雞馬立克病疫苗研究進展

1、雞馬立克病疫苗研究進展雞馬立克?。∕areksdisease,MD）是雞的一種淋巴組織增生性疾病。該病的致病因子為馬立克病病毒（Mareksdiseasevirus,MDV），屬于皰疹病毒屬。世界動物衛(wèi)生組織（OIE）已將MD歸為動物B類傳染性疾病。該病是第1個能用疫苗預防的腫瘤性疾病，因此受到了醫(yī)學界、獸醫(yī)學界、病毒學界的廣泛關(guān)注。到目前為止,還沒有有效的方法來治療MD患雞，仍通過疫苗預防控制該病的發(fā)生，所以對MD疫苗的研究一直是國內(nèi)外眾多學者研究的熱點。1常規(guī)MD疫苗的類型MDV有、型，3種血清型，利用這3種血清型制成疫苗，3種血清型疫苗即可單獨使用，也可混合使用。1.1血清型疫苗這類疫苗

2、是用MDV通過細胞培養(yǎng)連續(xù)傳代而致弱的,疫苗所含病毒是細胞結(jié)合性的,只有保證細胞的完整性,疫苗才具有免疫原性。最早的I型疫苗是英國的學者Churchill等研制出的HPRS-16/att疫苗，隨后荷蘭學者Rispens等將中等毒力的MDV株經(jīng)鴨胚成纖維細胞（DEF）傳代后獲得無毒株，并研制成的CVI988疫苗，廣泛應用于荷蘭和其他國家。因為該毒株有擴散的特性并略微存在致病性，1990年以后英國才準許應用該疫苗。同期由CVI988衍生的疫苗稱“克隆C”，據(jù)報道可有效抵抗超強毒MDV的感染，該疫苗只在短時間內(nèi)在美國上市和應用，不久在該國退出應用。“814”株是我國哈爾濱獸醫(yī)研究所于20世紀80年代

3、研制的另一種疫苗，它可用代次廣，抗母源抗體，性能穩(wěn)定且安全。目前，常將弱化I型強毒株和DNA重組技術(shù)結(jié)合起來研究新型疫苗。1.2血清型疫苗系一類自然篩選的弱毒疫苗，血清型MDV都是天然非致病性的，廣泛分布于雞群中，這種疫苗毒可通過接觸傳播，感染后第5周產(chǎn)生很強的免疫力。1988年江蘇農(nóng)學院的黃仕霞等分離出的型Z4弱毒株是國內(nèi)惟一的型MD疫苗株5。這一血清型具有代表性的是SB-1株，制成細胞結(jié)合性疫苗，單獨使用就能產(chǎn)生廣泛的保護力，但對超強毒株抵抗力不太強，可與HVT疫苗合用，充分抵抗超強毒株。美國和其他一些國家有商品SB-1疫苗出售，英國沒有，除SB-1外，目前應用的血清型疫苗還有S-24、3

4、01B/12。1.3血清型疫此類疫苗是火雞皰疹病毒(HVT)疫苗,其代表毒株Fc-126是由美國學者WritterRL博士從火雞群中分離出來的1株無毒力品系，對雞和火雞均不致病,在雞群內(nèi)不傳播；接種這種疫苗的雞體，細胞中的HVT能使機體產(chǎn)生抗體,但不能中和MDV。該疫苗具有干擾作用，它先于MDV侵入雞體細胞,能誘發(fā)阻止腫瘤形成的抗體，防止腫瘤的形成和發(fā)展。這種疫苗廣泛應用，可有效抵抗強毒。既有細胞結(jié)合性活疫苗，又有易于儲存、運輸?shù)膬龈擅?，目前正在使用的疫苗有：HVTFc-126和PB-THV1C4。1.4二價苗和三價（多價）苗自20世紀80年代開始，由于MDV毒力出現(xiàn)了超強毒，世界某些地區(qū)單價

5、苗免疫失敗屢屢發(fā)生，因此有些學者提出多價苗戰(zhàn)略，先后研制出二價苗和三價苗。WitterRL報道了3種血清型疫苗單獨使用和合用時抵抗強毒和超強毒MDV株感染的試驗比較，證實了多價苗的效力。在美國主要使用型和型組成的疫苗，即SB-1或301B/12+HVTFc-126，西歐則使用I型和型組成的疫苗CVI988+HVTFc-126；我國使用的二價苗有814+HVTFc-126、SB-1+HVTFc-126及Z4+HVTFc-126。目前，我國使用的三價苗主要由814+SB-1+HVTFc-126組成。利用幾種血清型病毒協(xié)同保護作用，使MD造成的損失得以降低，但多價苗只能用液氮保存和運輸，成本很高。2

