細(xì)胞外囊泡設(shè)計(jì)研究新進(jìn)展

1、 專(zhuān)業(yè)資料整理分享 .625/6專(zhuān)業(yè)資料整理分享 細(xì)胞外囊泡研究新進(jìn)展王琎1,陳建英2引用本文：王琎,陳建英. 細(xì)胞外囊泡研究新進(jìn)展J.中國(guó)組織工程研究,2017,21:621-626.DOI:7.04.022ORCID:0000-0003-4494-3898文章快速閱讀：細(xì)胞外囊泡的生物學(xué)意義：細(xì)胞外囊泡的生物學(xué)意義：綜述分析近年相關(guān)研究進(jìn)展文獻(xiàn)檢索細(xì)胞外囊泡概念及一般生物學(xué)特性分離提取及鑒定方法綜述分析近年相關(guān)研究進(jìn)展文獻(xiàn)檢索細(xì)胞外囊泡概念及一般生物學(xué)特性分離提取及鑒定方法在生物醫(yī)學(xué)研究中的意義在生物醫(yī)學(xué)研究中的意義文題釋義：細(xì)胞外囊泡：是由脂質(zhì)雙分子層包繞形成的球狀膜性囊泡,是細(xì)胞自發(fā)或

2、在一定條件下釋放出的一種亞細(xì)胞成份,實(shí)質(zhì)上是一組納米級(jí)顆粒,近年來(lái)學(xué)界研究的熱點(diǎn),包括外泌體、膜微粒及微囊泡等。自噬：這是發(fā)生在細(xì)胞代謝過(guò)程以清除代謝廢物或維持細(xì)胞器更新的一種現(xiàn)象,其過(guò)程如下：首先細(xì)胞的一些成分將部分細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞內(nèi)需降解的細(xì)胞器、蛋白質(zhì)等成分包裹起來(lái)形成自噬體,接著自噬體與溶酶體融合形成自噬溶酶體,降解其所包裹的內(nèi)容物,目前研究發(fā)現(xiàn)自噬在機(jī)體的生理和病理過(guò)程中均能見(jiàn)到。摘要背景：細(xì)胞外囊泡是細(xì)胞旁分泌產(chǎn)生的一種亞細(xì)胞成分,近年來(lái)學(xué)界研究的熱點(diǎn)外泌體、膜微粒及微囊泡等均在其范疇。目的：就細(xì)胞外囊泡定義分類(lèi)、形成釋放過(guò)程、分離鑒定方法、生物學(xué)意義及其在臨床疾病和生物醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用

3、等方面的最新進(jìn)展作一綜述。方法：由第一作者在PubMed、CNKI等數(shù)據(jù)庫(kù)中進(jìn)行文獻(xiàn)檢索,關(guān)鍵詞為Extracellular Vesicles,exosome,microvesicle,microparticle及細(xì)胞外囊泡、外泌體、微囊泡、膜微粒。檢索時(shí)間為20XX7月至2016年8月。結(jié)果與結(jié)論：共納入44篇文獻(xiàn)。幾乎所有的細(xì)胞都能產(chǎn)生細(xì)胞外囊泡,其中含有脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、核酸等多種母細(xì)胞來(lái)源的生物活性成份,這些信息物質(zhì)包裹在囊泡中或攜帶于膜上。他們參與炎癥免疫反應(yīng)、細(xì)胞間信號(hào)通訊、細(xì)胞存活與凋亡、血管新生、血栓形成、自噬等,在生理狀態(tài)維持及疾病的進(jìn)程中發(fā)揮重要作用。特定類(lèi)型的細(xì)胞外囊泡有望成

4、為輔助疾病診斷及預(yù)后判斷的新分子標(biāo)記物；在抗腫瘤治療、再生醫(yī)學(xué)、免疫調(diào)節(jié)等方面也有著廣闊前景；能為干細(xì)胞治療非細(xì)胞途徑開(kāi)辟新路徑；有可能作為疫苗或藥物的天然載體為臨床治療帶來(lái)福音。細(xì)胞外囊泡分泌的分子機(jī)制及其作用于靶細(xì)胞引起生物學(xué)功能變化的具體成分及其信號(hào)通路尚在研究中,以研究miRNA者為主,近年來(lái)lncRNA、circRNA開(kāi)始成為新星逐漸走進(jìn)學(xué)者視野。關(guān)鍵詞：組織構(gòu)建；組織工程；細(xì)胞外囊泡；外泌體；組織再生；自噬；藥物載體；非編碼RNA；免疫炎癥；國(guó)家自然科學(xué)基金主題詞：組織工程；外泌體；再生；自噬；藥物載體基金資助：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目Research progress of ex

