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文檔簡介
PPC細胞解上篇 相關知識介紹1、人體與生命?人體是由骨骼、肌肉、內臟器官、皮膚等組織和器官組成的,具有生命特征的統(tǒng)一體,其構造十分復雜。按現(xiàn)時解剖學的學說,人體可以分為皮膚系統(tǒng)、神經系統(tǒng)、運動系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、內分泌系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)等10個系統(tǒng)。從外觀可分為頭頸部、軀干部、手臂部、腿腳部等。從層次上劃分,構成系統(tǒng)的是器官,如心臟、肝臟、腎臟等等;構成器官的是組織,如皮膚組織、骨組織、肌組織、腺組織等等;構成組織的是細胞,如腦細胞、表皮細胞、肌細胞、骨細胞、腺細胞等等。人體就像一部有機組合,高精度,高機能的機器。在生理狀態(tài)下,身體的各部分互相協(xié)調、配合成一體,共同擔負著維持人體生命活動的重任。人體的生命周期長短不一,最高預期生命周期應為120年,但往往由于受生活環(huán)境、生活質量,以及疾病影響而無法達到生命預期。隨著生命科學和現(xiàn)代醫(yī)學的發(fā)展,人體生命周期會越來越長,不久的將來,有可能實現(xiàn)人類生命預期。2、人體生命本質是什麼?人體是以物質為基礎的有機體,根據人們對機體認識的程度,可以從五個層次上認識人體,即原子水平、分子水平、細胞水平、組織水平以及整體水平。(1) 原子水平從原子結構說,目前已知的元素有130余種,其中人體內含有的元素有60多種,主要為氧、氫、碳、氮、鈣及磷等,其中氧含量約為65%,碳約為18%,氫約為10%,氮為3.0%,鈣為2.0%,磷為1.0%。氧、碳、氫、氮就占了人體總重量的96%。其他元素雖然在人體內所占的比例很小,但并不代表著它們不重要,如血紅蛋白是體內氧的攜帶者,而鐵則是血紅蛋白的重要組成成分。(2) 分子水平在分子水平上,人體是由蛋白質、脂類、碳水化合物、水及礦物質等構成的。一名體重為65kg男性為例,其體內的水量約為40kg,占體重的60%多;脂類約為9kg,占體重的14%,其中估計有l(wèi)kg為生命活動所必需,其余為能量貯備,可以根據人體的活動狀況而改變;蛋白質約為llkg,占體重的17%,大部分蛋白質在身體內作為基本構成成分而存在,損失超過2kg就會導致嚴重的生理功能失調。碳水化合物在體內主要是以糖原形式存在,可以用于消耗的貯備不超過200g。細胞水平就細胞水平說,人體是由細胞、細胞外液及細胞外固體組成的。細胞是身體行使功能的主要組分。按照細胞存在的組織通常將其分為肌肉細胞、脂肪細胞、上皮細胞、神經細胞等類型。組織水平從組織結構角度說,人體是由組織、器官及系統(tǒng)構成的,這樣體重就等于脂肪組織、骨骼肌、骨、血及其他如內臟器官等的總和。脂肪組織包括脂肪細胞、血管及一些支撐性結構成分,是貯存脂肪的主要地方。骨骼肌有400多塊,占體重的比例因性別、年齡不同而有差異。成年男性約占40%,成年女性約占35%。四肢肌約占全身肌肉重量的80%,其中下肢肌約50%,上肢肌約占30%。正常人的總血量占體重的8%左右。