實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)主要內(nèi)容體液免疫及細(xì)胞免疫檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)自身免疫檢測(cè)主要內(nèi)容體液免疫及細(xì)胞免疫檢測(cè)第八章前言

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)按其發(fā)展水平可劃分為三個(gè)階段：（1）常規(guī)形態(tài)學(xué)檢查、生物化學(xué)診斷（2）免疫學(xué)診斷,自動(dòng)化檢測(cè)（3）分子生物學(xué)(基因)診斷三者相互補(bǔ)充，各有其應(yīng)用范圍。其中，免疫學(xué)診斷因其敏感特異、簡(jiǎn)便易行、穩(wěn)定可靠而被廣泛應(yīng)用，是實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的重要組成部分，可為臨床診斷、鑒別診斷、療效觀察和預(yù)后判斷提供特異和敏感的信息。

第八章前言實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)按其發(fā)展水平可劃分為三個(gè)階段：第一節(jié)血清免疫球蛋白檢測(cè)一、免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）的概念

免疫球蛋白是指具有抗體活性和(或)抗體樣結(jié)構(gòu)的球蛋白，由漿細(xì)胞產(chǎn)生，存在于機(jī)體的血液、體液、外分泌液和某些細(xì)胞的膜上，具有特異性識(shí)別抗原的功能，且必須與抗原結(jié)合后才能啟動(dòng)效應(yīng)功能。

第一節(jié)血清免疫球蛋白檢測(cè)一、免疫球蛋白（immunogl實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件

二、血清免疫球蛋白分類(一)正常血清免疫球蛋白（五大類）：有抗體活性IgG含量最多、比例最高、唯一通過(guò)胎盤(pán)的主力抗體。IgA分泌型IgA（SIgA）主控黏膜局部免疫，存在于外

分泌液中（如唾液、淚液、母乳等）。IgM分子量最大、凝集和溶解力最強(qiáng)。IgD含量很低功能不祥。IgE含量最低、親細(xì)胞、參與變態(tài)反應(yīng)（如寄生蟲(chóng)感染、過(guò)敏性疾病等）。

二、血清免疫球蛋白分類

(二)異常血清免疫球蛋白:無(wú)抗體活性M蛋白（Mprotein）的概念：也稱單克隆免疫球蛋白，是由單克隆B細(xì)胞增殖產(chǎn)生的具有相同結(jié)構(gòu)和電泳遷移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。血清中檢測(cè)到M蛋白即為單克隆性免疫球蛋白增殖病，如多發(fā)性骨髓瘤（MM，IgG型最常見(jiàn)）、巨球蛋白血癥（IgM型）、重鏈病、輕鏈病、半分子病、惡性淋巴瘤、良性M蛋白血癥等。(二)異常血清免疫球蛋白:無(wú)抗體活性（三）免疫球蛋白檢測(cè)的臨床意義免疫球蛋白是體液免疫應(yīng)答中的重要產(chǎn)物，檢測(cè)免疫球蛋白可以反映機(jī)體體液免疫功能狀態(tài)，有助于感染性疾病、免疫增生性疾病和免疫缺陷病等的鑒別診斷、疾病監(jiān)控和預(yù)后判斷。增高多與慢性感染、自身免疫病、免疫增殖病等相關(guān)（如IgG增高是再次免疫應(yīng)答的標(biāo)志，IgG降低見(jiàn)于各種先天性和獲得性體液免疫缺陷病、聯(lián)合免疫缺陷病、重鏈病、輕鏈病、腎病綜合癥、病毒感染等；IgM增高是早期感染的標(biāo)志等，見(jiàn)于宮內(nèi)感染，原發(fā)性巨球蛋白血癥等）。降低多與局部感染、免疫缺陷、免疫抑制、腎病綜合征等有關(guān)（如SIgA降低致反復(fù)呼吸道感染等）。（三）免疫球蛋白檢測(cè)的臨床意義第二節(jié)血清補(bǔ)體檢測(cè)

補(bǔ)體的概念：是一組具有酶原活性的糖蛋白，它由傳統(tǒng)的9種成分C1(C1q、Clr，、C1s)一C9，旁路途徑的3種成分及其衍生物B、D、P、H、I等因子組成。補(bǔ)體參與機(jī)體的抗感染與免疫調(diào)節(jié)，也可介導(dǎo)病理性反應(yīng)。補(bǔ)體成分的多少或缺失可導(dǎo)致自身免疫病、反復(fù)感染和血管神經(jīng)性水腫，對(duì)某些疾病的診斷與療效觀察極為重要。有三條激活途徑：傳統(tǒng)、旁路、甘露聚糖結(jié)合凝集素（MBL）途徑。第二節(jié)血清補(bǔ)體檢測(cè)補(bǔ)體的概念：是一組具有酶原活性的糖蛋一、總補(bǔ)體溶血活性（CH50）檢測(cè)主要反映補(bǔ)體經(jīng)典途徑（C1-C9）的綜合水平。使用溶血活性檢測(cè)法，檢測(cè)終點(diǎn)為50%溶血（CH50）。增高見(jiàn)于急性炎癥和某些惡性腫瘤等；減低見(jiàn)于各種免疫復(fù)合物性疾病等。一、總補(bǔ)體溶血活性（CH50）檢測(cè)二、補(bǔ)體C3、C4檢測(cè)C3：含量最高，是補(bǔ)體系統(tǒng)經(jīng)典激活途徑與旁路激活途徑的匯合點(diǎn)和關(guān)鍵物質(zhì)，為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。C4：參與經(jīng)典途徑，多種生物學(xué)功能。臨床意義：（1）增高：急性炎癥、傳染病早期、組織損傷、移植排斥反應(yīng)等。（2）降低：SLE、RA、急性腎小球腎炎、慢性自身免疫性肝炎、肝硬化、先天性補(bǔ)體缺乏等。

