實驗十葉綠素a和b含量的測定

實驗十葉綠素a和b含量的測定（分光光度法）、目的學會Chia、b含量的測定方法，了解葉片中Chia、b的含量。二、原理根據(jù)朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律，某有色溶液的吸光度A值與其中溶質(zhì)濃度C以及光徑L成正比，即A二aCL（a為該物質(zhì)的吸光系數(shù)）。各種有色物質(zhì)溶液在不同波長下的吸光值可通過測定已知濃度的純物質(zhì)在不同波長下的吸光度而求得。如果溶液中有數(shù)種吸光物質(zhì)，則此混合液在某一波長下的總吸光度等于各組分在相應波長下的吸光度的總和，這就是吸光度的加和性。4()060()711)0nm4()060()711)0nm吸收光能的百分比葉綠體中葉綠索TKj吸收:光譜圖乙醇溶液中葉綠素a、b在長波光方面的最大吸收峰位于665nm和649nm，同時在該波長時葉綠素a、b的比吸收系數(shù)K（溶液厚度是1cm,溶液濃度為1g/L的吸光度）為已知，我們即可以根據(jù)LambertBeer定律，它們的濃度C與吸光度A之間有如下的關系：幾65幾65=833Ca+侶創(chuàng)Cb.(1)A49=24.54Ca+44.24Cb.(2)(1)(2)式中的金5、A49為葉綠素溶液在波長665nm和649nm時的光密度。G、Cb為葉綠素a、b的濃度、單位為每升克數(shù)83.31、18.60為葉綠素a、b在、在波長665nm時的比吸收系數(shù)。24.54、44.24為葉綠素a、b在、在波長649nm時的比吸收系數(shù)。解方程式(1)(2)，則得：TOC\o"1-5"\h\zCA=13.7A665-5.76A649(3)CB=25.8A649-7.6A665(4)G=CA+CB=6.10A665+20.04A649(5)此時，G為總?cè)~綠素濃度，G、CB為葉綠素a、b濃度，單位為每升毫克，利用上面(3)(4)(5)式，即可以計算葉綠素a、b及總?cè)~綠素的總含量。三、材料用具及儀器藥品菠菜葉片、分光光度計、天平、研缽、剪刀、容量瓶(25ml)、漏斗、濾紙、乙醇(95%四、方法步驟1.稱取0.2克新鮮去葉脈葉片，剪碎，放在研缽中，加少許CaCO3加入乙醇10ml共研磨成勻漿，再加5ml乙醇，過濾，最后將濾液用乙醇定容到25ml。2.取一光徑為1cm的比色杯，注入上述的葉綠素乙醇溶液，另加乙醇注入另一同樣規(guī)格的比色杯中，作為對照，在分光光度計下分別以665nm和649nm波長測出該色素液的光密度。計算結果:葉綠索□含■屋臣人FVi)X25X1'10000.2葉綠索b含呈注.FWD=C.X25X1"10000.2251

葉綠素總量EW>葉綠索□含■屋臣人FVi)X25X1'10000.2葉綠素總量EW>=g*