一個50kg體重的人,約有血液4000ml,而真正參與循環(huán)的血量只占全身血液的70%?80%,其余的則貯存在肝、脾等“人體血庫”內,當人體出現(xiàn)少量失血時,貯存在“人體血庫”中的血液,便會立即釋放出來,隨時予以補充。骨骼是人體的支架系統(tǒng)。有206塊骨頭,成年人骨骼的重量大約有9kg。整體水平人體在各個水平上的構成是一個動態(tài)的過程。對一個個體來說,在胎兒、嬰兒、幼兒、青春期、成年、老年等各個時期,身體成分會呈現(xiàn)一定的變化,在疾病、應激等狀態(tài)下也會發(fā)生一定的改變。但通常情況下,在某一特定時間內,如以月或年為單位來衡量時,人體的構成在各個水平上都是相對穩(wěn)定的,就是說,各組成部分間呈現(xiàn)穩(wěn)定的定量關系。所以,可以通過在整體水平上的人體測量確定各個水平上身體的構成。這也是身高、體重、皮褶厚度、體質指數(BMI)等人體測量學指標在人體營養(yǎng)狀況評價中得到普遍應用的理論基礎之一。3、人體細胞的基本慨念?細胞,是截至目前已知的構成人體的最小結構單位。換句話說,人體是由有成百上千億個細胞組成的有機統(tǒng)一體。根據功能劃分,組成人體組織的細胞形態(tài)、組織結構、物理基礎,以及其功能和壽命是千差萬別的。根據細胞的增殖能力,分化程度,生存周期,可將人體的組織細胞分為四大類:(1) 更新組織細胞:執(zhí)行某種功能的特化細胞,經過一定時間后衰老死亡,由新細胞分化成熟補充,如上皮細胞、血細胞,構成更新組織的細胞可分為三類:a?干細胞,能進行增殖又能進入分化過程。b?過渡細胞,來自干細胞,是能伴隨細胞分裂趨向成熟的中間細胞。c.成熟細胞,不再分裂,經過一段時間后衰老和死亡。(2) 穩(wěn)定組織細胞:是分化程度較高的組織細胞,功能專一,正常情況下沒有明顯的衰老現(xiàn)象,細胞分裂少見,但在某些細胞受到破壞喪失時,其余細胞也能進行分裂,以補充失去的細胞,如肝、腎細胞等。(3)恒久組織細胞:屬高度分化的細胞,個體一生中沒有細胞
更替,破壞或喪失后不能由這類細胞分裂來補充。如神經細胞,骨骼細胞和心肌細胞等??珊谋M組織細胞:如人類的卵巢實質細胞,在一生中逐漸消耗,而不能得到補充,最后消耗殆盡。人體內的細胞并不是一成不變的,時時刻刻在不斷地進行著新舊更替。也就是說我們身體里每天總有成千上萬的細胞在衰老死亡,同時又有成千上萬的新細胞生成。人體組織細胞大約每6?7年就要更新一次。細胞的衰老死亡,并不代表著人的生命的終止,而是展現(xiàn)了人體生命的生生不息。細胞一般外表有一層薄膜(稱為細胞膜)包裹,細胞內部有細胞質和細胞核。人體細胞大小不一,形態(tài)也多種多樣。通常情況下,單憑我們的肉眼是看不到單個細胞的,要靠放大數倍的顯微鏡才能看到。既然細胞要新陳代謝,那是否新生細胞越多越好呢?這也不一定,所謂癌變正是身體某些細胞異常增生所造成的。4、細胞的再生增殖過程是怎樣的?4、細胞的再生增殖過程是怎樣的?匹