5、tracellular vesiclesWang Jin1, Chen Jian-ying2 1GraduateSchool of GuangdongMedicalUniversity, Zhanjiang 524001, Guangdong Province, China; 2Third Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Guangdong Medical University, 王琎王琎,女,1989年生,漢族,XX省人,碩士。 通訊作者：陳建英,主任醫(yī)師,碩士生導(dǎo)師,XX醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院心內(nèi)三區(qū),XX省XX市524001 中

6、圖分類(lèi)號(hào):R394.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):2095-434404-00621-06稿件接受：2016-11-26Wang Jin, Master, Graduate School of Guangdong Medical University, Zhanjiang 524001, Guangdong ProvinceCorresponding author: Chen Jian-ying, Chief physician, Masters supervisor, Third Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Guangdong

7、 Medical University, Zhanjiang 524001, Guangdong Province, ChinaBACKGROUND: Extracellular vesicles are a kind of subcellular component produced by paracinemechanism including exosomes, microparticles and microvesicles, which have become hotspots in recent years.OBJECTIVE: To review the research stat

8、us and progress of EVs, especially in the studies about definition, secreting mechanism, isolation and identification, biological characteristics and functions in diseases as well as in biomedical research.METHODS: The first author retrieved PubMed and CNKI databases for relative articles published

9、from July 2006 to August 2016. The keywords were extracellular vesicles, exosome, microvesicle, microparticle in English and Chinese, respectively.Subject headings: Tissue Engineering; Exosomes; Regeneration; Autophage; Drug CarriersFunding: the National Natural Science Foundation of China, No. 8137

10、0242Cite this article: Wang J, Chen JY.Research progress of extracellular vesicles. Zhongguo Zuzhi Gongcheng Yanjiu. 2017;21:621-626.0引言 Introduction細(xì)胞外囊泡是細(xì)胞旁分泌產(chǎn)生的一種亞細(xì)胞成分,實(shí)質(zhì)上是一組納米級(jí)顆粒,近年來(lái)學(xué)界研究的熱點(diǎn)外泌體、膜微粒、微囊泡等均在其范疇。Chargaff等1在1946年首次發(fā)現(xiàn)血漿中含有一種能加速血栓形成的可沉淀的物質(zhì),他們稱(chēng)之為因子。Wolf等2在1967年報(bào)道活化血小板能釋放富含磷脂的細(xì)胞膜來(lái)源的微粒,并具有

11、促凝血作用的,將其命名為血小板塵埃。隨后的相關(guān)研究多是用術(shù)語(yǔ)膜微粒來(lái)描述這類(lèi)物質(zhì)3。Johnstone等4-5在1983年觀察綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞變?yōu)槌墒旒t細(xì)胞晚期過(guò)程中發(fā)現(xiàn),紅細(xì)胞能將代謝終產(chǎn)物通過(guò)一些小囊泡釋放到細(xì)胞外,并于1987年命名這類(lèi)小囊泡為外泌體。起初大家普遍認(rèn)為這些微粒是垃圾桶,是為清除細(xì)胞代謝廢物、是提示細(xì)胞死亡的信號(hào)分子亦或者是某些特有器官的細(xì)胞器結(jié)構(gòu),到了20世紀(jì)90年代末,細(xì)胞外囊泡的生物學(xué)功能漸漸受到研究者們重視6 。學(xué)者們意識(shí)到這些細(xì)胞外囊泡攜帶有膽固醇、鞘磷脂、磷脂酰絲氨酸、神經(jīng)節(jié)苷細(xì)胞外囊泡是一組異質(zhì)性較大的群體,參與機(jī)體多種反應(yīng),經(jīng)歷了從無(wú)人問(wèn)津到趨之若鶩的戲劇性變