6、MD基因工程疫苗隨著生物學技術(shù)的發(fā)展及其在疫苗研究領域的廣泛應用，科學工作者努力研究比天然弱毒組成的常規(guī)疫苗免疫效果好，成本低，使用方便的抗MD基因工程疫苗。2.1禽痘病毒為載體的MDV重組疫苗禽痘病毒（FPV）是目前分子量最大的動物病毒，全長約300kb，是極具開發(fā)前景的載體系統(tǒng)。科研工作者研究發(fā)現(xiàn)MDV的糖蛋白gB具有良好的免疫原性，Chen及Ross等相繼克隆并序列分析了MDVgB基因，發(fā)現(xiàn)gB編碼的100ku的糖蛋白復合物可以激發(fā)抗MDV免疫保護反應，NazarianK等已建立表達gB的重組FPV,GA株gB蛋白具有很好的免疫保護作用，該重組病毒對MDV、vvMDV(超強MDV)、RB

7、IB感染發(fā)病具有良好的免疫保護作用。YanagidaN等利用隨機克隆的PFV的EcoR片段作為體內(nèi)重組的同源DNA序列,分別在痘苗病毒7500bp和103bp人工合成的Ps啟動子控制下表達了MDVgB蛋白和pp38蛋白，并通過免疫熒光檢測篩選出重組PFV。gB蛋白重組PFV，接種雛雞可使雞獲得抵抗強毒攻擊的免疫力，而接種pp38蛋白重組病毒無保護作用。在MDV疫苗研究中，除gB糖蛋白還加強MDV其他糖蛋白的研究,尋找更多的疫苗候選分子。陳志琳等首次以FPV中國株為載體，構(gòu)建表達MDVgI基因的重組病毒，為研制gI-FPV疫苗奠定了基礎，也為進一步研制抗MD多價組合基因工程疫苗提供了有效組分。痘

8、病毒重組表達一些結(jié)構(gòu)性和非結(jié)構(gòu)性MDV1抗原已建立，但沒能產(chǎn)生理想的保護，包括gC、gD、UL47、UL48和pp38。接種MDV1或SB-1，能誘導MHC-I限制性的細胞免疫反應，MDV1的gD或gC沒有保護作用。但用FPV重組表達的MDV1gC，MDV1gB和MDV1gD抗原混合接種比起單獨gB接種，產(chǎn)生加強保護作用。LeeLF等利用rFPVs表達MDV1的gB1,gE,gI,gH和UL32，當用rFPV/gB1gIgEUL32+HVT免疫雞時保護率達到94%。2.2HVT為載體的MDV重組疫苗HVT基因組可容納25kb的外源基因,可以插入一些外源基因。用HVT重組病毒表達MDV抗原的優(yōu)點

9、是二者有交叉抗原反應，從而可以用大量的HVT蛋白來誘導免疫反應，HVT在雛雞體內(nèi)維持時間也長，比起FPV來能夠長時間的表達MDV的抗原。RossLJN等14使用HVT做載體，在TK基因區(qū)插入gB構(gòu)建基因工程苗,雖然TK基因的破壞使HVT在細胞內(nèi)繁殖能力降低，但這種低效價重組病毒比其野毒株的免疫效果好。重組HVT疫苗的一個重要特點是可以插入多個外源基因，具有多重保護的潛力，人們對此非常感興趣制成聯(lián)苗使用,以預防MD和其他禽病。MorganRW等15將雞新城疫病毒(NDV)的融合蛋白(F)基因和血凝素神經(jīng)氨酸苷酶(HN)基因分別插入HVT非必需基因Us10，構(gòu)建了NDVF-HVT和NDVHN-HVT兩種重組體，它們能在細胞培養(yǎng)物上和雞體內(nèi)穩(wěn)定而充足的感染，NDVF-HVT重組體接種的雞可同時抵抗NDV和MDV的雙重攻擊，由此可見，利用HVT為載體結(jié)構(gòu)建多聯(lián)苗是實際可行的,關(guān)鍵在于插入合適的外源基因。這個重組方法的成功主要依賴于鑒定出了HVT基因的適宜位點，而后插入不削弱雞體中病毒復制的外源基因，從而產(chǎn)生了理想的表達。迄今為止發(fā)現(xiàn)的最適合的插入點是Us10基因片段,它與不知功效的HSVUs10基因同源。ReddySK等16又構(gòu)建了表達NDV的F和HN抗原,MDV1的gC和gB抗原的HVT重組疫苗,輸卵管免疫接種結(jié)果