實驗診斷學(xué)10臨床病原體檢查

1、關(guān)于期末考試(有雙語內(nèi)容，有實驗內(nèi)容)判斷題共10題，每題1分單選題共70題，每題1分 多選題共6題，每題1.5分 名詞解釋共2題，每題3分簡答題共1題，每題5分 臨 床 病 原 體 檢 測We ask the lab for a diagnosis, expecting a yes or no, but often end up with just a maybeCase 1One day in summer, a young man was admitted to hospital after three days of chills, joint pain, headache, coug

2、h, vomit, hepatosplenomegaly and a high fever. Total leukocyte count was 25,900/mm3, Chest X-ray and urine routine were normal.After the initial diagnosis with septicemia, he was treated by Tienam. On the next 3 days, still in a bad way and he consulted a dermatologist due to a rash. Blood culture w

3、as sterile. After investigation, We found the patient climbed the hill two weeks ago. And had a rest in the grass.A typical black eschar was found on the patients waist. Tetracycline for the treatment of scrub typhus (rickettsiosis). Then he allayed a fever. After a week, the patient discharged from

4、 hospital.A laboratory test such as Weil-Felix test was positive.臨床病原體檢查目的 明確感染是否發(fā)生以及病原體的類型。 提供體外微生物藥物敏感實驗的結(jié)果。 密切監(jiān)視烈性傳染病與新的傳染病的發(fā)生，及時向行政主管部門報告。 配合相關(guān)機構(gòu)進行流行病學(xué)調(diào)查。 第九章 臨床常見病原體檢測 一、概述二、標本采集、運送和檢測方法三、細菌耐藥性檢查四、臨床感染常見病原體檢查感染性疾病的現(xiàn)狀感染性疾病的病原體：細菌、病毒、支原體、衣原體、立克次體 以及寄生蟲等。自從抗生素的發(fā)現(xiàn)和預(yù)防接種的實施，許多曾嚴重危害人體健康的病原體已消滅或基本消滅 新的

5、傳染病陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，曾絕跡的老傳染病部分死灰復(fù)燃。條件致病菌感染比例增加。多重耐藥菌株不斷出現(xiàn)，真菌感染的幾率逐年增高。A young Bangladeshi girl infected with smallpox (1973)感染性疾病的現(xiàn)狀感染性疾病的病原體：細菌、病毒、支原體、衣原體、立克次體 以及寄生蟲等。自從抗生素的發(fā)現(xiàn)和預(yù)防接種的實施，許多曾嚴重危害人體健康的病原體已消滅或基本消滅 新的傳染病陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，曾絕跡的老傳染病部分死灰復(fù)燃。條件致病菌感染比例增加。多重耐藥菌株不斷出現(xiàn)，真菌感染的幾率逐年增高。Tubercular decay has been found in the sp

6、ines of Egyptian mummies in the British Museum感染性疾病的現(xiàn)狀感染性疾病的病原體：細菌、病毒、支原體、衣原體、立克次體 以及寄生蟲等。自從抗生素的發(fā)現(xiàn)和預(yù)防接種的實施，許多曾嚴重危害人體健康的病原體已消滅或基本消滅 新的傳染病陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)，曾絕跡的老傳染病部分死灰復(fù)燃。條件致病菌感染比例增加。多重耐藥菌株不斷出現(xiàn)，真菌感染的幾率逐年增高。Culture View Microscopic View pandrug-resistant Acinetobacter baumannii Worldwide mortality due to infectiou

7、s diseases RankCause of deathDeaths 2002Percentage ofall deathsDeaths 19931993 RankN/AAll infectious diseases14.7 million25.9%16.4 million32.2%1Lower respiratory infections3.9 million6.9%4.1 million12HIV/AIDS2.8 million4.9%0.7 million73Diarrheal diseases1.8 million3.2%3.0 million24Tuberculosis 1.6 m

8、illion2.7%2.7 million35Malaria1.3 million2.2%2.0 million46Measles0.6 million1.1%1.1 million5正確收集標本應(yīng)遵循的原則 SPECIMEN COLLECTION IS THE MOST IMPORTANT STEP! （1）Where無菌 versus 有菌 （2）When （3） HowUrine SpecimenStool Specimen 無菌技術(shù) （容器/手法） 足夠的量 適當?shù)慕ㄗh 完整的申請單CulturetteCary-Blair(4) Standard Precautions一、常見標本的采

9、集（血液與骨髓）1. 適應(yīng)癥：疑似菌血癥、敗血癥或膿毒血癥的病人。2. 采血部位多為肘靜脈，切忌在靜滴抗菌藥物的靜脈處采集血標本，無菌操作。 3. 每次采血量為5ml左右，培養(yǎng)基與血液之比以10:1為宜。4. 選擇體溫上升或高溫時采血。5. 每例至少采血兩次，注意區(qū)別 感染菌和皮膚污染菌。第一節(jié) 標本采集、運送和檢測方法一、常見標本的采集( 尿液 ) 1. 中段尿采集：最常用的方法。采樣前須消毒尿道口將中段或近后段的尿液留于無菌容器中。2.導(dǎo)尿管采集尿液：可減少污染，但易引起逆行感染，除非必要，須避免用此方法。3. 膀胱穿刺采集尿液：病人恥骨上皮 膚消毒后，以無菌針筒作膀胱穿刺。 此法主要用于

