食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗課件

食品衛(wèi)生微生物學檢驗

金黃色葡萄球菌檢驗食品衛(wèi)生微生物學檢驗

金黃色葡萄球菌檢驗1金黃色葡萄球菌的生物學特性金黃色葡萄球菌的抗原構造及分型簡介金黃色葡萄球菌的致病性金黃色葡萄球菌的流行病學金黃色葡萄球菌的檢驗方法金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測金黃色葡萄球菌的快速檢測方法金黃色葡萄球菌污染的控制金黃色葡萄球菌的生物學特性2一、金黃色葡萄球菌的生物學特性1、形態(tài)與染色：(staphylococcusaureus)

金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8

mm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。革蘭氏染色陽性。

附：金黃色葡萄球菌的顯微照片

金黃色葡萄球菌的染色照片

金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片

金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片一、金黃色葡萄球菌的生物學特性1、形態(tài)與染色：(staph3

金黃色葡萄球菌的顯微照片

典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8

mm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。

金黃色葡萄球菌的顯微照片4

金黃色葡萄球菌革蘭氏染色顯微照片

金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。革蘭氏染色陽性。

食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件5金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片StaphylococcusaureusEnhancedsemw:7.9micron

金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片6金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片Temx12000digitizedStaphylococcusaureus

金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片72、培養(yǎng)特性：金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37℃，最適生長pH7.4。

平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，邊緣整齊、表面光滑、濕潤，直徑一般為1～2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在7.5～15%NaCl肉湯中生長。

2、培養(yǎng)特性：8

食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件93、生化特性：可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產酸不產氣。甲基紅反應陽性，VP反應弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。3、生化特性：10金黃色葡萄球菌的抗原構造和分型

對分型進行簡單的了解。１、血清學分型：金黃色葡萄球菌水解，獲得兩種抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。蛋白抗原主要為葡萄球菌A蛋白（SPA)，是一種表面抗原，90%以上金黃色葡萄球菌有此抗原，無特異性。多糖抗原為半抗原，有型特異性。２、噬菌體分型。３、根據(jù)腸毒素分型。４、根據(jù)血漿凝固酶分型。金黃色葡萄球菌的抗原構造和分型11金黃色葡萄球菌的致病性金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產生的毒素和侵襲性酶：a.溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞；c.血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關；d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質性腸毒素，分為A、B、C、D、E及F六種血清型。

金黃色葡萄球菌的致病性12

＊＊＊當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經過8～10小時即可產生相當數(shù)量的腸毒素，腸毒素可耐受100℃煮沸30分鐘而不被破壞。人攝食該菌污染的食物2～3小時后可引起中毒癥狀，它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。＊＊＊當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多13金黃色葡萄球菌的流行病學金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。作為人和動物的常見病原菌，其主要存在于人和動物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機會很多。金黃色葡萄球菌的流行病學14金黃色葡萄球菌的流行病學近年來，美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌的流行病學15金黃色葡萄球菌的流行病學特點季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。金黃色葡萄球菌的流行病學特點16金黃色葡萄球菌的流行病學一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶牛患化膿性乳腺炎或禽畜局部化膿時，對肉體其他部位的污染。金黃色葡萄球菌的流行病學17

*金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。腸毒素形成條件：存放溫度，在37℃內，溫度越高，產毒時間越短；存放地點，通風不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質豐富，水分多，同時含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。*金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美18金黃色葡萄球菌的檢驗1、樣品制備按無菌操作取檢樣25g（mL），加入225mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置均質器中制成1:10樣品混懸液。

供計數(shù)檢驗時，可按十進位遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。金黃色葡萄球菌的檢驗19金黃色葡萄球菌的檢驗2、增菌及分離培養(yǎng)

吸取5mL混懸液，接種于7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯50mL培養(yǎng)基內，36℃±1℃培養(yǎng)24h，轉種血平板和Baird-Parker平板，36℃±1℃培養(yǎng)24h，挑取血平板上金黃色（有時為白色）菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。金黃色葡萄球菌的檢驗20血平板上金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)