二、補(bǔ)體C3、C4檢測(cè)第三節(jié)細(xì)胞免疫檢測(cè)一、T細(xì)胞亞群檢測(cè)（一）T細(xì)胞花結(jié)形成試驗(yàn)—檢測(cè)T細(xì)胞數(shù)量原理：T細(xì)胞表面的特異性綿羊紅細(xì)胞（E）受體可與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合形成玫瑰花結(jié)，以此計(jì)數(shù)T細(xì)胞數(shù)量，但不能反映T細(xì)胞生物學(xué)功能。參考值：計(jì)數(shù)百分率為（64.4±6.7）%。臨床意義：（1）降低：免疫缺陷性疾病，如惡性腫瘤、免疫性疾病、大面積燒傷、多發(fā)性神經(jīng)炎、淋巴增殖性疾病等。（2）升高：甲亢、甲狀腺炎、重癥肌無(wú)力、慢活肝、SLE活動(dòng)期、移植排斥等。第三節(jié)細(xì)胞免疫檢測(cè)一、T細(xì)胞亞群檢測(cè)（二）T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)

–檢測(cè)T細(xì)胞生物學(xué)功能原理：T細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中受有絲分裂原（如植物血凝素PHA或刀豆蛋白A）或特異性抗原刺激時(shí)可向母細(xì)胞轉(zhuǎn)化，計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化的母細(xì)胞數(shù)，求出轉(zhuǎn)化的百分率，從而反映T細(xì)胞的免疫功能。參考值：形態(tài)學(xué)法的轉(zhuǎn)化百分率為（60.1±7.6）%。臨床意義：同前，但Down綜合征時(shí)明顯升高。（二）T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)–檢測(cè)T細(xì)胞生物學(xué)功能（三）T細(xì)胞分化抗原（CD）測(cè)定1.T細(xì)胞分化抗原主要類別：CD3+

—代表總T細(xì)胞、CD4+

—代表T輔助性細(xì)胞（Th）、CD8+

—代表T抑制性細(xì)胞（Ts）。2.臨床意義：CD3+降低：自身免疫性疾病（AID），如SLE、RA等。CD4+降低：惡性腫瘤、遺傳性免疫缺陷癥、AIDS、應(yīng)用免疫抑制劑者等。CD8+降低：AID、變態(tài)反應(yīng)性疾病。CD4+/CD8+比值（0.9-2.0/1）：增高見(jiàn)于AID、病毒感染、變態(tài)反應(yīng)、移植排斥等。降低見(jiàn)于惡性腫瘤、AIDS（常<0.5）。（三）T細(xì)胞分化抗原（CD）測(cè)定二、B細(xì)胞分化抗原檢測(cè)檢測(cè)標(biāo)志：CD19、CD20、CD22等。臨床意義：升高見(jiàn)于急、慢性B細(xì)胞型淋巴細(xì)胞白血病和Burkitt淋巴瘤等；降低見(jiàn)于無(wú)丙種球蛋白血癥、使用免疫抑制劑等。二、B細(xì)胞分化抗原檢測(cè)

三、自然殺傷性(NK)細(xì)胞檢測(cè)NK細(xì)胞是不同于T、B細(xì)胞的異質(zhì)性、多功能細(xì)胞群，介導(dǎo)天然免疫，能直接殺傷靶細(xì)胞，不依賴抗體和補(bǔ)體。檢測(cè)意義：NK細(xì)胞的活性是判斷機(jī)體抗腫瘤、抗病毒感染的重要指標(biāo)之一。對(duì)于腫瘤、病毒感染者、移植排斥反應(yīng)者可檢測(cè)NK細(xì)胞活性，指導(dǎo)臨床診治。NK細(xì)胞活性：減低見(jiàn)于血液系統(tǒng)腫瘤、實(shí)體瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染等；升高見(jiàn)于宿主抗移植物反應(yīng)?？贵w依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒（ADCC）:由細(xì)胞表面的抗體Fc受體介導(dǎo)。

三、自然殺傷性(NK)細(xì)胞檢測(cè)四、細(xì)胞因子（cytokine,CK）檢測(cè)概念：細(xì)胞因子是一類由免疫細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞產(chǎn)生的調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的高活性、多功能、低分子的分泌性蛋白質(zhì)，屬于微量免疫調(diào)節(jié)因子。常見(jiàn)種類介紹：（1）白細(xì)胞介素-2（IL-2）：主要由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，具有促進(jìn)淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)，增殖，分化作用，增高見(jiàn)于自身免疫性疾病、排斥反應(yīng)等，降低見(jiàn)于免疫缺陷病、惡性腫瘤、某些病毒感染等。（2）腫瘤壞死因子(TNF)

：由單核細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、T細(xì)胞產(chǎn)生，可引起腫瘤組織出血、壞死和殺傷作用，還可引起抗感染的炎癥反應(yīng)，對(duì)免疫細(xì)胞有調(diào)節(jié)、誘生作用，其結(jié)構(gòu)分TNFa和TNFβ兩型，但生物活性類似。（3）干擾素(IFN)：是宿主細(xì)胞受病毒感染后產(chǎn)生的一種非特異性防御因子，具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、控制細(xì)胞增殖的作用，增高見(jiàn)于SLE、非活動(dòng)性類風(fēng)關(guān)、急性病毒感染等；減低見(jiàn)于乙型肝炎、哮喘、活動(dòng)性類風(fēng)關(guān)、使用免疫抑制劑等。四、細(xì)胞因子（cytokine,CK）檢測(cè)思考題1：1.何謂M蛋白、NK細(xì)胞、CK？2.檢測(cè)免疫球蛋白有何臨床意義？3.T細(xì)胞分化抗原CD3、CD4和CD8檢測(cè)的臨床意義?思考題1：思考題2：評(píng)估機(jī)體體液免疫狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)有那些？①血清蛋白電泳可以初步從α、β、γ球蛋白的相對(duì)含量判斷是否有嚴(yán)重的體液免疫缺陷，或者發(fā)現(xiàn)異常的球蛋白(如M蛋白等)；②血清免疫球蛋白(1gG、A、M、E)定量測(cè)定可以判斷體液免疫的功能狀態(tài)；③B細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)可以判斷體液免疫缺陷或增殖等。思考題2：思考題3：評(píng)估機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)有那些？①血常規(guī)及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)可以初步判斷白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞的相對(duì)數(shù)量的多少；②T細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)可以判斷細(xì)胞免疫降低或升高等狀態(tài)；③T細(xì)胞功能檢測(cè)(如T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn))能反映細(xì)胞免疫的功能狀態(tài)。

思考題3：第四節(jié)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)

一、腫瘤標(biāo)志物（tumormarker，TM）的概念：

是指在惡性腫瘤的發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞本身合成釋放或是由機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生和升高的一類物質(zhì)。這類物質(zhì)存在于細(xì)胞、組織或體液中，反映腫瘤的存在和生長(zhǎng)。

