甲基綠-派洛寧法顯示細胞內(nèi)DNA、RNA的分布實驗報告 山東大學(xué)

甲基綠——派寧法顯細胞內(nèi)的分【實驗?zāi)康摹繉W(xué)作血涂；熟基綠—派洛寧法顯示核酸的原理與操作步驟；觀、RNA在細的分布?！緦嶒炘怼?、電用：脫氧核糖核酸和糖核酸都有磷酸基，又有堿基，故為兩性電解質(zhì)。在一定的條下，可以電離而帶電荷，因此都有一定等電點。甲基綠、派洛寧為兩種堿性染料在水中電離后，都產(chǎn)生帶陽電荷的離子，常與帶負(fù)電荷的磷根形成鹽鍵。甲基綠電離后，在五價氮處產(chǎn)生個正電荷，堿性較強，易與雙鏈DNA分子（胞核等電點pH3.8）進行極性吸著而結(jié)合示綠色寧電離后僅產(chǎn)生一個正電荷較綠弱鏈RNA（胞質(zhì)等電點pH4.6）附合，使RNA顯色。2、聚合作用：甲基綠對聚合高有和力，派洛寧對聚合低的RNA親和力。因此，甲綠選染DNA，洛寧選染RNA?！炯谆陕鍖幏▽嶒灢襟E1．取蟾蜍（蟾蜍破髓，仰位剪下頜、舌頭）制備血涂片，干燥后滴0%的醇溶液固定10分，干。2．滴染色液于血膜上，染分染中）3．蒸餾水沖洗，去染液。4．向染色液血膜滴加95%乙醇分色、同時傾斜載片棄液體，晾干。5.觀甲基—派洛寧染液配制試劑醋緩沖液PH4.8A液：冰醋酸蒸水至100mlB：醋酸鈉）2.72克100ml蒸水中使用時A液液2：3比例混合。甲基—派洛寧染液A液:2克甲加醋沖液至100mlB:1克洛寧Y加醋沖液至100ml。臨用時A液液：2混合甲基綠派洛寧法試劑配制（改良）（一2%基綠水溶液：甲基綠methyl蒸餾水加至50ml用三氯甲烷抽提，方法詳后。（二5%洛寧水溶液：派洛寧（pyronine蒸餾水加至20ml（三0.2M醋緩沖液pH）0.2M醋酸液41ml0.2M醋酸鈉液59ml（三）甲基綠派洛寧染液：1

2%基綠水溶液（經(jīng)抽提）5ml5%洛寧水溶液1ml蒸餾水12ml0.2M醋酸鹽緩沖液pH18ml甲基綠派洛寧染液的pH值必嚴(yán)控PH4.8，甲基綠與派洛寧分別和RNA有親和性，可獲較好結(jié)果PH9時基綠著色，派洛寧不色。PH極，甲基綠不著色DNA和RNA染液MGP液）原理方法Vnna-Pappenheim氏基綠派洛寧法。適用范圍：適宜組織石蠟切片染。產(chǎn)品組成：試劑染劑3瓶PMG料3瓶染色方法1、組織切片脫蠟至2試（酶染劑）染色鐘3劑PMG染）色～30分鐘4水洗，此時切片應(yīng)淡綠色，若偏紅，可用冷丙酮快速分色干，二苯透明，中性樹膠封固。結(jié)果參考DNA呈～深綠色RNA粉紅色。有效期：十二個月。貯存：常保存。【實驗用品】1.材料蟾蜍2.試劑蒸餾水70%乙醇溶液95%乙液。3．器材解剖針、載玻片、蓋玻片、顯微、鑷子?！静僮鞑襟E】1.取蟾蜍（蟾蜍破髓，仰位剪下頜、舌頭）制備血涂片，干燥后滴加70%的乙醇溶液固定10分鐘，晾干；2.3.4.5.

滴兩種染色液分別于兩張血膜上染15分鐘染缸中蒸餾水沖洗，去染液；向染色液血膜滴加乙溶液色，同時傾斜載片棄液體，晾干；觀察。【實驗結(jié)果】甲基綠——派羅寧染色液1

甲基綠——派洛寧染色液22

實驗結(jié)果分析