生化試劑知識(shí)通用v1

1、生化試劑知識(shí)培訓(xùn)（通用版）V1.0版 主 講：技術(shù)主管 李漢營(yíng) 更新時(shí)間：2010年3月27日深 圳 雷 杜 生 命 科 學(xué) 股 份 有 限 公 司 Rayto Life and Analytical Sciences Co.,Ltd 制 造 標(biāo) 準(zhǔn) ，制 造 信 賴 Manufacture Standard,Manufacture Reliance 生化檢測(cè)項(xiàng)目及原理試劑發(fā)展歷史試劑的分類臨床項(xiàng)目主要測(cè)定原理試劑的性能評(píng)價(jià)方法試劑使用注意事項(xiàng)生化檢測(cè)項(xiàng)目及原理試劑發(fā)展歷史試劑的分類臨床項(xiàng)目主要測(cè)定原理試劑的性能評(píng)價(jià)方法試劑使用注意事項(xiàng) 除特種蛋白外的大部分臨床生化項(xiàng)目，配以相應(yīng)的試劑，均可利

2、用吸收光譜法在生化分析儀上進(jìn)行測(cè)定。酶類：ALT，AST，ALP，ACP，r-GT，-HBDH，LDH，CK，CK-MB, -AMY等。 底物/代謝產(chǎn)物類：TG，TC，HDL-C，LDL-C，UA，UREA，Cr，Glu，TP，Alb，T-Bil，D-Bil，CO2 等。 無(wú)機(jī)離子類：Ca，P，Mg，Cl等。 生化檢測(cè)項(xiàng)目及原理生化檢測(cè)項(xiàng)目及原理試劑發(fā)展歷史試劑的分類臨床項(xiàng)目主要測(cè)定原理試劑的性能評(píng)價(jià)方法試劑使用注意事項(xiàng)試劑發(fā)展的歷史第一階段：各醫(yī)院實(shí)驗(yàn)室通常自行配制簡(jiǎn)單試劑。（能開展的生化檢測(cè)的方法及檢測(cè)項(xiàng)目十分有限，無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，標(biāo)準(zhǔn)性極差）第二階段：使用時(shí)要用多種試劑配制在一起，穩(wěn)定性很差

3、，多數(shù)在冰箱內(nèi)只能保存數(shù)天，并且操作繁瑣費(fèi)時(shí)，容易加錯(cuò)試劑第三階段：凍干試劑、干粉試劑。（凍干試劑是將各化學(xué)試劑溶解混合后，分裝成不同試劑的瓶?jī)?nèi)，再經(jīng)凍干處理。凍干試劑中殘留的含水量不易精確控制，造成瓶間差較大。干粉試劑是用將各種干燥的化學(xué)試劑直接混合加工而成，各瓶?jī)?nèi)試劑中所含水量均一。凍干和干粉試劑在使用前要復(fù)溶，復(fù)溶時(shí)對(duì)水質(zhì)及其加入量要求很高，復(fù)溶后保存期短，穩(wěn)定性差，常常造成浪費(fèi)，同時(shí)不能抗干擾。）試劑發(fā)展的歷史第四階段：液體單、雙試劑。準(zhǔn)確、穩(wěn)定性好；抗干擾能力強(qiáng)，無(wú)需復(fù)溶，使用方便，不易浪費(fèi)，使用前無(wú)需準(zhǔn)備，可直接上機(jī)使用，并適用于手工法.試劑發(fā)展的歷史生化檢測(cè)項(xiàng)目及原理試劑發(fā)展歷史

4、試劑的分類臨床項(xiàng)目主要測(cè)定原理試劑的性能評(píng)價(jià)方法試劑使用注意事項(xiàng)干粉試劑：易保存，價(jià)格相對(duì)便宜。溶解過(guò)程中易造成明顯的瓶間差，而且溶解后保存期短，容易浪費(fèi)。液體試劑：使用方便，放儀器冷藏室穩(wěn)定性好，保存期長(zhǎng)，浪費(fèi)少，最終成本和干粉試劑相當(dāng)。試劑的分類單試劑: 即單試劑方法學(xué)試劑盒，一次加樣后反應(yīng)檢測(cè)。雙試劑：雙試劑二步法在方法學(xué)上有很多優(yōu)點(diǎn)：第一試劑中缺少部分工具酶或底物，可以消除內(nèi)源性非 特異性反應(yīng)的干擾加第一試劑后讀取血清吸光度，可徹底排除樣品空白第一試劑與第二試劑分開保存，避免了單試劑中某些成 分之間的相互干擾，提高了試劑的穩(wěn)定性并減少浪費(fèi)試劑的分類生化檢測(cè)項(xiàng)目及原理試劑發(fā)展歷史試劑的分

5、類臨床項(xiàng)目主要測(cè)定原理試劑的性能評(píng)價(jià)方法試劑使用注意事項(xiàng)臨床項(xiàng)目主要測(cè)定原理NAD-NADH和NADP-NADPH系統(tǒng)p-NP和p-NA系統(tǒng)H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)抗原抗體反應(yīng)指示系統(tǒng)其它顯色反應(yīng)NAD-NADH和 NADP-NADPH指示系統(tǒng)NADH和NADPH在340nm有特征性吸收峰，而NAD和NADP在340nm無(wú)特征性吸收峰，利用其偶聯(lián)的脫氫酶(工具酶)反應(yīng)，根據(jù)340nm吸光度的變化，可以測(cè)定物質(zhì)的濃度或活性。作為該指示系統(tǒng)常用的工具酶有LDH、MDH、GLDH和G6PDH目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有：ALT、AST、CK、LDH、CK-MB、-HBDH Glu、UREA、