1=1細胞增殖是通過基因復制完成的,細胞增殖過程就是DNA合成的過程,是以自身的RNA為模板順序進行的,而且正常情況下能進行自我控制和調節(jié)。細胞增殖次數與端粒DNA長度有關。細胞DNA每復制一次端粒就縮短一段,當縮短到一定程度至Hayflick點時,可能會啟動DNA損傷檢測點(DNAdamagecheckpoint),激活p53,引起p21表達,導致不可逆地退出細胞周期,走向衰亡。而染色體的端粒有細胞分裂計數器的功能,能記憶細胞分裂的次數。端粒的長度還與端粒酶(telomerase)的活性有關,端粒酶是一種反轉錄酶,能以自身的RNA為模板合成端粒DNA,在精原細胞、干細胞和腫瘤細胞(如Hela細胞)中有較高的端粒酶活性,而正常體細胞中端粒酶的活性很低,呈抑制狀態(tài)。5、 正常人體有多少細胞?人體是由細胞組成的,據科學家粗略地估計,人體大約是由500-600兆個細胞構成的。大多數細胞的大小是10-30微米,最大的細胞卵子直徑達140微米,最長的神經細胞可以長達1米。精子是最小的細胞,除了細胞核就是拖的很長的尾巴,總長有60微米。人腦有數千億個細胞,其中98.5%—99%的細胞處于休眠狀態(tài),大約有1%-1.5%的細胞參加腦神經功能活動。紅細胞也是人體比較小的細胞,直徑為7-8微米,所以數量也不少。一般來說,血液約占人體重量的1/13。例如,一位重65公斤的男人,他體內約有5升的血液。按這樣計算,這個男人就應該擁有25兆個紅細胞了。而血液里面白細胞的數量只有紅細胞的八百分之一。6、 人體細胞的來源?人體眾多的細胞,其實都是由同一個細胞變成的,這個最初的細胞叫做受精卵。受精卵慢慢長大;1個變?yōu)?個,2個變?yōu)?個,4個變?yōu)?個,……,就這樣成倍成倍地增加,最后變成數百兆個的集合,就成為我們的身體了。正是由于身體細胞協(xié)調有序的工作,我們才生存著,才能津津有味地享受著生活的樂趣。人體每天產生數十億個完成了工作使命因而不再被需要的細胞,它們會按照基因的指令有條不紊地死去,并通過分解代謝而被清除。但是,在極偶然的情況下,細胞有時也會迷失方向。它們不按照規(guī)定的指令“自動消失”相反,它們拼命分裂和擴增,從而造成了癌癥的發(fā)生。7、細胞、染色體、基因的關系?基因(遺傳因子)是遺傳的物質基礎,是DNA(脫氧核糖核酸)分子上具有遺傳信息的特定核昔酸序列的總稱,是具有遺傳效應的DNA分子片段?;蛲ㄟ^復制把遺傳信息傳遞給下一代,使后代出現(xiàn)與親代相似的性狀。人類大約有10萬個基因,儲存著生命孕育生長、凋亡過程的全部信息,通過復制、表達、修復,完成生命繁衍、細胞分裂和蛋白質合成等重要生理過程?;蚴巧拿艽a,記錄和傳遞著遺傳信息。生物體的生、長、病、老、死等一切生命現(xiàn)象都與基因有關。它同時也決定著人體健康的內在因素,與人類的健康密切相關?;蚴侨魏紊w都必然具有的,因為它是生命信息的編碼,沒了它就無法將生命信息一代代傳下去,也就沒有生命了。但是基因本身只是一個抽象的東西,是承載在一些特定的化學物質上的,就好像一長串0、1的數字信息組成了電腦軟件一樣,這些化學物質內部的組分按照一定的順序排列就具有了編碼的功能,從而記錄下基因。我們常聽說的DNA(脫氧核糖核酸)就是這樣的一種包含編碼信息的物質,類似的還有RNA(核糖核酸),甚至蛋白質都具有此種功能。在大多數生命體中基因的承載物都主要是DNA,只有少數的病毒等具有不同的承載物。在病毒等不具有細胞結構的生命體中,遺傳物質,也就是上面所提到的DNA等,結構較為簡單,只是松散地存在于病毒外殼內。而在細胞生物中(包括真核和原核生物)遺傳物質非常復雜,量很大,在一些蛋白質的配合下,就形成了一個個的小團體,即為染色體,位于細胞內。通常在原核生物中,染色體都只有一個,呈環(huán)狀,因為不具有完整的細胞核(有些有簡單的核)而直接泡在細胞里的細胞質里。