鄰二氮菲分光光度法測定鐵含量課件

2014年12月鄰二氮菲分光光度法

測定鐵含量2014年12月鄰二氮菲分光光度法

測定鐵含量實驗目的通過本實驗了解分光光度法的基本原理和基本方法。2.掌握鄰二氮菲吸光光度法測定鐵的方法。3.學習吸光光度法測定鐵吸收曲線和標準曲線的繪制方法。4.了解分光光度計的構(gòu)造、性能及使用方法。實驗目的通過本實驗了解分光光度法的基本原理和基本方法。一、分光光度法分光光度法(spectrophotometry):根據(jù)物質(zhì)的分子對光的選擇性吸收而建立起來的分析方法，是應用分光光度計測量溶液在某一波長下的吸光度以確定溶液中被測物質(zhì)含量的分析方法。一、分光光度法分光光度法(spectroph透光率（Transmittance）一、分光光度法I0ItIaI0=Ia+

It

透光率入射光透射光T的取值范圍：0.0%~100.0%全部吸收：0.0%全部透射：100%結(jié)論：溶液的透光率越大，表示它對光的吸收越?。环粗?，透光度越小，對光吸收越大。透光率（Transmittance）一、分光光度法I0ItI吸光度吸光度（Absorbance）一、分光光度法實驗證明：溶液吸光度，與溶液濃度、液層厚度和入射光波長等因素有關。I0ItIa入射光透射光吸光度吸光度（Absorbance）一、分光光度法實驗證明：物質(zhì)的吸收光譜一、分光光度法同一種物質(zhì)對不同波長的光的吸收程度不同，吸光度最大處對應的波長為最大吸收波長λmax。不同濃度的同一物質(zhì)，其吸收曲線性質(zhì)相似λmax不變。而對于不同物質(zhì)它們的吸收曲線形狀和λmax不同。吸收曲線可以提供物質(zhì)結(jié)構(gòu)信息，作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)。以波長λ為橫坐標，吸光度A為縱坐標作圖，可得吸收光譜(吸收曲線)物質(zhì)的吸收光譜一、分光光度法同一種物質(zhì)對不同波長的光的吸收程二、

Lambert-Beer定律根據(jù)Lambert-Beer定律數(shù)學表達式：A=εbcb—液層厚度（光程長度，cm）c—是溶液的物質(zhì)的量濃度ε—是摩爾吸光系數(shù)（單位為L·mol-1·cm-1），與入射光波長及物質(zhì)本性有關若溶液組成量度以質(zhì)量濃度(g·L-1)表示，數(shù)學表達式還可以表示為：A=abc，式中a為吸光系數(shù)（單位為L·g-1·cm-1）。二、Lambert-Beer定律根據(jù)Lambert-Bee在分光光度法中，當條件一定時，吸光系數(shù)（ε、a）均為常數(shù)，此時溶液的吸光度（A）與有色物質(zhì)的濃度成正比。三、

比較法求未知品濃度同一實驗中所使用的比色杯厚度b相等，相同的被測物，其a亦相同，將兩式相除得：在分光光度法中，當條件一定時，吸光系數(shù)（ε、a）均為四、標準曲線法求未知品濃度A標

=abc標Y=k·XA標(Y)c標(X)A未c未四、標準曲線法求未知品濃度A標=abc標Y=k·五、分光光度計使用方法五、分光光度計使用方法五、分光光度計使用方法五、分光光度計使用方法722s可見分光光度計預熱20分鐘以上。（接通電源-左側(cè)面長方形按鈕為開關，開啟進行預熱）機器調(diào)零：開蓋調(diào)零模式，按以下步驟操作：將樣品池蓋子打開-（面板上）“模式”按鍵調(diào)到透射比-“0%”按鍵（透射率為零）-關上蓋子按“100%”按鍵（透射率100%），調(diào)零工作結(jié)束。

如果沒有進行測試，樣品池蓋子一定處于開蓋狀態(tài)！！五、分光光度計使用方法722s可見分光光度計預熱20分鐘以上。（接通電源-左側(cè)面長測試樣品步驟：（整個過程樣品池蓋關閉）空白樣品調(diào)零：1號溶液為空白樣品（1號溶液透光率為100%），利用拉桿（輕輕調(diào)節(jié)拉桿即可）使光路對準空白樣品進行調(diào)零，“模式”按鍵調(diào)到透射比-“100%”按鍵（光全部退通過1號溶液，相當于將背景吸光度扣除掉）

