炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件

1、炭疽檢驗(yàn)技術(shù)遼寧省cdc炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件炭疽檢驗(yàn)技術(shù)遼寧省cdc炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 炭疽是由炭疽桿菌引起的人獸共患急性、熱性、敗血性傳染病。其病理變化的特點(diǎn)是脾臟顯著腫大，皮下及漿膜下結(jié)締組織出血浸潤(rùn)，血液凝固不良，呈煤焦油樣。人感染后多表現(xiàn)為皮膚炭疽、肺炭疽及腸炭疽，偶有伴發(fā)敗血癥。 炭疽（Anthrax）炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 炭疽是由炭疽桿菌引起的人獸共患急性、熱性、敗血發(fā)病、死亡污染環(huán)境 形成芽胞經(jīng)口 食入食草動(dòng)物通過(guò)直接接觸、消化道、呼吸道等途徑感染人類(lèi)食肉動(dòng)物 偶爾感染 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件發(fā)病、污染環(huán)境 經(jīng)口 食草動(dòng)物通過(guò)直接接觸、食肉動(dòng)物 炭革蘭氏染色陽(yáng)性；長(zhǎng)而直的大桿菌，菌體兩端平直；大

2、小為1.01. 5um35um，致病菌中最大的；無(wú)鞭毛，不能運(yùn)動(dòng)。一、病原炭疽桿菌（Bacillus anthracis）炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件革蘭氏染色陽(yáng)性；一、病原炭疽桿菌（Bacillus an莢膜染色在碳酸鹽培養(yǎng)基中、厭氧環(huán)境下生成莢膜。一、病原炭疽桿菌（Bacillus anthracis）炭疽桿菌在病人、病畜體內(nèi)多散在或呈23個(gè)短鏈排列，有莢膜（紅色）炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件莢膜染色一、病原炭疽桿菌（Bacillus anthra在活炭疽病畜體或死亡后未經(jīng)解剖的尸體內(nèi)，不形成芽胞。一旦體內(nèi)炭疽桿菌暴露于空氣中，接觸了游離氧，在一定溫度下(12-42)就會(huì)形成芽胞。芽胞呈卵圓形或圓形，位于菌體中央

3、或稍偏向一端。一、病原炭疽桿菌（Bacillus anthracis）炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件在活炭疽病畜體或死亡后未經(jīng)解剖的尸體內(nèi)，不形成芽胞。一旦體內(nèi)A：炭疽芽孢薄片（透射電鏡）有致密的胞膜B：炭疽芽孢（掃描電鏡）收縮成橢圓形C：炭疽繁殖體薄片（透射電鏡）炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件A：炭疽芽孢薄片（透射電鏡）有致密的胞膜B：炭疽芽孢（掃描 炭疽桿菌為兼性需氧菌，在1244都能生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為37。最適pH為7.37.6。 在普通瓊脂平皿培養(yǎng)基上生長(zhǎng)成不透明、灰白色、扁平、表面粗糙的菌落，邊緣不整齊，能形成幾個(gè)或數(shù)十個(gè)菌體相連的長(zhǎng)鏈，低倍顯微鏡觀察呈卷發(fā)狀。在血液瓊脂平皿培養(yǎng)基上，生長(zhǎng)出濕潤(rùn)粘稠的菌落，菌

4、落周?chē)蝗苎?。二、培養(yǎng)特性炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 炭疽桿菌為兼性需氧菌，在1244都能生長(zhǎng)，最適生光鏡下炭疽桿菌菌落邊緣呈卷發(fā)狀炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件光鏡下炭疽桿菌菌落邊緣呈卷發(fā)狀炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件在血液瓊脂平皿培養(yǎng)基上不溶血或微溶血炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件在血液瓊脂平皿培養(yǎng)基上不溶血或微溶血炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件三、致病性與免疫性致病物質(zhì):主要有二種 莢膜:由質(zhì)粒編碼,具有抗吞噬作用 炭疽毒素:由質(zhì)粒編碼（致死主要因素） 保護(hù)性抗原（protective antigen ， PA） 水腫因子 （edema factor ， EF） 致死因子 (lethal factor ， LF)炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件三、致病性與免疫性致病