而在真核生物中染色體較多,每一個也大得多,形成了棍狀的樣子,都位于細胞核中。對于不同的真核生物,其染色體的數量是不一樣的,例如人有46條,形成23對,而驢有60多條。在高等生物中,染色體的數量與進化程度關系不大,有些植物具有上百條染色體。在一個單細胞真核生物體內,當然無所謂染色體數量的差異。而在多細胞生物中,一個個體所有的細胞主要可分為兩類:體細胞和性細胞。體細胞就是組成身體的幾乎所有的細胞,而性細胞就是傳宗接代的那些細胞,也就是精子和卵子。對于同一種生物而言,在通常情況下,所有體細胞的染色體數量都是一樣的,即所謂的“雙倍體”如果出現(xiàn)例外,那就是異常,意味著不健康。在一些植物中,多倍體是很常見的,與普通雙倍體相比,它們的產量往往有所增加。而在動物中,大多數動物的體細胞都是雙倍體,但是某些動物,例如螞蟻,它們具有很奇特的遺傳特征,只有蟻后才是雙倍體,工蟻、兵蟻等都是單倍體,也就是沒有性別。在通常情況下,性細胞是通過減數分裂產生的。就同一個個體來講,他體內不同類型的細胞所包含的基因都是一樣的,只是在不同類型的細胞有的基因轉錄,有的基因不轉錄,所以造成細胞類型的不一樣。DNA是長長的細絲,直徑僅0.02微米,一個細胞里所含的DNA長2米,一個人體內的所有DNA連接起來長達120兆米,也就是12000億千米,海王星到太陽的距離的266倍。大概只有2%-3%的DNA是有效的,其余的DNA沒有任何作用,稱為垃圾(Junk)DNA。所有DNA加在一起,組成了人體的10萬個基因。實際上,并不是越復雜的動物基因越多。人與人之間,有99.9%的DNA是相同的。果蠅和人類也有60%的基因相同。海膽,60%;老鼠,80%,黑猩猩,超過98%。簡而言之,、基因、染色體都是細胞的重要組成部分。基因是一種遺傳物質,含有大量遺傳信息。染色體是細胞核的組成部分,而染色體是基因的載體,包含遺傳物質(DNA、RNA、mRNA等)。細胞的再生復制以及代謝凋亡是由遺傳物質(基因編碼)所決定的。8、人體細胞的生命周期?人體細胞的壽命長短不一,小腸絨毛細胞,僅1天;胃黏膜細胞,2-3天;神經細胞,4-6周;肝細胞,5個月;血管內皮細胞,6個月。而腦與骨髓里的神經細胞的壽命有幾十年,同人體壽命幾乎相等。人體血液里的紅細胞壽命大約只有120天左右。按它在血液循環(huán)中的速度計算,一個紅細胞總共要游走1,600多公里。同是血液里的一種白細胞——粒細胞的壽命卻不到1天。在整個人體中,每分鐘約有1億個細胞進行更新。最為神奇的是大腦的神經細胞的神經沖動傳遞速度超過400公里/小時,相當于777飛機速度的一半。細胞代數學說(亦稱細胞分裂次數學說)認為,人體細胞相當于每2.4年更新一代。經實驗發(fā)現(xiàn),人體細胞在培養(yǎng)條件下平均可培養(yǎng)50代,每一代相當于2.4年,稱為弗列克系數。據此,人的平均壽命應為2.4x50=120歲。正常情況下,人體細胞在不斷地進行著生物化學反應,并通過細胞膜向外界環(huán)境吸取營養(yǎng)物質和排出代謝廢物,以維持人體的正常生命活動。9、人體細胞的主要結構與功能?就細胞本身而言,是構成人體組織系統(tǒng)的基本單元,由于人體是一結構功能復雜的有機體,而其復雜的結構功能正是通過千差萬別的細胞來實現(xiàn)的。盡管構成不同組織系統(tǒng)的細胞結構、物質成分及其功能不一樣,但人體細胞的基本結構和功能大致是有相同的。