注意：只要波長λ有變動，就要進行1號空白樣品調(diào)零操作

調(diào)零結(jié)束后，進入吸光度模式，就可以將樣品調(diào)到與光路對應位置進行吸光度測試。讀取吸光度數(shù)值、記錄。

注意：一定要耐心等待約1分鐘左右，讀數(shù)穩(wěn)定后才可按動按鍵進行0%或100%調(diào)節(jié)操作??！五、分光光度計使用方法測試樣品步驟：（整個過程樣品池蓋關閉）五、分光光度計使用方法鄰二氮菲（鄰菲羅啉）是目前分光光度法測定鐵含量的較好試劑，在pH=3~9的溶液中，試劑與Fe2+生成穩(wěn)定的橙紅色配合物該顯色反應中鐵必須是亞鐵狀態(tài)，因此，在顯色前要加入還原劑，如鹽酸羥胺，反應如下：2Fe3++2NH2OH·HCl+2H2O=2Fe2++N2↑+4H3O++2Cl-六、顯色劑鄰二氮菲（鄰菲羅啉）是目前分光光度法測定鐵含量的較好試劑，在表5-1標準溶液和待測溶液配制實驗序號1（空白）234567標準Fe2+溶液/mL00.200.400.600.801.0010.00（水樣）鹽酸羥胺/mL0.500.500.500.500.500.500.50鄰二氮菲/mL1.001.001.001.001.001.001.00醋酸鈉溶液/mL2.502.502.502.502.502.502.50V總（稀釋）/mL25.0025.0025.0025.0025.0025.0025.00c稀釋（Fe2+）/mmol·L-1表5-2吸收光譜的測定λ/nm450460470480490500510520530540550560Aλmax/nm用4號樣品找到具有最大吸光度的波長后，可在其左右5nm處，再測一下。七、實驗步驟表5-1標準溶液和待測溶液配制實驗序號1（空白）23456選擇最大吸收光波長λmax為入射光波長，以調(diào)節(jié)1號溶液透射比100%后，測出2-7號溶液的吸光度：六、實驗步驟表5-3標準溶液和待測溶液的吸光度數(shù)據(jù)記錄容量瓶編號1（空白）234567（水樣）c稀釋（Fe2+）/mmol·L-10.00？？吸光度A0.00根據(jù)標準曲線讀出濃度數(shù)值選擇最大吸收光波長λmax為入射光波長，以調(diào)節(jié)1號溶液透射比七、數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果分析（1）繪制吸收光譜并確定λmax：根據(jù)表5-2所記錄的數(shù)據(jù)，以波長為橫坐標，吸光度為縱坐標在坐標紙上繪制吸收光譜，從而找出測量用的最大吸收波長λmax。吸收光譜：（附圖）（2）繪制標準曲線：根據(jù)表5-1所記錄的數(shù)據(jù)，以標準Fe2+離子的濃度（μmol·L-1）為橫坐標，吸光度（A）為縱坐標繪制濃度對吸光度的標準曲線。標準曲線：（附圖）直線七、數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果分析（1）繪制吸收光譜并確定λmax：根據(jù)（3）待測溶液中Fe3+（或Fe2+）離子濃度的確定：根據(jù)所測的待測溶液的吸光度，利用比較法和標準曲線法分別計算出原未知溶液Fe3+（或Fe2+）濃度（mg·L-1）。標準曲線：（附圖）

1）標準曲線法：標準曲線上直接讀出Fe2+的含量為＿＿＿（mg·L-1）；原水樣中鐵離子含量為＿＿＿＿＿＿（mg·L-1）。2）比較法：所選取Fe2+標準溶液的吸光度＿＿＿＿＿＿；水樣的吸光度＿＿＿＿＿＿＿＿＿；原水樣中鐵離子含量為＿＿＿＿＿＿（mg·L-1）。七、數(shù)據(jù)記錄與結(jié)果分析（3）待測溶液中Fe3+（或Fe2+）離子濃度的確定：根據(jù)所注意吸量管上“吹或快”字注意吸量管上“吹或快”字鄰二氮菲分光光度法測定鐵含量課件2014年12月鄰二氮菲分光光度法

測定鐵含量2014年12月鄰二氮菲分光光度法

測定鐵含量實驗目的通過本實驗了解分光光度法的基本原理和基本方法。2.掌握鄰二氮菲吸光光度法測定鐵的方法。3.學習吸光光度法測定鐵吸收曲線和標準曲線的繪制方法。4.了解分光光度計的構(gòu)造、性能及使用方法。實驗目的通過本實驗了解分光光度法的基本原理和基本方法。一、分光光度法分光光度法(spectrophotometry):根據(jù)物質(zhì)的分子對光的選擇性吸收而建立起來的分析方法，是應用分光光度計測量溶液在某一波長下的吸光度以確定溶液中被測物質(zhì)含量的分析方法。一、分光光度法分光光度法(spectroph透光率（Transmittance）一、分光光度法I0ItIaI0=Ia+

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透光率入射光透射光T的取值范圍：0.0%~100.0%全部吸收：0.0%全部透射：100%結(jié)論：溶液的透光率越大，表示它對光的吸收越??；反之，透光度越小，對光吸收越大。透光率（Transmittance）一、分光光度法I0ItI吸光度吸光度（Absorbance）一、分光光度法實驗證明：溶液吸光度，與溶液濃度、液層厚度和入射光波長等因素有關。I0ItIa入射光透射光吸光度吸光度（Absorbance）一、分光光度法實驗證明：物質(zhì)的吸收光譜一、分光光度法同一種物質(zhì)對不同波長的光的吸收程度不同，吸光度最大處對應的波長為最大吸收波長λmax。不同濃度的同一物質(zhì)，其吸收曲線性質(zhì)相似λmax不變。而對于不同物質(zhì)它們的吸收曲線形狀和λmax不同。吸收曲線可以提供物質(zhì)結(jié)構(gòu)信息，作為物質(zhì)定性分析的依據(jù)。以波長λ為橫坐標，吸光度A為縱坐標作圖，可得吸收光譜(吸收曲線)物質(zhì)的吸收光譜一、分光光度法同一種物質(zhì)對不同波長的光的吸收程二、