12、化,有望成為新型分子標(biāo)記物用于疾病診斷、判斷評(píng)估疾病預(yù)后,有望作為新藥研發(fā)對(duì)象11。但由于描述的術(shù)語(yǔ)不統(tǒng)一,相關(guān)研究結(jié)果存在混淆,為了方便眾多研究者學(xué)習(xí),文章就細(xì)胞外囊泡定義分類(lèi)、形成釋放過(guò)程及機(jī)制、分離鑒定方法、生物學(xué)意義及其在臨床疾病和生物醫(yī)學(xué)研究中應(yīng)用等方面的最新進(jìn)展作一綜述。1 資料和方法 Data and methods1.1 資料來(lái)源由第一作者應(yīng)用計(jì)算機(jī)檢索CNKI 數(shù)據(jù)庫(kù)和PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)相關(guān)文獻(xiàn)。檢索時(shí)間范圍：20XX7月至2016年8月。中文檢索詞為：細(xì)胞外囊泡、外泌體、微囊泡、膜微粒；英文檢索詞為Extracellular Vesicles,exosome,microve

13、sicle,microparticle。1.2入選標(biāo)準(zhǔn)：納入標(biāo)準(zhǔn)：論點(diǎn)、論據(jù)可靠的細(xì)胞外囊泡研究。同一領(lǐng)域的細(xì)胞外囊泡研究文獻(xiàn)選擇近期發(fā)表或權(quán)威、專(zhuān)業(yè)雜志的文獻(xiàn)。1.3文獻(xiàn)質(zhì)量評(píng)估根據(jù)納入標(biāo)準(zhǔn),作者先閱讀經(jīng)相關(guān)關(guān)鍵詞篩選出的文獻(xiàn)標(biāo)題和摘要進(jìn)行初步篩選,排除與研究目的不符或重復(fù)性文章,選取英文文獻(xiàn)113篇,中文文獻(xiàn)14篇,查閱全文。持嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)態(tài)度,盡量查詢(xún)引用原始文獻(xiàn)資料,按照納入標(biāo)準(zhǔn),最后選擇44篇作為引用文獻(xiàn)進(jìn)行寫(xiě)作。對(duì)對(duì)CNKI、PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)中2006至2016年的文獻(xiàn)進(jìn)行計(jì)算機(jī)檢索將共44篇文獻(xiàn)納入分析全體作者共同篩選圖1 文獻(xiàn)檢索流程2 結(jié)果 Results2.2細(xì)胞外囊泡形成、

14、釋放機(jī)制及過(guò)程細(xì)胞外囊泡主要存在于細(xì)胞生存的微環(huán)境中,如細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液等14。幾乎所有的細(xì)胞都可自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生和釋放細(xì)胞外囊泡,如上皮細(xì)胞、未成熟樹(shù)突狀細(xì)胞等會(huì)自發(fā)的產(chǎn)生和釋放細(xì)胞外囊泡15。刺激條件主要包括細(xì)圖2圖2 細(xì)胞外囊泡的分類(lèi)圖注：細(xì)胞外囊泡據(jù)分泌方式不同分3類(lèi),一種是多泡小體脫離溶酶體途徑與母細(xì)胞胞膜特定部位融合釋放出外泌體；一種是通過(guò)出芽的形式釋放出膜微粒；還有一種就是釋放出凋亡小體15。胞活化、氧化應(yīng)激、細(xì)胞癌性轉(zhuǎn)化、放射損傷、細(xì)胞死亡和凋亡等16,如骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)低氧或低營(yíng)養(yǎng)誘導(dǎo)后會(huì)分泌釋放細(xì)胞外囊泡17。微囊泡：分子直徑100-1000 nm,也有