5、物質(zhì):主要有二種炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件四、抵抗力芽胞抵抗力強(qiáng) 煮沸40min或干熱140C 3h滅活； 在干燥土壤或皮毛中能存活數(shù)年至20年； 對(duì)化學(xué)消毒劑抵抗力強(qiáng)(5%石炭酸5d殺死）； 對(duì)碘及氧化劑較敏感； 繁殖體的抵抗力弱 對(duì)青霉素、紅霉素、氯霉素敏感 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件四、抵抗力芽胞抵抗力強(qiáng)炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件炭疽病原學(xué)檢查炭疽血清學(xué)檢查五、炭疽實(shí)驗(yàn)室檢查炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件五、炭疽實(shí)驗(yàn)室檢查炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件炭疽病原學(xué)檢查標(biāo)本采集和樣品處理細(xì)菌培養(yǎng)涂片、革蘭染色、莢膜染色、光鏡檢查Ascoli試驗(yàn)動(dòng)力檢查噬菌體裂解和青霉素敏感性試驗(yàn)串珠試驗(yàn)生化試驗(yàn)炭疽PCR基因檢測(cè)五、炭疽實(shí)驗(yàn)室檢查炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件炭

6、疽病原學(xué)檢查五、炭疽實(shí)驗(yàn)室檢查炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件炭疽血清學(xué)檢查標(biāo)本采集和樣品處理血清中抗炭疽芽胞和毒素IgG水平檢測(cè) （酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA）血清中抗炭疽莢膜抗體膠體金檢測(cè) 五、炭疽實(shí)驗(yàn)室檢查炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件炭疽血清學(xué)檢查五、炭疽實(shí)驗(yàn)室檢查炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件人間傳染的病原微生物名錄序號(hào) 病原菌名稱(chēng) 危害程度分類(lèi) 實(shí)驗(yàn)活動(dòng)所需生物安全實(shí)驗(yàn)室級(jí)別 學(xué)名 中文名 大量活菌操作 動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn) 樣本檢測(cè) 非感染性材料的實(shí)驗(yàn) 1Bacillus anthracis 炭疽芽孢桿菌 第二類(lèi) BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 2Brucella spp 布魯氏菌屬 第二類(lèi) BSL-3 ABSL

7、-3 BSL-2 BSL-1 3Burkholderia mallei 鼻疽伯克菌 第二類(lèi) BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 4Coxiella burnetii 伯氏考克斯體 第二類(lèi) BSL-3 ABSL-3 BSL-2 BSL-1 大量活菌操作：實(shí)驗(yàn)操作涉及“大量”病原菌的制備，或易產(chǎn)生氣溶膠的實(shí)驗(yàn)操作（如病原菌離心、凍干等）。 動(dòng)物感染實(shí)驗(yàn)：特指以活菌感染的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。 樣本檢測(cè)：包括樣本的病原菌分離純化、藥物敏感性實(shí)驗(yàn)、生化鑒定、免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)、PCR核酸提取、涂片、顯微觀察等初步檢測(cè)活動(dòng)。 非感染性材料的實(shí)驗(yàn)：如不含致病性活菌材料的分子生物學(xué)、免疫學(xué)等實(shí)驗(yàn)。炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件

8、人間傳染的病原微生物名錄序號(hào) 病原菌名稱(chēng) 危害程度分類(lèi) 炭疽病原檢驗(yàn)程序標(biāo)本處理（方法根據(jù)標(biāo)本情況選擇）直接涂片、革蘭染色、莢膜染色、光鏡檢查接種培養(yǎng)（可用選擇性培養(yǎng)基、血培養(yǎng)基）37，1648 hAscoli試驗(yàn)基因檢測(cè)可疑菌落（形態(tài)）初檢培養(yǎng)性鑒定試驗(yàn)深入鑒定涂片、革蘭染色、莢膜染色、光鏡檢查動(dòng)力檢查液體培養(yǎng)噬菌體裂解和青霉素敏感性試驗(yàn)產(chǎn)莢膜培養(yǎng)及光鏡檢查串珠試驗(yàn)生化試驗(yàn)基因檢測(cè)酶免疫法測(cè)外毒素動(dòng)物毒性測(cè)定炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件炭疽病原檢驗(yàn)程序標(biāo)本處理（方法根據(jù)標(biāo)本情況選擇）直接涂片、接采取標(biāo)本時(shí)必須遵循的兩條原則1、盡可能的在抗生素治療前采取標(biāo)本；2、除必要時(shí)并在具備條件的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，不得用解剖

