糖的呈色反應(yīng)和還原糖的檢驗(yàn)

1、 2一、試驗(yàn)?zāi)康脑囼?yàn)1糖的呈色反響和復(fù)原糖的檢驗(yàn)學(xué)習(xí)鑒定糖類及區(qū)分酮糖和醛糖的方法。了解鑒定復(fù)原糖的方法及其原理。二、試驗(yàn)原理醛。有色物質(zhì)，反響式如下：酚如 有色物質(zhì)，反響式如下： 一萘酚、甲基苯二酚、間苯二酚和間苯三酚等，有時(shí)也用芳香胺、膽酸、某些吲哚衍生物和一些嘧啶類化合物等。有人認(rèn)為，用濃硫酸作為脫水劑時(shí)，形成有顏色的產(chǎn)物與酚核的磺化有關(guān)，見(jiàn)如下反響式；一糖的呈色反響Molish 反響(萘酚反響) 一萘酚作用，形成紅紫色復(fù)合物。在糖溶液與濃硫酸兩液面間消滅紫環(huán)，因此又稱紫環(huán)反響。自由存在和結(jié)合存在的糖均呈陽(yáng)性反響。此外，各種糠醛衍生物、葡萄糖醛酸、丙酮、甲酸、乳酸等皆呈顏色近似的陽(yáng)性反響

2、。因此，陰性反響證明沒(méi)有糖類物質(zhì)的存在；而陽(yáng)性反響，則說(shuō)明有糖存在的可能性，需要進(jìn)一步通過(guò)其他糖的定性試驗(yàn)才能確定有糖的存在。蒽酮反響(10 9，10 一二氫蒽)反響生成藍(lán)一綠色復(fù)合物。Seliwanoff 反響(間苯二酚反響)該反響是鑒定酮糖的特別反響。在酸作用下，己酮糖脫水生成羥甲基糠醛。后者與間苯二酚結(jié)合生成鮮紅色的化合物，反響快速，僅需 2030s。在同樣條件下，醛糖形成羥甲基糠醛較慢。只有糖濃度較高時(shí)或需要較長(zhǎng)時(shí)間的煮沸，才給出微弱的陽(yáng)性反響。蔗糖被鹽酸水解生成的果糖也能給出陽(yáng)性反響。Bial 反響(甲基間苯二酚反響)戊糖與濃鹽酸加熱形成糠醛，在有Fe3+存在下，它與甲基間苯二酚(地

3、衣酚)縮合，形成深藍(lán)色的沉淀物。此沉淀物溶于正丁醇。己糖也能發(fā)生反響，但產(chǎn)生灰綠色甚至棕色的沉淀物。二復(fù)原糖的鑒定含有自由醛基(一 CHO)或酮基(C=O)的單糖和二糖為復(fù)原糖。在堿性溶液中，復(fù)原糖能將金屬離子(銅、鉍、汞、銀等)復(fù)原，糖本身被氧化成酸類化合物，此性質(zhì)常用于檢驗(yàn)糖的復(fù)原性，并且常成為測(cè)定復(fù)原糖含量的各種方法的依據(jù)。Fehling 反響費(fèi)林試劑是含有硫酸銅與酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。硫酸銅與堿溶液混合加熱， 則生成黑色的氧化銅沉淀。假設(shè)同時(shí)有復(fù)原糖存在，則產(chǎn)生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉 淀。上述反響可用以下方程式表示：在堿性條件下，糖不僅發(fā)生烯醇化、異構(gòu)化等作用。也能發(fā)生糖分子的分

4、解、氧化、復(fù)原或 復(fù)原作用來(lái)寫(xiě)出反響平衡式是不行能的。為了防止銅離子和堿反響生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀，F(xiàn)ehling 試劑中參加酒石酸鉀鈉，它與 Cu2+形成的酒石酸鉀鈉絡(luò)合銅離子是可溶性的絡(luò)離子，該反響是可逆的。平衡。Benedict反響B(tài)enedict 試劑是 Fehling 試劑的改進(jìn)。它利用檸檬酸作為 Cu2+的絡(luò)合劑，其堿性比Fehling 試劑弱，靈敏度高，干擾因素少，因而在實(shí)際應(yīng)用中有更多的優(yōu)點(diǎn)。 3Barfoed反響該反響的特點(diǎn)是在酸性條件下進(jìn)展復(fù)原作用。在酸性溶液中，單糖和復(fù)原二糖的復(fù)原3min Cu2+20min。所以，該反響可 10 min 內(nèi)水解而發(fā)生反響。復(fù)原二糖