從總體上說,細胞外部有一層細胞膜,細胞膜將細胞內部和外部環(huán)境分隔開,使細胞內部的各種生命活動發(fā)生在特定的環(huán)境中,保障了單細胞個體的生命活動和多細胞個體中不同功能細胞的相對獨立性,使其成為生物體的功能單位。細胞內部是由線粒體、內質網、高爾基體、溶酶體、核糖體等細胞器構成的。線粒體是細胞進行有氧呼吸的主要場所,是細胞進行能量轉換的細胞器,又稱"動力車間"。線粒體基質含有酶、環(huán)狀DNA、RNA等物質,細胞生命活動所需的能量,大約95%來自線粒體。線粒體具有雙層膜,形狀為橢球形,有少量DNA和日豳,能相對獨立遺傳。內質網是由膜連接而成的網狀結構,是交織分布在細胞質中的內膜管道系統(tǒng),是細胞內蛋白質合成和加工,以及脂質合成的“車間”,具有合成和運送胞外分泌蛋白的功能。高爾基體對來自內質網的蛋白質加工,分類和包裝的“車間”及“發(fā)送站”,是合成糖類,脂類,是協(xié)調細胞生化功能和溝通細胞內外環(huán)境的重要細胞器。溶酶體是“消化車間”,內部含有多種水解酶,能分解衰老,損傷的細胞器,吞噬并殺死入侵的病毒或細菌。核糖體是由RNA和蛋白質構成的微小顆粒,是合成蛋白質的場所。10、生物細胞治療的主要進展?生物治療是近十余年來在分子生物學、分子免疫學、腫瘤學等學科基礎上發(fā)展起來的一種新的治療方法,到本世紀50年代才逐漸興起了生物療法。經過不斷發(fā)展,目前生物治療包括基因治療、分子靶向治療、生物反應調節(jié)劑、主動免疫治療、細胞治療和細胞因子治療等治療技術和方法。截至目前,生物治療已在細胞因子的應用、免疫效應細胞的應用、單克隆抗體治療與抗腫瘤治療、細胞疫苗內分泌療法、抗腫瘤血管生成的治療、基因生物支持治療、組織與細胞移植治療等應用領域取得了令人欣喜的成就。這也表明,生物治療技術將成為未來在疾病治療領域的領軍技術,在人類疾病預防和治療,提高健康水平方面發(fā)揮越來越大的作用,實現(xiàn)人類對生命質量和預期壽命的更高期盼。細胞治療是整個生物治療方法的一部分,是近年興起的疾病治療新技術。細胞治療的方法是利用某些具有特定功能的細胞特性,采用生物工程方法獲取,進而以去分化/逆向分化后再編程定向誘導等培育過程,而后或通過體外擴增,特殊培養(yǎng)等處理后,使這些細胞具有達到促進組織器官再生,或具有特異免疫功能,達到殺滅病原體和腫瘤細胞的目的,從而治愈或輔助治療作用,促進機體康復。細胞治療以其良好的療效,副作用小,更個體化、人性化等獨特的優(yōu)勢,為一些復雜難治性疾病的治療,提供了一種選擇,有時甚至是最后選擇。在當前和今后很長的歷史階段,細胞治療都將在臨床治療中擔當更加重要的角色,二十一世紀將是細胞治療發(fā)揮重要作用的時代。最新數據顯示,目前全球大約170多個國家有3,000多項細胞治療臨床實驗,細胞治療已經成為臨床治療的重要方法,將發(fā)揮越來越重要的作用。根據統(tǒng)計,2001年,全球生物產業(yè)市場約有33億美元,到2004年已達1200億美元,2006年時,已逼近2000億美元,平均每年以26%的速度增長。根據預測,未來20年之內,細胞醫(yī)療市場的全球規(guī)模將迅速增長,2020年將達到一萬億美元。