9、的方式獲取標(biāo)本，所需的血液與組織標(biāo)本，均應(yīng)以穿刺方式取得。（一）炭疽病原學(xué)檢查 標(biāo)本采集和樣品處理 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件采取標(biāo)本時(shí)必須遵循的兩條原則（一）炭疽病原學(xué)檢查 1、血液標(biāo)本 所有的疑似病例和病畜，都應(yīng)采取血液標(biāo)本5-10ml，標(biāo)本量至少應(yīng)滿(mǎn)足下列檢查的需要：涂片進(jìn)行顯微鏡檢查；接種培養(yǎng)基進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)；分離血清檢查抗體；常規(guī)血液檢查。熒光定量PCR檢測(cè)2、皮膚潰瘍標(biāo)本 在皮膚炭疽病人潰瘍邊緣用棉拭子擦拭，沾取分泌物。（一）炭疽病原學(xué)檢查 標(biāo)本采集和樣品處理 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件1、血液標(biāo)本 所有的疑似病例和病畜，都應(yīng)采取血液標(biāo)本53、糞便與嘔吐物標(biāo)本 表現(xiàn)消化道癥狀的可疑病人收集糞便或嘔吐

10、物標(biāo)本，特別注意選取其中混有血液的部分，置無(wú)菌的容器中。4、痰與咳碟標(biāo)本 表現(xiàn)為呼吸道癥狀的可疑病人應(yīng)收集其痰液標(biāo)本，無(wú)痰液者，應(yīng)取供細(xì)菌分離培養(yǎng)用的培養(yǎng)基，打開(kāi)平皿蓋置病人口鼻10cm處；令病人對(duì)平皿咳嗽，然后迅速蓋上平皿。（一）炭疽病原學(xué)檢查 標(biāo)本采集和樣品處理 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件3、糞便與嘔吐物標(biāo)本 表現(xiàn)消化道癥狀的可疑病人收集糞便或嘔5、腦脊液標(biāo)本 表現(xiàn)為腦膜刺激癥狀的病人，腰椎穿刺獲取腦脊液。6、尸體標(biāo)本 食草動(dòng)物死于炭疽時(shí)，通常會(huì)從口、鼻、肛門(mén)等腔道開(kāi)口流出血液，這種血液應(yīng)是首先采取的標(biāo)本。如果血液已滲入土壤，則應(yīng)收集混有血液的土壤作為標(biāo)本。沒(méi)有血液流出，或已不可能獲取血液標(biāo)本時(shí)，可

11、通過(guò)穿刺心臟獲得血液或穿刺肝臟等實(shí)質(zhì)性臟器獲得組織標(biāo)本。（一）炭疽病原學(xué)檢查 標(biāo)本采集和樣品處理 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件5、腦脊液標(biāo)本 表現(xiàn)為腦膜刺激癥狀的病人，腰椎穿刺獲取7、肉類(lèi)標(biāo)本 如果懷疑罹患炭疽的牲畜已被宰殺，或?qū)ι唐啡忸?lèi)進(jìn)行常規(guī)檢查時(shí)，可剪取小塊肉類(lèi)標(biāo)本。如有可能，特別應(yīng)剪取肝臟、脾臟等富含血以及含有淋巴組織的標(biāo)本。8、毛皮或其他可疑污染物品標(biāo)本 剪取小塊毛皮或其他可疑物品，剪碎置無(wú)菌試管內(nèi)，加適量的無(wú)菌生理鹽水浸泡。（一）炭疽病原學(xué)檢查 標(biāo)本采集和樣品處理 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件7、肉類(lèi)標(biāo)本 如果懷疑罹患炭疽的牲畜已被宰殺，或?qū)ι唐啡忸?lèi)9、水標(biāo)本 檢查水體污染時(shí)，用廣口瓶收集水樣。10、土壤

