丙二酸對琥珀酸脫氫酶抑制

實驗?zāi)康膶嶒炘韺嶒灢牧吓c儀器實驗步驟實驗結(jié)果記錄注意事項實驗討論第一頁，共12頁。實驗?zāi)康模?、學(xué)習(xí)和掌握競爭性抑制作用的特點。2、觀察丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用。

第二頁，共12頁。實驗原理化學(xué)結(jié)構(gòu)與酶作用的底物結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)，可與底物競爭結(jié)合酶的活性中心，使酶的活性降低甚至喪失，這種抑制作用稱為競爭性抑制作用。E+SESE+P+IEI+S

EIS+I第三頁，共12頁。琥珀酸脫氫酶：是機體內(nèi)參與三羧酸循環(huán)的一種重要的脫氫酶，其輔基為FAD，如心肌中的琥珀酸脫氫酶在缺氧的情況下，可使琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫可將藍(lán)色的甲烯藍(lán)還原成無色的甲烯白。這樣，便可以顯示琥珀酸脫氫酶的作用第四頁，共12頁。實驗材料與儀器：

器材：大白鼠、手術(shù)剪、滴管鑷子、紗布、漏斗、量筒、燒杯、研缽刻度吸量管

試管及試管架、恒溫水箱、

試劑：0.2mol/L琥珀酸溶液、0.02mol/L琥珀酸溶液0.2mol/L丙二酸溶液0.02mol/L丙二酸溶液、1/15mol/LPH=7.4磷酸鹽緩沖液、0.02%甲烯藍(lán)

第五頁，共12頁。1、酶提取液的制備：取大白鼠的骨骼肌，用冷水洗3次，加入1/15mol/L磷酸緩沖液pH在7.4。在研缽中碾碎，然后用紗布過濾，用干凈的燒杯收集過濾的備用。實驗步驟:第六頁，共12頁。

2、取試管6支，編號，在按圖步驟操作酶提取液（ml）磷酸緩沖液（ml）0.2mol/L琥珀酸（滴）0.02mol/L琥珀酸（滴）0.2mol/L丙二酸溶液（滴）0.02mol/L丙二酸溶液（滴）蒸餾水（滴）甲烯藍(lán)（滴）褪色時間（分鐘）試管12—8———83試管22—8——8—3試管32—8—8——3試管42——88——3試管5—28———83試管62—8———83試管6：酶提取液在100℃水浴中保溫第七頁，共12頁。3.各管溶液立即混均勻，沿試管壁加入液體石蠟，約0.5cm，各管置于37℃的水浴中保溫，切勿搖動試管，隨時觀察比較各試管顏色的變化，記錄褪色時間。

第八頁，共12頁。實驗結(jié)果記錄：褪色時間（分鐘）[I]/[S]試管1試管2試管3試管4試管5試管6第九頁，共12頁。【注意事項】：

1、酶提取液的制備應(yīng)操作迅速，以防止酶活性降低。2、加入液體石蠟的作用是隔絕空氣，以避免空氣中的氧氣對實驗造成影響，因此加石蠟時試管壁要傾斜，注意不要產(chǎn)生氣泡。3、37℃水浴保溫過程中，不能搖動試管，避免空氣中的氧氣接觸反應(yīng)溶液，使得還原型的甲烯白重新氧化成藍(lán)色。4.、37℃水浴保溫過程中，要注意隨時觀察各試管的褪色情況。5、實驗結(jié)果結(jié)束后，一定要洗干凈試管內(nèi)的液體石蠟。第十頁，共12頁。實驗討論：

1、酶提取液中有琥珀酸脫氫酶活性，表1所示，在試管1中沒有抑制劑，但琥珀酸依然能脫氫，使得甲烯藍(lán)反應(yīng)得甲烯白。

2、各管的褪色有明顯的時間差別，褪色時間隨[I]/[S]逐漸增大，而增大。

3、丙二酸對琥珀酸脫氫酶抑制作用的類型是競爭性抑制，其特點：最大反應(yīng)速率Vmax不變，米氏常數(shù)Km增大，競爭性抑制可以通過增大底物濃度來減輕抑制程度。

4、本實驗中5號、6號試管的作用是做對照，5號試管和1號試管做對照，說