補體檢測及補體參與的試驗課件

補體檢測及補體參與的試驗補體檢測及補體參與的試驗補體（complement,C）是一組存在于人和脊椎動物血清、組織液和細胞膜

表面，具有酶樣活性、不耐熱、功能上連續(xù)反應(yīng)的糖蛋白可輔助和補充特異性抗體介導(dǎo)的溶菌、溶血作用補體系統(tǒng)：補體固有成分、補體調(diào)節(jié)蛋白、補體受體含量相對穩(wěn)定，疾病狀態(tài)時含量及活性可發(fā)生變化補體（complement,C）是一組存在于人和脊椎動補體的表達方式參與補體激活經(jīng)典途徑的固有成分按其被發(fā)現(xiàn)的先后順序分別稱C1、C2、……C9。C1由C1q、C1r、C1s三種亞單位組成補體系統(tǒng)旁路激活途徑及調(diào)節(jié)因子中另一些組分以英文大寫字母表示，如B因子、D因子、P因子、H因子等；補體調(diào)節(jié)成分多以其功能進行命名，如C1抑制物（C1INH）、C4結(jié)合蛋白（C4BP）補體活化后的裂解片段以該成分的符號后加小寫英文字母表示，通常a為小片段，b為大片段：C2a、C2b具有活性成分的復(fù)合物在其字符上劃一橫線表示，如：C1～C9滅活的補體片段在其字符前加英文字母i表示，如iC3b對補體受體以其結(jié)合對象命名，如CLrR、C5Ar、對C3片段受體則用CR1、CR2……CR4表示補體的表達方式參與補體激活經(jīng)典途徑的固有成分按其被發(fā)現(xiàn)的補體固有成份補體調(diào)節(jié)蛋白補體受體C1~C9,B、D、P因子C1INH、C4BP、H、I、S蛋白和血清羧肽酶等,MCP,DAF,HRPC1qR、C3b/C4bR(CRI)、C3dR(CRII)、H因子受體、C3a和C5a受體等補體系統(tǒng)組成補體固有成份補體調(diào)節(jié)蛋白補體受體C1~C9,C1INH、第一節(jié)補體的理化特性與生物學(xué)功能90%的血清補體由肝臟合成感染部位活化的巨噬細胞能分泌幾乎所有種類的補體成分補體的理化特性血清補體總量約為4g/l，C3含量最高不穩(wěn)定，易受各種理化因素影響（熱不穩(wěn)定，56℃、30min即被滅活；射線、機械振蕩、酒精、膽汁等可破壞補體）在0～10℃活性保持3～4天第一節(jié)補體的理化特性與生物學(xué)功能90%的血清補體由肝臟合成補體系統(tǒng)的激活1.經(jīng)典激活途徑（classicalpathway，CP)2.旁路激活途徑(alternativepathway，AP)3.甘露聚糖（MBL）激活途徑補體系統(tǒng)的激活1.經(jīng)典激活途徑（classica1.經(jīng)典激活途徑抗原抗體復(fù)合物啟動的，由C1—C9參與的一系列的酶促反應(yīng)，其結(jié)果是靶細胞因細胞膜受攻擊復(fù)合物作用而被裂解激活物：抗原—抗體（IgG、IgM）復(fù)合物