第四節(jié)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)一、腫瘤標(biāo)志物（tumormark

二、腫瘤標(biāo)志物的臨床意義：

腫瘤標(biāo)志物可反映細(xì)胞惡變各階段表型及基因特征性，存在于血液、細(xì)胞、組織或體液中，可用于腫瘤普查、輔助診斷、觀察療效和判斷預(yù)后。

二、腫瘤標(biāo)志物的臨床意義：實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件三、腫瘤標(biāo)志物主要檢測(cè)方法：放射免疫法（RIA）化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）蛋白芯片技術(shù)（proteinmicroarray）三、腫瘤標(biāo)志物主要檢測(cè)方法：四、多腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)及臨床意義：1.甲胎蛋白（AFP）：原發(fā)性肝癌（>300ug/l）陽(yáng)性率為67-74%，注意：約18%不升高；若與α-L-巖藻糖苷酶（AFU）聯(lián)合，原發(fā)性肝癌的診斷陽(yáng)性率可高達(dá)93.1%。生殖腺胚胎腫瘤、胃癌或胰腺癌、病毒性肝炎、肝硬化、妊娠等均有不同程度升高。2.癌胚抗原（CEA）：一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，胰腺癌90%，結(jié)腸癌74%，肺癌70%，乳癌60%（>60ug/l），胃液和唾液CEA對(duì)胃癌有一定價(jià)值。3.前列腺特異抗原（PSA）：一種前列腺分泌的單鏈糖蛋白，血清總PSA(t-PSA)明顯升高，前列腺癌60-90%。4.前列腺酸性磷酸酶(PAP)：前列腺癌時(shí)血清PAP明顯升高，常提示癌癥復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良。5.游離PSA（f-PSA）：比t-PSA更敏感，f-PSA/t-PSA<0.1提示前列腺癌。四、多腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)及臨床意義：6.癌抗原72-4(CA72-4)：一種腫瘤相關(guān)糖蛋白，是卵巢癌和胃癌的標(biāo)志物，若與CA125、CEA聯(lián)合檢測(cè)，可分別提高二者的檢出率。7.癌抗原19-9（CA19-9）：一種糖蛋白L血型抗原，胰腺癌（首選80-90%）和消化道癌時(shí)明顯升高，若結(jié)合CEA，對(duì)胃癌診斷符合率可達(dá)85%。8.癌抗原125（CA125）：一種糖蛋白性腫瘤相關(guān)抗原，存在于卵巢腫瘤的上皮細(xì)胞內(nèi)，卵巢癌50-90%，其他宮頸癌、乳腺癌等也有一定的陽(yáng)性反應(yīng)。9.癌抗原242（CA242）：一種唾液酸碳水化合物，胰腺癌68-79%、結(jié)腸癌55-85%、胃癌44%。10.癌抗原15-3（CA15-3）：一種糖蛋白，乳腺癌30-50%，用于治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷；早期乳癌僅20-30%，不能用于篩查及早期診斷。6.癌抗原72-4(CA72-4)：一種腫瘤相關(guān)糖蛋白，11.神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）：在糖酵解途徑中催化甘油分解的酶，與神經(jīng)內(nèi)分泌起源的腫瘤有關(guān)，是神經(jīng)母細(xì)胞瘤（>90%）、小細(xì)胞肺癌的高特異性和高靈敏度的標(biāo)志物。12.鐵蛋白（Ferritin）：肝是合成鐵蛋白的主要場(chǎng)所，增高見(jiàn)于急性粒細(xì)胞白血病，肝腫瘤，胰腺癌，成人斯蒂爾病等；降低見(jiàn)于鐮刀細(xì)胞瘤，惡性腫瘤等。13.人絨毛膜促性腺激素β鏈（β-HCG）：惡性葡萄胎，絨毛膜上皮癌，男性睪丸畸胎瘤等惡性腫瘤。14.人生長(zhǎng)激素（HGH）：由腺垂體細(xì)胞分泌，見(jiàn)于垂體瘤（肢端肥大和巨人癥）。11.神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）：在糖酵解途徑中催化甘油附：多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)簡(jiǎn)介：是現(xiàn)代生物技術(shù)與計(jì)算機(jī)技術(shù)相融合的高技術(shù)產(chǎn)物，具有超微量、并行性、高通量的特點(diǎn)，可以一次性同時(shí)檢測(cè)幾十至幾百種甚至更多的蛋白抗原。原理：試劑盒提供生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，用來(lái)檢測(cè)結(jié)合到芯片上的抗原，加入熒光素標(biāo)記的鏈霉親和素，檢測(cè)每個(gè)點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，得到相應(yīng)信號(hào)值，由計(jì)算機(jī)分析處理得出結(jié)果。和傳統(tǒng)方法不同的是，蛋白芯片只要一次實(shí)驗(yàn)就可以得到十幾、數(shù)十種所有蛋白（不同組合、排列）的信息變化，在傳染病、腫瘤及藥物篩選方面都具有廣泛的使用價(jià)值。附：多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)

五、腫瘤標(biāo)志物的選用原則同一種腫瘤可含多種標(biāo)志物，而一種標(biāo)志物可出現(xiàn)在多種腫瘤。為提高腫瘤診斷的陽(yáng)性率應(yīng)選擇特異性標(biāo)志物或最佳組合。動(dòng)態(tài)檢測(cè)有利于鑒別良、惡性腫瘤，也有利于腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷。

五、腫瘤標(biāo)志物的選用原則常見(jiàn)腫瘤首選標(biāo)志物原發(fā)性肝癌：AFP+AFU結(jié)直腸癌：CEA前列腺癌：PSA+PAP小細(xì)胞肺癌：NSE絨毛膜上皮細(xì)胞癌：hcG胰腺癌、膽道癌：CA19-9卵巢癌：CA125乳腺癌：CA15-3胃癌：CA72-4常見(jiàn)腫瘤首選標(biāo)志物原發(fā)性肝癌：AFP+AFU思考題：1.何謂腫瘤標(biāo)志物？2.簡(jiǎn)述常見(jiàn)的腫瘤標(biāo)志物及臨床意義？詳述AFP檢測(cè)的臨床意義？3.腫瘤標(biāo)志物的選用原則如何？思考題：第五節(jié)自身抗體檢測(cè)