根據研究報告,中國可接受細胞移植治療的患者總人數將達到13,300萬人,分別是:帕金森氏病500萬人,阿爾茨海默氏病500萬人,脊髓損傷19萬人,心血管疾病3,480萬人,自身免疫性疾病2,100萬人,糖尿病5,860萬人,骨質疏松癥700萬人,腫瘤582萬人,嚴重燒傷21萬人,出生缺陷85萬人。如此巨大的應用需求人群,無異為細胞治療事業(yè)展現(xiàn)了十分美好的發(fā)展前景。在細胞治療領域,目前國內開展比較多,發(fā)展比較快的包括干細胞移植治療和細胞免疫治療(主要是DC和CIK細胞)。(1)造血干細胞移植治療血液性疾病造血干細胞移植的基本方法是將各種來源的正常造血干細胞在患者接受超劑量化(放)療后,通過靜脈輸注移植入受體內,利用干細胞的復制、再生能力,以替代原有的病理性造血干細胞,從而使患者正常的造血及免疫功能得以重建。造血干細胞移植目前大體上分為自體外周血干細胞移植(ABSCT)、異體骨髓細胞移植(Allo-BMCT)、臍帶血造血干細胞移植(CBSCT)、外周血CD34+細胞移植、混合造血干細胞移植和非清髓性造血干細胞移植(NST)等6種,一般排斥反應較輕,治療效果好,已經成為臨床經典治療方法。(2)DC-CIK生物細胞免疫治療DC-CIK生物細胞免疫治療即DC-CIK自體細胞治療技術,是癌癥治療領域的新突破??茖W研究發(fā)現(xiàn),在人體免疫系統(tǒng)內,有兩種專門對付癌細胞的專項功能細胞---DC細胞和CIK細胞。CIK細胞是細胞因子誘導的殺傷細胞,即NK樣T淋巴細胞,它是自體外周血單個核細胞,經過特殊的培養(yǎng)技術,CIK細胞在數量上可獲得數千倍的增長,對癌細胞的殺傷能力可增強數十倍。CIK療法不僅能直接殺傷癌細胞,還能增強機體免疫功能,最大可能地恢復細胞正常的生長調節(jié),為徹底進行癌癥治療提供了新的途徑。DC細胞相當于信使,將抗原信息傳遞給可以發(fā)揮免疫效應和殺傷功能的效應者即T細胞。它是體內抗原提呈能力最強的細胞,是針對惡性腫瘤治療開發(fā)的最新一代治療腫瘤疫苗,能有效打破機體對腫瘤的耐受,激活T細胞,殺傷并清除腫瘤細胞,啟動機體的主動免疫機制,產生長期特異性抗腫瘤免疫記憶細胞,監(jiān)控和清除新生腫瘤細胞,減少腫瘤復發(fā)機率,延長生存期,提高生活質量。但在人體內DC和CIK細胞的含量極少,僅占1%左右,腫瘤患者體內的含量更少。臨床實踐證明,DC-CIK細胞免疫治療能克服手術、放療、化療三大傳統(tǒng)治療方式的“不徹底、易轉移、副作用大”等弊端,部分患者可提高三到五年生存率近一倍,是國際公認的有望消滅癌細胞的腫瘤治療第四大新技術。腫瘤生物治療作為一種生物反應調節(jié)方法,可直接或間接地調整腫瘤患者與腫瘤之間的生物學關系,從而改變宿主對腫瘤的生物學應答,使之有利于宿主,而不利于腫瘤細胞生長,以達到生物治療的目的。經過大量臨床實踐證明,DC+CIK治療方案是目前最為成功的癌癥治療方案之一,兩者在抗腫瘤細胞中有互補作用,聯(lián)合應用取得“1+1>2”的療效,具有適用面廣、采血量少、療效明顯、無毒副作用等優(yōu)點。深得臨床醫(yī)生和患者的青睞,正在國內大部分有條件的醫(yī)院如火如荼的開展起來,日益發(fā)揮著不可替代的作用。下篇PPC細胞1、善爾PPC細胞治療技術是什么?善爾PPC細胞(ProgrammablePluripotentCells,可編程多能細胞)是通過現(xiàn)代細胞技術和分子生物學技術方法開發(fā)成功的一種來源于外周血的,具有干細胞功能的新型細胞。