糖精鈉的檢測(cè)

1、苯甲酸、山梨酸、糖精鈉是衡量食品衛(wèi)生質(zhì)量的重要指標(biāo)，苯甲酸、山梨酸的檢 測(cè)參照GB/T5009.29-2003，糖精鈉的檢測(cè)參照GB/T 5009.28-2003，即可開 展實(shí)驗(yàn)。苯甲酸、山梨酸、糖精鈉雖是較常見的檢測(cè)項(xiàng)目，但是要得到一個(gè)準(zhǔn)確可靠的結(jié) 果，也存在一定的難度，許多新手常出現(xiàn)因?qū)Ψ椒ɡ斫獍l(fā)生偏差而檢測(cè)出錯(cuò)的事 故。筆者根據(jù)自己多年該方面工作的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)出發(fā)，以苯甲酸、山梨酸為著重點(diǎn)， 從樣品前處理、檢測(cè)儀器的選擇、超標(biāo)時(shí)的判斷等幾個(gè)易出問(wèn)題的方面，進(jìn)行了 詳細(xì)的闡述。2樣品前處理的注意事項(xiàng)GB/T5009.28-2003和GB/T5009.29-2003在文字結(jié)構(gòu)上有缺陷，在涉及用儀

2、器法測(cè)定苯甲酸、山梨酸、糖精鈉時(shí)，只講述了液體樣品的前處理方法，沒有涉 及對(duì)固體樣品的前處理。食品樣品往往含有大量的油脂、蛋白質(zhì)，對(duì)提取極為不利；如處理不干凈也會(huì)污染色譜柱，影響檢測(cè)工作。這類樣品處理的關(guān)鍵在于如何找到一種較理想的沉淀 劑，盡量排除待測(cè)樣品中的油脂、蛋白質(zhì)，且不影響待測(cè)物組分的回收率。尚可，對(duì)于豆粉、奶粉、月餅等高油脂、高蛋白樣品則沉淀效果不理想。如用1 0%鎢酸鈉溶液作為沉淀劑，效果好些；如用10%亞鐵氰化鉀溶液和20%醋酸 鋅溶液則效果更理想（這是筆者目前用過(guò)最理想的沉淀劑）。具體操作步驟如下：取一定量樣品，搗碎，利用四分法原理稱取樣品5.0克于50ml比色管中，加水 20

3、ml，浸泡、振蕩均勻，加入氫氧化鈉溶液（1mol/L）1.0 ml ,加入9.5mL10% 亞鐵氰化鉀溶液，9.50mL 20%乙酸鋅溶液，定容，振蕩使其充分混勻后用濾 紙初濾除去沉淀物，初濾液過(guò)0.45pm微孔濾膜,收集濾液于樣品瓶中，樣品處理 液和標(biāo)準(zhǔn)有溶液各進(jìn)樣5uL測(cè)定。用這種方法簡(jiǎn)單易行，接觸有機(jī)試劑少，重復(fù)性和回收率都令人滿意；缺點(diǎn)是一 定要用液相色譜法檢測(cè)，有一定局限。3檢測(cè)儀器的選擇雖然液相色譜儀操作起來(lái)比氣相色譜儀要復(fù)雜，但筆者建議如條件許可仍盡量用 液相色譜法檢測(cè)。原因如下：3.1液相色譜法所用的樣品處理方法遠(yuǎn)比氣相色譜法簡(jiǎn)單，且不需使用有機(jī)試 劑。尤其對(duì)于高油脂樣品（如月

4、餅）若采用堿化-排油-酸化-提取-揮干-溶 解等步驟，再上氣相色譜儀檢測(cè)，工作量大，試劑毒性也大，且結(jié)果由于處理步 驟太多而難以保證準(zhǔn)確。3.2用液相色譜法還可同時(shí)完成糖精鈉項(xiàng)目的檢測(cè)，而氣相色譜法只能做苯甲酸、山梨酸的檢測(cè)。3.3液相色譜儀所用的紫外檢測(cè)器比氣相色譜儀的氫火焰檢測(cè)器靈敏，可進(jìn)行更 低含量的檢測(cè)。如用二極管陣列檢測(cè)器，還可輔助定性，這更是氣相色譜氫火焰 檢測(cè)器不可比擬的。4選用氣相色譜儀時(shí)的注意事項(xiàng)GB/T5009.29所用的氣相色譜柱為5%DEGS + 1%磷酸固定液的60 - 80目C hromosorb W AW,。這種柱有性能穩(wěn)定、重復(fù)性好、保留時(shí)間穩(wěn)定的優(yōu)點(diǎn)， 但同時(shí)