12、標(biāo)本 在牲畜死亡或宰殺的地點(diǎn)，應(yīng)取土壤標(biāo)本以供檢查。一般要采集表層土壤（10cm內(nèi)），每份150g左右。（一）炭疽病原學(xué)檢查 標(biāo)本采集和樣品處理 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件9、水標(biāo)本 檢查水體污染時(shí)，用廣口瓶收集水樣。（一）炭疽病 所有來(lái)自病人、病畜、尸體的標(biāo)本都應(yīng)首先進(jìn)行直接涂片鏡檢。 步驟： 涂片、革蘭染色及莢膜染色、顯微鏡檢查 鏡檢：取末稍血液或其他材料制成涂片后，染色鏡檢，發(fā)現(xiàn)有多量單在、成對(duì)或24個(gè)菌體相連的短鏈排列、竹節(jié)狀有莢膜的粗大桿菌，即可確診。 （二）炭疽病原學(xué)檢查 顯微鏡檢查 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 所有來(lái)自病人、病畜、尸體的標(biāo)本都應(yīng)首先進(jìn)行直接涂片鏡檢 革蘭染色（二）炭疽病原學(xué)檢查 顯微

13、鏡檢查 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 革蘭染色（二）炭疽病原學(xué)檢查 顯微鏡檢 莢膜染色（二）炭疽病原學(xué)檢查 顯微鏡檢查 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 莢膜染色（二）炭疽病原學(xué)檢查 顯微鏡 采集到的標(biāo)本均應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。 培養(yǎng)基選用血瓊脂平板、營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板和選擇性平板。（三）炭疽病原學(xué)檢查 細(xì)菌分離培養(yǎng) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 采集到的標(biāo)本均應(yīng)進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。（三）炭疽病原學(xué)檢查標(biāo)本處理： 無(wú)菌的標(biāo)本，如血液或腦脊液，直接涂布上述兩種平板，每平板0.1ml，組織標(biāo)本應(yīng)先以無(wú)菌剪刀剪開(kāi)一斷面，在培養(yǎng)基表面壓印，然后以白金耳涂開(kāi)。 污染或陳舊的標(biāo)本，均應(yīng)首先制成懸液。根據(jù)標(biāo)本中含菌量的多少，可將懸液適當(dāng)稀釋?zhuān)蚪?jīng)自然沉淀除

14、去粗大沉淀物后，再10000rpm離心1分鐘，取富集的沉淀物。將所得的懸液沸水浴15min，冷卻后涂布上述兩種平板，每平板0.1ml。（三）炭疽病原學(xué)檢查 細(xì)菌分離培養(yǎng) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件標(biāo)本處理：（三）炭疽病原學(xué)檢查 細(xì)菌分離培養(yǎng) 以上的平皿在37孵育過(guò)夜或24小時(shí)后，觀察培養(yǎng)情況。 粗糙不發(fā)光，比較扁平，有點(diǎn)兒象蠟樣桿菌的菌落但較小，卷發(fā)狀。有的菌體形態(tài)不規(guī)則，有彗星狀拖尾，白或灰白色。（三）炭疽病原學(xué)檢查 細(xì)菌分離培養(yǎng) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 以上的平皿在37孵育過(guò)夜或24小時(shí)后，觀察培養(yǎng)情況在血平皿上為白色菌落，較粘，不溶血或微溶血 。（三）炭疽病原學(xué)檢查 細(xì)菌分離培養(yǎng) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件在血平

15、皿上為白色菌落，較粘，不溶血或微溶血 。（三）炭疽病原 在靜止液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)在上層和底部，培養(yǎng)基透明，拿起則呈絲絮狀下垂，搖之均勻混濁，無(wú)菌膜和壁環(huán) 。1、肉湯生長(zhǎng)（四）炭疽病原學(xué)檢查 鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 在靜止液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)在上層和底部，培養(yǎng)基透 診斷炭疽簡(jiǎn)便而快速的方法，其優(yōu)點(diǎn)是培養(yǎng)失效時(shí)，仍可用于診斷，因而適宜于腐敗病料及動(dòng)物皮張或風(fēng)干、淹浸過(guò)肉品的檢驗(yàn)。但此法缺乏高度特異性，因?yàn)樘烤覘U菌耐熱抗原在其他腐生芽胞桿菌也共有。 新鮮、陳舊和外環(huán)境標(biāo)本都可采樣20-50g，加水5-10倍，煮沸10分鐘，用雙層濾紙過(guò)濾后制成可溶性熱沉淀抗原，用于熱沉淀反應(yīng)（Ascoli試驗(yàn)。2、As