其前身是外周血的單核樣細胞,經過特殊的去分化后定向誘導和細胞再編程技術處理,使其生長成為具有干細胞的分化再生功能的新型細胞,然后回輸入患者,通過組織結構和功能的再生和修復作用,并激活組織器官內處于休眠或被抑制狀態(tài)的前體細胞或幼稚細胞(包括組織定向干細胞)以取代并重建機體內因病變而受損和失去功能的細胞和組織,重新恢復建立重要生命器官的生理功能,以達到治療疾病和抗衰老及保健的目的。善爾PPC細胞治療技術是由善爾集團于2008年從德國引進,并在原有20余年研究應用的基礎上進行深度開發(fā)而成功的。PPC細胞從形態(tài)上看與外周血單核細胞差別不大,但實驗室反復測定干細胞細胞表型產物證實其已經具備類干細胞樣功能。PPC細胞技術已經獲得歐盟、美國、中國等多個國家和地區(qū)的專利授權。善爾PPC細胞治療技術的開發(fā)成功,為人類某些疾病的治療康復和長壽保健開辟了一個嶄新的生物醫(yī)藥來源和臨床治療途徑,使得治療過程更簡單,細胞來源更豐富,療效更確切,治療費用更加合理高效。2、PPC細胞的采集及制備?PPC細胞的采集嚴格執(zhí)行《國家獻血法》的規(guī)定,采取靜脈采血法采集,可以是混合采集,然后進行血液密度-重力梯度法分離,將血液中的單核細胞分離備用,血漿和紅細胞及其它有形成份回輸病人,避免浪費。也可以采用單采機,特定單型細胞采集技術一次直接采集所需單核細胞備用。采血數量每次約200-400毫升。細胞采集完成之后,即進入細胞制備階段,細胞制備流程大體如下:在符合GMP標準的實驗室內,分離單個核細胞置于培養(yǎng)瓶中,分離出活力高的單核細胞,用細胞激動因子進行逆向分化誘導區(qū)分化處理,然后在培養(yǎng)液里加入細胞生長因子和組織趨化因子等進行再編程和定向誘導生長,刺激細胞活化增值。在恒溫氣液平衡培養(yǎng)箱中經過6天細胞培養(yǎng)和嚴密監(jiān)測,細胞數量增至原有的107-9數量。C.當培養(yǎng)的細胞達到所需數量并符合標準要求時即進行細胞收獲,然后對所培養(yǎng)細胞用生理鹽水反復進行洗脫,去除雜質。對所培養(yǎng)細胞用生理鹽水稀釋制成50-100毫升的懸液,裝瓶或裝袋備用。對所制細胞懸液進行質量檢驗,包括無菌、熱源、細胞數量等項指標,檢驗合格之后,低溫保存?zhèn)溆谩?、PPC細胞制劑的質量控制?為了保證PPC細胞治療的安全有效,在制劑質量控制方面,我們采取了如下措施:a?對異體供血者,采血之前進行全面體檢,包括普通體檢、血象檢查、血生化檢查以及血清學肝炎和艾滋病等可傳染疾病進行檢測,首先確認供體健康和無病,保證供血來源的質量。在血細胞采集、分離、制備全過程嚴格無菌操作,防止人為污染,嚴格執(zhí)行標準化無菌操作流程,保證質量合格。嚴格執(zhí)行二次檢驗流程,確保PPC細胞治療的安全有效。所謂二次檢驗,即制劑制備完成之后冷藏保存之前的質量檢驗和回輸病人之前的質量檢驗,凡發(fā)現(xiàn)問題者,均作報廢處理,嚴禁回輸病人。4、PPC細胞的應用范圍?根據多年的實驗結果,PPC細胞的應用范圍是比較廣泛的。幾年來,先后進行過PPC細胞治療腫瘤、心腦血管病、肝病、糖尿病及其并發(fā)綜合癥、帕金森氏病,運動神經原病、老年性癡呆等神經系統(tǒng)退行性變疾病的治療,以及健康嚴重透支和亞健康人群的健康保健等嘗試,均取得令人十分滿意的效果,展現(xiàn)了無比美好的發(fā)展前景。