人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件

人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用1、戰(zhàn)鼓一響，法律無聲?！?、任何法律的根本；不，不成文法本身就是講道理……法律，也----即明示道理?！獝邸た瓶?、法律是最保險的頭盔?！獝邸た瓶?、一個國家如果綱紀不正，其國風一定頹敗?！麅?nèi)加5、法律不能使人人平等，但是在法律面前人人是平等的。——波洛克人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用1、戰(zhàn)鼓一響，法律無聲?！?、任何法律的根本；不，不成文法本身就是講道理……法律，也----即明示道理?！獝邸た瓶?、法律是最保險的頭盔。——愛·科克4、一個國家如果綱紀不正，其國風一定頹敗。——塞內(nèi)加5、法律不能使人人平等，但是在法律面前人人是平等的?！蹇巳祟惣毎|(zhì)、RPCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用分離提純RNA的目的分析不同發(fā)育時期基因的表達狀況獲得新基因研究基因的拼接分析相應(yīng)的蛋白產(chǎn)物人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析1人類細胞質(zhì)、RPCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用人類細胞質(zhì)、RPCR的原理、2分離提純RNA的目的分析不同發(fā)育時期基因的表達狀況獲得新基因研究基因的拼接分析相應(yīng)的蛋白產(chǎn)物分離提純RNA的目的3RNA提取的原理在哺乳動物中,rRNA占總量的80%85%,RNA和核內(nèi)小分子RNA占10-15%,而mRNA只占1-5%。RNA由28S、18S、55等幾類組成,這些RNA分子根據(jù)蜜度和分子大小,)過密度梯度離心、凝膠電冰、離子交析進行分離∩RNA分子種類繁多,分子量大小不均一,在細胞中含量少,絕大多數(shù)mRNA分子(除血紅蛋有些組蛋白mRNA以外)在3,端存在20250個多聚苷酸pOA用此特點,用ogo(]親和層析柱分離mRNARNA提取的原理4RNA分離的最關(guān)鍵因素是盡量減少RNA酶的污染。但RNA酶活性非常穩(wěn)定,分布廣泛,除紐胞內(nèi)源性RNA酶外,環(huán)境中也存在大量RNA酶。因此在提取RNA時,應(yīng)盡量創(chuàng)造個無RNA酶的環(huán)境,包括去除外源性RNA酶污染和抑制內(nèi)源性RNA酶活性,主要是采用焦碳酸二乙酯(DEPC)去除外源性RNA酶,通過RNA酶的阻抑蛋白Rnsn和強力的蛋白質(zhì)變性劑如異硫氰酸胍抑制內(nèi)源性RNA酶。RNA分離的最關(guān)鍵因素是盡量減少RNA酶的污染。但RNA5RNA提取的方法1、異硫箐酸胍法GuSCN是一種強的蛋白質(zhì)變性劑,能夠裂解細孢的同時,還能有效地抑制內(nèi)源性Rnase的活性,通過有機溶劑的分步抽提,可獲得純度較高的細胞總RNA特點:需低溫操作,但價格經(jīng)濟。2、Trizol試劑(商品化產(chǎn)品)特點:在室溫下可以提取細胞總RNA,具有簡單、快速、提取量大、純度高的優(yōu)點。3、mRNA提取試劑盒真核細胞mRNA的3未端有ploy(A)尾,利用寡聚dT纖維素結(jié)合mRNA,將其從細胞總RNA中分離出來。RNA提取的方法6rio法Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性,因此對純化RNA及標準化RNA的生產(chǎn)十分有用rio法7Izo法「ⅰio的主要成分是異硫氰酸胍和酚。異硫氰酸胍爲于解偶劑,是類強力的蛋白質(zhì)變性劑,可溶解蛋白質(zhì)主要作用是裂解細胞,使細胞中的蛋白,核酸物質(zhì)解聚得到釋放。酚雖可有效的變性蛋白質(zhì),但是它不能完全抑制RNA活性,因此o中還加入了8-羥基喹啉、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNaSe。在加入氯仿離心后,溶液分為水相和有機相,RNA選擇性地進入無DNA和蛋白質(zhì)的水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中間層可回收DNA;用異丙醇沉淀有機相可回收蛋白質(zhì)。Izo8rio法「izo試劑可用于小量樣品(50-10m9組織、5×106細胞)也適用于大量樣品(≥1g組織、>107細胞)。對人,動物,植物組織,細菌均適用,整個提取過程在一小時內(nèi)即可完成。分離的總RNA無蛋白質(zhì)和DNA污染,可用于Northernblot,dotblot,poyA篩選,體外翻譯,RNSe保護分析和分子克隆。rio法9RNA提取的一般步驟破碎組、分離織RNARNARNARNARNA提取的一般步驟101、破碎組織和滅活RNA酶可以同步進行可以用鹽酸胍、硫氰酸胍、№-40、SDS、蛋白酶K等破碎組織·加入β-M可以抑制RNA酶活性2、分離RNA一半用酚、氯仿等有機溶劑,加入少量異戊醇,經(jīng)過此步,離心,RNA一般分布于上層,與蛋白層分開。3、沉淀RMA般用乙醇、3dNaAc(pH-5.2)或異丙醇。1、破碎組織和滅活RNA酶可以同步進行11人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件12人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件13人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件14人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件15人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件16人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件17人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件18人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件19人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件20人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件21人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件22人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件23人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件24人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件25人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件26人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件27人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件28人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件29人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件30人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件31謝謝！21、要知道對好事的稱頌過于夸大，也會招來人們的反感輕蔑和嫉妒?！喔?/p>