10、尿液厭氧菌培養(yǎng)或嬰 幼兒。AMAS408-AMSure Infant Urine Collection Bag 一、常見標本的采集 ( 糞便 )有膿血粘液部分的新鮮糞便約2-3克送檢，也可用拭子挑取糞便插入Cary-Blair運送培養(yǎng)基中送檢對不易獲取糞便者，如嬰幼兒可用直腸拭子采集送檢。 - Do not collect the sample from the toilet bowl - Do not mix toilet paper, water, or soap with the sample 一、常見標本的采集(呼吸道標本）1. 自然咳痰：清水反復(fù)漱口后用力咳嗽， 從呼吸道深部咳出新鮮

11、痰液于無菌容器內(nèi)送檢。以清晨第一口痰為好。2. 氣管鏡下采集法、氣管穿刺法:理想標 本，但不易接受和推廣。3. 及時送檢和處理，最好不超過1小時。 (肺炎鏈球菌，流感嗜血桿菌) 4. 上呼吸道存在正常菌群，在采集標本 與結(jié)果分析時應(yīng)予考慮。一、常見標本的采集(腦脊液等無菌體液）1. 嚴格無菌條件下采集標本。2. 盡量采集多的標本送檢。3. 盡快送檢或床旁接種可提 高陽性率，特殊標本需保 溫送檢。如腦膜炎奈瑟菌、 肺炎鏈球菌、流感嗜血桿 菌等。一、常見標本的采集（傷口、燒傷創(chuàng)面、膿腫及其他）1. 無菌清洗病灶表面后，用無菌拭子取病灶深部的膿液和分泌物，立即送檢。2. 對未潰破的膿腫直接抽取膿液送

12、檢，也可以切開排膿時用無菌拭子采樣。3. 生殖道標本包括尿道口分泌物、外陰糜爛物、宮頸口分泌物、前列腺液等，應(yīng)注意保溫。二、檢查方法1.直接涂片、鏡檢 初步診斷但陽性率低。2.病原體特異性抗原檢測 免疫熒光技術(shù)、酶免疫技術(shù)、化學(xué)發(fā)光技術(shù)、膠乳凝集技術(shù)等。3.病原體核酸檢測 PCR、分子雜交、DNA測序等。 4.分離、培養(yǎng)、鑒定 金標準較費時,同時可進行藥物敏感試驗。5.血清學(xué)檢查 如肥達氏試驗、軍團菌抗體檢查等。應(yīng)進行雙份血清檢測，兩次抗體效價相差4倍以上有意義。但不能進行早期檢測。第二節(jié) 細菌耐藥性檢查The “Red Queen Hypothesis” Lewis Carrolls Thr

13、ough the Looking Glass Red Queen It takes all the running you can do, to keep in the same place. This is an appropriate analogy: the environment constantly changes and populations must continue to evolve to survive. 耐藥機制(1)產(chǎn)生滅活酶或純化酶(2)改變抗生素作用部位的結(jié)構(gòu)(3)改變外膜蛋白的通透性,藥物滲入細菌減少(4)代謝拮抗物的產(chǎn)生或代謝旁路的產(chǎn)生(5)細菌抗生素結(jié)合蛋白

14、的改變(6)細菌的外排系統(tǒng)(7)生物膜的形成（1）手工試驗 1.紙片擴散法（S，I，R） 2.稀釋法（MIC） 3.E test（MIC）（2）自動儀器 Vitek，Microscan，Phoenix（3）分子試驗 PCR直接檢測mecA基因（4）酶試驗 Nitrocefin、ESBL檢測檢查項目、結(jié)果和臨床應(yīng)用藥物敏感試驗(antimicrobiol susceptibility test AST) K-B 法E-試驗 對所有內(nèi)酰胺類及與酶抑制劑的復(fù)合劑耐藥并對氨基糖甙類、大環(huán)內(nèi)脂類、克林霉素和四環(huán)素等抗生素多重耐藥。治療首選藥物為萬古霉素。FOX耐甲氧西林的葡萄球菌（methecillin

15、 resistance staphylococcus，MRS）篩選試驗OXOXFOXOXFOX2.重點耐藥菌株監(jiān)測試驗注:OX為苯唑西林;FOX為頭孢西丁1.CTX/CA比CTX抑菌圈或CAZ/CA比CAX 5mm即為陽性2.若ESBLs陽性,對青霉素類、所有頭孢菌素類及單環(huán)類抗菌素耐藥 3.主要在大腸埃希菌和克雷伯菌屬等腸桿菌科細菌中產(chǎn)生 CTXCTX/CACAZCAZ/CA注:CTX為頭孢噻肟;CTX/CA為頭孢噻肟/棒酸 CAZ為頭孢他啶;CAZ/CA為頭孢他啶/棒酸產(chǎn)超廣譜-內(nèi)酰胺酶(extend spectum -lactamase, ESBL)雙紙片確證試驗檢查項目和臨床應(yīng)用細菌感染檢查項目的選擇普通細菌：常采用直接鏡檢、分離培養(yǎng)與鑒定明確病原體。 難培養(yǎng)或培養(yǎng)要求高的細菌：綜合運用免疫學(xué)或分子生物學(xué)檢測，如結(jié)核分枝桿菌感染以及幽門螺桿菌感染等。 流行病學(xué)調(diào)查：病原體抗體檢測，如ASO試驗與Widal反應(yīng)等。 細菌培養(yǎng)是最重要的確診方法第三節(jié) 臨床感染常見病原體檢查病實毒驗感室染診性斷疾 病 的 醫(yī)院感染常見病原體檢查院內(nèi)感染的定義流行病學(xué)檢查項目和臨床應(yīng)用醫(yī)院環(huán)