隔山消對藥物所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響

隔山消對藥物所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響【關(guān)鍵詞】隔山消摘要：目的討論隔山消對藥物所致小鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙的作用，并初步討論其作用機(jī)理。方法50只昆明小鼠隨機(jī)平均分為空白對照組、模型組、陽性對照組(刺五加注射液)、隔山消高、低劑量組，各組動物在作相應(yīng)的處理之后，于rris水迷宮實(shí)驗(yàn)中測試其埋伏期。各組動物完成行為實(shí)驗(yàn)后頸椎脫臼處死。在低溫下取其腦組織，用羥胺比色法測定腦組織中Ah含量和Ah-E的活性。結(jié)果模型組動物達(dá)岸時間(即埋伏期)明顯延長，說明空間學(xué)習(xí)記憶產(chǎn)生障礙；陽性對照組，隔山消高、低劑量組埋伏期均明顯低于模型組，且第3天成績好于空白對照組。三者互相比擬，隔山消高劑量組第3天成績最好。隔山消高，低劑量組的Ah含量明顯高于模型組，而隔山消上下劑量組的AhE活性均略高于模型組，且均低于陽性對照組。結(jié)論隔山消對于藥物所致的空間學(xué)習(xí)記憶障礙有一定的作用。關(guān)鍵詞：隔山消；空間記憶障礙；rris水迷宮實(shí)驗(yàn)；小鼠TheEffetsfynahuuilfrdii(axi)HeslntheLearningeryDisrderausedbyDruginuseAbstrat:bjetiveTinvestigatetheeffetsfynahuuilfrdii(axi)Heslntheusespaelearningerydisrderausedbydrugandtinvestigatetheehanisfeffetin.ethds50useererandlydividedintblankathedgrup,delgrup,psitiventrlgrup(anyprikleaanthpanaxrtinjetin),ynahuuilfrdiihighdsagegrup(15g/kg)andldsagegrup(7.5g/kg).Eahgrupasdealithseverally,theneasuredthelatentperidsinrrisaterazetest.TheusefeahgrupereputtdeathbydislatingthEirervialvertebrasafterthebehavirtests.Thebrainashydrxylainelrietriethd.ResultsThereahingbanktie(latentperid)fdelgrupprlngedbviusly,hihshedthespaelearingerydisrder;Thelatentperidsfpsitiventrlgrup,ynahuuilfrdiihighdsagegrupandldsagegrupprlngedntrlgrup,ynahuuilfrdiihighdsagegrupasthebestfthethreeabve.ThententfAhfynahuuilfrdiihighdsagegrupandldsagegrupasvisiblyhighdsagegrupandldsagegrupereappreiablyhigherthanthatfdelgrup,andbthftheerelerthanfpsitiventrlgrup.nlusinTheresultsindiatedtheynahuuilfrdii(axi)Heslhaseffetnthespaelearingerydisrderausedbydrug.Keyrds:ynahuuilfrdii(axi)Hesl;Learningerydisrder;rrisaterazetest;use學(xué)習(xí)記憶屬高級神經(jīng)活動。學(xué)習(xí)和記憶的根本過程大致可分為三個階段：獲得，穩(wěn)固和再現(xiàn)。理解學(xué)習(xí)記憶過程，進(jìn)步學(xué)習(xí)記憶才能，無疑是當(dāng)今社會一個值得關(guān)注的課題。根據(jù)學(xué)習(xí)記憶的生理生化根底，目前多項(xiàng)選擇用一些化學(xué)藥品致記憶損傷。從而復(fù)制出學(xué)習(xí)記憶障礙模型，以研究各種藥物對某些藥物所致的學(xué)習(xí)記憶障礙方面的改善作用。近年來，我國傳統(tǒng)的中藥越來越受到重視，中藥在許多疾病的治療上，顯示出的優(yōu)越性是許多西藥所不及的。隔山消ynahuuilfrdii(axi)Hesl又名白首烏，是祖國傳統(tǒng)中藥，具有養(yǎng)血益肝，固腎益精，烏須黑發(fā)和延年益壽的成效。