Immunocomplex，IC

循環(huán)免疫復(fù)合物CircularImmunocomplex，CIC激活順序：識別階段-活化階段-膜攻擊階段1.經(jīng)典激活途徑抗原抗體復(fù)合物啟動的，由C1—C9參與的一系補體檢測及補體參與的試驗課件補體檢測及補體參與的試驗課件補體檢測及補體參與的試驗課件補體檢測及補體參與的試驗課件2.旁路途徑的激活2.旁路途徑的激活補體檢測及補體參與的試驗課件補體檢測及補體參與的試驗課件經(jīng)典激活途徑替代激活途徑MBL途徑激活物質(zhì)抗原抗體復(fù)合物肽聚糖、酵母多糖、脂多糖MBL相關(guān)的絲氨酸蛋白酶起始分子C1qC3C2、C4參與成分C1-C9C3、C5-C9、B因子、D因子C2-C9、MASP所需離子Ca2+、Mg2+Mg2+Ca2+C3轉(zhuǎn)化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5轉(zhuǎn)化酶C4b2b3bC3bnBbC4b2b3b生物作用參與特異性免疫的效應(yīng)階段,感染后期發(fā)揮作用參與非特異性免疫的效應(yīng)階段,感染早期發(fā)揮作用參與非特異性免疫的效應(yīng)階段,感染早期發(fā)揮作用三種補體激活途徑比較經(jīng)典激活途徑替代激活途徑MBL途徑激活物質(zhì)抗原抗體復(fù)合物肽聚補體系統(tǒng)的生物學(xué)功能1.溶解細胞、細菌和病毒2.調(diào)理作用3.清除免疫復(fù)合物4.引起炎癥反應(yīng)5.免疫調(diào)節(jié)作用補體系統(tǒng)的生物學(xué)功能1.溶解細胞、細菌和病毒血清總補體活性測定（CH50試驗）:以紅細胞的溶解為指示，以50%溶血為判斷終點。CP-CH50AP-CH50MBL-CH50第二節(jié)血清總補體活性測定血清總補體活性測定（CH50試驗）:以紅細胞的溶解為指示，以（一）實驗原理：特異性抗體與紅細胞結(jié)合后可激活補體，導(dǎo)致紅細胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分滲入，引起紅細胞腫脹而發(fā)生溶血，溶血程度與補體的活性有關(guān)，與補體的劑量依賴呈S型曲線。（一）實驗原理：30%-70%呈直線，50%溶血為終點30%-70%呈直線，50%溶血為終點（二）試驗方法紅細胞濃度的調(diào)整：2%~5%綿羊紅細胞（SRBC）懸液溶血素的配制：是以SRBC免疫家兔所得的兔抗血清，即兔抗綿羊紅細胞抗體。試驗前要滅活補體及進行溶血素的稀釋和滴定。稀釋緩沖液：PH7.2~7.4磷酸鹽緩沖液，必須含有Ca2+、Mg2+（二）試驗方法紅細胞濃度的調(diào)整：2%~5%綿羊紅細胞（SRB不同稀釋度溶血素的配制最終稀釋度稀釋液(ml)稀釋度溶血素（ml）1:10001.81:1000.21:20000.21:10000.21:30000.41:10000.21:40000.21:20000.21:50000.81:10000.21:60000.21:30000.21:80000.21:40000.21:100000.21:50000.2所加溶血素不同稀釋度溶血素的配制最終稀釋度稀釋液(ml)溶血素的滴定11：10000.10.20.20.1全溶血21：20000.10.20.20.1全溶血31：30000.10.20.20.137℃

全溶血41：40000.10.20.20.130分鐘

全溶血51：50000.10.20.20.1大部分溶血61：60000.10.20.20.1微溶血71：80000.10.20.20.1不溶血81：100000.10.20.20.1不溶血9對照－－0.20.1不溶血管號溶血素試管內(nèi)加入的試劑量（ml）稀釋度溶血素

補體(1:60)緩沖液2%SRBC結(jié)果以最高稀釋度的溶血素仍能產(chǎn)生完全溶血為最大有效反應(yīng)管(1:4000)即為1個單位，一般試驗使用2個單位(1:2000)溶血素的滴定11：10000.150%溶血標(biāo)準(zhǔn)管配制混勻后取2.5ml，隨試驗一起孵育。試劑用量溶血程度2%SRBC0.5ml100%DH2O2.0ml1.8%Nacl2.0ml50%2%SRBC0.5ml50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管配制混勻后取2.5ml，隨試驗一起孵育。試劑血清總補體50%溶血活性測定（U/ml）10.10 1.40 0.5 0.52 0.15 1.35 0.5 0.53 0.20 1.30 0.5 0.54 0.25 1.25 0.5 0.55 0.301.20 0.5 0.56 0.35 1.15 0.5 0.57 0.40 1.10 0.5 0.58 0.45 1.05 0.5 0.59 0.50 1.00 0.5 0.510 0.00 1.50 0.5 0.5