15、文獻(xiàn)稱(chēng)之為脫落囊泡或Ectosomes。形成過(guò)程相對(duì)簡(jiǎn)單,是直接通過(guò)出芽方式從母細(xì)胞膜表面脫落產(chǎn)生,大小不均一,高表達(dá)磷脂酰絲氨酸,沒(méi)有特定的表面分子標(biāo)記物,但和外泌體一樣表達(dá)母細(xì)胞來(lái)源的表面標(biāo)記物22。如EMV表達(dá)CD31,PMV表達(dá)CD42b,白細(xì)胞來(lái)源的表達(dá)CD45,網(wǎng)織紅細(xì)胞來(lái)源的表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體分子,抗原呈遞細(xì)胞來(lái)源的富含MHC-,。微囊泡中也含有如金屬蛋白酶等外泌體中不包含的一些物質(zhì)。凋亡小體：是細(xì)胞程序性死亡或凋亡晚期釋放的微粒,文章不贅述,這類(lèi)囊泡顆粒較大,分子直徑為500-4000 nm,具有Annexin V高親和力,富含死細(xì)胞碎片的濃縮DNA,能將這些DNA運(yùn)載入巨噬細(xì)胞

16、細(xì)胞核中。2.3細(xì)胞外囊泡分離提取和鑒定方法2.4細(xì)胞外囊泡生物學(xué)功能細(xì)胞外囊泡所攜帶信息物質(zhì)目前Vesiclepedia中記錄了來(lái)自33種不同種類(lèi)的538份研究統(tǒng)計(jì)分析出細(xì)胞外囊泡中含有92 897種蛋白,27 642 種mRNAs,4934種 miRNAs和584種脂質(zhì)等24。蛋白質(zhì)譜分析發(fā)現(xiàn)這些蛋白包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子、MAPK通路信號(hào)分子、RHO通路信號(hào)分子、Tie-2/TEK及細(xì)胞黏附分子等。這些蛋白質(zhì)分子部分是酶類(lèi),酶催化具有高效性,能夠放大其效應(yīng),相比RNA,進(jìn)入內(nèi)皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)能夠即時(shí)迅速發(fā)揮作用,在維持血管新生以及維持

17、血管功能及修復(fù)損傷組織等方面起主要作用。Ratajczak等25證實(shí)小鼠胚胎干細(xì)胞來(lái)源的MVs能把蛋白質(zhì)和mRNA轉(zhuǎn)運(yùn)到造血祖細(xì)胞中,并使其重新編程,這一作用經(jīng)RNase處理微粒后不復(fù)存在,表明有微粒轉(zhuǎn)運(yùn)的mRNA不僅能穩(wěn)定存在于靶細(xì)胞,還能在靶細(xì)胞內(nèi)被翻譯成相應(yīng)蛋白。近年來(lái)有研究者報(bào)道在這類(lèi)囊泡中發(fā)現(xiàn)lncRNA、circRNA等noncodingRNA及gDNA20-21,26。microRNA 是一類(lèi)長(zhǎng)約22 nt且高度保守的單鏈小分子RNA,本身不編碼蛋白質(zhì)但能夠在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因的表達(dá)。且一個(gè)miRNA能夠調(diào)控多個(gè)mRNA,而一個(gè)mRNA能同時(shí)被多個(gè)miRNA調(diào)控,目前已知miRN

18、A的功能有調(diào)控細(xì)胞的增殖、分化和代謝,并與心血管疾病、腫瘤、白血病等疾病的發(fā)生、發(fā)展有著密切聯(lián)系。lncRNA即長(zhǎng)鏈非編碼RNA,是一類(lèi)本身不編碼蛋白、轉(zhuǎn)錄本長(zhǎng)度超過(guò)200 nt的長(zhǎng)鏈非編碼RNA,能干擾mRNA的剪切,他在表觀遺傳調(diào)控、轉(zhuǎn)錄調(diào)控以及轉(zhuǎn)錄后調(diào)控等多層面調(diào)控基因的表達(dá)。circRNA即環(huán)狀RNA,是一類(lèi)特殊的非編碼RNA分子,富含miRNA結(jié)合位點(diǎn),在細(xì)胞中起到miRNA海綿的作用,進(jìn)而解除miRNA對(duì)靶基因的抑制作用,升高靶細(xì)胞外囊泡參與細(xì)胞間物質(zhì)、信息傳遞在生理、病理?xiàng)l件下,細(xì)胞外囊泡將其攜帶生物信息運(yùn)輸?shù)街苓叞屑?xì)胞或經(jīng)2.5細(xì)胞外囊泡參與疾病的發(fā)生發(fā)展 中樞神經(jīng)細(xì)胞來(lái)源的細(xì)