5、也有穩(wěn)定時(shí)間較長(zhǎng)的缺點(diǎn)。該柱的適用的樣品提取溶劑為石油醚或乙醚，如果用甲醇或乙醇，則溶劑峰拖尾 效應(yīng)較大，對(duì)山梨酸的測(cè)定有影響。如用毛細(xì)管柱，能取得更好的峰形和靈敏度，但其穩(wěn)定性及特異性不如填充柱。 般可用非極性毛細(xì)管柱，0.530mm內(nèi)徑，10 - 15m長(zhǎng)度。色譜條件可能需 用程序升溫。在氣相色譜儀上的出峰次序?yàn)橄瘸錾嚼嫠?，后出苯甲酸。糖精鈉不能直接用氣相色譜進(jìn)行檢測(cè)，必須衍生化后才能汽化進(jìn)樣。5選用液相色譜儀的注意事項(xiàng)按照GB/T5009.29，流動(dòng)相應(yīng)為5 : 95的甲醇：0.02M醋酸銨溶液，但是這個(gè)比例僅是個(gè)參考值，我們?cè)诠ぷ髦袘?yīng)根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)節(jié)。為什么用甲醇溶液？甲醇有兩個(gè)作

6、用，（1）防腐，液相色譜柱最怕流動(dòng)相長(zhǎng)菌， 尤其霉菌。甲醇可使蛋白質(zhì)變性，有殺菌作用。（2）調(diào)節(jié)流動(dòng)相極性，這是最 重要的一點(diǎn)。甲醇在溶液中比例的較小變化都會(huì)使苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的保 留時(shí)間發(fā)生明顯的改變，因此可以通過(guò)改變流動(dòng)相中甲醇含量，以調(diào)節(jié)這幾個(gè)組 分的出峰和分離，以得到較理想的色譜圖。5 : 95是一個(gè)通用的比例，如減少甲醇含量，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的出峰時(shí) 間變慢，擴(kuò)散效應(yīng)增大，峰形較差，但這三組分的分離情況較好。如增加甲醇含 量，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的出峰時(shí)間提前，擴(kuò)散效應(yīng)較小，峰形尖銳，但這 三組分的分離情況可能受影響，產(chǎn)生重疊。在選擇條件時(shí)，只能通過(guò)實(shí)驗(yàn)手段， 如配制3

7、：97,4：96,5：95,6：96,7：93的流動(dòng)相，綜合考慮分離效果 和分離時(shí)間選擇最佳比例。不同柱的最適比例不同，舉例來(lái)說(shuō)，色譜科公司的液相柱最適比例為4 ：96，而 島津公司液相柱的最佳比例為7 : 93。就是同一根柱，一年前和一年后的極性也 會(huì)有變化，需調(diào)節(jié)溶液配比。為什么使用0.02M醋酸銨溶液？加入醋酸銨是為了調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度，使待測(cè)物的 峰形不致于變壞。如果單獨(dú)檢測(cè)苯甲酸和糖精鈉，加不加醋酸銨沒有什么關(guān)系， 都可以得到較好的峰形；但是檢測(cè)山梨酸時(shí)流動(dòng)相一定要加醋酸銨，否則得不到 一個(gè)完整的色譜峰，峰形呈破裂狀。醋酸銨溶液濃度不需嚴(yán)格控制，0.01M、0.02M、0.04M均可。苯甲

8、酸、山梨酸、糖精鈉在液相上的出峰次序很有特點(diǎn)。在流動(dòng)相5 : 95及以 下比例時(shí)，次序是苯甲酸、山梨酸、糖精鈉（注意一下氣相的出峰次序），逐步 增大甲醇含量，苯甲酸、山梨酸的出峰時(shí)間逐步提前，而糖精鈉是出峰時(shí)間迅速 提前，隨著甲醇比例的逐步增大（15%- 30%），原先在最后出峰的糖精鈉集 次和前面的山梨酸、山梨酸重疊，并位于最前面，其次序變?yōu)樘蔷c、苯甲酸、 山梨酸。再提高甲醇濃度，次序不變。用高甲醇比例條件（甲醇15%以上）做出的三種標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)色譜圖峰形較好，出 峰時(shí)間也較快，但做實(shí)際樣品時(shí)干擾較大；因此建議盡量使用低甲醇比例條件（甲 醇5%左右）。6苯甲酸、山梨酸超標(biāo)時(shí)的判斷苯甲酸、山梨酸