1.自身耐受--正常情況下，機(jī)體能識(shí)別自我，對(duì)自身組織成分不產(chǎn)生免疫應(yīng)答。2.自身免疫--當(dāng)某些原因削弱或破壞機(jī)體的自身免疫耐受時(shí)，機(jī)體的免疫系統(tǒng)就會(huì)對(duì)自身組織成分產(chǎn)生免疫應(yīng)答。3.自身免疫?。ˋID）--因自身免疫反應(yīng)而產(chǎn)生的疾病稱為自身免疫病。4.自身抗體（autoantibody）：是指針對(duì)自身組織器官、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)成分的抗體，是自身免疫和自身免疫病的重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體(譜)。第五節(jié)自身抗體檢測(cè)1.自身耐受--正常情況下，機(jī)體能識(shí)別實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件一、類風(fēng)濕因子（RF）測(cè)定1．原理：類風(fēng)濕因子（RF）是變性IgG刺激機(jī)體產(chǎn)生的一種自身抗體，主要存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液內(nèi)，以IgM型為主，也有IgG、IgA、IgD和IgE型。RF與體內(nèi)變性IgG結(jié)合形成免疫復(fù)合物，激活補(bǔ)體或被吞噬細(xì)胞吞噬，產(chǎn)生炎性介質(zhì)導(dǎo)致組織炎性損傷，使患者發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎及血管炎。

2．方法：乳膠凝集法（IgM型）和免疫比濁法。3．臨床意義：類風(fēng)濕性疾病時(shí)，RF的陽(yáng)性率高達(dá)70-90%，其他自身免疫性疾病如：SLE、RA、硬皮病、干燥綜合癥等也見(jiàn)RF陽(yáng)性，某些感染性疾病如結(jié)核病等也多為陽(yáng)性反應(yīng)。本法特異性不高，應(yīng)予鑒別。一、類風(fēng)濕因子（RF）測(cè)定常用方法：ELISA臨床意義：RA特異性自身抗體，敏感性65%~85%，特異性為94%~98%；高濃度抗CCP抗體是RA發(fā)生關(guān)節(jié)侵蝕的危險(xiǎn)因子之一，定量檢測(cè)有助于判斷預(yù)后。附：抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）常用方法：ELISA附：抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）二、抗核抗體（antinuclearantibody,ANA）1.概念：ANA是指抗細(xì)胞核和細(xì)胞漿成分的自身抗體總稱。這種抗體無(wú)器官和種族特異性。

2.方法：間接免疫熒光法（IIF），以Hep-2細(xì)胞或鼠肝作抗原。在熒光顯微鏡下可觀察到不同的熒光模型：均質(zhì)型、核膜型（又稱周邊型）、顆粒型、核點(diǎn)型、著絲點(diǎn)型、核仁型，代表不同的臨床意義。3.臨床意義：可作為自身免疫性疾病的篩選試驗(yàn)，見(jiàn)于多種自身免疫病，最多見(jiàn)于未治療的SLE，陽(yáng)性率達(dá)80-100%，活動(dòng)期SLE幾乎100%陽(yáng)性。二、抗核抗體（antinuclearantibody,AN

間接免疫熒光法示意圖HEp-2細(xì)胞肝組織切片熒光標(biāo)記抗體病人血清（待檢抗體）間接免疫熒光法示意圖HEp-2細(xì)胞熒光標(biāo)記抗體病人血抗dsDNA抗體抗ssDNA抗體抗組蛋白抗體抗核小體抗體抗U1-nRNP抗體抗Sm抗體抗SSA抗體抗SSB抗體均質(zhì)型顆粒型

核膜型（周邊型）核點(diǎn)型抗dsDNA抗體抗p80盤(pán)曲蛋白抗體抗Sp100抗體抗dsDNA抗體抗U1-nRNP抗體均質(zhì)型顆粒型核膜三、可提取性核抗原抗體譜（extractablenuclearantigens，ENA）1．概念：ENA是指可提取的可溶性核抗原，由多種相對(duì)分子質(zhì)量不同的多肽構(gòu)成，即Sm、nRNP、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1等。2．方法：免疫印跡試驗(yàn)（IBT）等。3.臨床意義：a)抗Sm抗體—SLE特異性最高的標(biāo)志性抗體，與疾病診斷高度相關(guān)

（25-40%）b)抗nRNP抗體—MCTD（混合性結(jié)締組織?。?00%陽(yáng)性；SLE：26-45%陽(yáng)性c)抗SSA抗體—SLE：30-40%；SjS（干燥綜合癥）：60-75%d)抗SSB抗體—SjS：50-60%e)抗Scl-70抗體—PSS（進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥）：30-60%f)抗Jo-1抗體—與肌炎伴間質(zhì)性肺纖維化相關(guān)，PM（多發(fā)性肌炎）：20-35%

三、可提取性核抗原抗體譜（extractablenucle免疫印跡法

SDS電泳轉(zhuǎn)移電泳酶免疫檢測(cè)免疫印跡法免疫印跡法SDS電泳轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件四、抗DNA抗體1.概念：以細(xì)胞核DNA結(jié)構(gòu)為靶抗原，包括抗雙鏈（ds）、單鏈（ss）和Z-DNA抗體。2.方法：免疫熒光法，滴金免疫法3.意義：（1）抗ds-DNA陽(yáng)性：與SLE活動(dòng)性密切相關(guān)，活動(dòng)期SLE70-90%陽(yáng)性，特異性高（95-100%），但敏感性低（僅為30%～50%），在SLE特別是并發(fā)狼瘡性腎炎患者的發(fā)病機(jī)制中起重要作用；（2）抗ss-DNA陽(yáng)性：見(jiàn)于SLE（70-95%），尤其是合并有狼瘡性腎炎。四、抗DNA抗體看抗飛核看小體抗體

核小體（nucleosome）是真核生物細(xì)胞核染色質(zhì)的基本單位。凋亡細(xì)胞是核小體的重要來(lái)源，當(dāng)SLE患者的吞噬細(xì)胞對(duì)凋亡細(xì)胞的清除能力受損或降低，導(dǎo)致核小體在患者體內(nèi)大量存積，激活B細(xì)胞產(chǎn)生抗核小體抗體（Antinucleosomeantibody,AnuA）。存在于染色體上的組蛋白也會(huì)使SLE患者產(chǎn)生抗組蛋白抗體。附：抗核小體、組蛋白抗體看抗飛核看小體抗體核小體（nucleosome）五、其他自身抗體檢測(cè)的臨床意義抗平滑肌抗體(ASMA)：診斷自身免疫性肝炎