5、PPC細胞的作用機理?近10年來,通過大量動物實驗和實證病人的臨床驗證,初步認為PPC細胞預防和治療疾病的作用機理體現(xiàn)在三個方面:優(yōu)質的PPC細胞通過細胞再生,組織修復,功能重建過程,替代補充了由于各種原因導致死亡而缺失的細胞,重新恢復了這部分細胞和組織功能。即所謂的再生修復和重建替代功能。優(yōu)質的PPC細胞通過強大的自泌/旁泌新生細胞生長信號系統(tǒng),激活組織器官中被抑制或處于休眠狀態(tài)的幼稚細胞、前體細胞、組織定向冠心病重新復活生長,使由于各種原因造成破壞損傷的細胞和組織結構得以恢復重建,重新煥發(fā)青春和活力。即所謂的組織再生功能。優(yōu)質的PPC細胞通過刺激強化功能,激活活化了病人細胞及體液免疫系統(tǒng),增強了病人的全面抗病能力。PPC細胞本身也釋放眾多細胞因子,重新整合免疫系統(tǒng)整體識別和攻擊以及清除系統(tǒng)功能,共同發(fā)揮抗病作用。即所謂的免疫調整活化功能。人體衰老是生命過程中的自然規(guī)律。老年醫(yī)學認為,45歲是生命的分界時期,45歲以前是發(fā)育成熟時期,45歲以后就開始進入初老期,而65歲以后就真正地進入老年期,一旦進入老年期,人的各種生理機能便逐漸衰退,各種老年性疾病也隨之而來,這是生命的必然過程。而實際上,由于外界環(huán)境的各種損傷因素(化學、物理、生物、生活方式等)的侵害和積累,諸多慢性損害和退行性變以及衰退在比較早的時間,甚至在30歲后就開始發(fā)生和表現(xiàn)。心梗、腦梗、猝死、糖尿病、高血壓屢屢發(fā)生在30多歲甚至20幾歲的年輕人中。一些平時不注意保健,嚴重或過度透支體能和健康,或者因為種種原因損傷累積而發(fā)生亞健康的人會促進衰老和慢病的提早發(fā)生。人為什麼會出現(xiàn)衰老呢?大多數學者認為與體內組織器官儲備的干細胞數量和活力減少和分化再生能力自然降低有關,換句話說,只有通過體外移植干細胞,從而增加體內干細胞的數量,恢復干細胞的活力,才能從根本上抑制衰老加速,延緩甚至逆轉衰老進程,有效延長生命時間。PPC細胞雖不是干細胞,但卻具有干細胞的主要效能作用,這也正是PPC細胞具有強大抗衰老保健作用之所在,不管是動物實驗還是大量人群實際應用結果均已得到有力證明。人體衰老是一個綜合復雜過程,除去與細胞數量質量和活力有直接關系之外,也與心境、習慣、環(huán)境、飲食、營養(yǎng)、運動等密切相關,應在進行PPC細胞抗衰老保健治療基礎上,結合其它措施綜合治療,實現(xiàn)健康長壽之目的。PPC細胞的最大優(yōu)勢是類干細胞或干細胞樣功能,本身不是干細胞,但又具有干細胞的功能作用。根據多年實踐,綜合起來看,PPC細胞具有如下大優(yōu)勢:a?細胞來源豐富,不僅限于自體,可以取自自體,也可以來源異體。細胞免疫原性低,完成細胞輸注后,完全不發(fā)生排異反應。加工制備簡便可靠,細胞培養(yǎng)制備過程與干細胞的制備的科學理論和適用技術相同或相似,只是在培養(yǎng)過程中所使用的培養(yǎng)液和所加入的細胞生長因子的組合和序列及時點有所不同。細胞增
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