金黃色葡萄球球菌的單個菌落在血平板上呈金黃色，有時也為白色，大而突出、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。

血平板上金黃色葡萄球菌21食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件22金黃色葡萄球菌在BP平板上的菌落形態(tài)

在Baird-Parker瓊脂平板上菌落呈圓形，表面光滑、凸起、濕潤，直徑2～3mm?；液谏梁谏?，有光澤，常有淺色（非白色）的邊緣，周圍繞以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰帶。當用接種針觸及菌落時具有黃油樣粘稠感。有時可見到不分解脂肪的菌株，除沒有不透明圈和清晰帶外，其他外觀基本相同。從長期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落，其黑色常較典型菌落淺些，且外觀可能較粗糙，質地較干燥。金黃色葡萄球菌23食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件24金黃色葡萄球菌在甘露醇鹽平板上的菌落

Staphylococcusaureusonmannitolsaltsagar

金黃色葡萄球菌253、血漿凝固酶試驗：

吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，置36±1℃溫箱或水浴內，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固,即將試管倒置或傾斜時，呈現(xiàn)凝塊者，被認為陽性結果。同時以已知陽性和陰性葡萄球菌株及肉湯作為對照。3、血漿凝固酶試驗：26食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件27金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測

一、動物學試驗主要用幼貓和猴。二、血清學試驗腸毒素作為抗原，可以和特異性抗體發(fā)生結合性反應，產生可見沉淀。用血清學反應檢驗金黃色葡萄球菌腸毒素，方法主要有：免疫瓊脂擴散法反向間接血凝試驗免疫熒光法酶聯(lián)免疫吸附法

金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測

28金黃色葡萄球菌快速檢測方法目前，隨著研究的深入，一些快速和采用現(xiàn)代技術的檢測方法不斷出現(xiàn)，這些新的快速方法，一般都縮短了傳統(tǒng)檢測方法的時間，能夠較快地得到檢測結果，并且操作相對簡單。比如：法國梅里埃公司生產的RPF培養(yǎng)基、API檢測系統(tǒng)等。梅里埃公司生產的miniVIDAS利用熒光免疫的方法檢測葡萄球菌腸毒素，在儀器上45min可以得到結果。金黃色葡萄球菌快速檢測方法29法國梅里埃公司生產的RPF培養(yǎng)基凝固酶陽性葡萄球菌:菌落周圍形成沉淀圈(例)金黃色葡萄球菌

-+將兔血漿包括在培養(yǎng)基中作為直接確認菌落的手段法國梅里埃公司生產的RPF培養(yǎng)基凝固酶陽性葡萄球菌:菌落30金黃色葡萄球菌污染的控制防止食品污染防止帶菌人群對各種食物的污染：定期對生產加工人員進行健康檢查，患局部化膿性感染（如疥瘡、手指化膿等）、上呼吸道感染（如鼻竇炎、化膿性肺炎、口腔疾病等）的人員要暫時停止其工作或調換崗位。

金黃色葡萄球菌污染的控制

31金黃色葡萄球菌污染的控制防止食品污染防止金黃色葡萄球菌對奶及其制品的污染：如牛奶廠要定期檢查奶牛的乳房，不能擠用患化膿性乳腺炎的牛奶；奶擠出后，要迅速冷至-10℃以下，以防毒素生成、細菌繁殖。奶制品要以消毒牛奶為原料，注意低溫保存。對肉制品加工廠，患局部化膿感染的禽、畜尸體應除去病變部位，經高溫或其他適當方式處理后進行加工生產。

金黃色葡萄球菌污染的控制

32防止金黃色葡萄球菌腸毒素生成

應在低溫和通風良好的條件下貯藏食物，以防腸毒素形成；在氣溫高的春夏季，食物置冷藏或通風陰涼地方也不應超過6小時，并且食用前要徹底加熱。食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件33食品衛(wèi)生微生物學檢驗