抗線粒體抗體（AMA）：診斷原發(fā)性膽汁性肝硬化（92.5%）?？鼓I小球基底膜（GBM）抗體：診斷Good-Pasture綜合征、腎小球腎炎抗甲狀腺球蛋白抗體（TGA）和抗甲狀腺微粒體抗體（TMA）:若血清水平升高，提示有自身免疫性甲狀腺疾病，如橋本甲狀腺炎等?？怪行粤＜?xì)胞胞漿抗體（ANCA）：是診斷微小動(dòng)脈炎性血管炎的特異指標(biāo)?？剐牧字贵w（ACA）：與抗磷脂綜合征（APS）如SLE、高凝血、貧血、血小板減少、自發(fā)性流產(chǎn)和宮內(nèi)死胎等關(guān)系密切。抗乙酰膽堿受體抗體(AchRA)：診斷重癥肌無(wú)力

五、其他自身抗體檢測(cè)的臨床意義思考題1：何謂自身免疫、AID、RF、ANA？檢測(cè)RF、ANA有何臨床意義？ENA抗體譜主要包含哪些抗核抗體？各有何臨床意義？思考題1：思考題2：自身抗體有那些特性？自身抗體是自身免疫性疾病的重要標(biāo)志某些自身抗體對(duì)疾病診斷具有高度特異性病人血液中存在高效價(jià)自身抗體是自身免疫病特點(diǎn)之一有些自身抗體與疾病活動(dòng)性相關(guān)少數(shù)自身抗體參與了免疫病理性損傷思考題2：思考題3：疑為SLE的患者可做那些自身抗體檢測(cè)？可測(cè)ANA、抗ds-DNA、抗Sm、抗nRNP、抗核小體、抗組蛋白抗體等自身抗體。思考題3：實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)主要內(nèi)容體液免疫及細(xì)胞免疫檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)自身免疫檢測(cè)主要內(nèi)容體液免疫及細(xì)胞免疫檢測(cè)第八章前言

實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)按其發(fā)展水平可劃分為三個(gè)階段：（1）常規(guī)形態(tài)學(xué)檢查、生物化學(xué)診斷（2）免疫學(xué)診斷,自動(dòng)化檢測(cè)（3）分子生物學(xué)(基因)診斷三者相互補(bǔ)充，各有其應(yīng)用范圍。其中，免疫學(xué)診斷因其敏感特異、簡(jiǎn)便易行、穩(wěn)定可靠而被廣泛應(yīng)用，是實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)的重要組成部分，可為臨床診斷、鑒別診斷、療效觀察和預(yù)后判斷提供特異和敏感的信息。

第八章前言實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)按其發(fā)展水平可劃分為三個(gè)階段：第一節(jié)血清免疫球蛋白檢測(cè)一、免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）的概念

免疫球蛋白是指具有抗體活性和(或)抗體樣結(jié)構(gòu)的球蛋白，由漿細(xì)胞產(chǎn)生，存在于機(jī)體的血液、體液、外分泌液和某些細(xì)胞的膜上，具有特異性識(shí)別抗原的功能，且必須與抗原結(jié)合后才能啟動(dòng)效應(yīng)功能。

第一節(jié)血清免疫球蛋白檢測(cè)一、免疫球蛋白（immunogl實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件

二、血清免疫球蛋白分類(一)正常血清免疫球蛋白（五大類）：有抗體活性IgG含量最多、比例最高、唯一通過(guò)胎盤(pán)的主力抗體。IgA分泌型IgA（SIgA）主控黏膜局部免疫，存在于外

分泌液中（如唾液、淚液、母乳等）。IgM分子量最大、凝集和溶解力最強(qiáng)。IgD含量很低功能不祥。IgE含量最低、親細(xì)胞、參與變態(tài)反應(yīng)（如寄生蟲(chóng)感染、過(guò)敏性疾病等）。

二、血清免疫球蛋白分類

(二)異常血清免疫球蛋白:無(wú)抗體活性M蛋白（Mprotein）的概念：也稱單克隆免疫球蛋白，是由單克隆B細(xì)胞增殖產(chǎn)生的具有相同結(jié)構(gòu)和電泳遷移率的免疫球蛋白分子及其分子片段。血清中檢測(cè)到M蛋白即為單克隆性免疫球蛋白增殖病，如多發(fā)性骨髓瘤（MM，IgG型最常見(jiàn)）、巨球蛋白血癥（IgM型）、重鏈病、輕鏈病、半分子病、惡性淋巴瘤、良性M蛋白血癥等。(二)異常血清免疫球蛋白:無(wú)抗體活性（三）免疫球蛋白檢測(cè)的臨床意義免疫球蛋白是體液免疫應(yīng)答中的重要產(chǎn)物，檢測(cè)免疫球蛋白可以反映機(jī)體體液免疫功能狀態(tài)，有助于感染性疾病、免疫增生性疾病和免疫缺陷病等的鑒別診斷、疾病監(jiān)控和預(yù)后判斷。增高多與慢性感染、自身免疫病、免疫增殖病等相關(guān)（如IgG增高是再次免疫應(yīng)答的標(biāo)志，IgG降低見(jiàn)于各種先天性和獲得性體液免疫缺陷病、聯(lián)合免疫缺陷病、重鏈病、輕鏈病、腎病綜合癥、病毒感染等；IgM增高是早期感染的標(biāo)志等，見(jiàn)于宮內(nèi)感染，原發(fā)性巨球蛋白血癥等）。降低多與局部感染、免疫缺陷、免疫抑制、腎病綜合征等有關(guān)（如SIgA降低致反復(fù)呼吸道感染等）。（三）免疫球蛋白檢測(cè)的臨床意義第二節(jié)血清補(bǔ)體檢測(cè)