如今研究發(fā)現(xiàn)白首烏中含有多種有效成分，具有抗腫瘤，抗衰老等多方面的藥理活性，其主要成分為羥基馬甾烷酯苷，其中富含磷脂類成分，可以抗腫瘤抗衰老，而且對腦細(xì)胞具有保護(hù)作用。據(jù)此設(shè)計本實(shí)驗(yàn)，研究隔山消對藥物所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響，并測定其大腦中Ah含量和Ah-E活性的改變，以初步討論其可能的作用機(jī)理。1材料和方法1.1材料1.1.1動物與藥品選用成年安康的昆明種小鼠，雌雄各半，體重20～30g，由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。隔山消，中藥原材料，購自湖北省中藥材公司，由湖北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)部進(jìn)展加工粉粹過篩120目，實(shí)驗(yàn)時取7g粉末，參加45g純潔水，文火加熱至沸騰，靜置10in后，過濾兩次取其過濾液。4℃保存，灌胃前適當(dāng)加溫。刺五加注射液(有效成分黃酮5g/l，批號ZZ5397黑衛(wèi)藥準(zhǔn)字(1990)第202216號)，黑龍江烏蘇里江制藥。戊巴比妥鈉粉劑，上海試劑分購度試劑廠，批號：860603，用蒸餾水配置成1.5%溶液，供腹腔注射。溴化乙酰膽堿，其他試劑均為市售分析純或化學(xué)純。1.1.2儀器rris水迷宮系統(tǒng)：水桶直徑76，桶高36，水深12.9，平安島高：11.4，計算機(jī)軟件系統(tǒng)：泰盟Bi2000實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)；攝像機(jī)；SNY；臺式高速冷凍離心機(jī)TL16R(上海離心機(jī)研究所)；722型分光光度計；上海申化儀表自控公司產(chǎn)品。1.2方法1.2.1動物分組與模型的建立將50只小鼠隨機(jī)分為5組，每組10只，①空白對照組：不給予任何藥物，于每次訓(xùn)練前1h灌胃(NS，0.5l/20g)②模型組：于實(shí)驗(yàn)前3d開場每天腹腔注射戊巴比妥鈉1次(劑量：1.5g/l,0.1l/10g體重)。開場實(shí)驗(yàn)后，每次訓(xùn)練前30in戊巴比妥鈉腹腔注射(劑量同上)③陽性對照組：于實(shí)驗(yàn)前6d開場每天腹腔注射1次刺五加注射液(劑量：1.5g/l,0.1l/10g體重)。開場實(shí)驗(yàn)后于訓(xùn)練前1h腹腔注射剌五加注射液，劑量同上。④隔山消低、高劑量組：實(shí)驗(yàn)開場前6d開場每天灌胃(隔山消，7.5，15g/kg)實(shí)驗(yàn)開場后每天提早1h灌胃。其中，陽性對照組，隔山消低、高劑量組在實(shí)驗(yàn)開場后，于每天訓(xùn)練前30in腹腔注射戊巴比妥鈉1次(劑量：1.5g/l,0.1l/10g體重)。1.2.2行為學(xué)實(shí)驗(yàn)方法用過圓心的兩條互相垂直線分水迷宮為A，B，，D4個象限，平安島位于A象限，位置固定。每天將小鼠依次從B，，D區(qū)面朝桶壁放入水迷宮中，記錄其自下水到抵達(dá)并停留在平安島(A區(qū))上所用的時間，即埋伏期。以120s為限，假設(shè)此時間內(nèi)動物不能到達(dá)平安島，在將此小鼠安置于平安島上10s，讓其熟悉環(huán)境。1.2.3Ah含量和Ah-E活性測定實(shí)驗(yàn)完畢后，于冰臺上以頸椎脫臼法處死，并迅速取出全腦，去其腦干及小腦，用水生理鹽漂洗，濾紙吸干后稱重，樣品以冰生理鹽水配制成20%勻漿液，4℃4500r/in離心5in，取其上清液，按羥胺比色法進(jìn)展Ah含量，Ah-E活性測定。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.1.3統(tǒng)計學(xué)處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用±s表示，各組間差異用t檢驗(yàn)進(jìn)展統(tǒng)計學(xué)分析。2結(jié)果2.1隔山消對戊巴比妥鈉所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響連續(xù)3d的水迷宮試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，模型組的埋伏期成績明顯延長，說明模型復(fù)制成功。陽性對照組第3天的埋伏期明顯縮短，與模型組比擬(P＜0.05)；隔山消高劑量組第3天的埋伏期與模型組比擬(P＜0.01)；隔山消低劑量組第3天的埋伏期與模型組比擬(P＜0.05)。結(jié)果見表1，圖1。