5、濃度過(guò)高時(shí)，也會(huì)很快呈現(xiàn)陽(yáng)性反響，假設(shè)樣品中含有少量氯化鈉也會(huì)干擾此反響。三、試驗(yàn)試劑和材料儀器測(cè)試糖液2阿拉伯糖，葡萄糖，果糖，麥芽糖，蔗糖，12 種未知糖液。試劑Molish 氏試劑稱取萘酚2 克，溶于9乙醇中并定容到100m于棕色瓶中。蒽酮(Anthrone)試劑溶解0.2g蒽酮于100mL(A.1.8，含量95%中。當(dāng)日配制、使用。Fehling氏試劑4試劑A34.5g 硫酸銅(CuSO 5H20)500mI。蒸餾水中。4試劑B125g 137g 500mL 蒸餾水中，儲(chǔ)于帶橡皮塞瓶中。臨用時(shí)，將試劑A 和B 等量混合。Benedict 氏試劑溶解85g(Na3C6HllH20及50g

6、無(wú)水碳酸鈉于400m8.5g硫酸銅于 50mL。熱水中。將硫酸銅溶液緩緩傾人檸檬酸鈉一碳酸鈉溶液中，邊加邊攪，如有沉淀，可過(guò)濾本試劑可長(zhǎng)期使用。如放置過(guò)久，消滅沉淀可取用其上清液。Bial 氏試劑1.5g 地衣酚(orcin01)500mL2030 10三氯化鐵溶液。Seliwanoff氏試劑溶解50mg(resorcin01于100rn=1:2V)12，否則，它將導(dǎo)致糖形成糠醛或其衍生物。濃硫酸。器材試管，試管架，煤氣燈和沸水浴等。四、試驗(yàn)方法一.糖的呈色反響Molish反響8 支已標(biāo)號(hào)的試管，分別參加各種測(cè)試糖液lmL(15 滴)Molish 試劑 2滴，搖勻。逐一將試管傾斜，分別沿管壁漸

7、漸參加濃硫酸 l mL，然后，留神豎直試管，使溫?zé)釒追昼姟Ｓ涗浉鞴芟麥绲念伾?，說(shuō)明緣由，檢定未知糖液。蒽酮反響取 8 lmL 蒽酮溶液，再將測(cè)試糖液分別滴加到各試管內(nèi)，混勻，觀看顏色變化，鑒定未知糖液。Seliwanoff反響8 支，編號(hào)，各加人Seliwanoff ImL。再依次分別參加測(cè)試糖液各4 滴，混勻，同時(shí)放人沸水浴中，比較各管顏色變化及消滅顏色的先后挨次，分析說(shuō)明緣由。留意 蔗糖的反響。bial反響2 1ml Bial 試劑的試管中,沸水浴中加熱,觀看顏色變化.如遇到未知糖呈色不明顯,3 倍體積水稀釋,1ml 戊醇,搖動(dòng),醇液呈藍(lán)色,即為陽(yáng)性反響。二復(fù)原糖的鑒定Fehling反響8

8、 支試管，各加Fehling A B lmL4 滴，沸23min，取出冷卻，觀看沉淀和顏色的變化。Benedict反響8 支試管中先各參加Benedict 2ml,4 滴,2-3min,冷卻后,觀看顏色變化.barfoed反響2-3 1ml Barfoed 試劑的試管中,3min,20min 以上,比較各管顏色變化及紅色消滅的先后挨次.五、留意事項(xiàng)Molisch 反響格外靈敏，000100001蔗糖即能呈現(xiàn)陽(yáng)性反響。因此， 紅色及褐色而不呈紫色。需稀釋糖溶液后重做。果糖在 Seliwanoff。試劑中反響格外快速，呈鮮紅色，而葡萄糖所需時(shí)間長(zhǎng)，且只能產(chǎn)Seliwanoff 生成綠色到藍(lán)色產(chǎn)物。酮根本身并沒(méi)有復(fù)原性，只有在變?yōu)橄┐际胶?，才顯示復(fù)原作用。糖的復(fù)原作用生成氧化亞銅沉淀的顏色打算于顆粒的大小，Cu2O 顆粒的大小又打算于反響速度。反響速度快時(shí)，生成的Cu2O 顆粒較小，呈黃綠色；反響慢時(shí)，生成的Cu2O 顆粒較大，呈紅色。有保護(hù)膠體存在時(shí)，常生成黃色沉淀。實(shí)際生成的沉淀含有大小不同的Cu2O 顆粒，因而每次觀看到顏色可能略有不同。溶液中復(fù)原糖的濃度可以從生成沉淀的多少來(lái)估量，而不能依據(jù)沉淀的顏色來(lái)區(qū)分。Barfoed 反響產(chǎn)生的Cu2O 色的消滅，它與一般復(fù)原性試驗(yàn)不一樣，觀看不到反響液由藍(lán)色變綠變黃或變紅的過(guò)程。六