乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝課件

乙肝疫苗的制備(zhìbèi)第一頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝乙肝疫苗是用于預(yù)防乙肝的特殊藥物。疫苗接種后，可刺激免疫系統(tǒng)產(chǎn)生保護(hù)性抗體，這種抗體存在于人的體液之中，乙肝病毒一旦出現(xiàn)，抗體會(huì)立即作用(zuòyòng)，將其清除，阻止感染，并不會(huì)傷害肝臟，從而使人體具有了預(yù)防乙肝的免疫力，從而達(dá)到預(yù)防乙肝感染的目的。接種乙肝疫苗是預(yù)防乙肝病毒感染的最有效方法。

第二頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝基因工程乙肝疫苗是乙肝表面抗原（HbsAg）亞單位疫苗，它系采用現(xiàn)代生物技術(shù)將乙肝病毒表達(dá)表面抗原的基因進(jìn)行質(zhì)粒構(gòu)建，克隆進(jìn)入啤酒酵母菌或CHO細(xì)胞（中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞）中，通過培養(yǎng)這種重組酵母菌或CHO細(xì)胞來表達(dá)乙肝表面抗原亞單位。發(fā)酵后經(jīng)過細(xì)胞破碎和一系列微濾、超濾、硅膠吸附(xīfù)、洗脫等工序，再經(jīng)過疏水層析，可使產(chǎn)品抗原蛋白純度達(dá)99%以上。第三頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝乙肝疫苗的制造(zhìzào)工藝1.目的基因的獲取(huòqǔ)2.工程菌的構(gòu)建3.目的基因的表達(dá)4.蛋白質(zhì)的分離純化第四頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝

目的基因的獲取編碼乙型肝炎表面抗原的基因的獲取一般的目的基因的獲取方法有：反轉(zhuǎn)錄法化學(xué)合成法反轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)法工程菌的構(gòu)建(ɡòujiàn)CHO(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢）細(xì)胞的特點(diǎn)①具有準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄后修飾功能,表達(dá)的糖基化藥

物蛋白在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學(xué)功能方面最接近于天然蛋白分子②具有產(chǎn)物胞外分泌功

能,便于下游產(chǎn)物分離純化;③具有重組基因的高效

擴(kuò)增和表達(dá)能力;④具有貼壁生長(zhǎng)特性,且有較高的

耐受剪切力和滲透壓能力,可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng),表達(dá)水平較高;⑤CHO細(xì)胞屬于成纖維細(xì)胞(fibrob2last),很少分泌自身的內(nèi)源蛋白,利于外源蛋白的后分離目的基因的表達(dá)蛋白質(zhì)的分離純化

細(xì)胞破碎→固液分離→濃縮與初步純化→高度純化→成品加工第五頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝生產(chǎn)工藝控制(kòngzhì)基因工程乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝包括發(fā)酵、提取、純化、吸附、配制、分裝等工序。生產(chǎn)工藝中采用世界一流的發(fā)酵罐，通過全自動(dòng)控制，提供酵母菌最優(yōu)生長(zhǎng)條件，發(fā)酵后經(jīng)過細(xì)胞破碎和一系列微濾、超濾、硅膠吸附、洗脫等工序，再經(jīng)過疏水層析，可使產(chǎn)品抗原蛋白純度達(dá)99%以上所有工藝設(shè)備可自動(dòng)清洗、自動(dòng)滅菌，有效地減少了種種(zhǒngzhǒng)人為因素的干擾，確保生產(chǎn)穩(wěn)定和質(zhì)量一致性。第六頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝蛋白質(zhì)的分離(fēnlí)純化