表1隔山消對戊巴比妥鈉所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響(略)圖1隔山消對戊巴比妥鈉所致小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的影響2.2隔山消對小鼠腦組織Ah含量，Ah－E活性的影響在低溫下取小鼠腦組織勻漿，用羥胺比色法測定各組小鼠腦組織中Ah含量及AhE活性，其結(jié)果顯示：隔山消高，低劑量組小鼠腦組織中的Ah含量明顯高于模型組小鼠腦組織中的Ah含量(P≤0.01)，隔山消高，低劑量組小鼠腦組織中的AhE活性均高于模型組。結(jié)果見表2，圖2～3。表2隔山消對戊巴比妥鈉所致學(xué)習(xí)記憶障礙〔略〕3討論隔山消，又名白首烏，是傳統(tǒng)補(bǔ)腎良藥，具有養(yǎng)血益肝，固腎益精，烏須黑發(fā)和延年益壽的成效。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)該中藥含有多種有效成分，具有抗腫瘤，抗衰老等多方面的藥理活性，其主要成分為羥基馬甾烷酯苷，其中富含磷脂類成分，可以抗腫瘤抗衰老，而且對腦細(xì)胞具有保護(hù)作用。中醫(yī)認(rèn)為“腎藏精，精生髓，通于腦〞，“腦為髓海〞，故腦功能與腎精盛衰親密相關(guān)。補(bǔ)腎可益精生髓，健腦促智，中醫(yī)藥臨床上運(yùn)用補(bǔ)腎法延緩衰老，防止腦功能減退有悠久歷史。而用隔山消對抗藥物引起的空間學(xué)習(xí)記憶障礙尚未見報道。圖2隔山消對戊巴比妥鈉所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠腦組織Ah含量的影響圖3隔山消對戊巴比妥鈉所致學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠腦組織AhE活性的影響本實(shí)驗(yàn)從動物行為學(xué)實(shí)驗(yàn)和生化測定實(shí)驗(yàn)兩方面討論隔山消在對抗藥物引起的空間記憶障礙的作用。先用藥物造成小鼠空間學(xué)習(xí)記憶障礙，即制作動物一種記憶障礙的模型，采用水迷宮實(shí)驗(yàn)方法，觀察藥物對動物行為功能的影響，同時用生化測定方法，初步分析藥物作用機(jī)制。為獲得穩(wěn)定可靠的模型，需注意以下問題：實(shí)驗(yàn)環(huán)境對實(shí)驗(yàn)結(jié)果有非常大的影響。本實(shí)驗(yàn)宜在隔音或半隔音室內(nèi)進(jìn)展，同內(nèi)溫度，濕度光照度應(yīng)適宜并保持一致。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)物品擺放及實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中所處的位置保持一致。本實(shí)驗(yàn)觀察到上午與下午進(jìn)展的測試會有所差異，可能與上、下午小鼠分泌的激素或神經(jīng)甾體的量有關(guān)。光線的強(qiáng)弱、室內(nèi)物品的擺放，和實(shí)驗(yàn)人員站位對小鼠測試也有較大影響。小鼠在一定的空間、光線下訓(xùn)練，經(jīng)條件反射形成記憶，改變上述實(shí)驗(yàn)條件，會影響條件反射的形成，從而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果有較大差異。通過水迷宮實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，陽性對照組(刺五加組)和隔山消組(高、低劑量組)對小鼠尋找平臺的埋伏期均明顯小于模型組。結(jié)果顯示，隔山消對藥物所致的空間學(xué)習(xí)記憶障礙，有明顯改善作用。Ah是腦內(nèi)的經(jīng)典神經(jīng)遞質(zhì)，與認(rèn)識、學(xué)習(xí)、記憶等大腦高級神經(jīng)功能有關(guān)。學(xué)習(xí)記憶任務(wù)的完成伴隨著腦內(nèi)的Ah的變化。AhE是Ah的分解酶，它的活力變化可間接反映腦內(nèi)Ah含量的關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)采用羥胺比色法測定腦組織乙酰膽堿和膽堿酯酶的含量，結(jié)果提示，模型組小鼠腦組織中Ah含量和Ah-E活性均低于正常對照組和給藥組鼠，隔山消組小鼠腦組織中Ah含量及AhE活性明顯高于模型組。說明隔山消對戊巴比妥鈉所致的小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善可能與影響中樞膽堿能系統(tǒng)功能有一定關(guān)系。大腦的空間學(xué)習(xí)記憶才能涉及到多種機(jī)制參與，而不是單一的膽堿能系統(tǒng)來發(fā)揮作用的，因此有關(guān)其他作用機(jī)理有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn)：［1］elhartD,