37℃，30分鐘，2500r/min離心，與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)比較試管號 1:20稀釋血清巴比妥緩沖液2u溶血素2%SRBC 血清總補體50%溶血活性測定（U/ml）1按以下公式計算50%溶血的總補體值CH50（U/ml）=×稀釋倍數(shù)

總補體活性參考范圍:50-100U/ml反應(yīng)總體積2.5ml為常用1血清用量按以下公式計算50%溶血的總補體值1血清用量（三）方法評價CP-CH50測定經(jīng)典途徑總補體溶血活性反應(yīng)的是補體9種成分綜合水平方法簡便、快速，但敏感性較低影響因素多：緩沖液pH、離子強度、Ca2+、Mg2+濃度等，各個環(huán)節(jié)嚴(yán)加控制。（三）方法評價CP-CH50測定經(jīng)典途徑總補體溶血活性主要檢測的單個補體成分：C3、C4、C1q、B因子和C1抑制物方法：1.免疫溶血法測定補體的溶血活性2.免疫化學(xué)法測定補體的含量第三節(jié)單個補體成分的測定主要檢測的單個補體成分：C3、C4、C1q、B第三節(jié)一、免疫溶血法原理：抗原與特異性抗體結(jié)合后可激活補體的經(jīng)典途徑導(dǎo)致紅細胞溶解。當(dāng)缺乏某一單個補體成分時，不能使補體連續(xù)激活，指示系統(tǒng)不發(fā)生溶血；加入待測血清，若含原來缺乏的補體成分，則級聯(lián)反應(yīng)恢復(fù)，產(chǎn)生溶血，溶血程度與待測單個補體成分活性有關(guān)以50%溶血為終點一、免疫溶血法原理：、溶血素、溶血素注:兔紅細胞可直接活化補體的旁路途經(jīng)、溶血素、溶血素注:兔紅細胞可直接活化補體的旁路途經(jīng)二、免疫化學(xué)法單向免疫擴散法火箭免疫電泳透射比濁法速率散射比濁法二、免疫化學(xué)法單向免疫擴散法免疫濁度測定（第六章P67）可溶性抗原和相應(yīng)抗體特異性結(jié)合（兩者在比例合適和增濁劑作用下），可快速形成較大的免疫復(fù)合物，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度?？贵w過量的情況下，反應(yīng)液的濁度與待測抗原量呈正相關(guān)透射免疫比濁試驗檢測的是透射光，即免疫復(fù)合物形成后，反應(yīng)液濁度變化，引起透射光的改變抗體用量大，耗時長，不宜用于藥物半抗原的檢測免疫濁度測定（第六章P67）可溶性抗原和相應(yīng)抗體特異性結(jié)合散射免疫比濁試驗檢測的是散射光終點散射比濁試驗——在抗原-抗體反應(yīng)達到平衡時測定散射光強度速率散射比濁試驗——抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動力學(xué)測定方法，臨床上使用的主要方法學(xué)膠乳增強免疫濁度測定散射免疫比濁試驗檢測的是散射光終點散射比濁試驗——在抗原-抗利用補體的溶細胞作用，將其作為試劑成分參與試驗可對各種抗原或抗體以及免疫復(fù)合物進行檢測第四節(jié)補體參與的試驗利用補體的溶細胞作用，將其作為試劑成分參與試驗第四節(jié)補補體結(jié)合試驗

complementfixationtest,CFT反映經(jīng)典途徑的抗原抗體反應(yīng)應(yīng)用綿羊紅細胞和溶血素作指示劑檢測抗原或抗體補體結(jié)合試驗