金黃色葡萄球菌檢驗食品衛(wèi)生微生物學檢驗

金黃色葡萄球菌檢驗34金黃色葡萄球菌的生物學特性金黃色葡萄球菌的抗原構造及分型簡介金黃色葡萄球菌的致病性金黃色葡萄球菌的流行病學金黃色葡萄球菌的檢驗方法金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測金黃色葡萄球菌的快速檢測方法金黃色葡萄球菌污染的控制金黃色葡萄球菌的生物學特性35一、金黃色葡萄球菌的生物學特性1、形態(tài)與染色：(staphylococcusaureus)

金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8

mm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。革蘭氏染色陽性。

附：金黃色葡萄球菌的顯微照片

金黃色葡萄球菌的染色照片

金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片

金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片一、金黃色葡萄球菌的生物學特性1、形態(tài)與染色：(staph36

金黃色葡萄球菌的顯微照片

典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8

mm左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。

金黃色葡萄球菌的顯微照片37

金黃色葡萄球菌革蘭氏染色顯微照片

金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。革蘭氏染色陽性。

食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件38金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片StaphylococcusaureusEnhancedsemw:7.9micron

金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片39金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片Temx12000digitizedStaphylococcusaureus

金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片402、培養(yǎng)特性：金黃色葡萄球菌營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37℃，最適生長pH7.4。

平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，邊緣整齊、表面光滑、濕潤，直徑一般為1～2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。金黃色葡萄球菌有高度的耐鹽性，可在7.5～15%NaCl肉湯中生長。

2、培養(yǎng)特性：41

食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件423、生化特性：可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產酸不產氣。甲基紅反應陽性，VP反應弱陽性。許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。金黃色葡萄球菌具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。3、生化特性：43金黃色葡萄球菌的抗原構造和分型

對分型進行簡單的了解。１、血清學分型：金黃色葡萄球菌水解，獲得兩種抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。蛋白抗原主要為葡萄球菌A蛋白（SPA)，是一種表面抗原，90%以上金黃色葡萄球菌有此抗原，無特異性。多糖抗原為半抗原，有型特異性。２、噬菌體分型。３、根據(jù)腸毒素分型。４、根據(jù)血漿凝固酶分型。金黃色葡萄球菌的抗原構造和分型44金黃色葡萄球菌的致病性金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。金黃色葡萄球菌的致病力強弱主要取決于其產生的毒素和侵襲性酶：a.溶血毒素：外毒素，分甲、乙、丙、丁、戊五種，能損傷血小板，破壞溶酶體，引起肌體局部缺血和壞死；b.殺白細胞素：可破壞人的白細胞和巨噬細胞；c.血漿凝固酶：當金黃色葡萄球菌侵入人體時，該酶使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面或凝固，阻礙吞噬細胞的吞噬作用。葡萄球菌形成的感染易局部化與此酶有關；d.脫氧核糖核酸酶：金黃色葡萄球菌產生的脫氧核糖核酸酶能耐受高溫，可用來作為依據(jù)鑒定金黃色葡萄球菌；e.腸毒素：金黃色葡萄球菌能產生數(shù)種引起急性胃腸炎的蛋白質性腸毒素，分為A、B、C、D、E及F六種血清型。

