流式細(xì)胞術(shù)一覽課件

1、流式細(xì)胞術(shù)原理與應(yīng)用2016.5.21 簡介流式細(xì)胞儀(FlowCytometer):是集激光技術(shù)、電子物理技術(shù)、光電測量技術(shù)、計算機技術(shù)、細(xì)胞熒光化學(xué)技術(shù)以及單克隆抗體技術(shù)為一體的高科技細(xì)胞分析儀。流式細(xì)胞術(shù)(FlowCytometry，F(xiàn)CM):利用流式細(xì)胞儀對處于快速直線流動狀態(tài)中的細(xì)胞或亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進行多參數(shù)、快速的定量分析和分選的技術(shù)。特點1.測量速度快；2.可進行多參數(shù)測量；3.是一門綜合性的高科技方法（ FCM綜合了光學(xué)，電子學(xué)，流體力學(xué)，細(xì)胞化學(xué)，免疫學(xué)，激光和計算機等多門學(xué)科和技術(shù)）；4.既是細(xì)胞分析技術(shù)，又是精確的分選技術(shù)。應(yīng)用范圍隨著對FCM研究的日益深入，其價值已經(jīng)從科學(xué)

2、研究走入了臨床應(yīng)用階段，在我國臨床醫(yī)學(xué)領(lǐng)域里已有著廣泛的應(yīng)用?？捎糜诎籽〉姆中汀⒛[瘤細(xì)胞染色體的異倍性測定，以及免疫學(xué)研究，并已開始用于細(xì)菌鑒定，病毒感染細(xì)胞的識別和艾滋病感染者T4、T8細(xì)胞的記數(shù)。(1)發(fā)現(xiàn)癌前病變，協(xié)助腫瘤早期診斷：人體正常組織發(fā)生癌變要經(jīng)過一個由量變到質(zhì)變的漫長過程，而癌前細(xì)胞即處于量變過程中向癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化階段。人體正常的體細(xì)胞均具有比較穩(wěn)定的DNA二倍體含量。當(dāng)人體發(fā)生癌變或具有惡性潛能的癌前病變時，在其發(fā)生、發(fā)展過程中可伴隨細(xì)胞DNA含量的異常改變，F(xiàn)CM可精確定量DNA含量的改變，作為診斷癌前病變發(fā)展至癌變中的一個有價值的標(biāo)志，能對癌前病變的性質(zhì)及發(fā)展趨勢作出估價

3、，有助于癌變的早期診斷。有資料證實，癌前病變的癌變發(fā)生率與細(xì)胞不典型增生程度有密切關(guān)系，增生程度越重，癌變發(fā)生率越高。隨著細(xì)胞不典型增生程度的加重，DNA非整倍體出現(xiàn)率增高，這是癌變的一個重要標(biāo)志。在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用在臨床中的作用FCM通過熒光抗原抗體檢測技術(shù)對人體細(xì)胞免疫功能的評估以及各種血液病及腫瘤的診斷和治療有重要作用。有大量文章介紹了淋巴細(xì)胞亞群等在各種疾病中的變化。正常人群淋巴細(xì)胞T4/T8比值大約為21，但在人體細(xì)胞免疫力低下時可出現(xiàn)比例倒置。用FCM還可以監(jiān)測腎移植后病人的腎排斥反應(yīng)，如果T4/T8比例倒置，病人預(yù)后良好，較少發(fā)生腎排異現(xiàn)象；反之排異危險性增加。同樣此種測定技術(shù)也用

4、于艾滋病的診斷和治療中。還有作者報告了外周血淋巴細(xì)胞免疫表型的參考值，并對其種族、性別、年齡等影響因素進行了探討。目前FCM用的各種單克隆抗體試劑已經(jīng)發(fā)展到了百余種，可以對各種血細(xì)胞和組織細(xì)胞的表型進行測定分析在血液病診斷和治療中的應(yīng)用(1)白血病的診斷和治療：FCM采用各種抗血細(xì)胞表面分化抗原 (CD)的單克隆抗體，借助于各種熒光染料(異硫氰基熒光素FITC，藻紅蛋白PE等)測定一個細(xì)胞的多種參數(shù)，以正確地判斷出該細(xì)胞的屬性。(2)其它種類血液病的診斷和治療監(jiān)測：陣發(fā)性睡眠性血紅蛋白尿癥是一種造血干細(xì)胞克隆病，細(xì)胞CD55、CD59抗原表達減低是該病的一個特點。(3)網(wǎng)織紅細(xì)胞的測定及臨床應(yīng)用：網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)是反映骨髓造血功能的重要指標(biāo)，F(xiàn)CM通過某些熒光染料(吖啶橙、噻唑橙等)與紅細(xì)胞中RNA結(jié)合，定量測定網(wǎng)織紅細(xì)胞中RNA，得到網(wǎng)織紅細(xì)胞占成熟紅細(xì)胞的百分比。(2)血小板相關(guān)抗體的測定：免疫性血小板減少性紫癜病人血漿中可產(chǎn)生血小板自身抗體，結(jié)合在血小板表面，稱為血小板相關(guān)抗體，其分子可以是IgG、IgA或IgM，用羊抗人IgG、IgA、IgM熒光抗體標(biāo)記被測血小板，F(xiàn)CM可以測定血小板相關(guān)抗體含量