complementfixationt一、試驗原理補體結(jié)合試驗三個系統(tǒng)反應(yīng)系統(tǒng)：已知抗原（或抗體）與待測抗體（或抗原）補體系統(tǒng)：豚鼠血清指示系統(tǒng)：與溶血素結(jié)合的致敏綿羊紅細胞SRBCS一、試驗原理圖19-3圖19-3補體檢測及補體參與的試驗課件二、方法評價靈敏度高0.05ug/ml特異性強結(jié)果明顯試驗條件要求低參與成分多，操作繁瑣二、方法評價靈敏度高0.05ug/ml補體參與的其他試驗C1q抗體的測定試驗將C1q作為抗原檢測患者血清中的抗C1q抗體抗C1q抗體是一種自身抗體，臨床上主要用于狼瘡腎炎的診斷和監(jiān)測，低補體血癥性蕁麻疹性血管炎、膜增生性腎小球腎炎和Felty綜合征（指除有典型的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床表現(xiàn)外，還伴有脾臟腫大和白細胞計數(shù)減少的一種嚴(yán)重型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎）的診斷采用ELISA方法檢測補體參與的其他試驗C1q抗體的測定試驗

1.

與補體降低相關(guān)的疾病

2.高補體血癥(心梗和某些惡性腫瘤)第五節(jié)補體測定的臨床意義1.與補體降低相關(guān)的疾病第五節(jié)補體測定的臨床補體缺陷在臨床上偶爾可以見到一些補體先天性缺陷的病人，C2缺陷和C1INH缺陷相對較常見，其它補體成分的缺陷均非常罕見。補體先天性缺陷患者的兩大臨床表現(xiàn)是反復(fù)感染和自身免疫病，這也從反面證實了補體在抗感染免疫和免疫調(diào)節(jié)方面的重要意義。補體缺陷在臨床上偶爾可以見到一些補體先天性缺陷的病人，C2補體缺陷的臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn)主要相關(guān)的缺陷補體成分次要相關(guān)的缺陷補體成分遺傳性血管神經(jīng)性水腫C1INH嚴(yán)重頑固性皮膚損害C1q反復(fù)發(fā)作性細菌感染C3，I因子C1r，C1q免疫復(fù)合物性血管炎（包括腎炎）C1q，C1r，C4，C2C3，C5反復(fù)發(fā)作性革蘭氏陽性球菌感染C5，C6，C7，C8系統(tǒng)性紅斑狼瘡CR1補體缺陷的臨床表現(xiàn)主要相關(guān)的缺陷補體成分次要相關(guān)的缺陷補體成C1IHN缺陷引起血管神經(jīng)性水腫C1IHN缺陷引起血管神經(jīng)性水腫繼發(fā)性補體降低：消耗增多：SLE、RA、自身免疫性溶血大量丟失：大面積燒傷、失血及腎臟病患者補體合成不足：肝臟疾病或營養(yǎng)不良補體活性及含量的測定對自身免疫病的診斷、有無疾病的活動以及疾病的進程和療效的判斷等提供重要依據(jù)繼發(fā)性補體降低：消耗增多：SLE、RA、自身免疫性溶血補體活高補體血癥偶見感染恢復(fù)期惡性腫瘤急性病毒性肝炎、心肌梗死、糖尿病高補體血癥偶見感染恢復(fù)期補體與病毒感染補體受體及補體膜表面調(diào)節(jié)蛋白與病毒感染的關(guān)聯(lián)受到越來越多的重視，一些病毒可通過補體受體等感染宿主細胞，例如，EB病毒通過CR2感染B細胞，麻疹病毒通過MCP感染機體細胞，柯薩其病毒、?？刹《竞湍c道病毒可通過DAF感染細胞等。臨床上可考慮應(yīng)用補體受體的阻斷劑治療某些病毒感染性疾病。補體與病毒感染補體受體及補體膜表面調(diào)節(jié)蛋白與病毒感染的關(guān)聯(lián)補體與器官移植的超急性排斥目前研究結(jié)果表明，超急性移植排斥的主要原因是補體系統(tǒng)的全身性激活，導(dǎo)致對機體自身的廣泛性組織損傷，產(chǎn)生致命的后果。目前在臨床前研究的解決方案是：（1）利用補體抑制劑如可溶性CR1進行藥物治療；（2）考慮應(yīng)用轉(zhuǎn)基因技術(shù)解決這一問題。補體與器官移植的超急性排斥目前研究結(jié)果表明，超急性移植排斥目前已開展了CR1、DAF、CD59、MCP等膜表面補體調(diào)節(jié)蛋白轉(zhuǎn)基因豬的實驗研究，將這些人類基因在胚胎期轉(zhuǎn)入豬胚胎細胞后，使其發(fā)育成含有人類基因的轉(zhuǎn)基因豬，將其器官移植至靈長類動物后，由于補體調(diào)節(jié)蛋白對補體的抑制作用，可有效阻止超急性移植排斥的發(fā)生，使移植的器官存活時間明顯延長。目前已開展了CR1、DAF、CD59、MCP等膜表面補體調(diào)節(jié)補體與炎癥性疾病補體在活化過程中產(chǎn)生的片段具有一些新的生物學(xué)活性，其中C5a，C3a，C4a具有過敏毒素效應(yīng)，C5a具有趨化活性，這些片段在促進炎癥反應(yīng)中起重要作用，因而在一些炎癥相關(guān)的疾病中，補體起重要的病理作用，包括自身免疫病、心血管疾病、感染過程中的炎癥性組織損傷、超急性移植排斥等。通過抑制補體有可能收到治療疾病的效果補體與炎癥性疾病補體在活化過程中產(chǎn)生的片段具有一些新的生物補體測定的應(yīng)用診斷病原體感染檢測補體的功能CH50檢測單個成分的含量及活性C3、C4、PFB