9、超標(biāo)的樣品較多，由于它們往往牽涉到一批貨物是否合格，因此 責(zé)任重大。由于該方法定量較準(zhǔn)確，因此遇到超標(biāo)樣品時(shí)應(yīng)將精力集中于定性方 面。如同時(shí)有氣相色譜儀和液相色譜儀，建議用這兩種性質(zhì)相差較大的儀器進(jìn)行對(duì) 照，如定量結(jié)果差不多，即可確認(rèn)。如只有氣相色譜儀，應(yīng)利用其在填充柱保留時(shí)間穩(wěn)定的特性，同時(shí)進(jìn)五針標(biāo)準(zhǔn)液 和五針樣品液（注：峰面積應(yīng)差不多，否則需對(duì)一方按比例稀釋），如標(biāo)準(zhǔn)和樣 品液的保留時(shí)間相差時(shí)間超過(guò)1秒，可認(rèn)為不是。（如進(jìn)針的技術(shù)不過(guò)關(guān)，請(qǐng) 不要做此實(shí)驗(yàn)）如用液相色譜儀，當(dāng)檢測(cè)器為二極管陣列檢測(cè)器時(shí)，根據(jù)保留時(shí)間和紫外吸收?qǐng)D 結(jié)合定性，當(dāng)只有紫外檢測(cè)器時(shí)，改檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，230nm

10、，250nm， 重復(fù)進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)和樣品液，由標(biāo)準(zhǔn)和樣品在不同波長(zhǎng)的峰高比值看是否吻合。如有微生物檢測(cè)手段，可加樣品于有菌培養(yǎng)基中，觀察有無(wú)抑菌現(xiàn)象，如無(wú)抑菌 現(xiàn)象則無(wú)防腐劑。不是很推薦用雙柱法，因?yàn)橛袝r(shí)柱極性相差不大，反而會(huì)影響最終判斷。7糖精鈉超標(biāo)時(shí)的判斷當(dāng)檢測(cè)糖精鈉超標(biāo)時(shí)，除了采用二極管陣列檢測(cè)器或波長(zhǎng)驗(yàn)證，還可以利用糖精 鈉的熒光特性，用熒光檢測(cè)器進(jìn)行驗(yàn)證。熒光條件是激發(fā)波長(zhǎng)為277nm，熒光 波長(zhǎng)為410nm。只有當(dāng)用熒光檢測(cè)器和用紫外檢測(cè)器做出的定量結(jié)果相差不多， 才可以判斷為是。還有一個(gè)簡(jiǎn)單粗糙、卻也行之有效的驗(yàn)證方法，即感官法。糖精鈉是一種甜味劑， 用舌頭可以感覺到它的甜味，如果含量超

11、標(biāo)，一定能嘗出來(lái)。8標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制貯存問(wèn)題 苯甲酸、山梨酸、糖精鈉的標(biāo)準(zhǔn)溶液如用水、乙醇作基體，一般幾個(gè)月后會(huì)嚴(yán)重 降解，。如用甲醇溶解再放于冰箱冷凍層，可保持穩(wěn)定一兩年。因此推薦用甲醇 作溶劑。在配制標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)，初學(xué)者常犯的錯(cuò)誤多為用甲醇溶解苯甲酸鈉，用水溶解苯甲 酸，晃了半天才發(fā)現(xiàn)怎么也不沒溶解。應(yīng)該用弱堿性水溶解苯甲酸鈉、山梨酸鉀， 用甲醇溶解苯甲酸、山梨酸。9苯甲酸、山梨酸的應(yīng)用范圍首先應(yīng)注意到，并不是所有食品都需要加入防腐劑，只有那些富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，且 需要長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣的才有這樣的需要，否則對(duì)廠家來(lái)說(shuō)會(huì)增加不必要的成 本。醬油、醬料、咸菜、濃縮果汁等由于開封后不可能短期內(nèi)吃完，月餅