19、胞外囊泡可以進(jìn)入血液循環(huán)并在外周循環(huán)中發(fā)揮其促增殖、分化及抗凋亡的作用,在阿爾茨海默病和帕金森病等退行性疾病及其他中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病中發(fā)揮著重要作用。內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞外囊泡本身與機(jī)體高凝傾向和小血管炎癥等微循環(huán)障礙疾病有密切關(guān)系30。T細(xì)胞來(lái)源的外泌體可通過(guò)磷脂酰絲氨酸識(shí)別單核細(xì)胞膜表面的受體,誘導(dǎo)膽固醇堆積,進(jìn)而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化形成31。類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)滑液來(lái)源的纖維母細(xì)胞分泌的細(xì)胞外囊泡攜帶的TNF-結(jié)合于T淋巴細(xì)胞后抵抗機(jī)體活化誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡,從而加重關(guān)節(jié)炎癥狀32。細(xì)胞外囊泡也參與體內(nèi)自噬過(guò)程,有研究指出,經(jīng)煙霧提取物誘導(dǎo)人氣道上皮細(xì)胞后收集到的HBEC-細(xì)胞外囊泡中miR-210

20、表達(dá)量上調(diào),后者作圖3圖3 以外泌體為例闡釋細(xì)胞外囊泡與靶細(xì)胞信息傳遞方式圖注：圖A顯示富含母細(xì)胞信息的外泌體從細(xì)胞中釋放出來(lái)；B：通過(guò)其攜帶的特異性表面分子配體與靶細(xì)胞上相應(yīng)受體位點(diǎn)結(jié)合；C：直接與靶細(xì)胞質(zhì)膜融合,釋放其內(nèi)容物到靶細(xì)胞胞質(zhì)中；D：改變外泌體作用方式時(shí)對(duì)靶細(xì)胞影響；E：通過(guò)內(nèi)陷以類(lèi)似胞吞作用的機(jī)制將信息直接傳遞給靶細(xì)胞。用于體高表達(dá)FasL配體當(dāng)與CD8+T細(xì)胞上FasL受體結(jié)合后能誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞凋亡,導(dǎo)致腫瘤免疫逃逸。此外,細(xì)胞外囊泡 不僅與腫瘤細(xì)胞增殖、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān),在腫瘤細(xì)胞耐藥方面也發(fā)揮重要作用。總之,細(xì)胞外囊泡在生理狀態(tài)維持以及細(xì)胞遷移、血管新生、血

21、栓形成、免疫炎癥反應(yīng)、腫瘤浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等過(guò)程中發(fā)揮重要作用29。2.6細(xì)胞外囊泡能作為標(biāo)記物診斷疾病、評(píng)估預(yù)后細(xì)胞外囊泡有望作為一種非侵入性標(biāo)記物,在心血管疾病、腎臟疾病、中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病診斷以及癌癥等的早期篩查等方面起重要作用。這一作用主要有賴(lài)于細(xì)胞外囊泡攜帶的生物信息物質(zhì),尤其是RNA,有文獻(xiàn)報(bào)道,急性冠脈綜合征患者血清中,肌特異性miR-1和miR-133a表達(dá)水平升高,并且這一變化和肌鈣蛋白T水平相關(guān)7。血液中膜微粒與內(nèi)皮祖細(xì)胞的比值能反應(yīng)ACS中內(nèi)皮細(xì)胞凋亡與修復(fù)的變化情況33。血液循環(huán)中細(xì)胞外囊泡攜帶的miRNA可以用于心肌梗死、腦膜瘤的診斷；尿液細(xì)胞外囊泡中含有一些蛋白質(zhì)、miRN