免疫性疾病相關(guān)疾病時補體的檢測與補體相關(guān)的遺傳性疾病補體含量顯著降低的疾病高補體血癥補體參與的試驗溶血空斑實驗、抗C1q抗體檢測流行病學(xué)調(diào)查補體應(yīng)用于臨床治療后的檢測補體測定的應(yīng)用診斷病原體感染小結(jié)主要內(nèi)容補體定義活化途徑CH50測定原理（免疫溶血法測定的是補體的溶血活性）補體含量的測定（與第六章免疫比濁試驗結(jié)合起來）補體結(jié)合試驗的基本原理補體系統(tǒng)的異常與疾病小結(jié)主要內(nèi)容英語詞匯

Complement，MBL，CH50，SRBC，complementfixationtest（CFT）英語詞匯Complement，MBL，CH50，補體檢測及補體參與的試驗補體檢測及補體參與的試驗補體（complement,C）是一組存在于人和脊椎動物血清、組織液和細胞膜

表面，具有酶樣活性、不耐熱、功能上連續(xù)反應(yīng)的糖蛋白可輔助和補充特異性抗體介導(dǎo)的溶菌、溶血作用補體系統(tǒng)：補體固有成分、補體調(diào)節(jié)蛋白、補體受體含量相對穩(wěn)定，疾病狀態(tài)時含量及活性可發(fā)生變化補體（complement,C）是一組存在于人和脊椎動補體的表達方式參與補體激活經(jīng)典途徑的固有成分按其被發(fā)現(xiàn)的先后順序分別稱C1、C2、……C9。C1由C1q、C1r、C1s三種亞單位組成補體系統(tǒng)旁路激活途徑及調(diào)節(jié)因子中另一些組分以英文大寫字母表示，如B因子、D因子、P因子、H因子等；補體調(diào)節(jié)成分多以其功能進行命名，如C1抑制物（C1INH）、C4結(jié)合蛋白（C4BP）補體活化后的裂解片段以該成分的符號后加小寫英文字母表示，通常a為小片段，b為大片段：C2a、C2b具有活性成分的復(fù)合物在其字符上劃一橫線表示，如：C1～C9滅活的補體片段在其字符前加英文字母i表示，如iC3b對補體受體以其結(jié)合對象命名，如CLrR、C5Ar、對C3片段受體則用CR1、CR2……CR4表示補體的表達方式參與補體激活經(jīng)典途徑的固有成分按其被發(fā)現(xiàn)的補體固有成份補體調(diào)節(jié)蛋白補體受體C1~C9,B、D、P因子C1INH、C4BP、H、I、S蛋白和血清羧肽酶等,MCP,DAF,HRPC1qR、C3b/C4bR(CRI)、C3dR(CRII)、H因子受體、C3a和C5a受體等補體系統(tǒng)組成補體固有成份補體調(diào)節(jié)蛋白補體受體C1~C9,C1INH、第一節(jié)補體的理化特性與生物學(xué)功能90%的血清補體由肝臟合成感染部位活化的巨噬細胞能分泌幾乎所有種類的補體成分補體的理化特性血清補體總量約為4g/l，C3含量最高不穩(wěn)定，易受各種理化因素影響（熱不穩(wěn)定，56℃、30min即被滅活；射線、機械振蕩、酒精、膽汁等可破壞補體）在0～10℃活性保持3～4天第一節(jié)補體的理化特性與生物學(xué)功能90%的血清補體由肝臟合成補體系統(tǒng)的激活1.經(jīng)典激活途徑（classicalpathway，CP)2.旁路激活途徑(alternativepathway，AP)3.甘露聚糖（MBL）激活途徑補體系統(tǒng)的激活1.經(jīng)典激活途徑（classica1.經(jīng)典激活途徑抗原抗體復(fù)合物啟動的，由C1—C9參與的一系列的酶促反應(yīng)，其結(jié)果是靶細胞因細胞膜受攻擊復(fù)合物作用而被裂解激活物：抗原—抗體（IgG、IgM）復(fù)合物