12、等需在貨架 上擺放，如不加防腐劑很快會(huì)發(fā)霉變質(zhì)，有添加防腐劑的必要。而利樂(lè)裝或易拉 罐裝的飲料由于很快可以食用完畢，即在細(xì)菌大量繁殖前己被消化了，因而沒有 添加的必要。苯甲酸、山梨酸如果要起到防腐的作用，含量就不能太低。如果我們檢測(cè)樣品時(shí) 只有幾個(gè)ppm的濃度，有可能是從原料中帶來(lái)的或由其它添加劑轉(zhuǎn)化來(lái)的，而 不是廠家出于防腐目的加入的。苯甲酸、山梨酸也只是防腐劑中的兩種。并不是所有需要加入防腐劑的食品都會(huì) 添加苯甲酸、山梨酸，有可能使用防霉劑或其它種類的防腐劑，或自行規(guī)定需冷 藏（如某些月餅）。因此有些食品檢測(cè)不出也屬正常。另外，我們應(yīng)該比較清楚地理解苯甲酸與苯甲酸鈉、山梨酸與山梨酸鉀之間的

13、關(guān) 系。在食品中添加防腐劑通常以苯甲酸鈉、山梨酸鉀形式加入，它們不易汽化， 易溶于水，但不溶于甲醇等有機(jī)試劑；而苯甲酸、山梨酸易汽化，易溶于有機(jī)試 劑，但是幾乎不溶于水。檢測(cè)時(shí)要注意有機(jī)酸及其鹽類之間的轉(zhuǎn)換。GB/T16345-1996刖 言本標(biāo)準(zhǔn)非等效采用國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是提示的附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部衛(wèi)生監(jiān)督司提出。本標(biāo)準(zhǔn)負(fù)責(zé)起草單位:衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所負(fù)責(zé)起草;參加起草單位: 北京市衛(wèi)生防疫站，中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院環(huán)境衛(wèi)生監(jiān)測(cè)所。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:楊祖英、張平偉、孫淳、姚孝元、鄭蘭波。本標(biāo)準(zhǔn)由衛(wèi)生部委托技術(shù)歸口單位衛(wèi)生部食品衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)所負(fù)責(zé)解釋。中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)飲料中乙酰

14、磺胺酸鉀(安賽蜜)的測(cè)定GB/T 16345-1996Deternination of Acesulfame K in Beverage1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了飲料中乙酰磺胺酸鉀的測(cè)定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于汽水、可樂(lè)型飲料、果汁、果茶等食品中乙?；前匪徕浀臏y(cè)定。也適用于糖精鈉的測(cè)定。本法取樣量為2.5g時(shí)，最低檢出限為乙?；前?酸鉀、糖精鈉各50mg/kg(L)。2原理樣品中乙?；前匪徕洝⑻蔷c經(jīng)高效液相反相柱C18分離后，以保留時(shí)間 定性，峰高或峰面積定量。3試劑有機(jī)溶劑需重蒸3.1甲醇:分析純3.2乙腈:分析純3.3 0.02mol/L硫酸銨溶液:稱取硫酸銨2.642g，加水溶解至1000mL。3.

15、4硫酸溶液:10%。3.5中性氧化鋁層析用，100 200目。3.6乙?；前匪徕?，糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：精密稱取乙酰磺胺酸鉀、糖精鈉各0.1000g ,用移動(dòng)相溶解后移入100mL容量瓶中，并用移動(dòng)相稀釋至刻度，即含乙?；前?酸鉀、糖精鈉各1mg/mL的溶液。3.7乙酰磺胺酸鉀、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液:吸取乙酰磺胺酸鉀、糖精鈉標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液2mL于50mL容量瓶，加移動(dòng)相至刻然后分別吸取此液1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于10mL容量瓶中，各加移動(dòng)相至刻度，即得各含乙酰磺胺酸鉀，糖精鈉0.004mg/mL、0.008mg/mL、0.012mg/mL、0.016mg/mL、0.020mg/mL 的混合標(biāo)準(zhǔn)液系 列。3.3 移動(dòng)相:0.02M 硫酸銨(740 800) + 甲醇(170 800) + 甲醇(170 150) + 乙 腈(90 50)4儀器 4.1高效液相色譜儀4.2超聲清洗儀（溶劑脫氣用）4.3離心機(jī)4.4抽濾瓶4.5 G3耐酸漏斗4.6微