金黃色葡萄球菌的致病性45

＊＊＊當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多的食品，如牛奶和乳制品、肉、蛋等，在溫度條件適宜時，經過8～10小時即可產生相當數(shù)量的腸毒素，腸毒素可耐受100℃煮沸30分鐘而不被破壞。人攝食該菌污染的食物2～3小時后可引起中毒癥狀，它引起的食物中毒癥狀是嘔吐和腹瀉。此外，金黃色葡萄球菌還產生溶表皮素、明膠酶、蛋白酶、脂肪酶、肽酶等。＊＊＊當金黃色葡萄球菌污染了含淀粉及水分較多46金黃色葡萄球菌的流行病學金黃色葡萄球菌在自然界中無處不在，空氣、水、灰塵及人和動物的排泄物中都可找到。作為人和動物的常見病原菌，其主要存在于人和動物的鼻腔、咽喉、頭發(fā)上，50%以上健康人的皮膚上都有金黃色葡萄球菌存在。因而，食品受其污染的機會很多。金黃色葡萄球菌的流行病學47金黃色葡萄球菌的流行病學近年來，美國疾病控制中心報告，由金黃色葡萄球菌引起的感染占第二位，僅次于大腸桿菌。金黃色葡萄球菌的流行病學48金黃色葡萄球菌的流行病學特點季節(jié)分布，多見于春夏季；中毒食品種類多，如奶、肉、蛋、魚及其制品。此外，剩飯、油煎蛋、糯米糕及涼粉等引起的中毒事件也有報道。上呼吸道感染患者鼻腔帶菌率83%，所以人畜化膿性感染部位常成為污染源。金黃色葡萄球菌的流行病學特點49金黃色葡萄球菌的流行病學一般說，金黃色葡萄球菌可通過以下途徑污染食品：食品加工人員、炊事員或銷售人員帶菌，造成食品污染；食品在加工前本身帶菌，或在加工過程中受到了污染，產生了腸毒素，引起食物中毒；熟食制品包裝不嚴，運輸過程受到污染；奶?；蓟撔匀橄傺谆蚯菪缶植炕摃r，對肉體其他部位的污染。金黃色葡萄球菌的流行病學50

*金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的33%，加拿大則更多，占45%，我國每年發(fā)生的此類中毒事件也非常多。腸毒素形成條件：存放溫度，在37℃內，溫度越高，產毒時間越短；存放地點，通風不良氧分壓低易形成腸毒素；食物種類，含蛋白質豐富，水分多，同時含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。*金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美51金黃色葡萄球菌的檢驗1、樣品制備按無菌操作取檢樣25g（mL），加入225mL滅菌生理鹽水，固體樣品研磨或置均質器中制成1:10樣品混懸液。

供計數(shù)檢驗時，可按十進位遞增稀釋法將樣品勻液再進行適當稀釋。金黃色葡萄球菌的檢驗52金黃色葡萄球菌的檢驗2、增菌及分離培養(yǎng)

吸取5mL混懸液，接種于7.5%氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯50mL培養(yǎng)基內，36℃±1℃培養(yǎng)24h，轉種血平板和Baird-Parker平板，36℃±1℃培養(yǎng)24h，挑取血平板上金黃色（有時為白色）菌落進行革蘭氏染色鏡檢及血漿凝固酶試驗。金黃色葡萄球菌的檢驗53血平板上金黃色葡萄球菌菌落形態(tài)

金黃色葡萄球球菌的單個菌落在血平板上呈金黃色，有時也為白色，大而突出、圓形、不透明、表面光滑，周圍有溶血圈。

血平板上金黃色葡萄球菌54食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件55金黃色葡萄球菌在BP平板上的菌落形態(tài)

在Baird-Parker瓊脂平板上菌落呈圓形，表面光滑、凸起、濕潤，直徑2～3mm。灰黑色至黑色，有光澤，常有淺色（非白色）的邊緣，周圍繞以不透明圈（沉淀），其外常有一清晰帶。當用接種針觸及菌落時具有黃油樣粘稠感。有時可見到不分解脂肪的菌株，除沒有不透明圈和清晰帶外，其他外觀基本相同。從長期貯存的冷凍或脫水食品中分離的菌落，其黑色常較典型菌落淺些，且外觀可能較粗糙，質地較干燥。金黃色葡萄球菌56食品衛(wèi)生微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗-課件57金黃色葡萄球菌在甘露醇鹽平板上的菌落

Staphylococcusaureusonmannitolsaltsagar

金黃色葡萄球菌583、血漿凝固酶試驗：

吸取1:4新鮮兔血漿0.5mL，放入小試管中，再加入培養(yǎng)24h的金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯培養(yǎng)物0.5mL，振蕩搖勻，置36±1℃溫箱或水浴內，每半小時觀察一次，觀察6h，如呈現(xiàn)凝固,即將試管倒置或傾斜時，呈現(xiàn)