Immunocomplex，IC

循環(huán)免疫復(fù)合物CircularImmunocomplex，CIC激活順序：識別階段-活化階段-膜攻擊階段1.經(jīng)典激活途徑抗原抗體復(fù)合物啟動的，由C1—C9參與的一系補體檢測及補體參與的試驗課件補體檢測及補體參與的試驗課件補體檢測及補體參與的試驗課件補體檢測及補體參與的試驗課件2.旁路途徑的激活2.旁路途徑的激活補體檢測及補體參與的試驗課件補體檢測及補體參與的試驗課件經(jīng)典激活途徑替代激活途徑MBL途徑激活物質(zhì)抗原抗體復(fù)合物肽聚糖、酵母多糖、脂多糖MBL相關(guān)的絲氨酸蛋白酶起始分子C1qC3C2、C4參與成分C1-C9C3、C5-C9、B因子、D因子C2-C9、MASP所需離子Ca2+、Mg2+Mg2+Ca2+C3轉(zhuǎn)化酶C4b2bC3bBbC4b2bC5轉(zhuǎn)化酶C4b2b3bC3bnBbC4b2b3b生物作用參與特異性免疫的效應(yīng)階段,感染后期發(fā)揮作用參與非特異性免疫的效應(yīng)階段,感染早期發(fā)揮作用參與非特異性免疫的效應(yīng)階段,感染早期發(fā)揮作用三種補體激活途徑比較經(jīng)典激活途徑替代激活途徑MBL途徑激活物質(zhì)抗原抗體復(fù)合物肽聚補體系統(tǒng)的生物學(xué)功能1.溶解細胞、細菌和病毒2.調(diào)理作用3.清除免疫復(fù)合物4.引起炎癥反應(yīng)5.免疫調(diào)節(jié)作用補體系統(tǒng)的生物學(xué)功能1.溶解細胞、細菌和病毒血清總補體活性測定（CH50試驗）:以紅細胞的溶解為指示，以50%溶血為判斷終點。CP-CH50AP-CH50MBL-CH50第二節(jié)血清總補體活性測定血清總補體活性測定（CH50試驗）:以紅細胞的溶解為指示，以（一）實驗原理：特異性抗體與紅細胞結(jié)合后可激活補體，導(dǎo)致紅細胞表面形成跨膜小孔，使胞外水分滲入，引起紅細胞腫脹而發(fā)生溶血，溶血程度與補體的活性有關(guān)，與補體的劑量依賴呈S型曲線。（一）實驗原理：30%-70%呈直線，50%溶血為終點30%-70%呈直線，50%溶血為終點（二）試驗方法紅細胞濃度的調(diào)整：2%~5%綿羊紅細胞（SRBC）懸液溶血素的配制：是以SRBC免疫家兔所得的兔抗血清，即兔抗綿羊紅細胞抗體。試驗前要滅活補體及進行溶血素的稀釋和滴定。稀釋緩沖液：PH7.2~7.4磷酸鹽緩沖液，必須含有Ca2+、Mg2+（二）試驗方法紅細胞濃度的調(diào)整：2%~5%綿羊紅細胞（SRB不同稀釋度溶血素的配制最終稀釋度稀釋液(ml)稀釋度溶血素（ml）1:10001.81:1000.21:20000.21:10000.21:30000.41:10000.21:40000.21:20000.21:50000.81:10000.21:60000.21:30000.21:80000.21:40000.21:100000.21:50000.2所加溶血素不同稀釋度溶血素的配制最終稀釋度稀釋液(ml)溶血素的滴定11：10000.10.20.20.1全溶血21：20000.10.20.20.1全溶血31：30000.10.20.20.137℃

