血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定設(shè)計實驗

血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶

活性的測定實驗題目實驗?zāi)康恼莆展缺D(zhuǎn)氨酶活性測定的原理和方法血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶作用于由丙氨酸及a一酮戊二酸組成的基質(zhì)。產(chǎn)生丙酮酸及谷氨酸血清加基液保溫后產(chǎn)生丙酮酸的多少，即反應(yīng)出谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性的大小。丙酮酸與2，4-二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在酸性溶液中顯黃色，在堿性溶液中成醌型顯棕紅色。實驗原理本實驗是在堿性條件下，生成醌類化合物的量反應(yīng)丙酮酸的量，即反應(yīng)了谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性。本法以lml血清與基質(zhì)液在37℃，保溫30分鐘生成2.5μg丙酮酸為谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性1單位求酶活性單位的方法：

1、標(biāo)準(zhǔn)品對照法：檢品與標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸液同樣處理呈色，進(jìn)行比色，計算出酶活性單位。

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線法：取含待測物的一系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，作標(biāo)準(zhǔn)曲線，由標(biāo)準(zhǔn)曲線查得活性單位。

一、標(biāo)準(zhǔn)品對照法

取試管4支，標(biāo)號，按下表加試劑：基質(zhì)液血清丙酮酸水4個管同時放入37℃水浴中。準(zhǔn)確保溫30分鐘，呈色試劑基質(zhì)液A（檢品）0.50.1——0.5—B（檢對照）—0.1——0.50.5S（標(biāo)準(zhǔn)）0.5—0.1—0.5—S’（標(biāo)對照）———0.10.50.5實驗操作56℃放置5分鐘。

加0.4NNaOH液5.0ml慢慢加入（約1分鐘），邊加邊混勻。室溫放置30分鐘，測OD值，波長520nm，用蒸餾水調(diào)零點。計算（ODA-ODB）（ODs-ODs＇）=X（待測樣品丙酮酸含量）50ug/ml×0.1mlX=（ODA-ODB）（ODs-ODs＇）×5SGPT單位=（ODA-ODB）（ODs-ODs＇）×50.12.5×=（ODA-ODB）（ODs-ODs＇）×20二、標(biāo)準(zhǔn)曲線法配制一系列不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸液，并且各加以適量的基質(zhì)液，作成標(biāo)準(zhǔn)曲線。具體做法如下表。管號12345空白標(biāo)準(zhǔn)丙酮酸（50μg/ml）基質(zhì)液ml蒸餾水ml丙酮酸含量μg相當(dāng)GPT單位0.050.50.452.5100.10.50.45.0200.20.50.310400.30.50.215600.40.50.12080-0.50.5-0。各管混勻，放37℃水浴5分鐘

加0.4NNaOH液5.0ml

慢慢加入（約1分鐘），邊加邊混勻然后各加呈色試劑0.5ml，混勻56℃放置5分鐘。室溫放置30分鐘測定OD值,波長520nm，用蒸餾水調(diào)零點。ABSS’OD值一標(biāo)準(zhǔn)對照法１.原始數(shù)據(jù)記錄2、公式計算酶活性單位（要求帶入數(shù)據(jù)，寫出結(jié)果）二、標(biāo)準(zhǔn)曲線法１.原始數(shù)據(jù)記錄12345空白OD標(biāo)準(zhǔn)OD標(biāo)準(zhǔn)–OD空白(縱坐標(biāo))--------標(biāo)準(zhǔn)GPT單位(橫坐標(biāo))1020406080---------2、繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，（要求規(guī)范作圖）3、通過方法一的ODA-ODB，在標(biāo)準(zhǔn)曲線中，查得酶活性單位實驗結(jié)果注意事項操作中加0.4NNaOH液時，需以較慢速度加入，并且邊加邊搖勻加快時則a一戊酮二酸引起的發(fā)色增強(qiáng)。本實驗中各試劑