放線菌、霉菌形態(tài)觀察

（一）放線菌形態(tài)的觀察一、目的要求學習掌握觀察放線菌形態(tài)的基本方法初步了解放線菌的形態(tài)特征二、基本原理放線菌是指能形成分枝絲狀或菌絲的一類革蘭氏陽性細菌。常見放線菌大多能形成菌絲體，為了觀察放線菌的形態(tài)特征，人們設計了各種培養(yǎng)和觀察方法，這些方法的主要目的是為了盡可能保持放線菌自然生長條件下的形態(tài)特征，本實驗介紹其中幾種常用的方法扦片法將放線菌接種在瓊脂平板上，扦上滅菌蓋玻片后培養(yǎng)，使放線菌絲沿著培養(yǎng)基表面與蓋玻片的交接處生長而附著在蓋玻片上，觀察時，輕輕取出蓋玻片，置于載玻片上直接鏡檢。這

種方法可以觀察到放線菌自然生長狀態(tài)下的特

征，而且便于不同生長期的形態(tài)。玻璃紙法玻璃紙是一種透明的半透膜，將滅菌的玻璃紙覆蓋在瓊脂平板表面，然后將放線菌接種于玻璃紙上，經培養(yǎng)，放線菌在玻璃紙上生長形成菌苔。觀察時，揭下玻璃紙，固定在載玻片上直接鏡檢，這種方法既能保持放線菌的自然生長，也便于觀察不同生長期的形態(tài)特征。印片法將要觀察的放線菌的菌落或菌苔，先印在載玻片上，經染色后觀察，這種方法主要用于觀察孢子絲的形態(tài)，孢子的排列及其形狀等。方法簡便，但形態(tài)特征可能有所改變。三、材料與器材菌種：自行分離到的土壤放線菌培養(yǎng)基：

1號瓊脂培養(yǎng)基.載玻片，接種鏟，番紅染液，顯微鏡等。四、實驗操作印片：用接種鏟或解剖刀將平板上的菌苔連同培養(yǎng)

基切下一小塊，菌面朝上放在一載玻片上，另取一潔凈載玻片置于火焰上微熱后，蓋在菌苔上，輕輕按壓，使培養(yǎng)物（氣絲、孢子絲或孢子）粘附（“印”）在后一塊載玻片的

，有印跡的一面朝上，通過火焰

2~3次固定。染色：用番紅覆蓋印跡，染色約1min后水洗。鏡檢：乘水未干時蓋上蓋玻片，用顯微鏡觀察。注意事項鏟菌苔時注意不要將瓊脂鏟得太厚，以免影響壓片。玻片不要太熱，以免瓊脂融化，干擾放線菌的附著。印片完畢后注意將印有放線菌的一面朝上進行固定。斜面接種放線菌：挑取

平板上的單菌落，移接到三支斜面上，每個斜面只能接種一個菌落(1)接種滅菌(2)開啟棉塞(3)管口滅菌(4)挑起菌苔(5)接種－從斜面底部到頂端Z字型劃線(6)塞好棉塞實驗報告繪圖描述所觀察到的放線菌形態(tài)。鏡檢時，你如何區(qū)分放線菌的基內菌絲和氣生菌絲？某同學在印片法觀察孢子絲時，鏡檢發(fā)現(xiàn)孢子分散，未發(fā)現(xiàn)完整的孢子絲，試分析原因并給出改進方法。（二）霉菌的形態(tài)觀察一、目的要求學習觀察霉菌的基本方法初步了解常見霉菌的基本形態(tài)特征。二、簡介

霉菌可以產生分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。霉菌菌絲體和孢子的形態(tài)特征是識別不同種類霉菌的重要依據。觀察方法—直接制片觀察：置于乳酸石炭酸棉藍染液中觀察。特點：細胞不變形；可防腐，不易干燥，可保存較長時間；能防止孢子飛散；染液的藍色可增強反差?！d玻片培養(yǎng)觀察：將培養(yǎng)基瓊脂置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養(yǎng)，培養(yǎng)一定時間后，將載玻片直接置于顯微鏡下觀察。特點：可保持霉菌自然生長狀態(tài)；便于觀察不同生長期的霉菌?！ＡЪ埮囵B(yǎng)觀察：與放線菌培養(yǎng)方法相似。三、器材1、菌種：曲霉(Aspergillus

sp.)、青霉2、試劑：乳酸石炭酸棉藍染色液3、用具：無菌吸管，平皿，載玻片，蓋玻片，解剖針，顯微鏡等四、操作步驟直接制片觀察取潔凈載玻片，滴一滴乳酸石炭酸棉藍染色液于載片

，用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置于液滴中，再細心地將菌絲挑散開，然后

地蓋上蓋玻片，注意不要產生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡

觀察，必要時

高倍鏡。觀察曲霉時，注意觀察其菌絲（有橫隔）、足細胞，分生孢子梗、頂囊、小梗（形狀、層數及在頂囊上的著生情況），分生孢子的著生情況。觀察青霉時，注意觀察其菌絲（有橫隔），分生孢子梗，帶狀枝（小梗的輪數及對稱性），分生孢子的著生情況。Observe

the

prepared

slides

ofP

i

illi單輪青霉群

帚狀枝由單輪小梗構成。對稱二輪青霉群

帚狀枝兩次分枝，對主梗呈對稱著生。多輪青霉群

帚狀枝多次分枝，并對稱。不對稱青霉群

帚狀枝兩次或兩次以上分枝，不對稱。Observe

the

prepared

slides

of

Aspergillus

sp.分生孢子挑菌和制片時要細心，盡可能保持霉菌自然生長狀態(tài)。加蓋玻片時切勿壓入氣泡，以免影響觀察。實