第七頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝細(xì)胞(xìbāo)破碎

微濾

超濾

發(fā)酵結(jié)束(jiéshù)后，通過過濾或離心，使酵母與發(fā)酵液分離，然后細(xì)胞通過高壓勻漿機(jī)破碎，釋放出抗原。酵母的細(xì)胞壁較厚，比大腸桿菌難破碎，可在高壓勻漿機(jī)內(nèi)施加幾千個(gè)大氣壓力，通過針形閥突然降壓到零，使細(xì)胞破碎。在細(xì)胞破碎前加入蛋白酶抑制劑以防抗原被分解。細(xì)胞破碎后加入表面活性劑使抗原溶解。粗細(xì)胞裂解物用0.2um中空纖維(xiānwéi)柱進(jìn)行微濾。抗原和大部分低分子量宿主細(xì)胞內(nèi)含物通過濾膜，細(xì)胞碎片被膜攔截。濾液再進(jìn)行超濾，此時(shí)抗原被膜攔截而低分子量宿主細(xì)胞內(nèi)含物通過濾膜除去。第八頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝疏水柱層析介質(zhì)：ButylSSepharoseFF加入適量硫酸銨，調(diào)節(jié)電導(dǎo)率與柱層析平衡液電導(dǎo)率相等按照平衡柱床、上樣吸附、平衡液洗柱、降低硫酸銨濃度解析(jiěxī)、清柱再生程序?qū)游鲫庪x子交換柱層析介質(zhì)：DEAESepharoseFFHBsAg活性蛋白(dànbái)經(jīng)SephadexG-25柱脫鹽換液，使緩沖鹽系統(tǒng)的PH、離子強(qiáng)度和IEC平衡液一致按照平衡柱床、丄樣吸附、氯化鈉濃度梯度分段洗脫、清柱再生程序?qū)游瞿z過濾柱層析介質(zhì)：Sepharose4FF超濾濃縮到適當(dāng)體積按照平衡柱床、丄樣、洗脫(xǐtuō)程序?qū)游龅诰彭?yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝

無(wú)菌過濾(guòl(fā)ǜ)氫氧化鋁(qīnɡyǎnɡhuàhuà)共沉淀

分裝(fēnzhuānɡ)純化后的抗原再與氫氧化鋁共沉淀，在共沉淀時(shí)，抗原吸附在氫氧化鋁上。疫苗的穩(wěn)定性較差，一般在2~8℃下能保存12個(gè)月，但當(dāng)溫度升高后，效力很快降低。在37℃下，許多疫苗只能穩(wěn)定幾天或者幾個(gè)小時(shí)，非常不利于在室溫下運(yùn)輸。為了使疫苗的穩(wěn)定性提高，可用凍干的方法使之干燥。收取到的HBsAg除菌過濾，即為純品第十頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝臨床(línchuánɡ)應(yīng)用乙肝疫苗自1979年問世以來，經(jīng)過20多年的大規(guī)模應(yīng)用和觀察，至今尚未見到有關(guān)注射后引起嚴(yán)重不良反應(yīng)的報(bào)道，只有少數(shù)(shǎoshù)人出現(xiàn)接種部位紅腫、硬結(jié)、疼痛、手臂酸重或發(fā)熱、惡心、嘔吐、乏力、皮疹等與一般疫苗接種大致相仿的輕微反應(yīng)，多于1-3天內(nèi)不治自愈。由于乙肝疫苗屬血源性的，在制備過程中純化與滅活程序十分嚴(yán)密，故不會(huì)產(chǎn)生像破傷風(fēng)等動(dòng)物血清疫苗可能造成的過敏反應(yīng)，也不會(huì)感染上乙肝、艾滋病及其他傳染性疾病。與其他疫苗同時(shí)接種亦未出現(xiàn)相互干擾作用。因此，可以說，乙肝疫苗是安全可靠的預(yù)防疫苗，注射前也不必皮試。第十一頁(yè)，共十二頁(yè)。乙肝疫苗的生產(chǎn)工藝內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)乙肝疫苗的制備。編碼乙型肝炎表面抗原的基因的獲取。一般的目的基因的獲取方法有：。①具有準(zhǔn)確的轉(zhuǎn)錄后修飾(xiūshì)功能,表達(dá)的糖基化