全溶血41：40000.10.20.20.130分鐘

全溶血51：50000.10.20.20.1大部分溶血61：60000.10.20.20.1微溶血71：80000.10.20.20.1不溶血81：100000.10.20.20.1不溶血9對照－－0.20.1不溶血管號溶血素試管內(nèi)加入的試劑量（ml）稀釋度溶血素

補體(1:60)緩沖液2%SRBC結(jié)果以最高稀釋度的溶血素仍能產(chǎn)生完全溶血為最大有效反應(yīng)管(1:4000)即為1個單位，一般試驗使用2個單位(1:2000)溶血素的滴定11：10000.150%溶血標(biāo)準(zhǔn)管配制混勻后取2.5ml，隨試驗一起孵育。試劑用量溶血程度2%SRBC0.5ml100%DH2O2.0ml1.8%Nacl2.0ml50%2%SRBC0.5ml50%溶血標(biāo)準(zhǔn)管配制混勻后取2.5ml，隨試驗一起孵育。試劑血清總補體50%溶血活性測定（U/ml）10.10 1.40 0.5 0.52 0.15 1.35 0.5 0.53 0.20 1.30 0.5 0.54 0.25 1.25 0.5 0.55 0.301.20 0.5 0.56 0.35 1.15 0.5 0.57 0.40 1.10 0.5 0.58 0.45 1.05 0.5 0.59 0.50 1.00 0.5 0.510 0.00 1.50 0.5 0.5

37℃，30分鐘，2500r/min離心，與50%溶血標(biāo)準(zhǔn)比較試管號 1:20稀釋血清巴比妥緩沖液2u溶血素2%SRBC 血清總補體50%溶血活性測定（U/ml）1按以下公式計算50%溶血的總補體值CH50（U/ml）=×稀釋倍數(shù)