22、業(yè)精于勤，荒于嬉；行成于思，毀于隨?！n愈

23、一切節(jié)省，歸根到底都歸結(jié)為時間的節(jié)省。——馬克思

24、意志命運往往背道而馳，決心到最后會全部推倒?！勘葋?/p>

25、學習是勞動，是充滿思想的勞動?！獮跎晁够淅祟j藍辣襖駒靴鋸瀾互慌仲寫繹衰斡染圾明將呆則孰盆瘸砒腥悉漠塹脊髓灰質(zhì)炎(講課2019)脊髓灰質(zhì)炎(講課2019)謝謝！21、要知道對好事的稱頌過于夸大，也會招來人們的反感輕32人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用1、戰(zhàn)鼓一響，法律無聲。——英國2、任何法律的根本；不，不成文法本身就是講道理……法律，也----即明示道理?！獝邸た瓶?、法律是最保險的頭盔?！獝邸た瓶?、一個國家如果綱紀不正，其國風一定頹敗。——塞內(nèi)加5、法律不能使人人平等，但是在法律面前人人是平等的。——波洛克人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用1、戰(zhàn)鼓一響，法律無聲?！?、任何法律的根本；不，不成文法本身就是講道理……法律，也----即明示道理。——愛·科克3、法律是最保險的頭盔?！獝邸た瓶?、一個國家如果綱紀不正，其國風一定頹敗?！麅?nèi)加5、法律不能使人人平等，但是在法律面前人人是平等的?！蹇巳祟惣毎|(zhì)、RPCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用分離提純RNA的目的分析不同發(fā)育時期基因的表達狀況獲得新基因研究基因的拼接分析相應(yīng)的蛋白產(chǎn)物人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析33人類細胞質(zhì)、RPCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用人類細胞質(zhì)、RPCR的原理、34分離提純RNA的目的分析不同發(fā)育時期基因的表達狀況獲得新基因研究基因的拼接分析相應(yīng)的蛋白產(chǎn)物分離提純RNA的目的35RNA提取的原理在哺乳動物中,rRNA占總量的80%85%,RNA和核內(nèi)小分子RNA占10-15%,而mRNA只占1-5%。RNA由28S、18S、55等幾類組成,這些RNA分子根據(jù)蜜度和分子大小,)過密度梯度離心、凝膠電冰、離子交析進行分離∩RNA分子種類繁多,分子量大小不均一,在細胞中含量少,絕大多數(shù)mRNA分子(除血紅蛋有些組蛋白mRNA以外)在3,端存在20250個多聚苷酸pOA用此特點,用ogo(]親和層析柱分離mRNARNA提取的原理36RNA分離的最關(guān)鍵因素是盡量減少RNA酶的污染。但RNA酶活性非常穩(wěn)定,分布廣泛,除紐胞內(nèi)源性RNA酶外,環(huán)境中也存在大量RNA酶。因此在提取RNA時,應(yīng)盡量創(chuàng)造個無RNA酶的環(huán)境,包括去除外源性RNA酶污染和抑制內(nèi)源性RNA酶活性,主要是采用焦碳酸二乙酯(DEPC)去除外源性RNA酶,通過RNA酶的阻抑蛋白Rnsn和強力的蛋白質(zhì)變性劑如異硫氰酸胍抑制內(nèi)源性RNA酶。RNA分離的最關(guān)鍵因素是盡量減少RNA酶的污染。但RNA37RNA提取的方法1、異硫箐酸胍法GuSCN是一種強的蛋白質(zhì)變性劑,能夠裂解細孢的同時,還能有效地抑制內(nèi)源性Rnase的活性,通過有機溶劑的分步抽提,可獲得純度較高的細胞總RNA特點:需低溫操作,但價格經(jīng)濟。2、Trizol試劑(商品化產(chǎn)品)特點:在室溫下可以提取細胞總RNA,具有簡單、快速、提取量大、純度高的優(yōu)點。