補(bǔ)體的概念：是一組具有酶原活性的糖蛋白，它由傳統(tǒng)的9種成分C1(C1q、Clr，、C1s)一C9，旁路途徑的3種成分及其衍生物B、D、P、H、I等因子組成。補(bǔ)體參與機(jī)體的抗感染與免疫調(diào)節(jié)，也可介導(dǎo)病理性反應(yīng)。補(bǔ)體成分的多少或缺失可導(dǎo)致自身免疫病、反復(fù)感染和血管神經(jīng)性水腫，對(duì)某些疾病的診斷與療效觀察極為重要。有三條激活途徑：傳統(tǒng)、旁路、甘露聚糖結(jié)合凝集素（MBL）途徑。第二節(jié)血清補(bǔ)體檢測(cè)補(bǔ)體的概念：是一組具有酶原活性的糖蛋一、總補(bǔ)體溶血活性（CH50）檢測(cè)主要反映補(bǔ)體經(jīng)典途徑（C1-C9）的綜合水平。使用溶血活性檢測(cè)法，檢測(cè)終點(diǎn)為50%溶血（CH50）。增高見(jiàn)于急性炎癥和某些惡性腫瘤等；減低見(jiàn)于各種免疫復(fù)合物性疾病等。一、總補(bǔ)體溶血活性（CH50）檢測(cè)二、補(bǔ)體C3、C4檢測(cè)C3：含量最高，是補(bǔ)體系統(tǒng)經(jīng)典激活途徑與旁路激活途徑的匯合點(diǎn)和關(guān)鍵物質(zhì)，為急性時(shí)相反應(yīng)蛋白。C4：參與經(jīng)典途徑，多種生物學(xué)功能。臨床意義：（1）增高：急性炎癥、傳染病早期、組織損傷、移植排斥反應(yīng)等。（2）降低：SLE、RA、急性腎小球腎炎、慢性自身免疫性肝炎、肝硬化、先天性補(bǔ)體缺乏等。

二、補(bǔ)體C3、C4檢測(cè)第三節(jié)細(xì)胞免疫檢測(cè)一、T細(xì)胞亞群檢測(cè)（一）T細(xì)胞花結(jié)形成試驗(yàn)—檢測(cè)T細(xì)胞數(shù)量原理：T細(xì)胞表面的特異性綿羊紅細(xì)胞（E）受體可與綿羊紅細(xì)胞結(jié)合形成玫瑰花結(jié)，以此計(jì)數(shù)T細(xì)胞數(shù)量，但不能反映T細(xì)胞生物學(xué)功能。參考值：計(jì)數(shù)百分率為（64.4±6.7）%。臨床意義：（1）降低：免疫缺陷性疾病，如惡性腫瘤、免疫性疾病、大面積燒傷、多發(fā)性神經(jīng)炎、淋巴增殖性疾病等。（2）升高：甲亢、甲狀腺炎、重癥肌無(wú)力、慢活肝、SLE活動(dòng)期、移植排斥等。第三節(jié)細(xì)胞免疫檢測(cè)一、T細(xì)胞亞群檢測(cè)（二）T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)

–檢測(cè)T細(xì)胞生物學(xué)功能原理：T細(xì)胞在體外培養(yǎng)過(guò)程中受有絲分裂原（如植物血凝素PHA或刀豆蛋白A）或特異性抗原刺激時(shí)可向母細(xì)胞轉(zhuǎn)化，計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化的母細(xì)胞數(shù)，求出轉(zhuǎn)化的百分率，從而反映T細(xì)胞的免疫功能。參考值：形態(tài)學(xué)法的轉(zhuǎn)化百分率為（60.1±7.6）%。臨床意義：同前，但Down綜合征時(shí)明顯升高。（二）T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)–檢測(cè)T細(xì)胞生物學(xué)功能（三）T細(xì)胞分化抗原（CD）測(cè)定1.T細(xì)胞分化抗原主要類別：CD3+

—代表總T細(xì)胞、CD4+

—代表T輔助性細(xì)胞（Th）、CD8+

—代表T抑制性細(xì)胞（Ts）。2.臨床意義：CD3+降低：自身免疫性疾病（AID），如SLE、RA等。CD4+降低：惡性腫瘤、遺傳性免疫缺陷癥、AIDS、應(yīng)用免疫抑制劑者等。CD8+降低：AID、變態(tài)反應(yīng)性疾病。CD4+/CD8+比值（0.9-2.0/1）：增高見(jiàn)于AID、病毒感染、變態(tài)反應(yīng)、移植排斥等。降低見(jiàn)于惡性腫瘤、AIDS（常<0.5）。（三）T細(xì)胞分化抗原（CD）測(cè)定二、B細(xì)胞分化抗原檢測(cè)檢測(cè)標(biāo)志：CD19、CD20、CD22等。臨床意義：升高見(jiàn)于急、慢性B細(xì)胞型淋巴細(xì)胞白血病和Burkitt淋巴瘤等；降低見(jiàn)于無(wú)丙種球蛋白血癥、使用免疫抑制劑等。二、B細(xì)胞分化抗原檢測(cè)

三、自然殺傷性(NK)細(xì)胞檢測(cè)NK細(xì)胞是不同于T、B細(xì)胞的異質(zhì)性、多功能細(xì)胞群，介導(dǎo)天然免疫，能直接殺傷靶細(xì)胞，不依賴抗體和補(bǔ)體。檢測(cè)意義：NK細(xì)胞的活性是判斷機(jī)體抗腫瘤、抗病毒感染的重要指標(biāo)之一。對(duì)于腫瘤、病毒感染者、移植排斥反應(yīng)者可檢測(cè)NK細(xì)胞活性，指導(dǎo)臨床診治。NK細(xì)胞活性：減低見(jiàn)于血液系統(tǒng)腫瘤、實(shí)體瘤、免疫缺陷病、艾滋病和某些病毒感染等；升高見(jiàn)于宿主抗移植物反應(yīng)?？贵w依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒（ADCC）:由細(xì)胞表面的抗體Fc受體介導(dǎo)。

三、自然殺傷性(NK)細(xì)胞檢測(cè)四、細(xì)胞因子（cytokine,CK）檢測(cè)概念：細(xì)胞因子是一類由免疫細(xì)胞和相關(guān)細(xì)胞產(chǎn)生的調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的高活性、多功能、低分子的分泌性蛋白質(zhì)，屬于微量免疫調(diào)節(jié)因子。常見(jiàn)種類介紹：（1）白細(xì)胞介素-2（IL-2）：主要由活化T細(xì)胞產(chǎn)生，具有促進(jìn)淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)，增殖，分化作用，增高見(jiàn)于自身免疫性疾病、排斥反應(yīng)等，降低見(jiàn)于免疫缺陷病、惡性腫瘤、某些病毒感染等。（2）腫瘤壞死因子(TNF)