22、A可輔助診斷腎臟疾病及膀胱癌等34。2.7細(xì)胞外囊泡能作為藥物或藥物載體發(fā)揮治療作用近幾年來(lái)研究證實(shí)干細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞外囊泡有著類(lèi)似于干細(xì)胞的生物學(xué)功能同時(shí)兼具其他眾多優(yōu)點(diǎn),如體積小、易穿透生物膜、免疫原性低等,且其特殊的脂質(zhì)雙分子層膜性結(jié)構(gòu)可保護(hù)其內(nèi)容物的降解,同時(shí)抵擋RNAse對(duì)核酸的破壞,保證其生物學(xué)活性。這類(lèi)囊泡能通過(guò)調(diào)節(jié)免疫炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞功能、抗纖維化、促血管及細(xì)胞再生、改善受損細(xì)胞的凋亡及增殖等多種機(jī)制對(duì)多種疾病發(fā)揮治療作用,且這種作用在組織再生和修復(fù)中尤為突出,能為干細(xì)胞治療非細(xì)胞途徑開(kāi)辟新路徑39。間充質(zhì)干細(xì)胞-細(xì)胞外囊泡能減少大鼠缺血再灌注腎臟損傷模型及

23、小鼠殘腎模型中腎臟淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。促進(jìn)大鼠腦卒中損傷后組織修復(fù)。可減輕肺小動(dòng)脈壁的增生肥厚,減輕肺血管狹窄及重構(gòu),改善肺血流動(dòng)力學(xué)異常,從而有效降低肺動(dòng)脈壓力,提高肺動(dòng)脈高壓實(shí)驗(yàn)大鼠生存質(zhì)量及存活率。一項(xiàng)關(guān)于小鼠心肌梗死模型研究表明,來(lái)源于過(guò)表達(dá)HIF-1的心臟內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源的exosome與心臟祖細(xì)胞共同輸注到成年NOD/SCID小鼠中能提高移植CPC的存活,改善心肌梗死損傷,并證實(shí)是exosome中富含的miR-126、miR-210起作用40。誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞來(lái)源的細(xì)胞外囊泡用于組織再生治療,則可大大降低誘導(dǎo)性多潛能干細(xì)胞的致瘤等風(fēng)險(xiǎn),這些都為干細(xì)胞非細(xì)胞途徑治療疾病提供新視角。也有學(xué)者報(bào)

24、道,一定條件下,用腫瘤抗原刺激樹(shù)突細(xì)胞后獲取的細(xì)胞外囊泡能誘導(dǎo)抗腫瘤免疫反應(yīng),而有望用于腫瘤治療,目前已有臨床一期實(shí)驗(yàn)相關(guān)報(bào)道10-11?；诩?xì)胞外囊泡而進(jìn)行的免疫療法越來(lái)越引人注意,有學(xué)者提出有望將其作為疫苗用于預(yù)防傳染性疾病,但目前還缺乏臨床實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。3小結(jié)Conclusion作者貢獻(xiàn)：文章設(shè)計(jì)、實(shí)施、評(píng)估為第一作者和通訊作者。資料收集為第一作者。利益沖突：所有作者共同認(rèn)可文章內(nèi)容不涉及相關(guān)利益沖突。倫理問(wèn)題：文章內(nèi)容不涉及倫理問(wèn)題。文章查重：文章出版前已經(jīng)過(guò)CNKI反剽竊文獻(xiàn)檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行3次查重。文章外審：文章經(jīng)國(guó)內(nèi)小同行外審專(zhuān)家雙盲外審,符合本刊發(fā)稿宗旨。作者聲明：文章第一作者對(duì)研究和

25、撰寫(xiě)的論文中出現(xiàn)的不端行為承擔(dān)責(zé)任。論文中涉及的原始圖片、數(shù)據(jù)記錄及樣本已按照有關(guān)規(guī)定保存、分享和銷(xiāo)毀,可接受核查。文章版權(quán)：文章出版前雜志已與全體作者授權(quán)人簽署了版權(quán)相關(guān)協(xié)議。開(kāi)放獲取聲明：這是一篇開(kāi)放獲取文章,文章出版前雜志已與全體作者授權(quán)人簽署了版權(quán)相關(guān)協(xié)議。根據(jù)知識(shí)共享許可協(xié)議署名-非商業(yè)性使用-相同方式共享3.0”條款,在合理引用的情況下,允許他人以非商業(yè)性目的基于原文內(nèi)容編輯、調(diào)整和擴(kuò)展,同時(shí)允許任何用戶(hù)閱讀、下載、拷貝、傳遞、打印、檢索、超級(jí)鏈接該文獻(xiàn),并為之建立索引,用作軟件的輸入數(shù)據(jù)或其他4參考文獻(xiàn)ReferencesWolf P. The nature and signif

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