16、coli試驗(yàn)（四）炭疽病原學(xué)檢查 鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 診斷炭疽簡(jiǎn)便而快速的方法，其優(yōu)點(diǎn)是培養(yǎng)失效時(shí)，仍可用 取一玻璃沉淀管（直徑2-4 mm，高20-40 mm），將0.3 ml炭疽菌沉淀血清加于小玻璃管底部，再緩緩加入采集處理的可溶性熱沉淀抗原約0.3ml于血清上層，注意勿使液面混合。置37 5 min，于兩液面間出現(xiàn)白色沉淀環(huán)為陽(yáng)性。 本實(shí)驗(yàn)應(yīng)有炭疽菌診斷抗原作陽(yáng)性對(duì)照。炭疽菌沉淀血清處理的可溶性熱沉淀抗原白色沉淀環(huán)（四）炭疽病原學(xué)檢查 鑒定試驗(yàn) 2、Ascoli試驗(yàn)炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 取一玻璃沉淀管（直徑2-4 mm，高2 在蓋玻片周?chē)糠彩苛?，將待檢菌的液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)物用生

17、理鹽水制成的均勻懸液滴于中央，再將凹玻片蓋于其上。迅速翻過(guò)來(lái)使蓋玻片在上，菌懸液懸成滴。置高倍鏡下觀察，細(xì)菌不應(yīng)有運(yùn)動(dòng)。3、動(dòng)力試驗(yàn)（四）炭疽病原學(xué)檢查 鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 在蓋玻片周?chē)糠彩苛?，將待檢菌的液體培養(yǎng)物或固體培養(yǎng)4、噬菌體裂解和青霉素敏感性 將挑取的可疑菌落密集劃線(xiàn)接種于平板上，在劃線(xiàn)區(qū)內(nèi)一處滴一診斷用炭疽噬菌體，另一處貼一片青霉素紙片。37 孵育824h后，在滴噬菌體處有透明噬菌體斑，青霉素紙片周?chē)忻黠@的抑菌環(huán)，便宜可斷定接種物為炭疽芽胞桿菌。（四）炭疽病原學(xué)檢查 鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件4、噬菌體裂解和青霉素敏感性（四）炭疽病原學(xué)檢查 鑒定試4、噬菌體裂解和青霉素

18、敏感性（四）炭疽病原學(xué)檢查 鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件4、噬菌體裂解和青霉素敏感性（四）炭疽病原學(xué)檢查 鑒定試 制備有牛肉消化液瓊脂培養(yǎng)基的載玻片，涂種待檢菌，在一端加青霉素紙片或紙條。置平皿中于37培養(yǎng)4 6小時(shí)后，在低倍鏡下觀察。在有菌生長(zhǎng)和抑菌區(qū)的臨界線(xiàn)處，應(yīng)有明顯典型串珠形態(tài)。5、串珠試驗(yàn)串珠試驗(yàn)時(shí)炭疽桿菌的形態(tài)：串珠狀或長(zhǎng)鏈狀（四）炭疽病原學(xué)檢查 鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 制備有牛肉消化液瓊脂培養(yǎng)基的載玻片，葡萄糖麥芽糖蔗糖乳糖甘露醇水楊素MRVP石蕊牛乳+產(chǎn)酸，液化遲緩產(chǎn)酸不產(chǎn)氣不產(chǎn)生靛基質(zhì)和H2S6、生化試驗(yàn) API 50CH/E鑒定條可以進(jìn)行炭疽生化鑒定（四）炭疽病原學(xué)檢查