：由單核細(xì)胞、吞噬細(xì)胞、T細(xì)胞產(chǎn)生，可引起腫瘤組織出血、壞死和殺傷作用，還可引起抗感染的炎癥反應(yīng)，對(duì)免疫細(xì)胞有調(diào)節(jié)、誘生作用，其結(jié)構(gòu)分TNFa和TNFβ兩型，但生物活性類似。（3）干擾素(IFN)：是宿主細(xì)胞受病毒感染后產(chǎn)生的一種非特異性防御因子，具有抗病毒、抗腫瘤、免疫調(diào)節(jié)、控制細(xì)胞增殖的作用，增高見(jiàn)于SLE、非活動(dòng)性類風(fēng)關(guān)、急性病毒感染等；減低見(jiàn)于乙型肝炎、哮喘、活動(dòng)性類風(fēng)關(guān)、使用免疫抑制劑等。四、細(xì)胞因子（cytokine,CK）檢測(cè)思考題1：1.何謂M蛋白、NK細(xì)胞、CK？2.檢測(cè)免疫球蛋白有何臨床意義？3.T細(xì)胞分化抗原CD3、CD4和CD8檢測(cè)的臨床意義?思考題1：思考題2：評(píng)估機(jī)體體液免疫狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)有那些？①血清蛋白電泳可以初步從α、β、γ球蛋白的相對(duì)含量判斷是否有嚴(yán)重的體液免疫缺陷，或者發(fā)現(xiàn)異常的球蛋白(如M蛋白等)；②血清免疫球蛋白(1gG、A、M、E)定量測(cè)定可以判斷體液免疫的功能狀態(tài)；③B細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)可以判斷體液免疫缺陷或增殖等。思考題2：思考題3：評(píng)估機(jī)體細(xì)胞免疫狀態(tài)的實(shí)驗(yàn)指標(biāo)有那些？①血常規(guī)及淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)可以初步判斷白細(xì)胞，淋巴細(xì)胞的相對(duì)數(shù)量的多少；②T細(xì)胞數(shù)量的檢測(cè)可以判斷細(xì)胞免疫降低或升高等狀態(tài)；③T細(xì)胞功能檢測(cè)(如T細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn))能反映細(xì)胞免疫的功能狀態(tài)。

思考題3：第四節(jié)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)

一、腫瘤標(biāo)志物（tumormarker，TM）的概念：

是指在惡性腫瘤的發(fā)生和增殖過(guò)程中，由腫瘤細(xì)胞本身合成釋放或是由機(jī)體對(duì)腫瘤細(xì)胞反應(yīng)而產(chǎn)生和升高的一類物質(zhì)。這類物質(zhì)存在于細(xì)胞、組織或體液中，反映腫瘤的存在和生長(zhǎng)。

第四節(jié)腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)一、腫瘤標(biāo)志物（tumormark

二、腫瘤標(biāo)志物的臨床意義：

腫瘤標(biāo)志物可反映細(xì)胞惡變各階段表型及基因特征性，存在于血液、細(xì)胞、組織或體液中，可用于腫瘤普查、輔助診斷、觀察療效和判斷預(yù)后。

二、腫瘤標(biāo)志物的臨床意義：實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件三、腫瘤標(biāo)志物主要檢測(cè)方法：放射免疫法（RIA）化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定（CLIA）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）蛋白芯片技術(shù)（proteinmicroarray）三、腫瘤標(biāo)志物主要檢測(cè)方法：四、多腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)及臨床意義：1.甲胎蛋白（AFP）：原發(fā)性肝癌（>300ug/l）陽(yáng)性率為67-74%，注意：約18%不升高；若與α-L-巖藻糖苷酶（AFU）聯(lián)合，原發(fā)性肝癌的診斷陽(yáng)性率可高達(dá)93.1%。生殖腺胚胎腫瘤、胃癌或胰腺癌、病毒性肝炎、肝硬化、妊娠等均有不同程度升高。2.癌胚抗原（CEA）：一種廣譜腫瘤標(biāo)志物，胰腺癌90%，結(jié)腸癌74%，肺癌70%，乳癌60%（>60ug/l），胃液和唾液CEA對(duì)胃癌有一定價(jià)值。3.前列腺特異抗原（PSA）：一種前列腺分泌的單鏈糖蛋白，血清總PSA(t-PSA)明顯升高，前列腺癌60-90%。4.前列腺酸性磷酸酶(PAP)：前列腺癌時(shí)血清PAP明顯升高，常提示癌癥復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及預(yù)后不良。5.游離PSA（f-PSA）：比t-PSA更敏感，f-PSA/t-PSA<0.1提示前列腺癌。四、多腫瘤標(biāo)志物指標(biāo)及臨床意義：6.癌抗原72-4(CA72-4)：一種腫瘤相關(guān)糖蛋白，是卵巢癌和胃癌的標(biāo)志物，若與CA125、CEA聯(lián)合檢測(cè)，可分別提高二者的檢出率。7.癌抗原19-9（CA19-9）：一種糖蛋白L血型抗原，胰腺癌（首選80-90%）和消化道癌時(shí)明顯升高，若結(jié)合CEA，對(duì)胃癌診斷符合率可達(dá)85%。8.癌抗原125（CA125）：一種糖蛋白性腫瘤相關(guān)抗原，存在于卵巢腫瘤的上皮細(xì)胞內(nèi)，卵巢癌50-90%，其他宮頸癌、乳腺癌等也有一定的陽(yáng)性反應(yīng)。9.癌抗原242（CA242）：一種唾液酸碳水化合物，胰腺癌68-79%、結(jié)腸癌55-85%、胃癌44%。10.癌抗原15-3（CA15-3）：一種糖蛋白，乳腺癌30-50%，用于治療監(jiān)測(cè)和預(yù)后判斷；早期乳癌僅20-30%，不能用于篩查及早期診斷。6.癌抗原72-4(CA72-4)：一種腫瘤相關(guān)糖蛋白，11.神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）：在糖酵解途徑中催化甘油分解的酶，與神經(jīng)內(nèi)分泌起源的腫瘤有關(guān)，是神經(jīng)母細(xì)胞瘤（>90%）、小細(xì)胞肺癌的高特異性和高靈敏度的標(biāo)志物。12.鐵蛋白（Ferritin）：肝是合成鐵蛋白的主要場(chǎng)所，增高見(jiàn)于急性粒細(xì)胞白血病，肝腫瘤，胰腺癌，成人斯蒂爾病等；降低見(jiàn)于鐮刀細(xì)胞瘤，惡性腫瘤等。13.人絨毛膜促性腺激素β鏈（β-HCG）：惡性葡萄胎，絨毛膜上皮癌，男性睪丸畸胎瘤等惡性腫瘤。14.人生長(zhǎng)激素（HGH）：由腺垂體細(xì)胞分泌，見(jiàn)于垂體瘤（肢端肥大和巨人癥）。11.神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）：在糖酵解途徑中催化甘油附：多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)簡(jiǎn)介：是現(xiàn)代生物技術(shù)與計(jì)算機(jī)技術(shù)相融合的高技術(shù)產(chǎn)物，具有超微量、并行性、高通量的特點(diǎn)，可以一次性同時(shí)檢測(cè)幾十至幾百種甚至更多的蛋白抗原。原理：試劑盒提供生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，用來(lái)檢測(cè)結(jié)合到芯片上的抗原，加入熒光素標(biāo)記的鏈霉親和素，檢測(cè)每個(gè)點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，得到相應(yīng)信號(hào)值，由計(jì)算機(jī)分析處理得出結(jié)果。和傳統(tǒng)方法不同的是，蛋白芯片只要一次實(shí)驗(yàn)就可以得到十幾、數(shù)十種所有蛋白（不同組合、排列）的信息變化，在傳染病、腫瘤及藥物篩選方面都具有廣泛的使用價(jià)值。附：多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)

