽的玻璃刀，并將玻璃刀口對準樣品5選擇切片模式（自動/手動），切片計數(shù)開始6取切片的材料：撈片，置于載玻片上，加熱，脫樹脂處理，對材料染色，著色后沖洗、封藏、烘干第13頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二半薄切片染色常規(guī)染色方法有： 甲苯胺蘭染色法、天青美蘭染色法、堿性復紅法、蘇

5、木素-伊紅法、HE染色法和Giemsa染色法等。無論哪種方法都需預先做處脫樹脂處理，否則染料不宜滲入，影響染色效果。第14頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二脫樹脂處理：過程將干燥切片插入氫氧化鉀無水酒精飽和溶液l015 min后，無水酒精洗三次，經(jīng)梯度酒精下行，水洗后染色。此過程即繁瑣又費時，所以選擇理想的染色劑非常重要。第15頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二染色方法現(xiàn) 象番紅固綠對染法木質化的細胞壁及細胞核紅纖維素的細胞壁及細胞壁綠鐵礬蘇木精法細胞一般結構及細胞分裂時期的優(yōu)良染劑，細胞分裂時期的染色體染成黑色高碘酸席夫反應法（PAS法）植物組織染成不同程度的紅色，可將纖維素細胞壁及淀粉粒染成紅色第16頁，共18頁，2022年，5月20日，2點4分，星期二細胞壁的染料酸性品紅 番紅 固綠 甲苯胺藍 蘇木精 結晶紫 亮綠 蘇丹IV細胞核染料（堿性）堿性品紅 蘇木精 洋紅 番紅 地衣紅 結晶紫 細胞質染料（酸性）酸性品紅 甲苯胺藍 曙紅 固綠 苦味酸各種熒