6、NH4+ 、CO2等。ALT（GPT）的測(cè)定原理R1： NADH 、乳酸脫氫酶（LDH）R2： L-丙氨酸 、-酮戊二酸 p-NP和p-NA指示系統(tǒng)p-NP和p-NA在405nm有特征性吸收峰，根據(jù)405nm吸光度的變化，可以測(cè)定物質(zhì)的濃度或活性。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有ALP、ACP、r-GT、AMY等。ALP（AKP）的測(cè)定原理R1：AMP緩沖液 、MgCl2 ；R2：對(duì)硝基苯磷酸鹽 H2O2偶聯(lián)的指示系統(tǒng)H2O2在過(guò)氧化物酶的作用下，可使單一個(gè)或成對(duì)的無(wú)色的色素原氧化成有色的色素，導(dǎo)致某一波長(zhǎng)吸光度的增加，因此可用來(lái)測(cè)定物質(zhì)的濃度或活性用于此指示系統(tǒng)的單一色素原有TMB、A

7、BTS等；成對(duì)色素原有酚和4AA、MBTH和DMA等。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有TC、TG、HDL-C、LDL-C、Glu、Cr、UA等。GLU的測(cè)定原理R1：4-氨基安替吡啉 、抗壞血酸氧化酶R2：葡萄糖氧化酶（GOD）、過(guò)氧化物酶（POD）、酚 。 抗原抗體反應(yīng)指示系統(tǒng)特異性抗體與抗原(待測(cè)物質(zhì))在相應(yīng)的緩沖環(huán)境下反應(yīng)生成抗原抗體復(fù)合物，形成一定的濁度，導(dǎo)致特定波長(zhǎng)透光率的改變。在抗體過(guò)剩的前提下，改變程度與抗原濃度成正比。目前利用此指示系統(tǒng)進(jìn)行測(cè)定的臨床項(xiàng)目有apoAI、apoB、Lp(a)、IgG、IgA、IgM、C3、C4、CRP等載脂蛋白測(cè)定原理測(cè)定原理：免疫透射比濁法

8、，抗原抗體免疫復(fù)合物形成的濁度的大小在合適的抗體濃度下與抗原含量成正比R1（緩沖液）:磷酸鹽緩沖液pH7.520mM，PEG，表面活性劑，防腐劑，穩(wěn)定劑；R2（抗血清）:羊抗人apo Al（apo B）抗血清，防腐劑，穩(wěn)定劑 。 抗原(血清中的apo Al,apo B)+抗體(抗血清試劑) 緩沖環(huán)境 抗原抗體免疫復(fù)合物其它顯色反應(yīng)蛋白質(zhì)中的肽鍵在堿性溶液中能與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，在一定濃度范圍內(nèi)顏色反應(yīng)強(qiáng)度與蛋白質(zhì)的濃度成正比。用于TP的測(cè)定。溴甲酚綠(BCG)在非離子去污劑Brij35的存在下，可與白蛋白形成緊密結(jié)合的綠色復(fù)合物。用于Alb的測(cè)定。重氮苯磺酸鹽與膽紅素生成紅紫色偶氮膽

9、紅素。用于總膽紅素和直接膽紅素的測(cè)定。甲基麝香草酚蘭(MTB)在堿性條件下可與Ca、Mg形成有色絡(luò)合物。用于Ca、Mg的測(cè)定。其它顯色反應(yīng)（TP）測(cè)定原理：蛋白質(zhì)中的肽鍵在堿性溶液中能與銅離子作用產(chǎn)生紫紅色絡(luò)合物，導(dǎo)致540nm吸光度的增加，增加的程度與蛋白質(zhì)的含量成正比。 堿性條件 酞鍵 + Cu2+ 紫紅色絡(luò)合物 其它顯色反應(yīng)（Ca）測(cè)定原理：甲基麝香草酚蘭(MTB)在堿性條件下可與Ca2+形成紅色絡(luò)合物，引起612nm吸光度的上升，上升程度與Ca濃度成正比 。 堿性條件 MTB + Ca2+ 紅色絡(luò)合物生化檢測(cè)項(xiàng)目及原理試劑發(fā)展歷史試劑的分類臨床項(xiàng)目主要測(cè)定原理試劑的性能評(píng)價(jià)方法試劑使用

10、注意事項(xiàng)試劑的性能評(píng)價(jià)方法穩(wěn)定性試驗(yàn)：指在規(guī)定條件下經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的保存，仍能達(dá)到相應(yīng)的性能指標(biāo)，如試劑空白吸光度、線性范圍、靈敏度等。 靈敏度試驗(yàn)：指單位濃度(或活性)的測(cè)定物反應(yīng)所產(chǎn)生的反應(yīng)度，反應(yīng)度越高，靈敏度越大。 試劑/樣本比例精密度試驗(yàn)對(duì)比試驗(yàn)及偏倚估計(jì) 線性試驗(yàn)回收試驗(yàn)干擾試驗(yàn)試劑的性能保證生化試劑的性能取決于四個(gè)方面:1 穩(wěn)定性2 線性范圍3 抗干擾能力4 采取的方法學(xué)原理生化檢測(cè)項(xiàng)目及原理試劑發(fā)展歷史試劑的分類臨床項(xiàng)目主要測(cè)定原理試劑的性能評(píng)價(jià)方法試劑使用注意事項(xiàng)試劑使用注意事項(xiàng)干粉試劑在干粉狀態(tài)下保存時(shí)間長(zhǎng)，復(fù)溶后一般 不超過(guò)3天；配成“工作液”后保存時(shí)間很短，一般12天；雙試劑不能擅自改成“工作液”。試劑失效的判定方法 通過(guò)試劑空白吸光度、顏色、PH值、查看反應(yīng)曲線等來(lái)判斷。