總補體活性參考范圍:50-100U/ml反應(yīng)總體積2.5ml為常用1血清用量按以下公式計算50%溶血的總補體值1血清用量（三）方法評價CP-CH50測定經(jīng)典途徑總補體溶血活性反應(yīng)的是補體9種成分綜合水平方法簡便、快速，但敏感性較低影響因素多：緩沖液pH、離子強度、Ca2+、Mg2+濃度等，各個環(huán)節(jié)嚴(yán)加控制。（三）方法評價CP-CH50測定經(jīng)典途徑總補體溶血活性主要檢測的單個補體成分：C3、C4、C1q、B因子和C1抑制物方法：1.免疫溶血法測定補體的溶血活性2.免疫化學(xué)法測定補體的含量第三節(jié)單個補體成分的測定主要檢測的單個補體成分：C3、C4、C1q、B第三節(jié)一、免疫溶血法原理：抗原與特異性抗體結(jié)合后可激活補體的經(jīng)典途徑導(dǎo)致紅細胞溶解。當(dāng)缺乏某一單個補體成分時，不能使補體連續(xù)激活，指示系統(tǒng)不發(fā)生溶血；加入待測血清，若含原來缺乏的補體成分，則級聯(lián)反應(yīng)恢復(fù)，產(chǎn)生溶血，溶血程度與待測單個補體成分活性有關(guān)以50%溶血為終點一、免疫溶血法原理：、溶血素、溶血素注:兔紅細胞可直接活化補體的旁路途經(jīng)、溶血素、溶血素注:兔紅細胞可直接活化補體的旁路途經(jīng)二、免疫化學(xué)法單向免疫擴散法火箭免疫電泳透射比濁法速率散射比濁法二、免疫化學(xué)法單向免疫擴散法免疫濁度測定（第六章P67）可溶性抗原和相應(yīng)抗體特異性結(jié)合（兩者在比例合適和增濁劑作用下），可快速形成較大的免疫復(fù)合物，使反應(yīng)液出現(xiàn)濁度?？贵w過量的情況下，反應(yīng)液的濁度與待測抗原量呈正相關(guān)透射免疫比濁試驗檢測的是透射光，即免疫復(fù)合物形成后，反應(yīng)液濁度變化，引起透射光的改變抗體用量大，耗時長，不宜用于藥物半抗原的檢測免疫濁度測定（第六章P67）可溶性抗原和相應(yīng)抗體特異性結(jié)合散射免疫比濁試驗檢測的是散射光終點散射比濁試驗——在抗原-抗體反應(yīng)達到平衡時測定散射光強度速率散射比濁試驗——抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的動力學(xué)測定方法，臨床上使用的主要方法學(xué)膠乳增強免疫濁度測定散射免疫比濁試驗檢測的是散射光終點散射比濁試驗——在抗原-抗利用補體的溶細胞作用，將其作為試劑成分參與試驗可對各種抗原或抗體以及免疫復(fù)合物進行檢測第四節(jié)補體參與的試驗利用補體的溶細胞作用，將其作為試劑成分參與試驗第四節(jié)補補體結(jié)合試驗

complementfixationtest,CFT反映經(jīng)典途徑的抗原抗體反應(yīng)應(yīng)用綿羊紅細胞和溶血素作指示劑檢測抗原或抗體補體結(jié)合試驗

complementfixationt一、試驗原理補體結(jié)合試驗三個系統(tǒng)反應(yīng)系統(tǒng)：已知抗原（或抗體）與待測抗體（或抗原）補體系統(tǒng)：豚鼠血清指示系統(tǒng)：與溶血素結(jié)合的致敏綿羊紅細胞SRBCS一、試驗原理圖19-3圖19-3補體檢測及補體參與的試驗課件二、方法評價靈敏度高0.05ug/ml特異性強結(jié)果明顯試驗條件要求低參與成分多，操作繁瑣二、方法評價靈敏度高0.05ug/ml補體參與的其他試驗C1q抗體的測定試驗將C1q作為抗原檢測患者血清中的抗C1q抗體抗C1q抗體是一種自身抗體，臨床上主要用于狼瘡腎炎的診斷和監(jiān)測，低補體血癥性蕁麻疹性血管炎、膜增生性腎小球腎炎和Felty綜合征（指除有典型的類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎臨床表現(xiàn)外，還伴有脾臟腫大和白細胞計數(shù)減少的一種嚴(yán)重型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎）的診斷采用ELISA方法檢測補體參與的其他試驗C1q抗體的測定試驗

1.

與補體降低相關(guān)的疾病

2.高補體血癥(心梗和某些惡性腫瘤)第五節(jié)補體測定的臨床意義1.與補體降低相關(guān)的疾病第五節(jié)補體測定的臨床補體缺陷在臨床上偶爾可以見到一些補體先天性缺陷的病人，C2缺陷和C1INH缺陷相對較常見，其它補體成分的缺陷均非常罕見。補體先天性缺陷患者的兩大臨床表現(xiàn)是反復(fù)感染和自身免疫病，這也從反面證實了補體在抗感染免疫和免疫調(diào)節(jié)方面的重要意義。補體缺陷在臨床上偶爾可以見到一些補體先天性缺陷的病人，C2補體缺陷的臨床表現(xiàn)臨床表現(xiàn)主要相關(guān)的缺陷補體成分次要相關(guān)的缺陷補體成分遺傳性血管神經(jīng)性水