Lambert-Beer定律根據(jù)Lambert-Beer定律數(shù)學表達式：A=εbcb—液層厚度（光程長度，cm）c—是溶液的物質(zhì)的量濃度ε—是摩爾吸光系數(shù)（單位為L·mol-1·cm-1），與入射光波長及物質(zhì)本性有關若溶液組成量度以質(zhì)量濃度(g·L-1)表示，數(shù)學表達式還可以表示為：A=abc，式中a為吸光系數(shù)（單位為L·g-1·cm-1）。二、Lambert-Beer定律根據(jù)Lambert-Bee在分光光度法中，當條件一定時，吸光系數(shù)（ε、a）均為常數(shù)，此時溶液的吸光度（A）與有色物質(zhì)的濃度成正比。三、

比較法求未知品濃度同一實驗中所使用的比色杯厚度b相等，相同的被測物，其a亦相同，將兩式相除得：在分光光度法中，當條件一定時，吸光系數(shù)（ε、a）均為四、標準曲線法求未知品濃度A標

=abc標Y=k·XA標(Y)c標(X)A未c未四、標準曲線法求未知品濃度A標=abc標Y=k·五、分光光度計使用方法五、分光光度計使用方法五、分光光度計使用方法五、分光光度計使用方法722s可見分光光度計預熱20分鐘以上。（接通電源-左側(cè)面長方形按鈕為開關，開啟進行預熱）機器調(diào)零：開蓋調(diào)零模式，按以下步驟操作：將樣品池蓋子打開-（面板上）“模式”按鍵調(diào)到透射比-“0%”按鍵（透射率為零）-關上蓋子按“100%”按鍵（透射率100%），調(diào)零工作結(jié)束。

如果沒有進行測試，樣品池蓋子一定處于開蓋狀態(tài)?。∥?、分光光度計使用方法722s可見分光光度計預熱20分鐘以上。（接通電源-左側(cè)面長測試樣品步驟：（整個過程樣品池蓋關閉）空白樣品調(diào)零：1號溶液為空白樣品（1號溶液透光率為100%），利用拉桿（輕輕調(diào)節(jié)拉桿即可）使光路對準空白樣品進行調(diào)零，“模式”按鍵調(diào)到透射比-“100%”按鍵（光全部退通過1號溶液，相當于將背景吸光度扣除掉）

注意：只要波長λ有變動，就要進行1號空白樣品調(diào)零操作

調(diào)零結(jié)束后，進入吸光度模式，就可以將樣品調(diào)到與光路對應位置進行吸光度測試。讀取吸光度數(shù)值、記錄。

注意：一定要耐心等待約1分鐘左右，讀數(shù)穩(wěn)定后才可按動按鍵進行0%或100%調(diào)節(jié)操作??！五、分光光度計使用方法測試樣品步驟：（整個過程樣品池蓋關閉）五、分光光度計使用方法鄰二氮菲（鄰菲羅啉）是目前分光光度法測定鐵含量的較好試劑，在pH=3~9的溶液中，試劑與Fe2+生成穩(wěn)定的橙紅色配合物該顯色反應中鐵必須是亞鐵狀態(tài)，因此，在顯色前要加入還原劑，如鹽酸羥胺，反應如下：2Fe3++2NH2OH·HCl+2H2O=2Fe2++N2↑+4H3O++2Cl-六、顯色劑鄰二氮菲（鄰菲羅啉）是目前分光光度法測定鐵含量的較好試劑，在表5-1標準溶液和待測溶液配制實驗序號1（空白）234567標準Fe2+溶液/mL00.200.400.600.801.0010.00（水樣）鹽酸羥胺/mL0.500.500.500.500.500.500.50鄰二氮菲/mL1.001.001.001.001.001.001.00醋酸鈉溶液/mL2.502.502.502.502.502.502.50V總（稀釋）/mL25.0025.0025.0025.0025.0025.0025.00c稀釋（Fe2+）/mmol·L-1表5-2吸收光譜的測定λ/nm450460470480490500510520530540550560Aλmax/nm用4號樣品找到具有最大吸光度的波長后，可在其左右5nm處，再測一下。七、實驗步驟表5-1標準溶液和待測溶液配制實驗序號1（空白）23456選擇最大吸收光波長λmax為入射光波長，以調(diào)節(jié)1號溶液透射比100%后，測出2-7號溶液的吸光度：六、實驗步驟表5-3標準溶液和待測溶液的吸光度數(shù)據(jù)記錄容量瓶編號1（空白）