3、mRNA提取試劑盒真核細胞mRNA的3未端有ploy(A)尾,利用寡聚dT纖維素結(jié)合mRNA,將其從細胞總RNA中分離出來。RNA提取的方法38rio法Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,可以直接從細胞或組織中提取總RNA。其含有苯酚、異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速破碎細胞并抑制細胞釋放出的核酸酶。在破碎和溶解細胞時能保持RNA的完整性,因此對純化RNA及標準化RNA的生產(chǎn)十分有用rio法39Izo法「ⅰio的主要成分是異硫氰酸胍和酚。異硫氰酸胍爲于解偶劑,是類強力的蛋白質(zhì)變性劑,可溶解蛋白質(zhì)主要作用是裂解細胞,使細胞中的蛋白,核酸物質(zhì)解聚得到釋放。酚雖可有效的變性蛋白質(zhì),但是它不能完全抑制RNA活性,因此o中還加入了8-羥基喹啉、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNaSe。在加入氯仿離心后,溶液分為水相和有機相,RNA選擇性地進入無DNA和蛋白質(zhì)的水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中間層可回收DNA;用異丙醇沉淀有機相可回收蛋白質(zhì)。Izo40rio法「izo試劑可用于小量樣品(50-10m9組織、5×106細胞)也適用于大量樣品(≥1g組織、>107細胞)。對人,動物,植物組織,細菌均適用,整個提取過程在一小時內(nèi)即可完成。分離的總RNA無蛋白質(zhì)和DNA污染,可用于Northernblot,dotblot,poyA篩選,體外翻譯,RNSe保護分析和分子克隆。rio法41RNA提取的一般步驟破碎組、分離織RNARNARNARNARNA提取的一般步驟421、破碎組織和滅活RNA酶可以同步進行可以用鹽酸胍、硫氰酸胍、№-40、SDS、蛋白酶K等破碎組織·加入β-M可以抑制RNA酶活性2、分離RNA一半用酚、氯仿等有機溶劑,加入少量異戊醇,經(jīng)過此步,離心,RNA一般分布于上層,與蛋白層分開。3、沉淀RMA般用乙醇、3dNaAc(pH-5.2)或異丙醇。1、破碎組織和滅活RNA酶可以同步進行43人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件44人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件45人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件46人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件47人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件48人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件49人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件50人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件51人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件52人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件53人類細胞質(zhì)、RT-PCR的原理、方法、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果分析及其應(yīng)用共課件54人類細胞質(zhì)、