19、鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件葡萄糖麥芽糖蔗糖乳糖甘露醇水楊素MRVP石蕊牛乳+待測(cè)模板的制備： 模板制備可直接從標(biāo)本樣品，也可從培養(yǎng)物制。標(biāo)本將炭疽桿菌接種于固體培養(yǎng)基平板上，37培養(yǎng)18h，取培養(yǎng)物懸浮于1ml生理鹽水，離心，棄上清，沉淀用ph7.8TE溶液洗起懸浮，于沸水浴中煮15min。離心，上清用0.22um的濾器除菌過(guò)濾。濾液即為模板，可置4備用于PCR擴(kuò)增。（五）炭疽病原學(xué)檢查 PCR鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件待測(cè)模板的制備：（五）炭疽病原學(xué)檢查 PCR鑒定試驗(yàn) cap外F：CCTGGTTGTTCTTTTCGTTGCcap外R：CGGATTGTATATGGAGTGGG 產(chǎn)物大：124

20、2bprpoB普1F：GTACGCCAATCGATATCATGrpoB普1R：GATCATCGTCATCTTCCGTA 產(chǎn)物大?。?18bppagA普F: ATTTGCGGTAACACTTCACTpagA普R: AGACCGTGACAATGATGGAA 產(chǎn)物大小：923bp引物序列：（五）炭疽病原學(xué)檢查 PCR鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件引物序列：（五）炭疽病原學(xué)檢查 PCR鑒定試驗(yàn) 反應(yīng)體系 (50l)10反應(yīng)緩沖液 5l4dNTP混合物（每種2.5mM） 4l引物（上游） 1l引物（下游） 1l待測(cè)模板 1l無(wú)菌去離子水 37lTaq DNA 聚合酶 1l 反應(yīng)條件： 預(yù)變性95 5min；

21、然后95 1 min，55 1 min，72 1 min，30個(gè)循環(huán)；最后72 5 min。（五）炭疽病原學(xué)檢查 PCR鑒定試驗(yàn) 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件 反應(yīng)體系 標(biāo)本采集和樣品處理血清中抗炭疽芽胞和毒素IgG水平檢測(cè) （酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)ELISA）血清中抗炭疽莢膜抗體膠體金檢測(cè) 炭疽血清學(xué)檢查炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件標(biāo)本采集和樣品處理炭疽血清學(xué)檢查炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件根據(jù)血清學(xué)檢驗(yàn)的結(jié)果可以對(duì)病人做出追溯診斷，由于診斷必須由雙份血清做出，需要特別強(qiáng)調(diào)急性期血清的采取。首份血清應(yīng)在檢視病人時(shí)采取，通常應(yīng)一次采取血液標(biāo)本供涂片鏡檢，細(xì)菌分離培養(yǎng)，血清學(xué)檢查及常規(guī)的血液檢查使用。血清分離后置4保存，待獲得恢復(fù)期血清

22、后，一同進(jìn)行抗體檢查。恢復(fù)期血清應(yīng)在發(fā)病后15日左右采取。（一）炭疽血清學(xué)檢查 標(biāo)本采集和樣品處理 炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件根據(jù)血清學(xué)檢驗(yàn)的結(jié)果可以對(duì)病人做出追溯診斷，由于診斷必須由雙（二）炭疽血清學(xué)檢查 抗炭疽芽胞和毒素IgG水平ELISA測(cè)定炭疽檢驗(yàn)技術(shù)課件（二）炭疽血清學(xué)檢查 炭疽檢抗炭疽芽胞和毒素IgG水平ELISA測(cè)定程序包被抗原：所用各孔加入檢測(cè)用炭疽標(biāo)準(zhǔn)芽胞抗原液或檢測(cè)用炭疽毒素抗原液100 l，酶標(biāo)板貼上封口膜，置4過(guò)夜。次日，甩干孔內(nèi)溶液，每孔加洗滌緩沖液100 l，甩干，反復(fù)洗滌3次，每次3 min。待檢血清反應(yīng)：每種待測(cè)血清使用兩行，以增加測(cè)定結(jié)果的可分析性。兩行的112孔各加生理氯化鈉溶液100 l。在第1孔加待測(cè)血清100 l，從第1孔以倍比稀釋法向后至第12孔進(jìn)行稀釋混勻。酶標(biāo)板貼上封口膜，置37 60 min。甩干孔內(nèi)溶液，每孔加洗滌緩沖液100 l，甩干，反復(fù)洗滌3次，每次3 min。 (同時(shí)做空白、正常血清孔對(duì)照)酶標(biāo)抗體反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的工作濃度的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊（兔）抗人IgG或辣根過(guò)氧化物