五、腫瘤標(biāo)志物的選用原則同一種腫瘤可含多種標(biāo)志物，而一種標(biāo)志物可出現(xiàn)在多種腫瘤。為提高腫瘤診斷的陽(yáng)性率應(yīng)選擇特異性標(biāo)志物或最佳組合。動(dòng)態(tài)檢測(cè)有利于鑒別良、惡性腫瘤，也有利于腫瘤的復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷。

五、腫瘤標(biāo)志物的選用原則常見(jiàn)腫瘤首選標(biāo)志物原發(fā)性肝癌：AFP+AFU結(jié)直腸癌：CEA前列腺癌：PSA+PAP小細(xì)胞肺癌：NSE絨毛膜上皮細(xì)胞癌：hcG胰腺癌、膽道癌：CA19-9卵巢癌：CA125乳腺癌：CA15-3胃癌：CA72-4常見(jiàn)腫瘤首選標(biāo)志物原發(fā)性肝癌：AFP+AFU思考題：1.何謂腫瘤標(biāo)志物？2.簡(jiǎn)述常見(jiàn)的腫瘤標(biāo)志物及臨床意義？詳述AFP檢測(cè)的臨床意義？3.腫瘤標(biāo)志物的選用原則如何？思考題：第五節(jié)自身抗體檢測(cè)

1.自身耐受--正常情況下，機(jī)體能識(shí)別自我，對(duì)自身組織成分不產(chǎn)生免疫應(yīng)答。2.自身免疫--當(dāng)某些原因削弱或破壞機(jī)體的自身免疫耐受時(shí)，機(jī)體的免疫系統(tǒng)就會(huì)對(duì)自身組織成分產(chǎn)生免疫應(yīng)答。3.自身免疫?。ˋID）--因自身免疫反應(yīng)而產(chǎn)生的疾病稱為自身免疫病。4.自身抗體（autoantibody）：是指針對(duì)自身組織器官、細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)成分的抗體，是自身免疫和自身免疫病的重要特征之一，某些自身免疫病伴有特征性的自身抗體(譜)。第五節(jié)自身抗體檢測(cè)1.自身耐受--正常情況下，機(jī)體能識(shí)別實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)：臨床常用免疫學(xué)檢測(cè)課件一、類風(fēng)濕因子（RF）測(cè)定1．原理：類風(fēng)濕因子（RF）是變性IgG刺激機(jī)體產(chǎn)生的一種自身抗體，主要存在于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的血清和關(guān)節(jié)液內(nèi)，以IgM型為主，也有IgG、IgA、IgD和IgE型。RF與體內(nèi)變性IgG結(jié)合形成免疫復(fù)合物，激活補(bǔ)體或被吞噬細(xì)胞吞噬，產(chǎn)生炎性介質(zhì)導(dǎo)致組織炎性損傷，使患者發(fā)生骨關(guān)節(jié)炎及血管炎。

2．方法：乳膠凝集法（IgM型）和免疫比濁法。3．臨床意義：類風(fēng)濕性疾病時(shí)，RF的陽(yáng)性率高達(dá)70-90%，其他自身免疫性疾病如：SLE、RA、硬皮病、干燥綜合癥等也見(jiàn)RF陽(yáng)性，某些感染性疾病如結(jié)核病等也多為陽(yáng)性反應(yīng)。本法特異性不高，應(yīng)予鑒別。一、類風(fēng)濕因子（RF）測(cè)定常用方法：ELISA臨床意義：RA特異性自身抗體，敏感性65%~85%，特異性為94%~98%；高濃度抗CCP抗體是RA發(fā)生關(guān)節(jié)侵蝕的危險(xiǎn)因子之一，定量檢測(cè)有助于判斷預(yù)后。附：抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）常用方法：ELISA附：抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP抗體）二、抗核抗體（antinuclearantibody,ANA）1.概念：ANA是指抗細(xì)胞核和細(xì)胞漿成分的自身抗體總稱。這種抗體無(wú)器官和種族特異性。

2.方法：間接免疫熒光法（IIF），以Hep-2細(xì)胞或鼠肝作抗原。在熒光顯微鏡下可觀察到不同的熒光模型：均質(zhì)型、核膜型（又稱周邊型）、顆粒型、核點(diǎn)型、著絲點(diǎn)型、核仁型，代表不同的臨床意義。3.臨床意義：可作為自身免疫性疾病的篩選試驗(yàn)，見(jiàn)于多種自身免疫病，最多見(jiàn)于未治療的SLE，陽(yáng)性率達(dá)80-100%，活動(dòng)期SLE幾乎100%陽(yáng)性。二、抗核抗體（antinuclearantibody,AN

間接免疫熒光法示意圖HEp-2細(xì)胞肝組織切片熒光標(biāo)記抗體病人血清（待檢抗體）間接免疫熒光法示意圖HEp-2細(xì)胞熒光標(biāo)記抗體病人血抗dsDNA抗體抗ssDNA